检索结果-内蒙古大学图书馆

田蓟苷对大鼠A7R5血管平滑肌细胞增殖、迁移、表型转化及Notch1信号通路调控的影响

中成药 2024年第3期46卷 977-981页

作者：李雅琪马晓莉赵云丽李静袁勇王新春石河子大学药学院新疆石河子832002 石河子大学医学院第一附属医院新疆石河子832008

目的研究田蓟苷对A7R5血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响及其抗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激A7R5细胞建立血管平滑肌表型转化模型,将细胞分为正常组、模型组、田蓟苷组、Notch1通路抑制... 详细信息

目的研究田蓟苷对A7R5血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响及其抗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激A7R5细胞建立血管平滑肌表型转化模型,将细胞分为正常组、模型组、田蓟苷组、Notch1通路抑制剂组(DAPT组)和辛伐他汀组。采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,实时荧光定量PCR法检测细胞SM22α、α-SMA、Notch1、Hes1、Hes5、Jagged-1 mRNA表达,Western blot法检测细胞Notch1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达。结果与模型组比较,各给药组均可抑制A7R5细胞的异常增殖和迁移(P<0.05,P<0.01),上调α-SMA mRNA表达(P<0.01);田蓟苷组和DAPT组下调Notch1通路相关基因Notch1、Hes-1、Hes-5和Jagged-1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);田蓟苷组下调Notch1、Hes-1、RBP-Jκ蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论田蓟苷通过抑制VSMCs的异常增殖、迁移、表型转化及调控Notch1信号通路,从而保护ox-LDL诱导的A7R5细胞损伤。

关键词：田蓟苷血管平滑肌表型转化动脉粥样硬化 Notch1信号通路

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阿帕替尼在血管平滑肌表型转换及血管重构中作用的研究

阿帕替尼在血管平滑肌表型转换及血管重构中作用的研究

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作者：邵文超华中科技大学

学位级别：硕士

目的:通过建立小鼠颈动脉结扎模型,检测阿帕替尼(Apatinib)对在体颈动脉内膜损伤所致的内膜增生的影响。检测Apatinib对体外PDGF-BB诱导的大鼠原代VSMC增殖、迁移和去分化的影响。通过体外PDGF-BB诱导大鼠原代VSMC和大鼠血管平滑肌细胞... 详细信息

目的:通过建立小鼠颈动脉结扎模型,检测阿帕替尼(Apatinib)对在体颈动脉内膜损伤所致的内膜增生的影响。检测Apatinib对体外PDGF-BB诱导的大鼠原代VSMC增殖、迁移和去分化的影响。通过体外PDGF-BB诱导大鼠原代VSMC和大鼠血管平滑肌细胞系A7r5,阐明Apatinib在血管重构中的作用机制。方法:将C57BL/6J小鼠(野生型,8周,25-30 g,雄性)随机分为3组,每组各6只;分别为:假手术+溶剂对照组、损伤+溶剂对照组及损伤+Apatinib组。于造模前一天开始向小鼠腹腔注射Apatinib(10 mg/kg)或等体积玉米油(溶剂对照),持续给药2周。2周后取小鼠颈动脉,行HE染色和马松(Masson)染色并测量血管内膜(Intimal)厚度,中膜(Media)厚度,计算内膜中膜厚度比值(Intimato-media ratio),以评估Apatinib对新生内膜的影响。选取250 g左右的雄性SD大鼠,采用酶消法分离提取大鼠原代VSMC,第3-7代用于实验,培养至细胞融合度约80%时,改用无血清的培养基饥饿24小时。给予溶剂对照或不同浓度的Apatinib(50 n M,100 n M,200 n M)预处理VSMC 4小时,再用PDGF-BB(30ng/m L)在无血清的培养基中刺激24小时。EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)试验检测VSMC增殖表型;Transwell小室细胞迁移试验和细胞划痕试验检测VSMC迁移表型;免疫荧光分析VSMC收缩表型;Western blot检测细胞膜表面及细胞增殖、迁移、凋亡、去分化等过程中关键基因的蛋白水平变化。大鼠VSMC细胞系A7r5饥饿24小时后,用溶剂对照或Apatinib(200 n M)预处理1小时,再给予PDGF-BB(30 mg/m L)刺激不同时间(0 min,5 min,15 min,30 min,45 min),Western blot检测细胞膜表面及细胞增殖、迁移、内膜新生过程中重要通路信号分子的磷酸化和总蛋白表达水平。结果:小鼠颈动脉结扎2周后获取小鼠颈动脉,HE染色表明,与假手术+溶剂对照组相比,损伤+溶剂对照组新生内膜明显;Masson染色示中膜弹力纤维层无明显增厚。与损伤+溶剂对照组相比,注射Apatinib 2周可减轻内膜增生。EdU试验表明,Apatinib呈剂量依赖性降低PDGF-BB诱导的增殖VSMC细胞数量;Western blot证实,Apatinib对凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase 3及Caspase 3-cleaved的表达无明显影响。Apatinib呈剂量依赖性下调PCNA,Cyclin D1的表达,上调抑癌基因P27的表达,对抑癌基因P21无明显效应。Transwell小室细胞迁移试验和细胞划痕试验表明,Apatinib呈剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移;Western blot证实,Apatinib下调细胞迁移相关蛋白MMP2及MMP9的表达。Western blot证实,Apatinib呈剂量依赖性上调SMα-actin和SM22α的表达;免疫荧光显示,相同曝光时间下,Apatinib可以恢复PDGF-BB诱导的VSMC中SMα-actin的荧光强度;Apatinib可以恢复损伤血管壁VSMC中SMα-actin的荧光强度。Western blot结果表明,Apatinib呈剂量依赖性下调p-PDGFR-β及pPLC-γ1的表达水平,对其总蛋白水平无影响。在细胞系A7r5中,PDGF-BB刺激5分钟后p-PDGFR-β,p-PLC-γ1,p-Erk1/2和p-JNK明显上调并达峰,Apatinib在所观察时间点抑制p-PDGFR-β,p-PLC-γ1,p-Erk1/2和p-JNK的表达,对其总蛋白表达无明显影响。结论:Apatinib可以减轻小鼠颈动脉结扎损伤所致的内膜增生。Apatinib抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMC增殖和迁移。Apatinib在体外和体内均有抑制VSMC去分化的作用。PDGFR-β,PLC-γ1,ERK1/2和JNK信号分子参与了Apatinib对PDGF-BB介导的VSMC表型的调控。

关键词：阿帕替尼小鼠颈动脉结扎血管损伤 PDGFR-β 血管平滑肌表型转化 MAPK信号通路

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活络效灵丹对2型糖尿病SD大鼠的作用和对血管平滑肌细胞表型转化影响初探

活络效灵丹对2型糖尿病SD大鼠的作用和对血管平滑肌细胞表型转化...

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作者：高姗姗北京中医药大学

学位级别：硕士

国内外众多研究显示DM的血管并发症问题也成问了困扰广大病患的一大难题,给患者造成了巨大的精神负担和经济压力。因此对于DM血管并发症的治疗就显得尤为重要。目前,中医中药在DM血管并发症方面取得了一定的疗效,特别是延缓坏疽,糖尿病... 详细信息

国内外众多研究显示DM的血管并发症问题也成问了困扰广大病患的一大难题,给患者造成了巨大的精神负担和经济压力。因此对于DM血管并发症的治疗就显得尤为重要。目前,中医中药在DM血管并发症方面取得了一定的疗效,特别是延缓坏疽,糖尿病足等方面有突出表现,这显示出了中医中药在DM血管并发症方面的预防和治疗方面有着极大潜力和广阔的前景。活络效灵丹,从方名上理解,“活络”即通经活络,活血祛瘀,目前广泛应用于临床。从组方来看,丹参、芍药、乳香没药四药合用,能够活血化瘀通条二焦水道,是中西医结合治疗血管疾病的常用药。研究表明此方对于糖尿病肾病的患者而言,能够降低血BUN、SCr降低,24小时尿蛋白减少,全血粘度和纤维蛋白原较对照组治疗后均改善显著。本课题之前的实验也显示,活络效灵丹对于抑制高脂喂养家兔动脉粥样硬化方面也有显著效果。为了更加深入的探讨活络效灵丹对于糖尿病血管病的研究,本实验小组进行了进一步的探索。本课题通过建立2TDM大鼠模型,从对2TDM大鼠生化指标的研究和对于VSMC表型转化机制探讨两个方面,对于中医中药在治疗DM血管并发症方面的作用进行初步探讨。研究目的：1、通过活络效灵丹作用于2TDM大鼠,通过中药干预,观察实验前后大鼠血糖值、葡萄糖耐量,体重的作用,分析活络效灵丹对治疗2TDM大鼠的生物学作用。2、通过活络效灵丹作用于2TDM大鼠,通过中药干预,以2型糖尿病大鼠VSMC的TGF-β/Smad4信号表达途径为切入点,通过观察VSMC表型转化过程中PDGF-BB以及相关标志蛋白SM22a和OPN含量从而研究活络效灵丹对防治糖尿病血管病的作用机制。研究方法1、80只SD大鼠分为对照组、模型组、二甲双胍组和中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,后五组高脂喂养8周时,腹腔注射小剂量链脲霉素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型,予药物灌胃4周后,观察大鼠的一般情况,动态监测各组大鼠体重、空腹血糖值、以及给药前,给药后2周和4周的葡萄糖耐量。2、80只SD大鼠分为对照组、模型组、阿司匹林组和中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,后五组高脂喂养8周时,腹腔注射小剂量链脲霉素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型。活络效灵丹连续灌胃,各组给药30天后处死。取大鼠颈动脉切片,HE染色观察血管平滑肌细胞病理变化,实时荧光定量PCR法检测颈动脉PDGF-BB、SM22α、 Smad4和OPN表达。研究结果：1、给药4周后,与模型组相比,中药组可降低糖尿病大鼠空腹血糖(p<0.05),葡萄糖耐量改善(p<0.05),西药组空腹血糖降低(p<0.05),葡萄糖耐量改善(p<0.05)体重降低改善(p<0.05)。活络效灵丹对糖尿病导致体重下降具有一定缓解作用,但无明显的量效关系。2、发现与模型组相比,活络效灵丹剂量组仅见轻度的血管平滑肌细胞增生。模型组PDGF-BB较正常组显著升高,与模型组相比,中药组血管中PDGF-BB的表达显著降低(P<0.05)。结论：1、活络效灵丹能改善2型糖尿病大鼠空腹血糖和葡萄糖耐量,各组疗效顺序为中剂量>西药组>低剂量组>高剂量组,表明活络效灵丹对2型糖尿病的治疗有着积极地作用。2、活络效灵丹能有效降低VSMC表型转化,而且能够干扰TGF-β/Smad4信号通路,下调Smad4,上调SM22α,同时具有拮抗作用的PDGF-BB表达下降,合成表型的标志蛋白OPN表达随之下降。

关键词：活络效灵丹血管平滑肌表型转化 PDGF-BB TGF-β/Smad4 SM22α OPN

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硅胶微导管套管缩窄术建立小鼠颈总动脉血管重塑模型

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第二军医大学学报 2021年第8期42卷 875-881页

作者：赵峰徐强胡舒婷郭志福宋晓伟吴弘海军军医大学(第二军医大学)长海医院心血管内科上海200433 海军905医院心血管内科上海200050 宁夏医科大学基础医学院生理学教研室银川750004

目的通过硅胶微导管套管缩窄术建立一种新的小鼠颈总动脉血管重塑模型,分析血管缩窄时间与血管重塑之间的关系。方法12只C57BL/6小鼠经异氟烷麻醉后,取颈正中切口,分离左、右侧颈总动脉。左侧颈总动脉行缩窄术,将长1 cm、内径0.3 mm的... 详细信息

目的通过硅胶微导管套管缩窄术建立一种新的小鼠颈总动脉血管重塑模型,分析血管缩窄时间与血管重塑之间的关系。方法12只C57BL/6小鼠经异氟烷麻醉后,取颈正中切口,分离左、右侧颈总动脉。左侧颈总动脉行缩窄术,将长1 cm、内径0.3 mm的硅胶微导管纵向剖开后套入颈总动脉,固定并扎紧;右侧颈总动脉仅行假手术,不放置硅胶微导管,不进行缩窄术。在术后2周和4周时分别处死6只小鼠,3只用于组织病理学观察,3只用于RNA和蛋白提取。取小鼠两侧颈总动脉制作病理切片,采用H-E染色观察颈总动脉血管的显微结构,免疫组织化学染色检测颈总动脉组织中血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;取两侧颈总动脉RNA和蛋白样品,采用qRT-PCR检测血管平滑肌表型转化标志分子钙调理蛋白1(CNN1)、平滑肌肌动蛋白α2(ACTA2)的表达,蛋白质印迹法检测细胞增殖相关分子周期蛋白A2、周期蛋白D1和PCNA的表达。结果12只小鼠左侧颈总动脉套管缩窄手术均获得成功,套管扎紧后即刻可见血管管腔狭窄但血流未被阻断,术后2周和4周取材时小鼠均无明显异常表现。H-E染色结果显示,术后2周时小鼠左侧颈总动脉血管外膜组织明显增生,4周时小鼠左侧颈总动脉血管中膜和内膜明显增生。免疫组织化学染色结果显示,术后2周和4周时小鼠左侧颈总动脉出现大量PCNA表达,提示平滑肌细胞异常增殖。qRT-PCR检测结果显示,术后2周和4周时小鼠左侧颈总动脉收缩型平滑肌细胞标志分子CNN1、ACTA2的表达水平均降低。蛋白质印迹法检测结果显示,术后2周和4周时小鼠左侧颈总动脉细胞周期蛋白A2、周期蛋白D1和PCNA的表达水平均升高。结论硅胶微导管套管致小鼠颈总动脉缩窄是一种简单、高效的血管重塑模型。

关键词：血管重塑血管平滑肌表型转化颈总动脉缩窄微导管内膜增生

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Nrf3靶向Mir-101c调节血管钙化的研究

Nrf3靶向Mir-101c调节血管钙化的研究

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作者：孙厦厦浙江大学

学位级别：博士

研究背景及目标:在血管中膜钙化过程中,多种因素介导的血管平滑肌细胞向成骨细胞样表型转化是基本的病理特征。课题组既往研究发现Nrf3(Nuclear Factor,Erythroid 2 Like3)参与胚胎干细胞向血管平滑肌分化,表明Nrf3在心血管疾病中可以... 详细信息

研究背景及目标:在血管中膜钙化过程中,多种因素介导的血管平滑肌细胞向成骨细胞样表型转化是基本的病理特征。课题组既往研究发现Nrf3(Nuclear Factor,Erythroid 2 Like3)参与胚胎干细胞向血管平滑肌分化,表明Nrf3在心血管疾病中可以起到一定的作用。然而,在血管钙化进程中,Nrf3能否影响血管平滑肌成骨表型转化,从而调节血管钙化的进程还未有研究。本研究试图阐述Nrf3对血管钙化的作用,并寻找Nrf3参与血管钙化的可能通路,阐述其作用机制,为血管钙化的防治提供新的思路。研究方法:首先,我们在体外分离培养小鼠原代主动脉平滑肌细胞,在2.7 m M的氯化钙和2 m M的磷酸二氢钠的培养条件下诱导平滑肌细胞钙化,模拟临床上CKD(Chronic kidney disease)病人循环血中高钙高磷的环境,然后检测平滑肌细胞的Nrf3在钙化过程中的变化。与此同时我们还在平滑肌细胞钙化过程中过表达或抑制Nrf3,研究Nrf3在平滑肌细胞成骨样表型转化中的作用。其次,利用小鼠主动脉转录组测序、平滑肌细胞染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)测序及生物信息学分析、分子克隆等一系列方法鉴定Nrf3的功能性靶基因。第三,我们通过过表达或敲低靶基因探究其作用的部分机制。在动物实验上,我们采用高剂量维生素D(Vitmin D,VD)诱导小鼠血管钙化,比较野生型小鼠、Nrf3全身敲除小鼠和Nrf3血管平滑肌特异敲除小鼠血管钙化严重程度,在体探讨Nrf3在VD诱导的血管钙化模型中对其的作用。最后,分别采集CKD病人的钙化血管和非钙化的血管,探索Nrf3的表达差异情况。结果:原代血管平滑肌细胞用钙化培养基诱导细胞钙化,分别在0、1、3、5天提取RNA,发现Nrf3在平滑肌细胞钙化过程中表达显著升高。在细胞功能学研究中,敲除或者敲低Nrf3后,VSMC钙化减轻;反之,钙化明显加重。随后我们利用CHIP在体外寻找Nrf3下游靶点。根据CHIP-seq结果和相关文献,选定miR-101c可能为Nrf3的功能性靶基因,再结合双荧光素酶报告基因(Dual-luciferase reporter gene)实验发现Nrf3可以直接结合调控miR-101c的downstream区域。VSMC过表达Nrf3后,miR-101c在RNA水平表达下调,而抑制Nrf3则使其表达升高。双荧光素酶报告实验和分子克隆实验证实,过表达Nrf3能明显降低miR-101c 3’UTR调控的荧光素酶活性。在体外VSMC钙化过程中,miR-101c表达逐渐降低,抑制miR-101c表达可明显加重VSMC的钙化,反之则减轻。通过查找数据库,我们首先预测了Map3k1,Akt2,Msx2作为miR-101c的潜在下游分子靶点,通过一系列分子实验及双荧光素酶报告实验,我们发现miR-101c不能调控Akt2和Msx2,而Map3k1则是miR-101c的下游靶点之一。miR-101c可以通过调节Map3k1/ERK的磷酸化来影响血管的钙化。在体实验中,我们将Nrf3-KO小鼠和对照小鼠主动脉送mRNA转录组测序,发现两组在ERK的信号通路中同样存在差异。然后用维生素D诱导小鼠血管钙化,Nrf3全身敲除和平滑肌特异敲除小鼠主动脉的miR-101c表达升高,血管钙化程度减轻。对主动脉进行免疫荧光染色发现,Nrf3敲除的小鼠,p-ERK和RUNX2的荧光强度显著低于对照组。结论:本研究成功地揭示了Nrf3在血管钙化中的作用,Nrf3可以促进VSMC成骨样表型转化从而促进血管钙化。MiR-101c是Nrf3的功能性靶基因,Nrf3可直接结合miR-101c的downstream区域,抑制其表达。MiR-101c通过抑制Map3k1/ERK的磷酸化,降低Runx2的表达,减轻血管的钙化。提示Nrf3/miR-101c可能是治疗血管钙化相关疾病的新靶点。

关键词： Nrf3 血管平滑肌表型转化 microRNA101c 血管钙化

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