检索结果-内蒙古大学图书馆

生物医学工程学杂志 2006年第5期23卷 1086-1091页

作者：毛晓燕刘卫滨付士红李仁德梁国栋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 兰州大学生命科学院兰州730000

血管抑制素(A S)和内皮抑制素(ES)是两种具有较强活性的内源性血管抑制剂,联合应用具有协同作用。本研究通过大肠杆菌表达A S-ES融合蛋白,观察其对血管生成的抑制作用。首先用RT-PCR方法分别获得A S和ES基因,通过基因拼接获得融合基因,... 详细信息

血管抑制素(A S)和内皮抑制素(ES)是两种具有较强活性的内源性血管抑制剂,联合应用具有协同作用。本研究通过大肠杆菌表达A S-ES融合蛋白,观察其对血管生成的抑制作用。首先用RT-PCR方法分别获得A S和ES基因,通过基因拼接获得融合基因,构建了含有该融合基因的原核表达质粒——pET-42(b)/A S-ES。表达菌株经IPTG诱导后目的蛋白以包涵体形式表达,表达量为14%,分子量约65 KD。W estern b lotting检测表明表达产物可分别与A S和ES抗体产生特异的免疫反应。经复性、肝素亲和层析柱纯化的表达产物对鸡胚尿囊膜血管有明显抑制作用。本研究获得了A S、ES在大肠杆菌中的融合表达,目的蛋白具有特异的免疫反应性和血管抑制活性。

关键词：血管抑制素内皮抑制素融合原核表达包涵体

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血管抑制素基因治疗人胰腺癌的实验研究

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中华消化杂志 2001年第8期21卷 465-468页

作者：聂胜利袁世珍中山医科大学孙逸仙纪念医院消化科广州510120

目的　探讨应用脂质体介导血管抑制素 (angiostatin ,AG)基因治疗实验性人胰腺癌细胞系SW1990的价值。方法　血管抑制素AG基因被定向克隆入真核表达载体 pRC/CMV中。运用脂质体将重组体 pRC/CMV AG转入胰腺癌细胞系SW 1990中 ,进行抗肿... 详细信息

目的　探讨应用脂质体介导血管抑制素 (angiostatin ,AG)基因治疗实验性人胰腺癌细胞系SW1990的价值。方法　血管抑制素AG基因被定向克隆入真核表达载体 pRC/CMV中。运用脂质体将重组体 pRC/CMV AG转入胰腺癌细胞系SW 1990中 ,进行抗肿瘤研究。结果　构建的真核表达载体pRC/CMV AG经酶切证实正确。Westernblot和药敏试验均证实血管抑制素基因已整合到靶细胞DNA中并可分泌表达AG ,且可抑制血管内皮细胞的生长。动物模型显示 ,所构建的载体能在肿瘤内表达 ,且可有效抑制荷瘤裸鼠人胰腺癌细胞的微血管形成及肿瘤生长。结论　脂质体介导的重组体pRC/CMV AG有体内治疗胰腺癌的作用。

关键词：血管抑制素脂质体胰腺癌基因治疗实验研究

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血管抑制素基因真核表达载体的构建及转染研究

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癌症 2001年第7期20卷 723-725页

作者：聂胜利袁世珍李冰刘启才中山医科大学孙逸仙纪念医院消化内科广东广州510120 广州医学院分子医学研究中心广东广州510182

目的：构建血管抑制素(angiostatin,AG)基因真核细胞表达载体并进行转染研究。方法：根据已发表的血管抑制素基因的核苷酸序列，设计并合成一对引物，以鼠的纤溶酶原核酸为模板进行PCR扩增，将其基因克隆到真核表达载体pRC／CMV中，进... 详细信息

目的：构建血管抑制素(angiostatin,AG)基因真核细胞表达载体并进行转染研究。方法：根据已发表的血管抑制素基因的核苷酸序列，设计并合成一对引物，以鼠的纤溶酶原核酸为模板进行PCR扩增，将其基因克隆到真核表达载体pRC／CMV中，进行序列分析和酶切鉴定后，运用脂质体将重组质粒pRC／CMV-AG转入胰腺癌SW1990细胞中，观察其表达情况,以及其对血管内皮细胞生长的作用。结果：PCR扩增出一长1.4 kb的片断，酶切和序列分析证明含完整的AG基因序列，与已知的血管抑制素基因的同源性很高（>96％）。Western blot证实重组体pRC／CMV-AG有较高的表达，对血管内皮细胞的生长有一定的抑制作用。结论：重组体pRC／CMV-AG是一种高效真核表达载体；克隆的AG基因能抑制血管内皮细胞的生长。

关键词：血管抑制素载体基因治疗胰腺癌

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血管抑制素在肿瘤治疗中的研究进展

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实用肿瘤杂志 2000年第1期15卷 67-69页

作者：李舒丹厉有名浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003

血管抑制素(angiostatin),又译为血管稳定素,为一种新型的肿瘤血管形成抑制因子。肿瘤的血管生成对于原发性肿瘤和转移性恶性肿瘤的生长至关重要。近年已发现了许多血管形成的生长因子和抑制因子。Hanahan等人于1996年提出了“血管形成... 详细信息

血管抑制素(angiostatin),又译为血管稳定素,为一种新型的肿瘤血管形成抑制因子。肿瘤的血管生成对于原发性肿瘤和转移性恶性肿瘤的生长至关重要。近年已发现了许多血管形成的生长因子和抑制因子。Hanahan等人于1996年提出了“血管形成开关的平衡假说”(balancehypothesis...

关键词：肿瘤治疗血管抑制素

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血管抑制素与内皮抑制素（AS-ES）在大肠杆菌中的融合表达及鉴定

血管抑制素与内皮抑制素（AS-ES）在大肠杆菌中的融合表达及鉴定

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作者：毛晓燕兰州大学

学位级别：硕士

本文首先以人肝脏组织RNA为模板，利用高保真酶进行RT-PCR分别得到了血管抑制素和内皮抑制素基因，将AS、ES片段通过Linker连接形成融合基因，构建了原核表达质粒pET-42(b)/AS-ES，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，在IPTG的诱导下得到了目... 详细信息

本文首先以人肝脏组织RNA为模板，利用高保真酶进行RT-PCR分别得到了血管抑制素和内皮抑制素基因，将AS、ES片段通过Linker连接形成融合基因，构建了原核表达质粒pET-42(b)/AS-ES，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，在IPTG的诱导下得到了目的蛋白的表达。通过对培养基、诱导温度、诱导时间、IPTG浓度条件优化，确定实验室规模下最佳表达条件为2×YT培养基，1.0mMIPTG，42℃诱导3h以上，最高表达丰度达到菌体总蛋白的14﹪。表达产物经过超声波破碎、12﹪SDS-PAGE鉴定为主要以包涵体形式表达，分子量约65KD。Western-blotting检测表明表达产物对血管抑制素和内皮抑制素的抗体均有特异的免疫反应;表达产物经过包涵体复性、肝素亲和柱纯化后进行鸡胚尿囊膜实验证明复性后的蛋白具有抑制血管生成的活性。

关键词：血管抑制素内皮抑制素融合表达包涵体抑制血管生成

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血管抑制素的分离纯化及性质研究

血管抑制素的分离纯化及性质研究

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作者：房佰俊郑州大学

学位级别：硕士

该试验拟以小鼠肺动脉内皮细胞株及原代培养的人脐静脉内皮细株作为检测细胞,从人血浆组份III中用亲和层析及分子筛技术分离纯化plasminogen,经过对plasminogen进行有限酶解和亲和层析得到Kring1-Kring3和Kring1-Kring4部分,即angiostat... 详细信息

该试验拟以小鼠肺动脉内皮细胞株及原代培养的人脐静脉内皮细株作为检测细胞,从人血浆组份III中用亲和层析及分子筛技术分离纯化plasminogen,经过对plasminogen进行有限酶解和亲和层析得到Kring1-Kring3和Kring1-Kring4部分,即angiostatin,并在细胞水平、组织动物水平对其生物学特性进行研究.结论:1、以1H11、HUVEC为检测细胞,采用MTT法,是一种检测血管形成抑制剂的较好的体外实验方法:2、从人血浆组份III中分离纯化到的plasminogen,分子量约为94KD;而有限酶解plasminogen所得的HAG的分子量约为37KD、34KD、52KD;3、纯化的HAG体外能抑制内皮细胞的增殖,且对内皮细胞的细胞毒作用呈剂量和时间依赖性,而HAG对多数肿瘤细胞株和正常组织细胞的增殖则无影响;4、ECGF对HAG体外抑制内皮细胞的增殖有明显的拮抗作用;5、透射电镜及琼脂糖凝胶电泳提示HAG对1H11内皮细胞体外增殖的特异性抑制作用的机制之一是诱导1H11内皮细胞凋亡;6、HAG对人血管内皮细胞的敏感性高于对小鼠血管内皮细胞的敏感性;7、HAG能抑制小鼠LEWIS肺癌的生长,而无明显的常规化疗药物的免疫抑制等毒副作用;8、angiostatin可能存在种属差异.该实验原代培养了HUVEC,建立了检测血管抑制剂的体外实验方法,纯化人血浆组份III中的抗血管生成组分并对其生物学特性进行了研究,提示血浆来源的血管生成抑制剂治疗肿瘤具有良好的临床应用前景.

关键词：血管抑制素血浆组份III 内皮细胞株

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针康法对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损及缺血区碱性成纤维细胞生长因子、血管抑制素蛋白表达的影响

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中国康复理论与实践 2015年第10期21卷 1151-1155页

作者：唐强姜云飞朱路文叶涛宋名杨黑龙江中医药大学附属第二医院黑龙江哈尔滨市150001 黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨市150040

目的探讨针康法对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损及缺血区碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和血管抑制素(AS)蛋白表达的影响。方法采用随机数字表法将90只清洁健康级雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺治疗组、康复治... 详细信息

目的探讨针康法对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损及缺血区碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和血管抑制素(AS)蛋白表达的影响。方法采用随机数字表法将90只清洁健康级雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺治疗组、康复治疗组和针康治疗组,各组又分为3 d、7 d、14 d 3个亚组(n=6)。改良Longa法制备永久性脑缺血大鼠模型。模型组与假手术组不予任何治疗,针刺治疗组采用头穴丛刺疗法,康复治疗组采用跑台训练,针康治疗组采用针康法治疗。术后3 d、7 d、14 d采用改良神经功能缺损评分(m NSS)评估各实验组大鼠的神经功能,Western blotting法检测各实验组大鼠缺血半暗区b FGF和AS蛋白的表达。结果术后3 d、7 d、14 d,与模型组、针刺治疗组、康复治疗组比较,针康治疗组m NSS评分降低(P<0.05),b FGF蛋白表达升高(P<0.05),AS蛋白表达降低(P<0.05)。结论针康法能降低局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损,其机制可能与上调b FGF蛋白表达、下调AS蛋白表达有关。

关键词：脑缺血神经功能针康法碱性成纤维细胞生长因子血管抑制素大鼠

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催乳素及血管抑制素对哺乳动物卵泡发育的调控作用研究进展

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中国畜牧杂志 2022年第10期58卷 107-113页

作者：谢社风高凤磊李菊韩贝贝李承德卫恒习华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642 广东农工商职业技术学院热带农林学院广东广州510507 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000

哺乳动物卵泡发育主要受到卵巢轴生殖激素的调控。催乳素(PRL)作为经典的生殖激素可通过内分泌途径调控卵泡发育,也可以作为细胞因子对卵泡发育起局部调控作用。高水平的PRL能够抑制促性腺激素释放激素(GnRH)和黄体生成素(LH)等激素分泌... 详细信息

哺乳动物卵泡发育主要受到卵巢轴生殖激素的调控。催乳素(PRL)作为经典的生殖激素可通过内分泌途径调控卵泡发育,也可以作为细胞因子对卵泡发育起局部调控作用。高水平的PRL能够抑制促性腺激素释放激素(GnRH)和黄体生成素(LH)等激素分泌,从而抑制卵泡发育。近期研究表明,PRL具有促进血管发生的功能,对有腔卵泡发育具有促进作用;而PRL经组织蛋白酶(CTSD、BMP-1和MMPs)裂解可产生血管抑制素(Vi),PRL/Vi的相对水平对血管发生起到重要影响。本文主要对PRL及Vi的结构、分泌、作用机制及其在哺乳动物卵泡发育过程中可能的调节作用进行综述,可为探究动物卵泡发育的调控机制提供参考。

关键词：催乳素卵泡发育血管发生血管抑制素

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脂质体介导血管抑制素基因抗胰腺癌作用的实验研究

脂质体介导血管抑制素基因抗胰腺癌作用的实验研究

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作者：聂胜利中山大学

学位级别：博士

胰腺癌是一预后析差的恶性肿瘤.为运用血管抑制素基因治疗胰腺癌,我们构建一个真核表达质粒,通过脂质体将AS基因转入胰腺癌细胞系SW1990中,分析其在体外的抗血管活性及机制,同时研究其在裸鼠模型上肿瘤内注射脂质体-AS混合物对肿瘤血管... 详细信息

胰腺癌是一预后析差的恶性肿瘤.为运用血管抑制素基因治疗胰腺癌,我们构建一个真核表达质粒,通过脂质体将AS基因转入胰腺癌细胞系SW1990中,分析其在体外的抗血管活性及机制,同时研究其在裸鼠模型上肿瘤内注射脂质体-AS混合物对肿瘤血管形成的影响和抑瘤效应.结论:1、脂质体可介导AS基因成功转染胰腺癌细胞并可得以稳定地表达.2、重组的AS细胞在体外可明显抑制内皮细胞生长,在体内可明显抑制裸鼠的胰腺癌移植瘤效应的生长.3、AS抗血管生成和诱导细胞凋亡是其抑瘤效应的主要机制.4、脂质体介导的AS基因治疗可能成为胰腺癌的一种很有潜力的新的治疗方法.

关键词：血管抑制素基因治疗胰腺癌血管生成抗血管生成休眠疗法脂质体细胞凋亡

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人血管抑制素在毕节酵母中组成型与诱导型表达、纯化及功能研究

人血管抑制素在毕节酵母中组成型与诱导型表达、纯化及功能研究

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作者：张爱联中山大学

学位级别：博士

血管抑制素(angiostatin,AS)是一种重要的血管生成抑制因子,能抑制新生血管生成和实验小鼠肿瘤生长.血管抑制素最早是从荷瘤小鼠的血流和尿中提取的,提取的含量甚微,无法大规模生产.基因工程是大规模生产人血管抑制素(human angiostatin... 详细信息

血管抑制素(angiostatin,AS)是一种重要的血管生成抑制因子,能抑制新生血管生成和实验小鼠肿瘤生长.血管抑制素最早是从荷瘤小鼠的血流和尿中提取的,提取的含量甚微,无法大规模生产.基因工程是大规模生产人血管抑制素(human angiostatin,hAS)的重要途径.该课题研究在毕节酵母中诱导型和组成型表达hAS及其表达产物和纯化和生物活性分析.根据人血管抑制素基因序列合成引物,以人胚肝细胞cDNA为模板,PCR扩增出人血管抑制素基因,经DNA序列分析证明后,将其克隆于pPIC9K载体的多克隆位点,构建成表达质粒pPIC9K-AS.用电转法和原生质体法将pPIC9K-AS转化毕节酵母GS115,并用PCR技术检测转化子的hAS基因,通过G418抗性筛选高拷贝整合的转化子,构建成高拷贝hAS基因整合的毕节酵母工程菌GS115(pPIC9K-AS).选择BMGY-BMMY培养基体系诱导GS115(pPIC9K-AS)表达hAS基因.hAS表达量94mg/L.研究开始诱导时期的选择、接种量和甲醇浓度对hAS表达的影响,选择出细胞生长至A<,600>=10开始诱导、开始诱导时(Mut<\'+>)A<,600>=1、甲醇浓度0.75%的优化条件.在10L发酵罐中高密度发酵GS115(pPIC9K-AS),采用连续补料和甲醇诱导60h,A<,600>=217,hAS的分泌量为156mg/L.发酵物上清直接上SP-Sepharose Fast Flow柱后,再用Sephadex G100进行进一步纯化.hAS总回收率69.7%.纯度达93.5%.CAM试验结果证实hAS能抑制CAM血管生成,以100mg/kg/d的hAS皮下注射荷瘤的C57BL/6J小鼠,发现hAS抑制小鼠的B16黑色素瘤生长,抑瘤率达90.54%.

关键词：血管抑制素组成型表达诱导型表达毕节酵母纯化抗血管生成抗肿瘤

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