检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏医药 2009年第2期35卷 224-226页

作者：何荣荣周怀君南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科 210029

血管生成素家族(Ang)是近年来新发现的血管生成因子。Ang家族编码四种结构相似的蛋白质,包括Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4,均能与受体Tie-2结合,参与肿瘤血管生成的起始及延续过程,影响肿瘤的生长、侵袭和转移。应用以Ang家族或其受体为... 详细信息

血管生成素家族(Ang)是近年来新发现的血管生成因子。Ang家族编码四种结构相似的蛋白质,包括Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4,均能与受体Tie-2结合,参与肿瘤血管生成的起始及延续过程,影响肿瘤的生长、侵袭和转移。应用以Ang家族或其受体为靶标可抑制肿瘤血管生成,对肿瘤的治疗有潜在的应用前景。

关键词：血管生成素家族血管形成过表达家系肿瘤细胞凋亡受体结合肿瘤生长血管

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血管生成素-2及其受体在脉络膜新生血管中的表达

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眼科研究 2005年第3期23卷 249-251页

作者：曲冬懿何守志解放军总医院眼科北京100853

目的研究血管生成素2(Ang2)及其受体Tie2在脉络膜新生血管(CNV)中的作用机制。方法应用氪激光诱导BN大鼠CNV,检测Ang2mRNA,Ang2和Tie2在CNV中的表达,探讨其作用。结果Ang2mRNA在正常BN大鼠视网膜无表达。光凝后7d,Ang2mRNA于视网膜神经... 详细信息

目的研究血管生成素2(Ang2)及其受体Tie2在脉络膜新生血管(CNV)中的作用机制。方法应用氪激光诱导BN大鼠CNV,检测Ang2mRNA,Ang2和Tie2在CNV中的表达,探讨其作用。结果Ang2mRNA在正常BN大鼠视网膜无表达。光凝后7d,Ang2mRNA于视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、视网膜和脉络膜血管内皮细胞的阳性染色密度最高(P<0.05),7d后变化差异不显著(P>0.05)。Ang2及受体与Ang2mRNA表达部位及趋势相同。Tie2在正常脉络膜血管内皮细胞表达。结论Ang2和Tie2结合,参与CNV形成。

关键词：血管生成素血管生成素受体脉络膜新生血管大鼠

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血管生成素参与激素性股骨头坏死血管损伤的机制研究

血管生成素参与激素性股骨头坏死血管损伤的机制研究

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作者：万里甫安徽医科大学

学位级别：硕士

背景糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)是非创伤性股骨头坏死的最常见诱因,随着相关研究的不断深入,我们发现需要使用GC治疗疾病的患者中,大约有5-40%的比例,最终都会发展至股骨头坏死,并且股骨头坏死的发生率随着使用剂量的增加和使用时... 详细信息

背景糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)是非创伤性股骨头坏死的最常见诱因,随着相关研究的不断深入,我们发现需要使用GC治疗疾病的患者中,大约有5-40%的比例,最终都会发展至股骨头坏死,并且股骨头坏死的发生率随着使用剂量的增加和使用时间的延长而逐渐增加。股骨头血供减少是激素性股骨头坏死发生(steroid-induced osteonecrosis of the femoral head,SONFH)的重要机制之一,GC既能够对既存血管造成直接损伤,又能够抑制新生血管的形成。而血管生成素(angiogenin,Ang)几乎参与了血管从新生到成熟的整个过程,且骨髓间充质干细胞(bone marrow derived stem cell,BMSC)是Ang的重要来源。为此我们设想,糖皮质激素可能通过抑制BMSC来源的血管生成素表达抑制股骨头区域的血管新生,进而减少股骨头血供,诱导股骨头坏死的发生。而靶向干预Ang的表达能够缓解GC造成的血供减少,对SONFH起到一定的治疗作用。本研究旨在研究明确Ang在SONFH中的作用机制并为SONFH的早期诊断和治疗提供一定的依据。目的1)进一步探索激素性股骨头坏死的发生机制2)明确Ang对BMSC及其促血管生成能力的影响3)探索Ang靶向干预对SONFH的治疗作用方法:本研究共分为体内和体外两大部分。体外实验部分的所用GC为长效GC地塞米松(dexamethasone,DEX),所有细胞于37℃,含5%CO2中的细胞培养箱中培养。体内以SD大鼠为实验对象,根据所报道文献,SONFH模型建立方法为:甲强龙(methylprednisolone,MP)20mg/kg/d,每周连续3次臀大肌注射,连续注射3周,6周后取材检测。1)GC干预的BMSC中Ang的表达情况及促血管生成能力变化采用CCK8试剂盒检测BMSC增殖水平,流式细胞仪检测BMSC凋亡水平。western-blot 方法检测 BMSC 中 Ang、Runx2、ALP、aP2、PPAR-γ蛋白表达情况;Elisa方法检测BMSC培养上清中Ang表达情况。qRT-PCR方法检测Ang、Runx2、ALP、aP2、PPAR-γ的mRNA表达水平。取BMSC培养上清,检测干预后BMSC促人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)体外成管能力的变化。2)Ang靶向干预对BMSC促成管能力的变化采用慢病毒转染技术构建稳定过表达Ang的人BMSC细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白;并检测转染BMSC中Ang蛋白和mRNA的表达,进一步确认细胞构建是否成功。取各组上清液培养HUVEC,检测HUVEC的细胞体外成管。3)Ang靶向干预对大鼠SONFH的治疗构建大鼠SONFH模型,模型开始构建2周后向MP+angiogenin组股骨髓腔内注射Ang过表达慢病毒,6周后行血管造影,取股骨头标本,microCT扫描计算骨小梁参数,如骨密度、骨体积、骨小梁数量、骨小梁厚度、骨小梁间隔等,观察股骨头坏死发生情况。标本脱钙后microCT扫描观察各组大鼠股骨头血运变化,计算各组股骨头内血管体积,HE染色观察各组大鼠骨小梁结构,CD31染色观察血管新生情况。结果:1)GC抑制hBMSC增殖和成骨分化的同时抑制h BMSC中Ang的表达及抑制促成管能力。(1)CCK-8实验结果显示DEX抑制了 h BMSC的增殖,Annexin V-FITC细胞凋亡实验结果提示DEX促进了hBMSC的凋亡;(2)成骨、成脂诱导培养后,染色结果发现DEX明显抑制了hBMSC的成骨分化、促进了hBMSC的成脂分化;(3)qPCR实验结果显示DEX明显抑制了成骨相关基因m RNA的表达水平,促进了成脂相关基因m RNA的表达水平;(4)Western-blot实验结果显示DEX抑制了hBMSC的成骨分化相关蛋白的表达,促进了成脂分化相关蛋白的表达。(5)DEX抑制了hBMSC中Ang的表达,并抑制了体外促成管能力。2)Ang靶向干预促进了hBMSC中蛋白和RNA的表达,促进了hBMSC的体外促成管能力。(1).CCK-8结果显示,DEX可以抑制转染后的细胞增殖活力,但转入目的基因Ang组细胞增殖活力受到DEX抑制的影响减弱。(2)qPCR实验及WB实验均检验了转染效果,Ang靶向干预组(Ang组)的Ang基因及蛋白表达均明显提高。(3)Ang靶向干预后,Ang组促成管能力提升。3)Ang靶向干预对SONF有一定的治疗作用。(1)microCT扫描计算骨小梁各参数,发现MP组股骨头坏死最明显,MP+angiogenin组较MP组明显减轻了股骨头坏死表现;股骨头标本脱钙后micro CT扫描计算各组股骨头内血管体积

关键词：血管生成素骨髓间充质干细胞血管内皮细胞激素性股骨头坏死

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血管生成素-1、2及其受体Tie-2在口腔鳞癌的表达及意义

血管生成素-1、2及其受体Tie-2在口腔鳞癌的表达及意义

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作者：梁萍山西医科大学

学位级别：硕士

目的：检测血管生成素－１、２及其受体Ｔｉｅ－２在口腔鳞癌的表达，初步探讨其在鳞癌血管生成中的作用。方法：采用免疫组化ＳＡＢＣ法，ＤＡＢ显色，检测３４例口腔鳞癌和１６例正常口腔黏膜组织中的 Ang-1、 Ang-2、Tie-... 详细信息

目的：检测血管生成素－１、２及其受体Ｔｉｅ－２在口腔鳞癌的表达，初步探讨其在鳞癌血管生成中的作用。方法：采用免疫组化ＳＡＢＣ法，ＤＡＢ显色，检测３４例口腔鳞癌和１６例正常口腔黏膜组织中的 Ang-1、 Ang-2、Tie-2 受体，同样的方法检测 CD34，以确定血管生成量。所有口腔鳞癌病例来源于山西医科大学第一附属医院2000年1月—2003年9月的手术切除石蜡标本，所有标本术前未经放疗、化疗或生物治疗，并根据 1997 WHO 口腔黏膜癌和癌前病损的组织分型标准将鳞癌分为三级：I 级(高分化)11 例;II 级(中度分化)19 例;III 级(低度分化)4 例。正常黏膜来源于门诊手术。结果：Ang-1 在口腔鳞癌患者和对照组及各级鳞癌中无明显差异;Ang-2、Tie-2 及 CD34 在口腔鳞癌的表达明显高于口腔正常黏膜组(P<0.05)。Ang-2 在口腔鳞癌病理分级 II 级为 30.74±5.76/HP，III 级为 42.00±8.96/HP，均明显高于 I 级 25.73±4.86/HP(P 均<0.05);III 级明显高于 II 级(P <0.01)。Tie-2、CD34 随口腔鳞癌病理分级升高呈现递增趋势，但组间比较无显著差异(P 均>0.05)，等级相关分析无相关性(P 均>0.05)。结论：说明 Ang-2 的表达在口腔鳞癌中表达明显上调，并随着肿瘤恶性程度增高其表达水平进一步升高。其作为肿瘤血管新生的标志之一，可能和口腔鳞癌的血管生成和早期转移有关。

关键词：血管生成素 Tie-2 口腔鳞癌免疫组化

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血管生成素与颗粒蛋白前体相互作用的研究

血管生成素与颗粒蛋白前体相互作用的研究

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作者：肖渝浙江大学

学位级别：硕士

血管生成素(angiogenin,ANG)是迄今为止唯一一个基于其促进血管新生能力而被发现和分离纯化的血管生成因子(angiogenic factor),由123个氨基酸残基组成,分子量为14kDa。研究表明,ANG在肿瘤血管生成中发挥重要作用,但是目前对ANG促血管... 详细信息

血管生成素(angiogenin,ANG)是迄今为止唯一一个基于其促进血管新生能力而被发现和分离纯化的血管生成因子(angiogenic factor),由123个氨基酸残基组成,分子量为14kDa。研究表明,ANG在肿瘤血管生成中发挥重要作用,但是目前对ANG促血管生成机制的认识还不全面,有待进一步研究。蛋白质相互作用在生命活动中扮演关键角色。据此,我们认为血管生成素与其他蛋白质的相互作用介导了血管生成的一系列细胞生物学过程。为此,我们实验室运用酵母双杂交技术对人心肌cDNA文库进行筛选,获得了一批与血管生成素相互作用的蛋白质,其中一个重要的蛋白就是颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)。PGRN是分子量为68.5 kDa的分泌性生长因子,在生长发育、损伤修复和肿瘤形成过程中发挥重要作用。然而作为研究蛋白质相互作用的宿主,酵母本身存在着一些无法克服的缺点,酵母双杂交系统显示的相互作用蛋白还需要利用其他研究蛋白质相互作用的方法进一步验证。为进一步证明血管生成素与颗粒蛋白前体之间相互作用的真实性,我们构建了融合表达质粒pEYFP-ANG和pECFP-PGRN,并且将以上两种质粒共转染入COS-7细胞中表达,利用荧光共振能量转移技术(FRET)验证两者在真核细胞内的相互作用。此外,我们还利用将PRGN和ANG与荧光蛋白融合的方

关键词：血管生成素颗粒蛋白前体 FRET 共定位酵母双杂交

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血管生成素对小鼠卵巢功能的影响研究

血管生成素对小鼠卵巢功能的影响研究

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作者：刘凤兰华中科技大学

学位级别：硕士

目的:血管生成素（Angiogenin,ANG）是较早发现的具有很强促进血管生成活性的促血管生长因子之一,参与调节新血管生成和维持血管稳定,并且ANG是其他血管生成因子如血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）等重要... 详细信息

目的:血管生成素（Angiogenin,ANG）是较早发现的具有很强促进血管生成活性的促血管生长因子之一,参与调节新血管生成和维持血管稳定,并且ANG是其他血管生成因子如血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）等重要促血管生长因子发挥促进血管生长作用的必需和准许因子。ANG也存在于多种人体组织和体液中,可能参与人体内多种生理、病理过程。再者,2016年新发现ANG在血液干细胞、皮肤干细胞以及肿瘤干细胞中扮演干细胞调节者的角色,ANG还具有不同细胞特异性功能,使原始干细胞趋向静止状态但却促进前体干细胞增殖;因此,将可能在移植、组织修复以及干细胞应用工程等方面治疗潜力非常广阔。在肿瘤的发生发展中,ANG表现出促进血管内皮细胞增殖,又促进癌细胞增殖的双重作用。此外,研究发现在人体组织和体液中如血浆、血清、羊水、卵泡液等检测到ANG的存在,从而推测其在女性生殖疾病的发生发展中可能发挥作用;前期我们饲养C57BL/6J小鼠的过程中发现,ANG基因敲除小鼠（Ang（-/-））繁殖能力明显低于野生型（wide type,WT）小鼠（Ang（+/+））,表现为小鼠的生育率、产仔数降低;因此,深入研究ANG与女性生殖之间的关系,将可能为女性生殖相关疾病的诊断和治疗提供新的思路。本课题欲从小鼠生育率、产仔数、动情周期情况、不同时期的卵巢组织形态以及卵泡数等方面初步探讨ANG基因敲除对小鼠卵巢功能的影响。论文分为两部分进行阐述,如下:第一部分血管生成素基因敲除对小鼠卵巢功能影响的初步研究方法:本试验中所用C57BL/6J ANG基因敲除型纯合子Ang（-/-）及杂合子Ang（+/-）型雌性种鼠各2只,共4只由浙江大学医学院许正平教授馈赠,在本校实验中心饲养繁殖,进一步按照美国Tufts University胡国富教授实验室鉴定方法进行鉴定。从以下三个方面观察比较Ang（-/-）和WT（Ang（+/+））小鼠卵巢功能情况:1)8周龄雌性小鼠,每组20只,两组小鼠分别与WT雄性小鼠按1:1交配1w,取出雄鼠后雌鼠继续连续观察21天,计数两组的平均受孕率及平均每胎产仔数;2)8周龄雌性小鼠,每组3只,每只小鼠用阴道涂片法连续观察动情周期情况35天;3)每组12只雌性小鼠,每阶段3只分别于4、6、8、12周龄时脱颈处死,剖开腹腔,取出卵巢组织固定、石蜡包埋、切片,HE染色观察卵巢组织形态,对卵巢组织中的各级卵泡数目分别进行计数与统计分析。结果:1、生育能力观测:结果表明Ang（-/-）雌性小鼠的受孕率及平均每胎产仔数下降。WT组受孕率47.50%,Ang（-/-）组受孕率40.00%,两组间无显著性差异（P=0.342）;WT组平均每胎产仔数7.20±1.15,Ang（-/-）组平均每胎产仔数4.55±0.94,与WT组相比,平均每胎产仔数极显著下降（P＜0.001）。2、阴道涂片法观察动情周期:结果表明雌性Ang（-/-）小鼠动情周期出现紊乱,WT组小鼠平均动情期（8.33±1.03）天,Ang（-/-）组（1±0.89）天,动情期较WT组极显著缩短（P＜0.001）;WT组小鼠平均动情间期（6.17±0.75）天,Ang（-/-）组（12.5±1.38）天,动情间期较WT组很显著延长（P＜0.002）;WT组小鼠平均动情前期（4.00±0.63）天,Ang（-/-）组（8.83±1.17）天,动情前期较WT组有很显著延长（P=0.003）;动情后期两组间无显著差异。3、卵巢组织形态观察:4、6周龄小鼠卵巢组织形态两组无显著差别;8和12周龄Ang（-/-）小鼠卵巢组织结构紊乱、皮质闭锁卵泡明显可见,卵巢间质增生增厚,黄体颗粒细胞排列疏松且不规则。4、4、6、8、12周龄小鼠卵巢各级卵泡数比较1)原始卵泡数:（1）4W:WT组平均原始卵泡数125.33±11.33,Ang（-/-）组119.83±2.79（P=0.137）;（2）6W:WT组118.23±10.36,Ang（-/-）组115.00±5.87（P=0.355）;（3）8W:WT组64.00±5.22,Ang（-/-）组62.33±5.54（P=0.793）;（4）12W:WT组33.17±6.08,Ang（-/-）组27.43±5.38（P=0.979）,各阶段平均原始卵泡数两组间比较均无显著性差异。2)初级卵泡数:（1）4W:WT组平均初级卵泡数26.33±5.32,Ang（-/-）组15.50±3.83,较之WT组极显著性降低（P＜0.001）;（2）6W:WT组18.33±3.61,Ang（-/-）组9.33±3.01,较之WT组极显著性降低（P＜0.001）;（3）8W:WT组13.17±2.32,Ang（-/-）组9.33

关键词：血管生成素卵巢功能动情周期卵泡环磷酰胺

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血管生成素-1、2及其受体Tie-2在寻常型银屑病皮损中的表达及意义

血管生成素-1、2及其受体Tie-2在寻常型银屑病皮损中的表达及意义

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作者：崔云裳山东大学

学位级别：硕士

研究背景银屑病是一种常见的以皮肤鳞屑性红斑为主要特征的慢性炎症性皮肤病,病理表现为表皮过度增殖、真皮乳头层微血管异常增生及炎细胞浸润。患者皮损中真皮乳头层微血管扭曲扩张、通透性增加,促进了炎症反应,且出现新生血管。微血... 详细信息

研究背景银屑病是一种常见的以皮肤鳞屑性红斑为主要特征的慢性炎症性皮肤病,病理表现为表皮过度增殖、真皮乳头层微血管异常增生及炎细胞浸润。患者皮损中真皮乳头层微血管扭曲扩张、通透性增加,促进了炎症反应,且出现新生血管。微血管生成异常与银屑病发生、持续存在及复发有密切关系,在银屑病发病中起重要作用。目前有关银屑病血管生成,特别是一些血管生成相关因子以及抗血管生成药物治疗银屑病的研究日益受到重视。血管生成素(angiopoietin,Ang)是新近发现的一族分泌型糖蛋白类细胞因子,主要在肿瘤细胞和内皮细胞中表达,与其酪氨酸激酶受体-2(tyrosine kinase withimmunoglobulin and epidermal growth factor homology domains,Tie-2)特异性结合,主要参与血管的成熟,维持血管的完整性及稳定性,并在血管发育、血管重建、炎症、癌症等生理及病理过程中发挥重要作用。已知的血管生成素家族成员有Ang1、2、3、4,其中Ang-1和Ang-2与血管生成关系最密切。有研究表明,Ang-1与Tie-2结合,在促进血管的成熟,维持血管的完整性及稳定性过程中起重要作用,而Ang-2与Tie-2结合参与引发血管的重新塑型和内膜去稳定的作用,在血管重塑、胚胎血管发育、癌症发生发展等过程中都发挥重要作用。研究目的研究Ang-1、2与Tie-2在寻常型银屑病进行期皮损组织中的表达,分析其在寻常型银屑病皮损组织处与正常组织中表达水平的差异和三者之间的相关性,探讨其在促进银屑病发病过程中的作用。研究方法利用免疫组织化学方法检测24例寻常型银屑病进行期皮损组织和12例正常皮肤组织石蜡包埋组织标本中Ang-1、2及其受体Tie-2的表达与定位。综合染色强度及阳性细胞数对其染色结果进行半定量测定,分析其在寻常型银屑病组织皮损处与正常组织中表达水平的差异;并对Ang-1、2及其受体Tie-2在皮损中的两两表达水平进行相关性分析,探讨三者之间的相互关系。结果在银屑病皮损组织中,Ang-1主要表达于受累皮肤真皮乳头层的基质细胞的胞浆内,Ang-2主要表达于受累皮肤表皮层和真皮乳头层的内皮细胞,Tie-2主要表达于受累皮肤表皮层和高度血管化的真皮乳头层的内皮细胞和包括真皮深层的其它区域的内皮细胞;在正常皮肤组织中,Ang-1表达极弱或呈阴性表达,Ang-2呈阴性表达,Tie-2仅在真皮深层内皮细胞可见表达。Ang-1、2与Tie-2在银屑病皮损处的表达明显高于正常皮肤,其差异具有统计学意义(P＜0.05)。寻常型银屑病组织中Ang-1、2及Tie-2表达均上调,任意两者之间的表达均呈显著正相关(P＜0.05)。结论①Ang-1在银屑病皮损处真皮乳头层的基质细胞中表达,在正常皮肤中几乎无表达;②Ang-2在银屑病皮损处表皮层和真皮乳头层的内皮细胞表达,在正常皮肤组织中无表达;③Tie-2在银屑病皮损处表达于受累皮肤表皮层和高度血管化的真皮乳头层的内皮细胞和包括真皮深层的其它区域的内皮细胞,在正常皮肤组织中仅在真皮层血管内皮细胞中表达,其在银屑病皮损中的表达显著高于正常组织;④血管生成在银屑病进展过程中起重要作用,Ang-1、2和Tie-2在银屑病皮损处的高表达与银屑病血管新生密切相关,Ang-1、2交替作用于Tie-2受体,促进银屑病皮损处血管生成。

关键词：银屑病血管生成素 Tie-2受体血管生成

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血管生成素及其受体在腹膜透析腹膜组织中的表达

血管生成素及其受体在腹膜透析腹膜组织中的表达

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作者：庄薇南昌大学

学位级别：硕士

目的：众所周知,长期的腹膜透析会导致腹膜功能逐渐出现衰退,最终导致超滤衰竭,使得尿毒症患者最终不得已退出腹膜透析。新近研究发现,腹膜发生血管新生是患者腹膜功能衰退的主要原因之一。本实验旨在通过建立尿毒症腹膜透析大鼠模型,... 详细信息

目的：众所周知,长期的腹膜透析会导致腹膜功能逐渐出现衰退,最终导致超滤衰竭,使得尿毒症患者最终不得已退出腹膜透析。新近研究发现,腹膜发生血管新生是患者腹膜功能衰退的主要原因之一。本实验旨在通过建立尿毒症腹膜透析大鼠模型,了解其腹膜组织血管生成素及其受体的表达情况以及引起血管生成素及其受体变化的影响因素,以探讨腹膜新生血管的发生机制。方法：选取健康SD雄性大鼠30只,体重约为180-220g,均购于江西省中医院医学动物实验中心。适应性喂养一周以后,随机选取其中22只大鼠建立经典的5/6肾切除术尿毒症模型,造模四周后采集大鼠尾静脉测血肌酐、尿素氮值,肾切除术后4周,造模成功的大鼠腹腔内予植入自制的腹透管,随机分为尿毒症组(NS组)及腹透组(PD组)。尿毒症组每日给予20ml生理盐水腹腔灌注,腹透组则每日给予20ml 4.25%百特腹透液腹腔灌注,共持续六周。余下未造模的8只大鼠拟为对照组(C组),行假手术且不予任何液体灌注。所有的大鼠均正常饮食饮水,灌液六周后取大鼠腹膜组织,观察腹膜血管新生情况；免疫组织化学染色及逆转录聚合酶链式反应技术(reverse transcription-polymerise chain reaction, RT-PCR)检测腹膜组织血管生成素及其受体的表达变化。结果：(1)实验表明PD组相对其他两组新生血管数显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05);NS组新生血管数较C组为多,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化显示各组大鼠血管生成素1(Angpt-1)阳性细胞数比较P>0.05,无统计学意义；血管生成素2(Angpt-2)及其受体2(Tie-2)阳性细胞数PD组相对于C组和NS组显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05)；NS组较C组亦有增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR显示Angpt-1mRNA条带半定量分析结果在三组间无统计学意义(P>0.05)；PD组Angpt-2 mRNA和Tie-2mRNA条带深于其他两组,半定量分析差异具有统计学意义(P<0.05);NS组Angpt-2 mRNA和Tie-2 mRNA半定量分析结果高于C组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4) Angpt-2阳性细胞数与腹膜新生血管数之间存在直线正相关关系(P<0.05, R<0.855); Angpt-2mRNA半定量分析结果与腹膜新生血管数之间亦呈直线正相关关系(P<0.05,R<0.742)。结论：尿毒症状态及腹膜透析液均会上调腹膜血管生成素-2及其受体的表达,但未见血管生成素1的表达出现明显变化。腹膜血管生成素-2及其受体的表达与腹膜血管新生密切相关。

关键词：腹膜透析血管新生血管生成素受体

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血管生成素与Fibulin蛋白家族相互作用的验证与功能探索

血管生成素与Fibulin蛋白家族相互作用的验证与功能探索

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作者：汤佳城浙江大学

学位级别：硕士

血管生成素(Angiogenin, ANG)是最初从人结肠癌细胞系HT-29培养液中分离纯化得到的生长因子,因其具有强烈的促血管生成活性而得名。它是一个单链碱性蛋白质,由123个氨基酸残基组成,分子量约为14 kDa。目前,已经知道血管生成素作为一个... 详细信息

血管生成素(Angiogenin, ANG)是最初从人结肠癌细胞系HT-29培养液中分离纯化得到的生长因子,因其具有强烈的促血管生成活性而得名。它是一个单链碱性蛋白质,由123个氨基酸残基组成,分子量约为14 kDa。目前,已经知道血管生成素作为一个重要的血管生成因子,在肿瘤血管生成的过程中发挥重要作用,它可激活细胞外周的蛋白酶并降解基底膜和胞外基质、可活化信号通路、可进入靶细胞的细胞核并促进rRNA转录,从而促进血管内皮细胞及平滑肌细胞的迁移、增殖和粘附。但从总体上看,对血管生成素促进血管生成的分子机制认识还不全面,许多方面尚待深入研究。蛋白质是生命活动的体现者和执行者,蛋白质-蛋白质之间的相互作用几乎参与了每一个生物学过程,并在其中扮演极其重要的角色。在我们的前期工作中,已经利用酵母双杂交的方法从人肝脏cDNA文库和心肌cDNA文库中筛选到了一些可能与血管生成素有相互作用的蛋白质,其中包括Fibulin-1、Fibulin-2、含表皮生长因子结构域的Fibulin样胞外基质蛋白1 (EGF-containing Fibulin-like Extracellular Matrix Protein 1, EFEMP1,又称Fibulin-3)、含表皮生长因子结构域的Fibulin样胞外基质蛋白2(EGF-containing Fibulin-like Extracellular Matrix Protein 2, EFEMP2,又称Fibulin-4)四个蛋白。因此,在本论文中我们利用蛋白沉降实验(GST pull down)技术验证了Fibulin-1、-2、-3、-4与血管生成素相互作用的真实性。分析发现,Fibulin家族另一成员Fibulin-5和Fibulin-1,-2,-3,-4在氨基酸序列上存在着很高的相似性,它们多数的结构域也相同。据此,我们推测Fibulin-5也极有可能与ANG存在着相互作用,并通过酵母双杂交实验、GST蛋白沉降(GST-pull down)实验和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)实验得到了证实。这一发现扩充了实验室前期发现的血管生成素相互作用蛋白数据库,为探索血管生成素作用机制提供了新的线索。 Fibulin-5是一个胞外基质糖蛋白,广泛分布于富含弹性蛋白的组织中,可通过与其它胞外蛋白相互作用而调节基质的结构。近来研究发现Fibulin-5是一个内源性血管生成抑制剂,可支持细胞粘附,并可抑制FN介导的细胞迁移。鉴于Fibulin-5与ANG间存在相互作用并且都参与血管生成过程的调节,我们首先检测了ANG与Fibulin-5在胞外的相互作用对HUVE细胞粘附的可能影响。实验结果显示,将二者混合的蛋白基质未能明显改变Fibulin-5对HUVE细胞的粘附过程。此外,我们利用Transwell模型检测了ANG与Fibulin-5相互作用对内皮细胞迁移的可能影响,发现Fibulin-5可明显抑制HUVE细胞对FN蛋白的迁移,但在加入ANG蛋白后Fibulin-5的这一抑制效应并未明显改变,说明在该实验条件下,Fibulin-5与ANG的相互作用不参与Fibulin-5抑制HUVE细胞对FN蛋白的迁移过程。综上所述,本学位论文首次证实血管生成素与Fibulin家族Fibulin-1、-2、-3、-4、-5成员存在相互作用,并分析得到了它们与血管生成素相互作用可能的保守模序,命名为FBLN-ANG模序,该模序未在其它胞外蛋白中找到。此外,利用体外模型对Fibulin-5与血管生成素相互作用在血管生成过程中的生物学意义进行了探索,发现二者相互作用未改变Fibulin-5对内皮细胞迁移和粘附的功能。下一步工作的重点应放在两个方面：第一,对含有FBLN-ANG模序的Fibulin蛋白采用突变的方法明确该模序在Fibulin蛋白家族与ANG相互作用过程中的重要性,进而找到Fibulin蛋白家族与血管生成素相互作用的具体位点；第二,进一步探索Fibulin蛋白家族成员与ANG相互作用的生物学意义。

关键词：血管生成素血管生成 Fibulin蛋白家族 Fibulin-5 蛋白质相互作用酵母双杂交蛋白沉降技术免疫共沉淀

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血管生成素与血小板可能关系的探索

血管生成素与血小板可能关系的探索

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作者：金闻浙江大学

学位级别：硕士

血管生成素(Angiogenin，ANG)是从人结肠癌细胞系HT-29的培养基中分离纯化的生长因子，因其具有强有力的促血管新生能力而得名．它是一个由123个氨基酸残基组成的碱性蛋白，分子量约为14 kDa，属核糖核酸酶超家族，具有促血管生成必不... 详细信息

血管生成素(Angiogenin，ANG)是从人结肠癌细胞系HT-29的培养基中分离纯化的生长因子，因其具有强有力的促血管新生能力而得名．它是一个由123个氨基酸残基组成的碱性蛋白，分子量约为14 kDa，属核糖核酸酶超家族，具有促血管生成必不可少的微弱核糖核酸酶活性(约比核糖核酸酶A低5到6个数量级)。正常人体循环血液中存在一定浓度的血管生成素，约为300-400 ng／ml;而在一些血管生成相关疾病患者的血液中，血管生成素浓度明显增高，甚至超过500ng/ml．目前，我们不了解血液中为什么需要存在如此高浓度的血管生成素，也不十分了解它在这些血管生成相关疾病进程的作用。血小板作为血管中流动的血液的基本组分之一，在某些刺激因素的作用下可以活化，发生聚集、粘附和／或释放反应，不仅在止血、凝血和维持血管壁完整性等正常生理功能中起关键作用，而且参与多种疾病的发生和发展．研究发现，血小板颗粒内含有bFGF、VEGF等血管生成调节因子，当血管损伤时，活化的血小板将这些调节因子释放到血液中，从而调节血管生成．有意思的是，在糖尿病、外周动脉闭塞性疾病(peripheral arterial occlusive disease，PAOD)和肿瘤等患者的血液中，血管生成素的浓度与血小板的活性都有所增高．因此，我们认为探索了解血小板中是否存在血管生成素以及血小板与血管生成素问的关系是有重要意义的。为此，在本论文的第一部分，我们首先运用免疫印迹(Western Blot)和细胞免疫荧光的方法研究了血管生成素在血小板内的存在情况。将血液中的血小板分离、洗涤、裂解后，进行SDS-PAGE，然后把蛋白质转移到膜上，利用抗血管生成素的抗体检测到血小板中确实存在ANG。同时，本论文还利用间接免疫荧光法研究ANG在血小板中的定位情况。激光共聚焦显微镜拍摄的图片表明，ANG广泛散布于血小板中，并且和假性血管血友病因子(von Willebrand Factor，vWF，一种存储于α颗粒中的分子)在位置上有一定程度的重叠，提示ANG可能存在于血小板的α颗粒中．本论文的第二部分主要探索血管生成素与血小板在功能上的关系。首先，为明确ANG对血小板释放功能的影响，我们应用流式细胞仪检测膜表面表达P选择素(P-selectin)的血小板百分率，以评价ANG(500 ng／ml和2500 ng／ml)能否诱导血小板脱颗粒。结果显示ANG对于静息状态(rest)的血小板没有明显的促颗粒内容物释放的作用。其次，为探索ANG与其它血小板活化因素对血小板聚集功能的影响，我们应用流式细胞仪检测膜表面结合纤维蛋白原(fibrinogen binding)的血小板百分率，以评价在ADP(10-6M)和凝血酶(Thrombin，0.04 U／ml)的激活作用下，ANG(2500 ng／ml)能否促进或抑制血小板聚集。结果表明，不论ANG与血小板孵育多少时间，不存在与ADP或Thrombin的协同或拮抗效应。另外，我们还利用血小板聚集仪测定富血小板血浆(Platelet Rich Plasma，PRP)的透光性，来直观地研究在ADP(10-6 M)或胶原(collagen，lμg／ml)的作用下，ANG(2500 ng／ml)对血小板聚集的影响。结果显示不论ANG与血小板孵育多少时间，不存在与协同或拮抗效应。最后，为探讨ANG与collagen对血小板粘附功能的影响，我们应用血小板流动小室模拟小动脉或中动脉狭窄时的血流(剪切力为1500s-1)观察在collagen(0.2μg／cm2和1μg／cm2)包被的玻片上，ANG(2500ng／ml)能否促进或抑制血小板粘附。结果显示这两种浓度的COllagen和ANG没有协同或拮抗血小板粘附的作用。以上两部分研究结果表明，虽然血小板中存在一定量的血管生成素，但在本论文的实验设计和条件下，没有观察到血管生成素对于血小板功能的影响。下一步的关键工作是探索明确血小板中存在的血管生成素的生理／病理意义。

关键词：血管生成素血小板血小板活化

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