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生理科学进展 2005年第1期36卷 55-57页

作者：程敏郭淮莲北京大学人民医院神经内科北京100044

血管生长素 (angiogenin ,ANG)是一种促使新血管生成的诱导剂 ,它属于核糖核酸酶超家族中的一员。ANG蛋白含 12 3个氨基酸 ,相对分子量为 14 .4kD ,在肿瘤细胞中首先发现 ,也存在于正常细胞中 ,可由多种细胞分泌 ,其核糖核酸酶活性较弱... 详细信息

血管生长素 (angiogenin ,ANG)是一种促使新血管生成的诱导剂 ,它属于核糖核酸酶超家族中的一员。ANG蛋白含 12 3个氨基酸 ,相对分子量为 14 .4kD ,在肿瘤细胞中首先发现 ,也存在于正常细胞中 ,可由多种细胞分泌 ,其核糖核酸酶活性较弱。研究证实 ,ANG可以在细胞间及细胞内发挥促血管生长作用。ANG与缺血性疾病、肿瘤、及其它疾病的关系已见不少报道。

关键词：血管生长素促血管生成核糖核酸酶

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人血管生长素的亚细胞定位

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第10期25卷 802-802页

作者：张宏斌武婕杨太成冼江王捷马文丽郑文岭广州军区广州总医院医学实验科 510010

已有大量研究表明血管生成素(angiogenin,ANG)与肿瘤的快速生长和转移有密切的关系,肺癌、胰腺癌、乳腺癌等患者的外周血血清中,ANG的水平明显升高,血清ANG的水平与这些肿瘤的发展及转移呈显著正相关,因此,可以检测血清中ANG的水平来预... 详细信息

已有大量研究表明血管生成素(angiogenin,ANG)与肿瘤的快速生长和转移有密切的关系,肺癌、胰腺癌、乳腺癌等患者的外周血血清中,ANG的水平明显升高,血清ANG的水平与这些肿瘤的发展及转移呈显著正相关,因此,可以检测血清中ANG的水平来预测肿瘤的发生与发展情况.此外,ANG对于创伤、烧伤及血循环较差的股骨头、半月板等损伤的修复具有较大的临床应用价值。

关键词：亚细胞定位血管生长素人脐静脉内皮细胞外周血血清临床应用价值真核表达质粒血管生成素 ANG 快速生长肿瘤

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心肌梗死基因治疗的实验研究

心肌梗死基因治疗的实验研究

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作者：赵晓燕浙江大学

学位级别：博士

研究背景心肌梗死（myocardial infarction，MI）后左室重构是左室扩张和残余的非梗死心肌肥厚等因素的综合结果，其显著影响心肌梗死患者的心室功能和预后。心肌梗死后患者由心功能不全发展为心力衰竭的过程中，毛细血管床与肥厚心肌... 详细信息

研究背景心肌梗死（myocardial infarction，MI）后左室重构是左室扩张和残余的非梗死心肌肥厚等因素的综合结果，其显著影响心肌梗死患者的心室功能和预后。心肌梗死后患者由心功能不全发展为心力衰竭的过程中，毛细血管床与肥厚心肌组织的比例结构失调可能发挥了重要作用。有研究报道，在非梗死区，微血管生长的速度和数量不足，导致肥厚心肌组织的毛细血管密度下降，由此继发氧气供应不足，心肌组织缺血，这将引起进行性的心肌细胞坏死、梗死区扩展和心肌纤维化。左室重构过程是决定心肌梗死患者预后的重要因素，因此各种旨在改善心肌梗死后左室重构的研究成为近年来研究的热点。诱导新血管生成已被证明是干预左室重构病理生理过程的有效手段。研究已经证明，某些药物、一些促血管生成因子以及干细胞治疗等均可有效诱导新血管生成，改善心肌梗死后左室重构和心功能。血管生长素（Angiogenin，ANG）是一个强效的促血管生长因子，而且是血管新生过程中必不可少的因子。体外实验证实，ANG促进内皮细胞的增殖、迁移，并在一定的培养条件下，形成管状结构；活体实验发现ANG可改善动物缺血肢体的血液供应；携带ANG的骨髓干细胞移植可促进缺血心肌血管生成、修复损伤心肌组织。然而，心肌内转染ANG基因对心肌梗死动物模型的影响目前尚未见报道。目的本研究构建携带目的基因ANG和报告基因lacZ的重组腺相关病毒载体（rAAV-ANG和rAAV-lacZ），建立心肌梗死大鼠模型，采用直接心肌内注射的方法，转染ANG基因，观察其在心肌组织的表达及其促血管生成作用、对心肌梗死大鼠左室重构和心功能的影响。方法按照AAV Helper-Free System试剂盒说明书，以pAAV-ANG（或pAAV-lacZ）、pAAV-RC和pHelper质粒磷酸钙共沉淀转染293细胞法包装rAAV-ANG和rAAV-lacZ病毒载体。成年雄性Wistar大鼠，随机分组：正常对照组（normal）、正常大鼠心肌内注射rAAV-ANG组（normal-rAAV-ANG）、假手术组（sham-operation）、心肌梗死大鼠心肌内注射生理盐水组（MI-saline）、心肌梗死大鼠心肌内注射rAAV-lacZ组（MI-rAAV-lacZ）和心肌梗死大鼠心肌内注射rAAV-ANG组（MI-rAAV-ANG）。以开胸结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌梗死模型。冠脉结扎后，立即取生理盐水、rAAV-lacZ或rAAV-ANG在梗死区周围4个点注射。4周后以超声心动图方法检测左室大小（左室舒张末期内径和左室收缩末期内径，即LVEDD和LVESD）和左室射血分数（LVEF），颈动脉插管测定有创左室血流动力学指标。大鼠处死后，测量左室重量，计算左室重量与体重比值。Western blot方法检测各组大鼠心肌组织ANG蛋白表达水平，免疫组化方法观察ANG蛋白在心肌组织的表达和分布。X-gal染色判断基因转染是否成功；免疫组化方法检测vWF表达以评价心肌组织毛细血管密度；组织学切片上测量非梗死区心肌细胞的横径和心肌间质纤维沉积指数。结果 1．转染pAAV-LacZ的阳性对照293细胞和转染pAAV-ANG的293细胞48小时后出现细胞变圆、脱壁等表现，并且培养基逐渐变为橙黄色，说明有重组病毒产生。rAAV-ANG病毒颗粒不低于1012个/ml。重组病毒感染滴度为3×1010IU/ml。 2．超声心动图和组织学检测证实，本研究成功建立了心肌梗死大鼠模型。大鼠心肌梗死面积在MI-saline、MI-rAAV-lacZ和MI-rAAV-ANG三组间相比无显著差异。 ***-rAAV-lacZ组大鼠左室心肌组织X-gal染色显示大量心肌细胞胞浆蓝染，提示这些细胞成功转染并表达了lacZ基因。MI-rAAV-lacZ组大鼠的肝、肺、肾和脑组织切片行X-gal染色，未见阳性细胞。 ***、sham-operation、MI-saline和MI-rAAV-lacZ组大鼠左室心肌组织可以检测到低水平的ANG蛋白表达。与normal和sham-operation组相比，normal-rAAV-ANG组和MI-rAAV-ANG组大鼠左室心肌组织ANG水平显著升高；与MI-saline组相比，MI-rAAV-ANG组大鼠左室心肌组织ANG水平亦显著升高，提示在正常大鼠和心肌梗死大鼠心肌组织内局部注射的rAAV-ANG基因均能高效表达。免疫组化实验结果发现ANG蛋白在大鼠左室心肌细胞胞浆中弥散分布，在血管周围

关键词：血管生长素腺相关病毒左室重构心功能心肌梗死磷酸受纳蛋白腺相关病毒心功能心肌梗死糖尿病磷酸受纳蛋白肌浆网Ca2+-ATPase

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血管生长素与血管生成

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 2003年第3期23卷 314-316页

作者：陈瑜张声林建银福建医科大学分子医学教研室福建福州350004 福建医科大学附属第一医院病理科福建福州350005

血管生长素 (ANG)属于RNase超家族 ,是唯一具有核糖核酸酶活性的血管生成因子。它可通过促进基膜的降解 ,促进内皮细胞增殖、迁移、粘附等作用来促进血管生成。ANG在多种肿瘤中表达增高。在糖尿病。

关键词：血管生长素血管生成肿瘤

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血管生长素基因转染5-氮胞苷诱导后的骨髓基质细胞移植于缺血心肌的实验研究

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中华医学杂志 2002年第19期82卷 1319-1323页

作者：李志刚梅举张宝仁第二军医大学长海医院胸心外科上海200433

目的　利用编码血管生长素基因的腺病毒 (Ad .ANG)转染 5 氮胞苷 (5 aza)诱导骨髓基质细胞 (BMSC) ,移植于大鼠缺血心肌后对心功能的保护和促血管新生作用。方法　体外培养Lewis大鼠的骨髓基质细胞 ,使用 3μmol/L的 5 aza体外强化诱... 详细信息

目的　利用编码血管生长素基因的腺病毒 (Ad .ANG)转染 5 氮胞苷 (5 aza)诱导骨髓基质细胞 (BMSC) ,移植于大鼠缺血心肌后对心功能的保护和促血管新生作用。方法　体外培养Lewis大鼠的骨髓基质细胞 ,使用 3μmol/L的 5 aza体外强化诱导 2 4h ;然后在 5 0倍的转染倍数 (病毒数 /靶细胞 )下 ,用Ad .ANG转染诱导BMSC。通过ELISA方法检测其对ANG的表达和分泌。然后将其移植于结扎了冠状动脉前降支的Lewis大鼠缺血心肌内 (组Ⅰ )。同时设置单纯细胞移植组 (组Ⅱ )和基因治疗组 (组Ⅲ ) ,以注射无血清培养基的实验动物为对照组 (组Ⅳ )。通过心脏射血分数 (EF)、左室舒张末期容积等超声指标研究其对心功能的保护作用 ;另外通过免疫组化、电镜研究细胞存活、分化和血管新生情况。结果　Ad ANG转染BMSC后 ,在培养上清中ANG大量出现 ,4～ 7d时达到表达高峰 ,15d后仍可检测到蛋白质表达。移植于缺血心肌 4周后 ,组Ⅰ和组Ⅱ缺血区的移植细胞大部分分化为心肌样细胞 ,组ⅠEF改善程度明显好于组Ⅱ (P <0 0 5 )、组Ⅲ (P <0 0 1)和组Ⅳ (P <0 0 1) ,在促血管新生方面 ,组Ⅰ也明显优于以上 3组 (组Ⅰ 36 3个 /HPF ;组Ⅱ 10 5个 /HPF ;组Ⅲ 2 3 1个 /HPF ;组Ⅳ 0 9个 /HPF)。结论　转染Ad ANG后的BMSC移植于缺?

关键词：血管生长素基因转染 5-氮胞苷心肌缺血骨髓细胞造血干细胞移植

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促血管新生治疗和冠心病

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心肺血管病杂志 2005年第2期24卷 128-128,F0003页

作者：安英华张建军上海交通大学第一附属人民医院心内科 200080

一、血管新生血管新生是Hertrg于 1935年提出的 ,Folkman和Klagabr un[1 ] 系统的阐述了血管新生的机制。现在人们对血管新生有了更深刻的理解 ,血管新生包括以下三种形式。1 血管形成 :是指原有的小毛细血管组织发芽后逐渐形成的毛细... 详细信息

一、血管新生血管新生是Hertrg于 1935年提出的 ,Folkman和Klagabr un[1 ] 系统的阐述了血管新生的机制。现在人们对血管新生有了更深刻的理解 ,血管新生包括以下三种形式。1 血管形成 :是指原有的小毛细血管组织发芽后逐渐形成的毛细血管和小的非肌性血管 ,一般发生在靠近坏死区的局部。基本过程包括内皮基底膜的降解、基底膜消化吸收、内皮细胞移行增殖形成新的血管芽孢、管腔的形成与连接等一系列过程。2 血管生成 :是由局部停留在胚胎发展期的成血管细胞发展而来 ,由已存在的小动脉原位扩大为肌性动脉 ,包括血管增生和血管重塑两个阶段。3 血管发生 :是指内皮祖细胞或成血管细胞原位

关键词：血管新生冠心病血管生长素硝酸甘油心绞痛

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血管生长素基因转染后的骨髓基质细胞移植于缺血心肌的实验研究

血管生长素基因转染后的骨髓基质细胞移植于缺血心肌的实验研究

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作者：李志刚第二军医大学

学位级别：博士

全世界每年都有数以千万计的患者被诊断为充血性心力衰竭(congestive heart failure，CHF)，其中大多数是由于心肌缺血和梗塞造成的，尤其是在发达国家，甚至在我国也是一样。为了治疗缺血性心脏病和由之引起的心力衰竭，人们想了... 详细信息

全世界每年都有数以千万计的患者被诊断为充血性心力衰竭(congestive heart failure，CHF)，其中大多数是由于心肌缺血和梗塞造成的，尤其是在发达国家，甚至在我国也是一样。为了治疗缺血性心脏病和由之引起的心力衰竭，人们想了很多办法，这里面包括药物治疗、心脏移植、机械辅助甚至全人工心脏、心肌成形和CABG等手术疗法。但对于大面积、弥漫性的冠心病患者来说，以上方法都很难遏制和逆转病情的发展。虽然心脏移植是治疗终末期心衰的理想手段，但由于供体有限，北美地区也只有15％-20％的患者能够有幸接受此项手术。因此，作为一种很有希望心衰治疗手段，细胞移植在过去的10年中逐渐引起了人们的注意；几乎与此同时，治疗性血管新生在改善缺血性心脏病患者心功能方面也表现出了满意效果。虽然心力衰竭的确切机制还没有完全被揭示，但心室重塑(ventricular remodeling)和血供不足肯定是晚期缺血性心脏病的最主要病理基础。因此，通过细胞移植置换疤痕组织，和通过血管生长因子的持续有效表达促进血管新生肯定是很有希望的两种治疗手段。已经有很多细胞被研究用来作为缺血心肌内细胞移植的供体。到目前为止，大部分学者都认为未成熟细胞或干细胞更适合于在缺血环境内移植，因为它们具有更强的耐缺血能力，而且干细胞在自体缺血心肌环境内还能够分化为心肌样细胞。另外，人们已经将多种血管生长因子用于临床Ⅰ期实验，初步结果表明促血管生长作用满意。ANG是一种性能非常优越的促血管生长因子，我们实验室已经报道了ANG蛋白在缺血心肌内的良好的促血管生长作用。因此，我们认为如果将表达ANG基因的自体骨髓基质细胞移植于缺血心肌后能从下面两个方面改善心功能：①通过移植细胞置换疤痕坏死组织；②通过血管新生改善局部血运、挽救自体受损心肌，并为移植细胞提供一个更好的生长环境。本课题主要研究方法： 1、BMSCs的体外分离培养和向心肌样细胞的诱导分化霓二旱区大纱协士学t住不申不灼县用叱外朴寺丛盼分别利用贴壁法和Pi。。11梯度离心法体外分离培养BMSCs，培养于含20％胎牛血清的IMDM培养基内，比较其在不同分离方法下的获取数量、增殖速度。通过CD71、 CD34、Vlll因子兔疫组化染色和流式细胞技术进行细胞成份鉴定。应用卜氮胞昔 u－Azaghdine，5－aza）体外诱导 BMSCs中间质干细胞向心肌样细胞分化。 2、***体外转染BMSCS及其促血管内皮细胞增殖作用研究利用贴壁法分离培养 BMSCs后，首先通过转染 p－半乳糖昔酶（Lac）基因评价腺病毒转染＊＊So后的转染效率和细胞毒性作用：然后通过免疫组化、地幻＊＊＊－81以．＿＿＿＿、、…＿．。＿．＿＿．．＿…＿。＿，＿＿…．．、、．．—＿、—。－．一和ELISA方法分别检测ANG在细胞内表达和细胞外分泌情况；通过血管内皮细胞与含有ANG的条件培养基共培养，研究ANG的体外促内皮细胞生长作用。 3、转染***后的BMSCS移植于缺血心肌的实验研究选取同基因背景的ie。is大鼠为研究对象，共42只，体重2009－2509。通过左侧开胸缝扎左冠状动脉前降支，建立心梗模型，4周后超声检测心功能。分组用药：组1 （***组人注射体外转染 AdjANG的 BMSCs 3 X 106乃0ul，n＝14；组＊（BMSCs组）：注射 BMSCs 3 X 106／50ul，n二8；组＊（Ad／ANG组）：注射 *** 5 ． X10

关键词：心肌缺血骨髓细胞细胞移植血管生长素腺病毒载体

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肿瘤患者血清血管生长素水平变化的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第2期18卷 190-190页

作者：张宏斌郭文军吴锦银杨太成王捷郑文岭广州军区广州总医院医学实验科广东广州510010 广州军区广州总医院麻醉科广东广州510010

血管生长素（ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ，ＡＮＧ）是一种能有效促进新生血管形成的刺激因子［１］，在新生血管的形成过程中发挥着重要的作用。而新生血管的形成又是体内实体瘤生长和转移必不可少的重要环节。已有大量研究表明，ＡＮＧ与肿... 详细信息

血管生长素（ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ，ＡＮＧ）是一种能有效促进新生血管形成的刺激因子［１］，在新生血管的形成过程中发挥着重要的作用。而新生血管的形成又是体内实体瘤生长和转移必不可少的重要环节。已有大量研究表明，ＡＮＧ与肿瘤的快速生长和转移具有密切的关系［２］。因此，通过检测体内ＡＮＧ的水平变化，有望对相关肿瘤的发生和发展提供有效的实验依据。１材料和方法１．１材料ＡＮＧ及其单克隆抗体（ｍＡｂ）均为本实验室自行研制［３］。辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠ＩｇＧ（ＨＲＰ－ＧＡＭＩｇＧ），购自武汉博士德生物工程有限公司。其余试剂均为国产分析纯。可拆式酶标板为ＮＵＮＣ公司产品。Σ９６０酶标仪为美国Ｍｅｔｅｒｔｅ

关键词：血清血管生长素检测肿瘤测定

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局灶性脑缺血大鼠脑内Angiogenin表达水平的变化

引用

中风与神经疾病杂志 2004年第4期21卷 292-294,i001页

作者：郭淮莲黄丽程敏伊鸣万有北京大学人民医院神经内科北京100044 北京大学医学部 97级本科生北京100083 北京大学神经科学研究所北京100083

目的　脑梗死患者存活时间与脑内血管增生程度相关。血管生长素 ( angiogenin)具有促血管生成作用。本研究旨在观察大鼠脑缺血后血管生长素在脑内表达水平的变化。方法　大鼠大脑中动脉栓塞法 ( MCAO法 )制作局灶性脑缺血模型 ,脑切片... 详细信息

目的　脑梗死患者存活时间与脑内血管增生程度相关。血管生长素 ( angiogenin)具有促血管生成作用。本研究旨在观察大鼠脑缺血后血管生长素在脑内表达水平的变化。方法　大鼠大脑中动脉栓塞法 ( MCAO法 )制作局灶性脑缺血模型 ,脑切片免疫组织化学染色检测血管生长素蛋白表达。结果　血管生长素在正常大鼠脑中普遍弱阳性表达 ,脑膜、室管膜及血管染色较为明显。脑缺血后 6 h缺血脑区血管生长素表达水平明显增强 ( P<0 .0 1) ,缺血 2 4 h内血管生长素表达水平逐渐升高。

关键词：局灶性脑缺血大鼠 Angiogenin 血管生长素免疫组化染色法检测

来源：评论

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血管生长素治疗家兔肢体缺血的实验研究

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中华实验外科杂志 2001年第3期18卷 218-220页

作者：包俊敏曹贵松景在平王元和应康谢毅第二军医大学长海医院血管外科上海200433 第二军医大学长征医院普外科第二军医大学长海医院烧伤科复旦大学遗传学研究所

目的　观察动脉内注射重组人血管生长素 (rhANG)对家兔缺血肢体血管再生的影响。方法　将 2 8只家兔随机均分为空白对照组、小剂量组、中剂量组、大剂量组。手术结扎、切断家兔股动脉各分支 ,插入硅塑导管至髂内、髂外动脉处。于术后第... 详细信息

目的　观察动脉内注射重组人血管生长素 (rhANG)对家兔缺血肢体血管再生的影响。方法　将 2 8只家兔随机均分为空白对照组、小剂量组、中剂量组、大剂量组。手术结扎、切断家兔股动脉各分支 ,插入硅塑导管至髂内、髂外动脉处。于术后第 11天经动脉内导管注射不同剂量的rhANG。分别作肢体血压测定、动脉造影、放射性核素血流测定及计算肢体肌肉毛细血管密度。结果　中剂量组、大剂量组与对照组、小剂量组各项指标于术后 2 0、3 0、40d时差异有非常显著性 (P <0 .0 1) ,尤以大剂量组变化最为明显。结论　家兔动脉内注射rhANG治疗肢体缺血 ,在用药 (2 0～ 40 μg)后 10～ 40d可观察到明显的促血管新生作用 ,此作用随rhANG的剂量增大而明显。

关键词：血管生长素肢体缺血血管再生家兔治疗 rhANG

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