检索结果-内蒙古大学图书馆

临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2011年第10期25卷 463-468页

作者：李隽孔维佳赵学艳杨阳胡钰娟华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科武汉430022 武汉市妇女儿童医疗保健中心武汉430016

目的:探讨以重组2型腺相关病毒(AAV2)介导锰超氧化物歧化酶(MnSOD)高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的作用及机制。方法:体外培养耳蜗血管纹缘细胞(MCs),分为实验组、对照组及正常组。实验组按感染复数(MOI)为104v.g/cell感染rAAV2-MnS... 详细信息

目的:探讨以重组2型腺相关病毒(AAV2)介导锰超氧化物歧化酶(MnSOD)高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的作用及机制。方法:体外培养耳蜗血管纹缘细胞(MCs),分为实验组、对照组及正常组。实验组按感染复数(MOI)为104v.g/cell感染rAAV2-MnSOD-EGFP,同时感染rAAV2-EGFP作对照组及不作处理缘细胞为正常组。荧光显微镜下观察MCs绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况及免疫印迹法(western blot)分析转染后MnSOD的表达水平。实验组及对照组同时暴露于400μmol/L H2O22 h,24 h后比色法测定各组丙二醛(MDA)含量;流式细胞PI荧光标记检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡因子Caspase-3活化片段Cleavedcaspase-3的表达。结果:①各组MCs感染病毒后,生长正常,实验组感染rAAV2-MnSOD-EGFP后4d出现EG-FP的表达,10 d至高峰;且持续细胞体外生长的整个周期。实验组MnSOD的表达及活性明显高与对照组及正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。②经H2O2作用后实验组MDA、Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的表达及凋亡率明显低与对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外培养的MCs使其高表达MnSOD,并对MCs氧化损伤有保护作用,这种保护作用与抑制凋亡因子Caspase-3的活化有关。

关键词：血管纹缘细胞重组2型腺相关病毒锰超氧化物歧化酶氧化应激

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成年大鼠耳蜗血管纹缘细胞的体外培养

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第22期21卷 1031-1033页

作者：李隽孔维佳陈敏周长璐华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科武汉430022

目的：建立成年大鼠耳蜗血管纹缘细胞（MC）的体外培养体系。方法：采用活体组织分离及培养技术，获取培养的大鼠耳蜗MC，透射电镜观察细胞超微结构，免疫组织化学法检测上皮细胞标志性中间丝角蛋白的表达及纯度，RT-PCR检测MC特征性的... 详细信息

目的：建立成年大鼠耳蜗血管纹缘细胞（MC）的体外培养体系。方法：采用活体组织分离及培养技术，获取培养的大鼠耳蜗MC，透射电镜观察细胞超微结构，免疫组织化学法检测上皮细胞标志性中间丝角蛋白的表达及纯度，RT-PCR检测MC特征性的中间丝角蛋白mRNA的表达。结果：体外培养的MC呈不规则多角形，细胞增殖相互连接，紧密排列呈现培养上皮细胞典型的“铺路石”样外观，并可见由数百个MC密集生长组成的折光性强的球形结构（dome）；透射电镜观察可见细胞周围有微绒毛样结构；免疫细胞化学检查，纯化后95％以上的MC细胞质呈桔黄色，而对照组无此着色。RT-PCR扩增出标志中间丝角蛋白基因表达的PCR产物，条带位于300--400bp，与目的条带（368bp）相符。结论：采用组织块培养技术成功建立成年大鼠耳蜗血管纹MC的体外培养体系，为进一步研究成熟期MC的功能提供合适的细胞模型。

关键词：耳蜗血管纹细胞培养缘细胞

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耳蜗毛细胞与血管纹的相互依存关系的研究

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中华耳科学杂志 2014年第3期12卷 475-480页

作者：李轶刘会占龚树生何志洲首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科北京100730 Department of Biomedical Sciences Creighton Universityusa68178

目的通过对Atoh1条件基因敲除小鼠及Mitf基因突变小鼠两个动物模型的研究,来验证毛细胞及血管纹两者的存活是否相互依赖,以及在内耳中是否存在钾离子从血管纹—毛细胞—支持细胞—血管纹循环通路。方法分别对一月龄两种模型小鼠进行ABR... 详细信息

目的通过对Atoh1条件基因敲除小鼠及Mitf基因突变小鼠两个动物模型的研究,来验证毛细胞及血管纹两者的存活是否相互依赖,以及在内耳中是否存在钾离子从血管纹—毛细胞—支持细胞—血管纹循环通路。方法分别对一月龄两种模型小鼠进行ABR、CM、CAP和EP的测量。并用免疫组化和共聚焦显微镜以及耳蜗铺片、切片对两种模型小鼠的耳蜗Corti’s器和血管纹进行形态学观察。结果内淋巴的缺损可造成外毛细胞的凋亡,但内毛细胞依然能够存活。20 mV的内淋巴电位是外毛细胞存活所必须的。血管纹的生存及功能并不需要功能正常的Corti’s器的支持,同时内淋巴电位的产生及维持并不依赖毛细胞及支持细胞的钾离子循环的支持。结论成熟毛细胞的存活依赖于正常的血管纹功能和内淋巴的离子环境。然而,血管纹的存活及功能却并不依赖Corti’s器的功能。

关键词： Corti’s器血管纹内淋巴电位 Mitf Atoh1

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耳蜗血管纹细胞离子转运的研究进展

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中华耳科学杂志 2015年第1期13卷 30-36页

作者：许庆庆郭维维翟所强杨仕明中国人民解放军总医院耳鼻喉头颈外科北京100853

本文综述了哺乳类动物耳蜗血管纹细胞的离子转运、内淋巴液生成以及耳蜗内淋巴电位产生的主要机制。详细阐述了每一种离子转运蛋白的作用,讨论了耳蜗血管纹中钾离子循环、氯离子循环和盐的平衡,以及这些平衡得以维持的机制。

关键词：血管纹离子转运

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耳蜗血管纹组织块的缘细胞培养

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临床耳鼻咽喉科杂志 2002年第7期16卷 352-354页

作者：张运东孔维佳华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科

目的 :建立豚鼠耳蜗血管纹 (SV)组织块缘细胞 (MCs)的培养方法 ,为进一步研究药物耳毒性及其作用机制奠定基础。方法 :2 6只豚鼠按SV培养时间随机分成 4组 :2 4h组 (n =8) ;72h组 (n =8) ;>72h组 (n =8) ;对照组 (新鲜SV固定组 ,n =... 详细信息

目的 :建立豚鼠耳蜗血管纹 (SV)组织块缘细胞 (MCs)的培养方法 ,为进一步研究药物耳毒性及其作用机制奠定基础。方法 :2 6只豚鼠按SV培养时间随机分成 4组 :2 4h组 (n =8) ;72h组 (n =8) ;>72h组 (n =8) ;对照组 (新鲜SV固定组 ,n =2 )。显微解剖数段连同螺旋韧带的SV组织块 ,置于 5 %CO2 / 95 %空气的二氧化碳恒温 (37℃ )培养箱中进行培养 ,分别进行形态学和组织学观察。结果 :培养 2 4hSV组织块保持良好活性 ,其组织学结构与新鲜固定的SV结构无明显差异 ;培养 72hSV组织块与新鲜固定的SV在组织学结构方面有显著性差异 ,不能观察到正常的SV结构 ,组织结构松散 ,缘细胞从组织块离心性生长出来 ;从SV组织块培养出的缘细胞能在培养皿内存活 13d。结论 :采用组织块培养技术 ,成功地建立了豚鼠耳蜗SV组织块的缘细胞培养方法 ;培养 2 4h的SV组织块光镜下保持了良好活性和正常组织学结构 ,可用来进一步研究药物耳毒性及其作用机制。

关键词：耳蜗血管纹缘细胞组织块培养

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胎儿耳蜗血管纹的扫描电镜观察

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临床耳鼻咽喉科杂志 2005年第4期19卷 157-159页

作者：林琳孙建和黄德亮朱光明侯宁解放军总医院耳鼻咽喉科研究所北京100853 解放军总医院病理科电镜室

目的借助扫描电镜技术观察血管纹的表面结构,以便对血管纹的结构和功能提供新的信息。方法标本取自尸检3个足月胎儿的6个颞骨,在死后尽可能快速取出耳蜗,经处理后,借助扫描电镜技术观察人胎儿耳蜗血管纹的超微结构。结果借助扫描电镜技... 详细信息

目的借助扫描电镜技术观察血管纹的表面结构,以便对血管纹的结构和功能提供新的信息。方法标本取自尸检3个足月胎儿的6个颞骨,在死后尽可能快速取出耳蜗,经处理后,借助扫描电镜技术观察人胎儿耳蜗血管纹的超微结构。结果借助扫描电镜技术可从耳蜗基底圈到顶圈,上起前庭膜嵴,下到基底膜的基底嵴全面观察血管纹的各个部分,血管纹边缘细胞表面结构呈圆球形,细胞表面有许多微绒毛。螺旋凸部位有一个细胞移行区,这个区域的边缘细胞表面形态明显不同,细胞细长或呈不规则的多角形细胞,细胞边界微绒毛丰富,显出明显的细胞界限,细胞表面分布均匀的微绒毛。血管纹断面的观察还可获得中间细胞、基底细胞和毛细血管结构。结论扫描电镜观察胎儿耳蜗血管纹,可获得整个血管纹全貌的表面精细结构,尤其是边缘细胞的表面形态,通过对血管纹断面的观察还可获得中间细胞、基底细胞的精细结构特征,为认识血管纹的结构和功能提供新的信息。

关键词：胎儿耳蜗血管纹显微镜检查,电子,扫描

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新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中ATP存在的证据

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2010年第10期24卷 462-465页

作者：陈洁何珊杨军上海交通大学医学院附属儿童医学中心耳鼻咽喉科上海200127 上海浦东新区人民医院耳鼻咽喉科上海交通大学医学院附属新华医院耳鼻咽喉-头颈外科

目的:研究体外培养的新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中存在ATP的证据,即细胞中是否存在ATP囊泡,体外培养液中能否检测到所释放的ATP。方法:采用出生1～3 d的Sprague-Dawley大鼠,进行体外血管纹缘细胞培养、纯化、鉴定。特异性标记ATP囊泡的... 详细信息

目的:研究体外培养的新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中存在ATP的证据,即细胞中是否存在ATP囊泡,体外培养液中能否检测到所释放的ATP。方法:采用出生1～3 d的Sprague-Dawley大鼠,进行体外血管纹缘细胞培养、纯化、鉴定。特异性标记ATP囊泡的喹丫因染色后在荧光显微镜下观察缘细胞中的ATP囊泡。采用生物发光法检测缘细胞细胞外液中所释放的ATP的浓度。结果:体外培养的新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞,经流式细胞法检测上皮细胞标志性的角蛋白和波形蛋白的纯度,证实培养所获得的细胞为缘细胞。经喹丫因染色后在荧光显微镜下可见缘细胞细胞质中存在大量的绿色星点状染色。采用生物发光法检测缘细胞细胞外液中ATP的浓度,通过细胞荧光值可计算出ATP的浓度。结论:新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中存在ATP囊泡,并能分泌ATP。

关键词：三磷酸腺苷耳蜗血管纹缘细胞细胞培养生物发光法

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老化型C57BL/6J小鼠耳蜗外侧壁血管纹Claudin-5、NF-κB、P21的表达

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听力学及言语疾病杂志 2021年第3期29卷 334-337页

作者：高险亭卢岭梁耕田陈应超吴龙军武汉市第三医院耳鼻咽喉头颈外科武汉430060

目的探讨紧密连接蛋白(Claudin-5)、核转录因子(NF-κB)、细胞周期抑制蛋白(P21)在老化型C57BL/6J小鼠耳蜗外侧壁血管纹内的表达及意义。方法将C57BL/6J小鼠分为青年组(3月龄)和老年组(24月龄),每组各20只,检测两组小鼠听性脑干反应(ABR... 详细信息

目的探讨紧密连接蛋白(Claudin-5)、核转录因子(NF-κB)、细胞周期抑制蛋白(P21)在老化型C57BL/6J小鼠耳蜗外侧壁血管纹内的表达及意义。方法将C57BL/6J小鼠分为青年组(3月龄)和老年组(24月龄),每组各20只,检测两组小鼠听性脑干反应(ABR)的反应阈,分别行组织学切片观察耳蜗外侧壁血管纹形态结构,免疫组化检测Claudin-5、NF-κB、P21在血管纹表达,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Claudin-5、NF-κB、P21在耳蜗的表达水平。结果与青年组小鼠相比,老年组C57BL/6J小鼠ABR阈值升高,差异有统计学意义(均为P<0.05);老年组C57BL/6J小鼠血管纹内细胞上Claudin-5表达减少,NF-κB、P21表达增多,差异有统计学意义(均为P<0.01);RT-PCR检测显示老年组耳蜗内Claudin-5含量明显减少,NF-κB、P21含量明显增多,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论Claudin-5、NF-κB、P21在老年组C57BL/6J小鼠耳蜗外侧壁血管纹内均有表达,Claudin-5表达降低可能与血管纹通透性相关,NF-κB和P21表达增多可能与内外淋巴循环紊乱和细胞凋亡有关。

关键词：血管纹紧密连接蛋白核转录因子细胞周期抑制蛋白耳蜗

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Mitf-M基因突变对猪耳蜗血管纹发育的影响

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中华耳科学杂志 2018年第4期16卷 483-487页

作者：陈林军邱士伟龙熙陈磊唐朝颖塞娜郭维维杨仕明韩维举中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科聋病教育部重点实验室聋病防治北京市重点实验室军事声损伤防护实验室北京100853 重庆市畜牧科学院重庆402460

目的研究Mitf-M基因突变是否会引起血管纹毛细血管、边缘细胞的变化,从而进一步了解Mitf-M基因突变引起Waardenburg综合征的病变机制。方法取出生后7d、10d、30d、40d的野生型和Mitf-M突变型猪共24头,分离解剖耳蜗外侧壁,运用免疫组织... 详细信息

目的研究Mitf-M基因突变是否会引起血管纹毛细血管、边缘细胞的变化,从而进一步了解Mitf-M基因突变引起Waardenburg综合征的病变机制。方法取出生后7d、10d、30d、40d的野生型和Mitf-M突变型猪共24头,分离解剖耳蜗外侧壁,运用免疫组织化学技术染色,观察野生型和Mitf-M突变型猪耳蜗血管纹毛细血管、边缘细胞在出生后不同时期的免疫荧光的差异。结果 Mitf-M突变型猪与野生型猪在出生后7d、10d及30d,血管纹毛细血管之间没有明显差异,而在40d,Mitf-M突变型猪相对野生型猪的血管纹毛细血管出现明显的减少,并有统计学意义。在7d、40d,Mitf-M突变型猪耳蜗血管纹边缘细胞的细胞骨架均无明显破坏,边缘细胞数量之间没有明显差异。结论 Mitf-M基因突变不引起血管纹边缘细胞骨架的破坏及边缘细胞数量的减少,且Mitf-M突变型猪在出生后早期30d内血管纹毛细血管没有明显变化,在40d后Mitf-M突变型猪较野生型猪的耳蜗血管纹毛细血管出现明显的减少。

关键词： Mitf 血管纹边缘细胞血管纹毛细血管猪

来源：评论

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血管纹边缘细胞形态及其IsK通道蛋白的分布

血管纹边缘细胞形态及其IsK通道蛋白的分布

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作者：高海河佳木斯大学

学位级别：硕士

目的:该实验在观察血管纹边缘细胞显微形态结构基础上,运用Western-blot(Western免疫印记法)和免疫电镜相结合的方法研究Isk通道蛋白在血管纹边缘细胞上的分布,探讨该细胞的离子转运机制.方法:1、取正常的Wistar鼠20只,灌注后剥离出耳... 详细信息

目的:该实验在观察血管纹边缘细胞显微形态结构基础上,运用Western-blot(Western免疫印记法)和免疫电镜相结合的方法研究Isk通道蛋白在血管纹边缘细胞上的分布,探讨该细胞的离子转运机制.方法:1、取正常的Wistar鼠20只,灌注后剥离出耳蜗血管纹,然后融解和提取其总蛋白,进行Western-blot实验(一抗为兔抗鼠Isk蛋白抗体,二抗为辣根过氧化酶标记的羊抗兔IgG);2、另取正常Wistar鼠10只,麻醉、灌注、固定(无后固定)、包埋(45-50℃)、切片、免疫染色(一抗同上,二抗为10nm金颗粒标记的羊抗兔IgG)、电子染色,然后在透射电镜(EM)下观察.结果:Western-blot:在样品泳道均有一条清晰条带,近15kD,与Isk通道的分子量相符;免疫电镜:免疫染色颗粒分布在边缘细胞的顶膜上,而在血管纹的其他部位及螺旋韧带上则无分布.结论:在观察血管纹边缘细胞的正常显微形态结构的基础上,该实验首次应用Western-blot和免疫电镜相结合的技术,证实Isk通道蛋白分布在血管纹边缘细胞的顶膜上,支持边缘细胞离子转运机制的单泵模式.此外,证明实验中所用的第一抗体(兔抗鼠Isk通道蛋白)除了可用于Western-blot,还可用于免疫组化实验.

关键词： IsK通道蛋白边缘细胞血管纹 Western-blot 免疫电镜

来源：评论

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