检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈德云中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的：本课题探讨人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells, hUC-MSCs)的分离、培养以及对其生物学特性的鉴定。构建胶原-壳聚糖支架材料,同时检测其生物学特性。利用hUC-MSCs的多向分化特性,探索由hUC... 详细信息

目的：本课题探讨人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells, hUC-MSCs)的分离、培养以及对其生物学特性的鉴定。构建胶原-壳聚糖支架材料,同时检测其生物学特性。利用hUC-MSCs的多向分化特性,探索由hUC-MSCs和胶原-壳聚糖支架构建的3D环境结合气-液培养的方式是否可诱导hUC-MSCs分化成表皮样细胞,并构建成表皮替代物,用于大鼠全层皮肤损伤的治疗。方法：1.采用组织块培养法来分离,培养原代hUC-MSCs。采用相差显微镜观察细胞形态特征,采用流式细胞仪鉴定hUC-MSCs表面标志物,采用成脂,成骨诱导实验检测hUC-MSCs的多向分化潜能。2.采用冷冻干燥、交联的方法制备胶原-壳聚糖支架材料,将hUC-MSCs接种到胶原-壳聚糖支架材料上,以构建富含生物活性的支架材料。一次接种细胞4h后,待细胞进入支架中,二次将hUC-MSCs接种到活性支架表面上。在正常培养条件下,培养2d,然后培养条件转变为气-液培养,分别于气-液培养7d,14d。利用免疫组化和western blotting的方法检测气-液培养7d,14d细胞角蛋白19(CK19)和外皮蛋白的表达情况。3.构建直径为1cm的SD大鼠全层皮肤损伤模型,分为三个不同的处理组：表皮替代物组,单纯支架材料组,空白对照组,观察不同处理组的创面愈合情况,并进一步通过组织学的方法(HE染色)检测大鼠皮肤修复情况。采用荧光染料示踪的方法检测移植入的细胞的去向。结果：1.组织块培养法分离的hUC-MSCs的细胞形态呈长梭形,旋涡状生长。流式细胞仪检测显示细胞阳性表达CD90, CD 105, CD73,阴性表达CD34, CD45, HLA-DR,和CD11α。诱导分化实验结果显示细胞能够向成脂细胞和成骨细胞分化,说明分离的细胞具有多向分化的潜能。2.对构建的胶原-壳聚糖支架材料的功能进行评测,结果显示生物材料具有100μm～200μm的孔径,孔隙率约为90%,具有良好的溶胀率,生物可降解性和生物相容性,可用于细胞培养。3. hUC-MSCs接种到胶原-壳聚糖支架材料中,细胞在材料中分布均匀,活性良好,且细胞和细胞分泌的细胞外基质等都参与构建生物活性海绵支架。hUC-MSCs在生物活性支架上采用气-液培养的方式,hUC-MSCs向表皮样细胞分化,western blotting和免疫组织化学的方法检测气-液培养7d,14d细胞角蛋白19和外皮蛋白的表达阳性。4.大鼠全层皮肤损伤修复实验结果证实：在体外气-液培养7d的细胞构建的表皮替代物组虽然不能显著加速大鼠创面的愈合速度,但是组织学检测结果显示hUC-MSCs可促进表皮的再生和毛囊新生,细胞体内示踪实验证实,植入创面的表皮替代物在植入后的21d,其表皮替代物内的细胞仍然存活,但其发挥作用的机制尚不清楚,还有待进一步研究。结论：体外由hUC-MSCs接种到胶原-壳聚糖支架材料中构建的生物活性支架,联合采用气-液培养的方式,模拟皮肤表皮细胞生长的微环境,可以诱导hUC-MSCs向表皮样细胞分化,并且由此构建的表皮替代物来修复大鼠全层皮肤损伤,可促进表皮的再生和毛囊新生。

关键词：人脐带间充质干细胞表皮样细胞胶原-壳聚糖支架材料气-液培养创面愈合

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

胚胎干细胞分化为表皮样细胞基因启动子区差异甲基化的研究

引用

中国病理生理杂志 2013年第5期29卷 769-777页

作者：张仁礼刘彩霞孟锦绣张丽丽韩冬蔡佳杰闻安民广东省医学科学院、广东省人民医院生殖医学中心广东广州510080 广东省医学科学院、广东省人民医院医学研究中心广东广州510080

目的:用全基因组甲基化芯片探讨可能参与小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化为表皮样细胞(ELCs)的基因DNA甲基化调控机制。方法:利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESCs诱导定向分化为ELCs,分别取未分化的ESCs和诱导分化后的ELCs进行芯片分析,利... 详细信息

目的:用全基因组甲基化芯片探讨可能参与小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化为表皮样细胞(ELCs)的基因DNA甲基化调控机制。方法:利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESCs诱导定向分化为ELCs,分别取未分化的ESCs和诱导分化后的ELCs进行芯片分析,利用甲基化免疫共沉淀技术将每组染色质DNA的甲基化片段共沉淀下来,和本底对照(input)分别标记Cy3和Cy5荧光,一同上样于Roche NimbleGen高密度(2.1M,芯片覆盖22 425个启动子)甲基化芯片,启动子区采用UCSC数据库进行注释,启动子覆盖转录起始位点上游8 200 bp、下游3 000 bp,通过对这些启动子区甲基化谱的分析,筛选出甲基化调控可能与ESCs向ELCs定向分化相关的基因。结果:小鼠ESCs和ELCs两组细胞在基因组水平上有17 500个启动子存在甲基化,其中有3 435个启动子发生甲基化差异变化,高CpG岛的启动子有894个发生差异甲基化,中度CpG岛的启动子有974个发生差异甲基化,低CpG岛的启动子有1 567个发生差异甲基化。结论:在ESCs向ELCs定向分化的过程中,众多的基因启动子区发生了甲基化程度的变化,说明细胞分化是一个复杂的表观遗传学事件。这些基因启动子的差异甲基化在ESCs向ELCs定向分化过程中所起的作用及其机制尚有待进一步的功能学研究阐明。

关键词： DNA甲基化胚胎干细胞表皮样细胞启动子甲基化DNA免疫共沉淀

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

胚胎干细胞分化为表皮样细胞的基因表达谱差异

引用

中山大学学报（医学科学版） 2012年第2期33卷 149-155页

作者：张仁礼刘彩霞孟锦绣闻安民张丽丽韩冬广东省医学科学院∥广东省人民医院生殖医学中心广东广州510080 广东省医学科学院∥广东省人民医院医学研究中心广东广州510080

【目的】用全基因表达谱芯片技术筛选小鼠胚胎干细胞(ESC)定向分化为表皮样细胞(ELC)的差异表达的基因并对其进行分析,以进一步阐明ESC分化为ELC的分子机制。【方法】利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESC诱导定向分化为ELC,做3次生物... 详细信息

【目的】用全基因表达谱芯片技术筛选小鼠胚胎干细胞(ESC)定向分化为表皮样细胞(ELC)的差异表达的基因并对其进行分析,以进一步阐明ESC分化为ELC的分子机制。【方法】利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESC诱导定向分化为ELC,做3次生物学重复,分别取未分化的ESC和诱导分化的ELC提取总RNA进行扩增、Cy3标记,与NimbleGen135k小鼠全基因表达谱芯片(含44170个基因)杂交,荧光扫描,筛选出差异表达基因,并进行GO分析和pathway分析,用实时定量PCR对结果进行验证。【结果】芯片筛选结果显示,分化后的ELC与ESC间的差异表达的基因多达4856个(Cut off:2)。基因本体(GO)分析显示与生物学过程相关的差异表达基因最多的是细胞过程,1931个;与亚细胞组分(CC)相关的差基因中最多的是细胞和细胞组分相关基因,2391个;与分子功能相关的差异基因中最多是的结合功能(binding)基因,1869个。Pathway分析显示,与DNA复制通路相关的差异基因有23个;与蛋白酶体通路相关的24个;剪接体通路相关有47个;细胞周期相关的有44个。【结论】ESC体外诱导定向分化为ELC过程中,基因表达谱发生了巨大的变化,提示细胞分化是一个众多基因参与的复杂的生物学过程,这些基因在分化过程所起的作用和作用机制尚需大量的实验研究阐明。

关键词：全基因组表达芯片胚胎干细胞表皮样细胞 GO分析 Pathway分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞的分化

引用

中国组织工程研究与临床康复 2012年第1期16卷 31-34页

作者：撒亚莲华映坤高建梅彭正国董虹严新民云南省第一人民医院(昆明医学院附属昆华医院)临床基础医学研究所云南省昆明市650032

背景:国内外的研究多采用细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞,而较少用人羊膜与骨髓间充质干细胞共培养的方法进行诱导分化。目的:观察人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的可行性。方法:体外分离培养、扩增人骨... 详细信息

背景:国内外的研究多采用细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞,而较少用人羊膜与骨髓间充质干细胞共培养的方法进行诱导分化。目的:观察人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的可行性。方法:体外分离培养、扩增人骨髓间充质干细胞,选用第5代人骨髓间充质干细胞与健康人羊膜共培养12d进行诱导分化。结果与结论:人骨髓间充质干细胞贴壁生长,呈长梭形,流式细胞仪检测表达CD29,CD44的阳性细胞数分别为96.6%,94.6%。人羊膜与人骨髓间充质干细胞共培养12d,人骨髓间充质干细胞渐变为扁平的表皮样细胞,免疫组化染色显示CK19散在阳性,广谱CK为弥漫阳性。说明人羊膜可诱导人骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞。

关键词：羊膜人骨髓间充质干细胞诱导分化表皮样细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究

人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实...

引用

作者：李东杰中国人民解放军军医进修学院

学位级别：博士

目的探讨从新生儿脐带华通氏胶中分离、培养人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UCMSCs),并对其表型鉴定以及生物学特性进行检测。将UCMSCs与兔异体皮+自体微粒皮复合移植于兔皮肤全层缺损创面,观察UCMSCs促进... 详细信息

目的探讨从新生儿脐带华通氏胶中分离、培养人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UCMSCs),并对其表型鉴定以及生物学特性进行检测。将UCMSCs与兔异体皮+自体微粒皮复合移植于兔皮肤全层缺损创面,观察UCMSCs促进微粒皮修复创面的效果,为其临床应用提供实验支持。观察UCMSCs在不同孔径的聚碳酸酯膜上生长和迁移情况,体外快速分离、培养表皮干细胞(epidermal stem cells, ESCs),将UCMSCs与ESCs分别接种在聚碳酸酯膜正反两面进行共培养,诱导UCMSCs分化为表皮样细胞,为以UCMSCs做为组织工程皮肤种子细胞提供实验依据。方法1取正常足月产健康新生儿脐带,采用酶消化法及组织块法的方法分离培养UCMSCs。以相差显微镜、HE染色及透射电镜观察UCMSCs形态及超微结构；以免疫荧光及流式细胞术鉴定细胞表面标志物；通过MTT法检测第1、3、5代细胞的增殖状况,并绘制生长曲线；流式细胞术检测第2、4代细胞周期；通过成脂以及成骨实验检测人脐带间充质干细胞多向分化的潜能。 2以腺病毒介导GFP基因体外转染UCMSCs 48h,于兔耳皮下注射移植,于3d、7d、14d、21d取材冰冻切片荧光显微镜下观察GFP表达情况。取成年日本大耳兔8只,随机抽取2只分为一组,同时构建兔背部急性皮肤全层缺损创面模型(每只兔2个创面),交换移植同等大小面积的反削断层皮,其真皮面均匀粘附兔自体微粒皮。所有兔头侧创面为UCMSCs移植组(A组)、尾侧为PBS空白自身对照组(B组)。于术后14d、21d观察创面情况,计算21d创面愈合率,进行统计学分析。于术后21d切取创面愈合区域组织,对标本行HE染色观察。 3取健康包皮环切术患者包皮皮片,采用中性蛋白酶和胰酶消化结合Ⅳ型胶原黏附法分离、培养hESCs,以相差显微镜及HE染色观察ESCs形态及生长特点;以免疫荧光染色鉴定细胞标志CK19、P63和β1-integrin。 4UCMSCs以丝裂霉素C处理后接种于常用的0.4、3.0和8.0μm三种膜孔径的6孔板Transwell插件中,培养7d,观察、计数三种孔径插件底部贴壁细胞,计算迁移率,并在扫描电镜下观察细胞在多孔膜上的生长、迁移情况。 5在聚碳酸酯膜底面预培养ESCs的Transwell插件内接种UCMSCs,使UCMSCs与ESCs在聚碳酸酯膜正反两面生长形成非直接接触式共培养,诱导UCMSCs向表皮细胞分化。共培养10d后,消化收集细胞,爬片后进行形态学观察；并进行免疫荧光染色检测细胞标志物CK19、P63和β1-integrin的变化；收集诱导后细胞通过Western blotting及qRT-PCR的方法,在mRNA和蛋白水平检测CK19、P63和β1-integrin表达情况；通过流式细胞术检测Transwell新型共培养与传统共培养诱导后细胞CK19表达率。结果1采用复合酶消化法和组织块法培养均从脐带华通氏胶中分离出成纤维样细胞,细胞呈梭形或多角形,呈旋涡状生长。透射电镜观察,细胞核大且不规则,核仁明显,细胞浆较少,细胞器以粗面内质网和线粒体为主。MTT法绘制生长曲线显示,各代细胞经过1d的潜伏期后,进入对数增殖期,第7d之后开始出现不同的接触抑制。细胞周期检测80%以上的细胞处于静止期。流式细胞仪检测显示分离培养的细胞表达CD44 (98.07%)、CD105 (95.29%)、CD73 (98.58%)、CD29 (99.50%)和HLA-Ⅰ(99.80%),不表达CD34 (0.59%)、CD31 (0.24%)、CD45 (1.91%)和HLA-DR (1.18%)。免疫荧光染色显示,细胞CD90和CD44阳性表达, CD31和CD45阴性表达。在体外特殊诱导条件下,这些细胞能够向脂肪细胞和成骨细胞分化,显示它们具有多向分化潜能。 2腺病毒介导的GFP基因转染UCMSCs后48h,荧光显微镜观察显示转染UCMSCs可有效表达GFP。于兔耳皮下注射移植后3d、7d时取材冰冻切片观察,UCMSCs较强表达GFP；14d、21d取材观察仍有GFP减弱表达。术后21d创面愈合率A组高于B组(P<0.05)。愈合后创面取材病理学观察可见表皮层下大量不规则胶原纤维,成纤维细胞以及小血管,缺少皮肤附件；移植组表皮层可发现表皮钉突样结构,而对照组表皮层底部平坦,与基底结合较为疏松。 3中性蛋白酶和胰酶消化结合Ⅳ型胶原黏附法分离、培养ESCs,形态学观察可见hESCs呈扁圆状多角形,融合后呈铺路石样生长；免疫荧光染色鉴定细胞标志CK19、P63和β1-integrin均呈阳性表达。 4培养7

关键词：脐带间充质细胞创面愈合表皮样细胞共培养诱导分化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

黄芪诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞的分化

引用

中国组织工程研究与临床康复 2009年第36期13卷 7099-7102页

作者：邹萍胡翔刘德伍南昌大学第一附属医院药剂科江西省南昌市330006 南昌大学第一附属医院烧伤中心江西省南昌市330006

背景:课题组以往的研究证实黄芪对体外培养的人表皮体外扩展生长和表皮干细胞增殖均具有促进作用,但它对人骨髓间充质干细胞的体外作用如何特别是是否具有诱导骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的效应,仍不清楚。目的:观察黄芪体外定向... 详细信息

背景:课题组以往的研究证实黄芪对体外培养的人表皮体外扩展生长和表皮干细胞增殖均具有促进作用,但它对人骨髓间充质干细胞的体外作用如何特别是是否具有诱导骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的效应,仍不清楚。目的:观察黄芪体外定向诱导人骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2006-09/2008-06在南昌大学第一附属医院完成。材料:骨髓来源于临床骨髓穿刺检查正常患者,无血液系统疾病和家族遗传病史。方法:用密度梯度离心结合贴壁法分离纯化培养人骨髓间充质干细胞,以含黄芪、胎牛血清、角质细胞无血清培养基组成的诱导培养液进行体外培养,以不含黄芪的上述培养液作为对照。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态学变化,免疫细胞化学染色法检测p63和广谱细胞角蛋白的表达。结果:经黄芪诱导后部分细胞由长梭形转变为扁园形,呈表皮样细胞形态特征;免疫细胞化学染色显示部分诱导细胞p63、广谱细胞角蛋白表达均呈阳性。结论:黄芪可诱导人骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞。

关键词：黄芪间充质干细胞分化表皮样细胞创面修复

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的研究

人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的研究

引用

作者：王素一浙江大学

学位级别：硕士

皮肤移植是治疗大面积烧伤和糖尿病顽固性皮肤溃疡等皮肤缺损的主要手段之一。其皮源主要有自体皮、同种异体皮、异种皮及人工皮。自体皮是最理想的皮肤移植物,但对大面积烧伤患者来说,自体皮常常不足,而且自体供皮区疼痛易感染和瘢痕... 详细信息

皮肤移植是治疗大面积烧伤和糖尿病顽固性皮肤溃疡等皮肤缺损的主要手段之一。其皮源主要有自体皮、同种异体皮、异种皮及人工皮。自体皮是最理想的皮肤移植物,但对大面积烧伤患者来说,自体皮常常不足,而且自体供皮区疼痛易感染和瘢痕增生。同种异体皮和异种皮存在免疫原性而发生免疫排斥反应,仅能在受体成活3周左右,一般用来做大面积烧伤切、削痂后创面的临时覆盖物。而且有可能携带病毒易传播疾病。近几年,随着组织工程的兴起,人们认识到组织工程化皮肤具有能修复受损组织和可能替代部分组织功能的独特优势,各国都加大了对组织工程化皮肤的研发力度。在美国,组织工程化皮肤是F'DA批准最早用于临床组织工程的产品,其代表产品有Dermagraft-TM,Dermagraft-TC和Apligraf(TM)。但上述产品均以异体表皮细胞或/和异体成纤维细胞作为种子细胞,所以仍然是临时性覆盖物。真正的永久性存活组织工程化皮肤的开发不仅需要具有良好生物活性和相容性的支架,还需要具有功能的不被排斥的种子细胞。目前国内外对支架的研究已接近成熟,用PLA、PGA和胶原等材料和成纤维细胞构建的组织工程化真皮具有良好的生物相容性和促进伤口愈合的能力,但要成为商品的全层组织工程化皮肤关键还在于表皮成分的种子细胞。近几年随着干细胞研究是深入和分子生物学的进步,使得皮肤组织工程种子细胞的问题有了解决希望。组织工程化皮肤的种子细胞主要为表皮系细胞(包括角质形成细胞[KC]/表皮干细胞[KSC])和其他干细胞,包括胚胎干细胞(ES)和骨髓间充质干细胞(MSC)

关键词：人骨髓间充质干细胞表皮样细胞分化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：