目的:探讨表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)致人永生化角质形成细胞(HaCaT)损伤机制,从而初步探索该药物诱导表皮不良反应机制。方法:利用MTS及Hoechst染色建立TKI药物对HaCaT细胞损伤模型;通过转录组测序筛选差异基因;利用数据库收集表皮不良反应靶点;将差异基因与表皮不良反应靶点取交集,得到潜在作用靶点;利用DAVID及R软件对潜在靶点进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)及基因本体论(gene ontology,GO)分析;应用STRING数据库进行蛋白互作(protein protein interaction,PPI)分析,并采用Cytoscape软件进行可视化分析和拓扑参数分析;通过Autodock软件对关键基因与EGFR-TKI药物进行分子对接;运用实时荧光定量PCR检测分子对接中结合能最低的靶点;利用免疫印迹实验(Wesrtern Blot)法检测通路相关蛋白表达。结果:MTS及Hoechst染色表明,奥希替尼与阿法替尼对细胞存活率有明显抑制作用;取交集后得到176个潜在作用靶点;PPI显示IL6、HSPA5、FN1、VEGFA、XBP1、TLR4、MMP1、CCL2、PTGS2和VWF可能是EGFR-TKI表皮毒性关键靶点;KEGG信号通路包括IL-17、PI3K-Akt通路;GO功能涉及内质网应激、氧化应激、脂多糖反应;分子对接表明,奥西替尼、阿法替尼与PTGS2、HSPA5、MMP1、VEGFA和FN1有较好的结合活性。实时荧光定量PCR显示,奥西替尼与阿法替尼处理HaCaT细胞后FN1、HSPA5和PTGS2表达上调,VEGFA和MMP1表达下调;免疫印迹实验表明FN1蛋白表达增加,VEGFA蛋白表达减少。结论:EGFR-TKI药物可能通过抑制PI3K-Akt、IL-17信号通路中的MMP1、VEGFA产生,促进PTGS2、FN1、HSPA5表达,损伤HaCaT细胞,从而产生表皮毒性。
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