检索结果-内蒙古大学图书馆

中国公共卫生 2006年第12期22卷 1492-1493页

作者：孟冬娅薛文成胡晓芳杨婧万楠陈渝宁马晓博沈阳军区总医院检验科沈阳110016

解脲脲原体(Uu)是引起非淋菌性泌尿生殖道炎(NGU)的主要致病体,约占30%～50%[1,2],大环内酯类(Macrolides)抗生素是其主要治疗药物之一.由于发病率不断增加,以及抗生素的不规范使用,耐药Uu株逐年增加,甚至出现多重耐药,给NGU的防治带来... 详细信息

解脲脲原体(Uu)是引起非淋菌性泌尿生殖道炎(NGU)的主要致病体,约占30%～50%[1,2],大环内酯类(Macrolides)抗生素是其主要治疗药物之一.由于发病率不断增加,以及抗生素的不规范使用,耐药Uu株逐年增加,甚至出现多重耐药,给NGU的防治带来一定困难.本文分析了2003～2005年分离自妇科、皮肤科门诊患者泌尿生殖道分泌物的Uu株对大环内酯类抗生素的耐药性变化,并分析了Uu对4种大环内酯抗生素耐药表型,为进一步研究其耐药机制提供依据.现报告如下.

关键词：大环内酯类抗生素抗生素耐药解脲脲原体表型分析泌尿生殖道分泌物大环内酯抗生素泌尿生殖道炎非淋菌性

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EDA变异导致选择性先天缺牙的表型分析

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实用口腔医学杂志 2024年第1期40卷 71-75页

作者：郭新月许涛云段小红口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔医学重点实验室空军军医大学第三附属医院口腔生物学教研室和口腔罕见病与遗传病门诊西安710032

目的:探讨EDA基因变异导致选择性先天缺牙的表型特征。方法:从PubMed及多个中文数据库检索截止2023年4月已发表的EDA变异导致的选择性先天缺牙病例,分析缺牙数目、不同牙位缺失率并对比男女患者表型特征。结果:EDA基因变异导致的选择性... 详细信息

目的:探讨EDA基因变异导致选择性先天缺牙的表型特征。方法:从PubMed及多个中文数据库检索截止2023年4月已发表的EDA变异导致的选择性先天缺牙病例,分析缺牙数目、不同牙位缺失率并对比男女患者表型特征。结果:EDA基因变异导致的选择性先天缺牙好发于下颌中切牙(47.7%)及上下颌侧切牙(41.6%, 40.1%),较少累及磨牙。男性较女性易患病,且男性缺牙严重程度显著高于女性。结论:EDA变异的表型分析有助于医生从缺牙表型预测致病基因并开展遗传咨询。

关键词： EDA变异选择性先天缺牙表型分析

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PEG介导的Botryosphaeria dothidea突变体库表型分析及致病突变体筛选

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西北农业学报 2015年第2期24卷 146-150页

作者：宋哲范涛黄丽丽高小宁韩青梅西北农林科技大学植物保护学院.陕西杨凌712100

对已建立的PEG突变体库中随机挑选的320株突变体菌株进行表型和致病性筛选,获得表型或致病性显著变化的菌株。将突变菌株及野生菌株接种至PDA培养基,观察生长3d和7d时菌落颜色及形态,测量菌落直径。将表型变化菌株及野生菌株接种于离体... 详细信息

对已建立的PEG突变体库中随机挑选的320株突变体菌株进行表型和致病性筛选,获得表型或致病性显著变化的菌株。将突变菌株及野生菌株接种至PDA培养基,观察生长3d和7d时菌落颜色及形态,测量菌落直径。将表型变化菌株及野生菌株接种于离体富士叶片,测量接种5d后病斑直径。生长速率检测显示有40株生长速率加快,有3株生长速率显著下降。14株突变体菌落颜色发生明显变化,菌落呈黑色或纯白色;15株突变体菌落形状不规则且气生菌丝稀疏;其中7株同时具有两种表型特征。致病性测定获得致病性增强突变体s104和致病性减弱突变体s172。所筛选的320株突变体中,表型异常菌株占6.8%,同时获得两株致病性变化菌株,对进一步揭示Botryosphaeria dothidea的致病机理具有重要价值。

关键词：苹果轮纹病 PEG介导突变体表型分析致病力

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8个中国东北视网膜变性家系致病基因筛选与临床表型分析

8个中国东北视网膜变性家系致病基因筛选与临床表型分析

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作者：赵慕瑶大连医科大学

学位级别：硕士

目的：视网膜色素变性(retinitis pigmentosa，RP)是目前世界范围内广泛存在的一组以眼底视网膜光感受器细胞进行性损伤减少为特点以致严重视力损害的遗传性眼病，该病具有高度的遗传异质性、表型多样性。本研究利用了二代测序技术(全... 详细信息

目的：视网膜色素变性(retinitis pigmentosa，RP)是目前世界范围内广泛存在的一组以眼底视网膜光感受器细胞进行性损伤减少为特点以致严重视力损害的遗传性眼病，该病具有高度的遗传异质性、表型多样性。本研究利用了二代测序技术(全外显子测序)对来自中国东北的8个视网膜色素变性家系患者进行基因测序，通过数据分析筛选出致病基因后同时对临床表型进行分析，并与文献报道临床表型相比较进行验证，旨在通过分析结果向患者提供更精确的临床诊断及遗传咨询。　　研究方法：本研究选取了在大连医科大学附属第一医院眼科门诊就诊并确诊为视网膜色素变性的8个患者作为先证者，构建家系，对患者及家系成员的一般情况、临床病史进行详细了解并记录，对参与研究的先证者及部分家属完善眼科基本及特殊检查，采集血样后进行基因组DNA的提取，并将提取后的DNA送至测序公司使用AgilentSureSelectHumanAllExonV6试剂盒进行二代测序(全外显子测序)建库筛选，之后在HiSeq测序平台上测序，将数据结果过滤后，利用ANNOVAR软件进行注释筛选，以RetNet数据库收录基因为标准参考比对，经预测软件评估有害程度后筛选出致病基因，初步确定致病基因后分析患者临床表型并与文献中记录的临床表型相比对。　　结果：本研究中共有8例先证者，其中男性2例，女性6例。8例先证者中常染色体显性遗传1例(家系1)，可疑致病基因为ROM1基因，在与其组成双基因突变的PRPH2基因上未发现有临床意义的致病突变，且变异在家系中共分离。该家系中男性患者发病早、症状重，男性患者发病年龄均小于20岁，女性患者发病年龄为30岁以上，男性患者至30岁以上时基本已发展为管状视野。其余7例先证者家系为常染色体隐性遗传，家系2可疑致病基因为CYP4V2基因，家系3、家系4可疑致病基因为PRCD基因，家系5、家系7可疑致病基因为USH2A基因，家系6可疑致病基因为EYS基因，家系8可疑致病基因为CRB1基因。查阅文献报道发现，各患者临床表型与报道的相应基因突变所致临床表型基本一致。　　结论：　　(1)本研究使用二代测序技术对8个中国东北视网膜色素变性家系致病基因进行筛选确定，ROM1基因致病家系1例，CYP4V2基因致病家系1例，PRCD基因致病2例，USH2A基因致病2例，EYS基因致病1例，CRB1基因致病基因1例。　　(2)研究中发现家系1仅在ROM1基因存在突变，未发现PRPH2基因存在具有临床意义的相关变异，且该变异在家系中共分离，推测导致家系1致病的ROM1基因可能不与PRPH2基因共同突变作为双基因型突变导致视网膜色素变性，而可作为单基因突变致病。　　(3)各家系患者临床表型基本与文献报道的相关基因突变所致临床表型相一致。　　(4)为进一步确定致病突变，还需对每个突变进行家系共分离实验并进行Sanger测序验证位点。

关键词：视网膜色素变性致病基因二代测序基因筛选表型分析

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应用深度学习方法发展高通量温室番茄果实表型分析系统

应用深度学习方法发展高通量温室番茄果实表型分析系统

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作者：黄怡瑄国立台湾大学

学位级别：硕士

近年来，全球粮食危机和粮食不安全的问题越来越严重，利用高效率的育种技术培育出较高产量的作物是其中一种解决方式，而育种技术仰赖准确的作物表型分析系统。本研究之目的即为建构一高通量之果实侦测、定位及量测系统，利用RGB-D相... 详细信息

近年来，全球粮食危机和粮食不安全的问题越来越严重，利用高效率的育种技术培育出较高产量的作物是其中一种解决方式，而育种技术仰赖准确的作物表型分析系统。本研究之目的即为建构一高通量之果实侦测、定位及量测系统，利用RGB-D相机拍摄目标果实之影片，并采用电脑视觉及深度类神经网路结构，达到自动化之目的。相较于其他作品利用单一影像进行单一作物之量测，本研究将利用影片提高果实量测之精准度，且方便进行影像之取得，选择番茄为目标果实。深度学习架构采用YOLOv2，为一即时之物件侦测演算法，作为果实之辨识及定位的物件侦测器，其于静态影像之最佳侦测命中率为88.86%。接着，开发个别果实追踪演算法以追踪影片中数个果实，包括线上追踪及线下追踪，线上追踪利用特征点侦测和配对、光流法及刚体转换，搭配有限向量机进行各颗果实的追踪，亦针对遮蔽问题，采用阈值设定及去噪。线下追踪则利用投票法降低由物件侦测器及深度影像造成的假警报。完成追踪演算法后，将分析得果实形态学参数如个别果实之成熟度、大小、总果实之计数结果，以及二维空间分布图。本研究共进行三次实验，前两次为系统架设及测试组，第三次实验为验证组，果实实际计数之最佳平均绝对相对计数误差为9.91%，前两次实验中大部分的果实成熟度为二级和三级，且果实平均截面积大小分别为45.68及42.01平方公分，而验证实验之平均绝对相对计数误差为15.15%，果实成熟度则大部分为三至五级，且果实平均截面积大小为40.11平方公分，由结果之合理一致性证明此实验及提出之系统具备重复性及再现性。利用此自动化之高通量果实表型分析系统，可即时获得温室中果实之分布及各颗果实的生长资讯，提供农民果实的生长过程量化指标，亦可进行自动化之纪录与分析，提供产量评估及栽培作业改善资讯，以持续优化栽种技术及提高产量。

关键词：物件侦测物件追踪电脑视觉表型分析自动化

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过表达BdAGL6转基因拟南芥和过表达BdFUL转基因水稻的表型分析

过表达BdAGL6转基因拟南芥和过表达BdFUL转基因水稻的表型分析

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作者：苏亚丽西北农林科技大学

学位级别：硕士

短柄草,新型的禾本科模式植物,基因组比较小,只有272Mbp,与水稻、玉米和小麦具有共线性,亲缘关系上与小麦较近,它们都属于早熟禾亚科。同时,短柄草种植方便,生长周期仅需3个月,自花授粉,易繁殖,且又与水稻和小麦的花器官结构相似。本论... 详细信息

短柄草,新型的禾本科模式植物,基因组比较小,只有272Mbp,与水稻、玉米和小麦具有共线性,亲缘关系上与小麦较近,它们都属于早熟禾亚科。同时,短柄草种植方便,生长周期仅需3个月,自花授粉,易繁殖,且又与水稻和小麦的花器官结构相似。本论文中AGL6（AGAMOUS LIKE 6）、FUL1（FRUITFULL 1）和FUL2（FRUITFULL 2）含有MADS-box保守结构域,均对植物花发育有重要的调控作用。分析研究以上三个基因,初步揭示短柄草的生物学功能,以期为我国禾本科粮食作物遗传育种提供更多的基因资源。本实验室以二穗短柄草花序的cDNA为模板,克隆得到了短柄草BdAGL6、BdFUL1和BdFUL2三个基因的全序列,发现BdAGL6和BdFUL1基因均存在可变拼接,BdFUL2基因不存在可变拼接。BdAGL6转录形成的3个转录本分别为:BdAGL6-1（比BdAGL6-3多7个氨基酸）、BdAGL6-2（比BdAGL6-3多5个氨基酸）和BdAGL6-3,依次构建了BDO1、BDO2和BDO3 3个过表达载体,转化拟南芥;BdFUL1基因转录形成的2个转录本分别为:BdFUL1-1和BdFUL1-2,依次构建了BdF1O1、BdF2O2和BdF2O 3个过表达载体,进行水稻转化。在实验室前期工作的基础上,使用潮霉素（50mg/ml）对转基因拟南芥种子进行抗性筛选,PCR检测和表型分析,初步揭示短柄草BdAGL6基因的生物学功能,比较三个转录本产物功能的异同;同时,在水稻遗传转化的基础上,对过量表达BdFUL1和BdFUL2的转基因阳性植株进行初步的观察分析。本论文的主要研究结果如下:1.对T0代（农杆菌侵染拟南芥当代收获的种子）转基因拟南芥种子进行潮霉素抗性筛选,得到了6个株系的BDO1的T1代种子,9个株系的BDO2的T1代种子,12个株系的BDO3的T1代种子;对T1代的转基因种子进一步筛选鉴定,获得了43株BDO1、84株BDO2和82株BDO3的T2代转基因阳性植株。2.在获得一定数量转基因拟南芥植株的基础上,对开花时间和分支数目进行记录和统计分析,对植株叶片和拟南芥小花进行观察并拍照,对3个基因的表达水平进行检测,从而比较3个转录本产物功能的异同。表型分析发现转基因株系之间均有以下几种表型:花期改变、株型变异、叶型特异和花发育异常。qRT-PCR结果显示:三个转录本的表达水平并未存在显著差异。3.过量表达BdFUL1的水稻植株中,获得了2株F1O1和2株F1O2的转基因株系,再对其表达水平进行检测,同时初步观察阳性株系表型。在转基因水稻阳性植株中,FUL1-1和FUL1-2的表达水平要显著高于野生型水稻植株,但是FUL1-2的表达更强烈。观察分析F1O2转基因水稻植株表型时发现:植株生长矮小,早花,育性低等现象,但是F1O1转基因株系与野生型无显著差异。从而初步推断:BdFUL1-1很可能没有功能,而BdFUL1-2很可能是促使水稻早花以及育性降低的主要原因。当然,我们需要更加充分的证据进一步证明。4.过量表达BdFUL2的水稻植株中,经鉴定获得10株F2O转基因水稻植株。初步观察分析发现:在F2O水稻植株中,BdFUL2表达水平高的植株表现出矮小及早花现象。目前,由于转基因植株数目的局限,需要获得更多的转基因阳性植株,进一步统计其开花时间,以便对早花现象提供充分的证据。综上所述,本论文主要利用遗传学策略和分子生物学手段,初步研究二穗短柄草BdAGL6、BdFUL1和BdFUL2三个基因的生物学功能。分析结果表明:BdAGL6基因的三个转录本功能上存在差异,但是具体的分子作用机制需要更多的证据证明;此外,BdFUL1和BdFUL2在控制植株花器官发育及种子育性方面具有一定的调控作用,但在植株开花时间上需要进一步证实。以上这些试验结果为证实短柄草花发育的分子机制奠定了基础,具有一定的理论意义。

关键词：短柄草 BdAGL6 BdFUL 过表达表型分析

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大豆短侧根突变体lrs-1表型分析及基因定位

大豆短侧根突变体lrs-1表型分析及基因定位

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作者：李雯婷华南农业大学

学位级别：硕士

根系是固定植物、获取水分和养分的重要器官,也与植物的抗逆密切相关。大豆是主根系植物,侧根决定着根系在生长介质中的空间分布（根构型）,对大豆的适应性和产量有重要影响。研究大豆侧根发育对优化大豆根构型,提高大豆产量和抗逆性有... 详细信息

根系是固定植物、获取水分和养分的重要器官,也与植物的抗逆密切相关。大豆是主根系植物,侧根决定着根系在生长介质中的空间分布（根构型）,对大豆的适应性和产量有重要影响。研究大豆侧根发育对优化大豆根构型,提高大豆产量和抗逆性有重要意义。本实验首先对lrs-1突变体与野生型的重要农艺性状、根系形态和解剖结构进行了比较,利用华夏3号与lrs-1杂交F2群体对lrs-1的短侧根性状进行了遗传分析确认突变基因的遗传方式后,用华夏3号与lrs-1杂交的F2群体中极端类型分离个体分别构建了两个混池,分别测序后用MutMap策略将突变基因定位在12号染色体的10497514～32404202（21.91Mb）区间内,最终确定了候选基因为Glyma.12G168900,并对候选基因及其同源基因特征进行了生物信息学分析。主要结果如下:***-1与野生型间根系性状的差异。通过水培和沙培试验观察lrs-1和华夏3号侧根发育的动态,发现lrs-1突变从侧根起始时就影响侧根长度,直至侧根发育完成。***-1与野生型间根系解剖结构的差异。通过对lrs-1和华夏3号切片观察,发现突变体lrs-1与华夏3号的侧根均起源于,但lrs-1在侧根未突破表皮前基部细胞短于华夏3号,这可能是lrs-1侧根短于华夏3号的原因之一。同时发现lrs-1木质部细胞的形态为一个环状,与华夏3号木质部细胞呈4瓣的形态不同,但木质部形态的差异是否与lrs-1基因的突变有关需进一步验证。***-1与野生型间农艺性状的差异。通过对田间lrs-1和华夏3号取样考种,发现lrs-1与华夏3号在产量上无显著差异,但lrs-1在有效分枝、节数、秕荚数上显著多于华夏3号。通过对lrs-1和华夏3号叶片的扫描,发现lrs-1与华夏3号在叶片叶柄的发育上无显著差异。说明华夏3号和lrs-1除了在侧根长度上有差异外,在分枝、分节、籽粒发育也存在差异。***-1与野生型间抗逆性状的差异。通过营养液中lrs-1和华夏3根系形态对重金属胁迫响应的观察,发现lrs-1和华夏3在对重金属镉和铅的响应一致。通过营养液中lrs-1和华夏3根系形态对缺素胁迫响应的观察,发现对缺铁和缺磷的响应不同,lrs-1在缺铁胁迫下总根长、侧根总长、总根表面积增加,但华夏3号总根长、侧根总长、总根表面积都减少;lrs-1在缺磷胁迫下总根长、侧根总长、总根表面积增加的幅度显著高于华夏3号,表明lrs-1对缺铁胁迫和缺磷胁迫的响应更明显。在干旱胁迫下lrs-1地上部干重减少幅度小于华夏3号,表明lrs-1对干旱性比华夏3号更不敏感。***-1突变基因的定位。通过MutMap定位策略,将lrs-1突变基因定位在12号染色体的10497514～32404202（21.91Mb）区间内,该区间存在8个突变点。在突变点上设计引物,通过琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯凝胶电泳确认分子标记32404202与lrs-1短侧根性状完全连锁。***.12G168900及其同源基因的生物信息学分析。Glyma.12G168900编码一个拟南芥CPSF73I的同源基因,其蛋白质序列与AT1G61010高度相似。突变基因的突变点位于Glyma.12G168900编码区,缺失一个碱基A后导致移码突变,翻译提前终止,导致缺失CPSF73-100＿C结构域。在大豆基因组中有一个同源基因Glyma.08G188800,其蛋白质序列上与Glyma.12G168900高度相似。公共数据库大豆表达数据表明Glyma.12G168900在大豆根中表达量远远高于Glyma.08G188800。通过比较Glyma.12G168900和Glyma.08G188800启动子区域发现两个基因的启动子元件类型和数量存在较大差异,可能与其表达特征有关。

关键词：大豆侧根伸长突变体表型分析 MutMap定位

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EMS诱变西瓜突变体库的构建及表型分析

EMS诱变西瓜突变体库的构建及表型分析

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作者：朱娜娜东北农业大学

学位级别：硕士

创建突变体库筛选突变体可以为西瓜育种提供新的种质材料,从而解决遗传狭窄的问题,推进西瓜种质创新。本试验以东北农业大学西甜瓜育种研究室自育的西瓜品系W1-17为材料,以EMS为诱变剂,处理西瓜W1-17种子以创建突变体库,分析诱变后的种... 详细信息

创建突变体库筛选突变体可以为西瓜育种提供新的种质材料,从而解决遗传狭窄的问题,推进西瓜种质创新。本试验以东北农业大学西甜瓜育种研究室自育的西瓜品系W1-17为材料,以EMS为诱变剂,处理西瓜W1-17种子以创建突变体库,分析诱变后的种子发芽率、相对出苗率和相对成苗率情况,确定EMS最佳诱变条件。调查M1代和M2代植株农艺性状,初步筛选突变体,进行突变表型鉴定和分析,为进一步构建西瓜突变体库,拓宽西瓜资源遗传背景和开展西瓜功能基因组学研究提供基础数据。主要结果如下:(1)采用6个EMS诱变浓度(0%,0.2%,0.6%,1.0%,1.4%,1.8%),4个处理时间(3 h,6h,9 h和12 h),分析诱变后的种子发芽率、相对出苗率和相对成苗率情况,最终确定EMS处理浓度1.0%、诱导时间9 h是西瓜品系W1-17种子的最佳诱变条件。(2)以此最佳诱变条件构建含有120个M1代家系及相应M2代种子的西瓜突变体库,对M1代进行观察和记录,共出现叶面黑斑点、叶面白斑点、叶畸形、叶变大、叶褶皱、叶簇生、部分黄化、花畸形、花瓣畸形、雄花不散粉、茎变粗、果畸形、种子变小、种子变少、种子变大、无籽、卷须畸形、矮小、生长缓慢等20种潜在的变异类型。总变异频率达18.33%。对M2代群体进行株系和单株的系统观察,得到叶色变浅、叶变小、叶变大、叶色变深、叶边缘内卷、叶片无蜡质、第一真叶浅黄化、叶片裂刻变深、叶片裂刻变浅、叶脉黄化、叶边缘内卷、叶片黄化、两性花、花期早、花期晚、雄蕊畸形、花瓣畸形、花冠大、花冠小、柱头畸形、花色变浅、子房变大、不育、茎变粗、茎变细、节间变短、节间变长、生长缓慢、矮化株、分支方式变异等48种不同变异类型。总变异频率达20.55%。(3)选取M2代10个典型变异单株种子,培育成苗后,使用23对SSR引物进行分析,发现9份材料在DNA水平上有变异。

关键词：西瓜 EMS 诱变表型分析

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农杆菌T-DNA转化桑树的表型分析

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农业生物技术学报 2005年第2期13卷 157-161页

作者：陆小平楼程富沈飞英小岛峯雄长野上田日本信州大学纤维学部杭州310029 日本386-8567 浙江大学动物科学学院

用自然杂交桑种子培育的3月龄幼年桑(MorusalbaL.)作材料,以野生型根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)的突变体M-21介导,将根癌农杆菌T-DNA导入桑树基因组中。将幼年桑摘芯后用细针对腋芽分生组织剌伤感染获得4个形态异常的株系。PC... 详细信息

用自然杂交桑种子培育的3月龄幼年桑(MorusalbaL.)作材料,以野生型根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)的突变体M-21介导,将根癌农杆菌T-DNA导入桑树基因组中。将幼年桑摘芯后用细针对腋芽分生组织剌伤感染获得4个形态异常的株系。PCR检测表明:4个株系都有T-DNA插入。将当代(T0)进行扦插繁殖获得T1代,T1表现出与T0不同的性状,显然T0是由正常产生生长素及细胞分裂素的未转化部分(第10叶位以下)和产生高水平细胞分裂素的转化部分共同作用决定的嵌合体表型,而T1是T0新梢的继续发育体,扦插后,它脱离了T0的作用。T0和T1的表型差异可能与T-DNA的插入有关。

关键词：桑根癌农杆菌T-DNA 整体转化表型分析分子鉴定

来源：评论

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广藿香青枯病菌低致病力突变株的表型分析及突变基因的克隆

广藿香青枯病菌低致病力突变株的表型分析及突变基因的克隆

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作者：王亚琴广州中医药大学

学位级别：硕士

本实验室前期利用Tn5转座子插入突变技术获得了广藿香青枯病菌突变株,本研究以获得的突变株为供试菌株,对广藿香进行致病性试验,筛选低致病力突变株;再对这些低致病力突变株的菌落形态、生长曲线、运动性及生物膜形成能力等表型特征进... 详细信息

本实验室前期利用Tn5转座子插入突变技术获得了广藿香青枯病菌突变株,本研究以获得的突变株为供试菌株,对广藿香进行致病性试验,筛选低致病力突变株;再对这些低致病力突变株的菌落形态、生长曲线、运动性及生物膜形成能力等表型特征进行考察分析;最后,对低致病力突变株的Tn5转座子插入失活基因进行克隆,并利用qRT-PCR技术分析Tn5转座子插入失活基因在青枯菌野生菌株及突变株中的表达情况。本研究为获得分子机制明确的防治广藿香青枯病的生防菌株奠定基础。1.国内外研究评述从广藿香的种质资源与鉴定、栽培技术、主要病害及其防治三个方面论述了广藿香的相关研究现状;总结了青枯菌的致病机理包括致病因子、运动性、生物膜及成膜能力;从Tn5转座子的概况、在基因鉴定和无致病力突变株构建中的应用几个方面概述了 Tn5转座子插入突变技术的应用;介绍了植物病原菌致病基因克隆的主要方法,如根据已知序列克隆法、同源克隆法和构建基因组文库克隆法。2.广藿香青枯病菌无致病力突变株的筛选以广藿香青枯病菌野生菌株PRS-84为供试菌株,测定其生长曲线,并比较不同生长时期的青枯菌对广藿香的致病性差异,以筛选合适的致病性测定条件。以实验室前期通过Tn5转座子插入突变技术获得的突变株为研究对象,对广藿香进行致病性试验,筛选出4个致病力减弱的突变株,分别为突变株PRS-84-4-7、PRS-84-4-49、PRS-84-9-13、PRS-84-11-123。3.广藿香青枯病菌低致病力突变株的表型分析以筛选得到的4个低致病力突变株为研究对象,对其菌落形态、生长曲线、运动性及生物膜形成能力等表型进行分析。结果表明,在菌落形态上,与野生菌株相比,突变株PRS-84-4-7菌落变小、颜色变浅;突变株PRS-84-4-49无明显差异,突变株PRS-84-9-13菌落明显变小,突变株PRS-84-11-123菌落颜色变浅。在运动性上,与野生菌株相比,PRS-84-4-49运动性稍减弱,而突变株PRS-84-4-7、PRS-84-9-13、PRS-84-11-123几乎无运动性。在生物膜形成能力上,与野生菌株相比,突变株PRS-84-4-49生物膜形成能力无明显差异,而突变株PRS-84-4-7、PRS-84-9-13、PRS-84-11-123生物膜形成能力明显减弱。生长曲线分析表明,与野生菌株相比,突变株PRS-84-4-49生长无明显差异,仅在进入稳定期后OD600值降低;突变株PRS-84-4-7与PRS-84-9-13生长有所延缓,达到对数生长期时间延长;突变株PRS-84-11-123生长速度较快,明显高于野生菌株。4.青枯菌低致病力突变株Tn5转座子插入突变基因的克隆及表达分析基于突变株 PRS-84-4-7、PRS-84-4-49、PRS-84-9-13、PRS-84-11-123 的致病性减弱及表型变化,推测这4个突变株的Tn5转座子插入突变基因可能是广藿香青枯病菌的致病相关基因。分别提取基因组DNA,经过酶切、连接反应,用引物KAN-2FP-1/KAN-2RP-1进行反向PCR扩增获得各低致病力突变株的Tn5转座子插入位点侧翼序列并进行序列测定;将侧翼序列于NCBI数据库中进行Blast分析,根据同源基因序列对插入突变基因进行克隆;再利用qRT-PCR技术,分析Tn5转座子插入突变基因在突变株及野生菌株中的表达情况。结果表明,从野生菌株PRS-84中成功克隆了 4个低致病力突变株的Tn5转座子插入突变基因,生物信息学分析表明这4个基因编码蛋白分别为tRNA修饰酶MnmG、假定蛋白、能量依赖性节流蛋白EttA、氯蛋白酶。qRT-PCR结果表明,Tn5转座子插入突变基因在各低致病力突变株中的表达明显低于野生菌株。

关键词：广藿香青枯菌表型分析基因克隆 qRT-PCR

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