检索结果-内蒙古大学图书馆

食品与生物技术学报 2021年第7期40卷 42-49页

作者：张煜彬叶路芬吴忠秀薛维娜何彬杨畅李勇军王永林刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学医药卫生管理学院贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 详细信息

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。

关键词：大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化亲和层析蛋白质印迹法

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漆酶基因lac1338在大肠杆菌中的表达条件优化及其染料降解作用

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应用与环境生物学报 2014年第6期20卷 1076-1081页

作者：冯娟覃炎锋李荷广东药学院基础学院生物化学与分子生物学系广州510006

在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离... 详细信息

在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600 nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95%以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值.

关键词：漆酶大肠杆菌表达条件优化染料降解

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杂合抗菌肽LPCB在毕赤酵母中的表达条件优化

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应用与环境生物学报 2012年第1期18卷 65-69页

作者：李增婷谢力冯顺利尤芳芳何桂桦林强曹毅乔代蓉四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室成都610065 漯河出入境检验检疫局漯河462000

为获取能表达具有天然活性的杂合抗菌肽的重组酵母菌,确定其最佳表达条件,将构建好的重组酵母表达载体pPICZα-A-CecropinB(1～10)-Magainin2(1～12)(简称pPICZα-A-CBMA)和pPICZα-A-Lfcin-Pro-CecropinB(简称pPICZα-A-LPCB)经SacⅠ线性化处理,分别电转入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris X-33,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,PCR扩增验证,甲醇诱导表达.采用抑菌圈法初步测定产物活性,优化杂合肽LPCB诱导时间、诱导剂浓度、诱导温度、培养基pH等表达条件,传代检测其质粒稳定性.结果显示,基因工程菌*** X-33/pPICZα-A-CBMA和*** X-33/pPICZα-A-LPCB成功构建.表达产物前者抑菌活性微弱,后者抑菌活性良好.杂合肽LPCB的最佳表达条件为:25℃,pH中性培养,每24 h添加0.5%(V/V,φ)甲醇,诱导表达72 h.重组酵母菌pPICZα-A-LPCB在培养超过100代后,未发生质粒丢失.

关键词：杂合抗菌肽 Lfcin-Pro-CecropinB 毕赤酵母表达条件优化

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合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化

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南方水产科学 2015年第6期11卷 100-106页

作者：毕晓敏黄桂菊范嗣刚朱文杰喻达辉中国水产科学研究院南海水产研究所农业部南海渔业资源开发利用重点实验室南海生物资源开发与利用协同创新中心广东广州510300 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主... 详细信息

为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主菌大肠杆菌(***)BL21(DE3),得到的原核重组融合蛋白p ET32a-Pearlin约为34.19 k D。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时间、时机进行了优化。结果显示,IPTG浓度在0.6~1.4 mmol·L^(-1)范围内诱导效果最佳;在IPTG终浓度为1 mmol·L^(-1)、相同培养时间(6 h)下,37℃表达蛋白最多;重组蛋白在p H分别为6.0、7.0、8.0的培养基中表达量变化不大;在IPTG诱导浓度一定的条件下,最佳诱导时间为4~6 h;在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下,在转接3~4 h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白p ET32a-Pearlin的可溶性进行检测,发现在不同的诱导条件下,融合蛋白都主要以包涵体形式存在。

关键词：合浦珠母贝 Pearlin 原核表达表达条件优化包涵体

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人GDF-15的克隆、表达条件优化及药理活性的初步研究

人GDF-15的克隆、表达条件优化及药理活性的初步研究

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作者：丛凡淏吉林农业大学

学位级别：硕士

目的:对人生长分化因子-15(human growth differentiation factor-15,hGDF-15)成熟肽基因进行克隆,诱导hGDF-15蛋白表达并对部分表达条件进行优化,对建模成功的动物模型注射hGDF-15蛋白观察其作用,为hGDF-15药理活性和生物学功能的研究... 详细信息

目的:对人生长分化因子-15(human growth differentiation factor-15,hGDF-15)成熟肽基因进行克隆,诱导hGDF-15蛋白表达并对部分表达条件进行优化,对建模成功的动物模型注射hGDF-15蛋白观察其作用,为hGDF-15药理活性和生物学功能的研究奠定基础。方法:利用PCR技术克隆人GDF-15成熟肽基因,将其连接到pET-28a载体上构建pET-28a-hGDF-15原核表达载体;在此基础上将其转入Rosetta(DE3)大肠杆菌感受态,获得重组大肠杆菌,分别采用不同温度(16,25,37℃)、不同IPTG浓度(0.1,0.25,0.5,0.75,1mmol/L)和不同时间(12,24,36,48 h)对其进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳,利用Gel Quant Express软件对菌体破碎离心的上清组分和沉淀组分进行含量测定,设计正交试验,分析上清组分和沉淀组分最适诱导表达条件;选用DAB显色法对诱导出的蛋白样品进行Western blot鉴定,利用Ni-Agarose亲和柱对表达产物进行纯化,设置不同浓度的GuNTA(20,40,60,100,500 mmol/L咪唑)洗脱纯化出hGDF-15蛋白,并将纯化后获得hGDF-15蛋白冻干;对实验组动物C57BL/6型小鼠喂养高脂饲料(80%基础饲料,10%猪油,10%蛋黄粉),对照组喂养基础饲料,将体重合格的实验组小鼠注射STZ(100 mg/kg),诱导其成为胰岛素抵抗动物模型,通过皮下给药方式注射hGDF-15蛋白对其进行治疗,观察用药后的血糖变化。结果:成功获得hGDF-15成熟肽基因(339bp);构建了pET-28a-hGDF-15原核表达载体;成功诱导出hGDF-15蛋白;根据正交试验优化出上清组分最适诱导条件为IPTG浓度为0.25 mmol/L、温度为16℃、时间为24 h,沉淀组分最适诱导条件为温度为37℃、时间为36 h、IPTG浓度为1 mmol/L,最高表达量为95.2mg/L;经Western blot鉴定表达产物为hGDF-15蛋白,100mmol/L咪唑的GuNTA成功洗脱出目的蛋白,冻干后经计算纯化后的回收率为29.8%;成功建立高脂胰岛素抵抗C57BL/6小鼠模型,并证明hGDF-15具有一定治疗糖尿病和胰岛素抵抗的作用。结论:成功克隆hGDF-15基因并在大肠杆菌中诱导表达出该蛋白,优化出最适诱导条件,纯化并获得该蛋白,利用该蛋白对高脂胰岛素抵抗动物模型进行治疗,具有一定的效果,这为该蛋白的功能研究提供了实验依据。

关键词：生长分化因子-15 原核表达表达条件优化高脂动物模型糖尿病

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猬迭宫绦虫27kDa半胱氨酸蛋白酶基因原核表达条件优化及组织定位研究

猬迭宫绦虫27kDa半胱氨酸蛋白酶基因原核表达条件优化及组织定位...

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作者：焦梦涵贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:克隆、表达猬迭宫绦虫27kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine Protease,CP)基因,优化原核表达条件,并应用免疫荧光技术检测27kDa-CP在成虫、裂头蚴不同组织中的分布情况。方法:(1)根据NCBI中公布的猬裂头蚴27kDa半胱氨酸蛋白酶基因序列(27k... 详细信息

目的:克隆、表达猬迭宫绦虫27kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine Protease,CP)基因,优化原核表达条件,并应用免疫荧光技术检测27kDa-CP在成虫、裂头蚴不同组织中的分布情况。方法:(1)根据NCBI中公布的猬裂头蚴27kDa半胱氨酸蛋白酶基因序列(27kDa-CP,D63670),提取蛇源猬裂头蚴总RNA,逆转录合成cDNA,应用PCR技术对目的片段进行体外扩增,并克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒,转入大肠埃希菌Transetta(DE3)中,观察在不同培养时间、不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)及不同培养温度条件下27kDa-CP重组蛋白的表达情况。用镍离子柱亲和层析法纯化目的蛋白,表达产物用SDS-PAGE及Western Blotting进行分析。(2)用纯化后的重组27kDa-CP蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体(一抗),用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗小鼠IgG作为二抗,对27kDa-CP在猬迭宫绦虫成虫、裂头蚴组织中的位置分布进行免疫荧光定位。结果:(1)pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒经IPTG诱导后,蛋白在大肠埃希菌Transetta(DE3)中成功表达,最适表达条件为:培养温度30℃,IPTG浓度为0.3mmol/L,培养时间为18h。重组蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后测得其浓度为0.2mg/mL。(2)纯化后的重组蛋白经Western Blotting检测,其相对分子质量大小(Mr)约为35kDa,与预期大小相符,且能被重组蛋白免疫小鼠血清识别。(3)免疫荧光定位显示27kDa-CP在裂头蚴皮层及排泄管中呈高度表达;在成虫中,以节片(孕节和成节)子宫内虫卵卵壳的表达最强,其次为排泄管道及皮层。结论:(1)成功构建了猬迭宫绦虫27kDa-CP基因原核表达体系,通过表达条件的优化,在大肠埃希菌Transetta(DE3)中27kDa-CP重组蛋白可获得高效表达。(2)通过免疫荧光技术组织定位初步提示27kDa-CP可能参与了虫体的入侵、移行、营养吸收、排泄、免疫逃避、生长发育及生殖等过程。

关键词：猬迭宫绦虫裂头蚴半胱氨酸蛋白酶表达条件优化组织定位

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新疆牛环形泰勒虫Tams1基因原核表达条件优化及免疫反应性研究

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因原核表达条件优化及免疫反应性研究

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作者：苗中秋新疆农业大学

学位级别：硕士

环形泰勒虫病使世界250,000,000头牛受到威胁,造成重大经济损失,分布于北非、南欧、印度次大陆、中东和中亚等地。牛环形泰勒虫病是由泰勒科泰勒属的环形泰勒虫寄生于牛体内引起的以高热、贫血、出血和体表淋巴结肿大为主要临床症状的... 详细信息

环形泰勒虫病使世界250,000,000头牛受到威胁,造成重大经济损失,分布于北非、南欧、印度次大陆、中东和中亚等地。牛环形泰勒虫病是由泰勒科泰勒属的环形泰勒虫寄生于牛体内引起的以高热、贫血、出血和体表淋巴结肿大为主要临床症状的一种血液性原虫病。本病在新疆广为流行,严重危害着养牛业的健康发展。本研究工作主要包括以下三部分: 1.新疆牛环形泰勒虫Tams1基因原核表达条件的优化为了提高新疆牛环形泰勒虫Tams1基因在大肠杆菌中的表达量,研究了诱导温度、诱导时间以及诱导剂(IPTG)浓度等不同条件对Tams1融合蛋白表达量的影响。试验结果表明,大肠杆菌菌株BL21(DE3)在37℃培养2.5h后,使用终浓度为2mmol/L的IPTG在25℃振荡诱导培养8h时,GST-Tams1融合蛋白表达量最高,达到2.5mg/mL。用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-Tams1融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE检测表明GST-Tams1融合蛋白大小约为56KDa,与预计的分子量大小一致。 2.新疆牛环形泰勒虫Tams1基因真核表达载体的构建及免疫反应性研究采用PCR方法从梨形虫病患牛的全血基因组中扩增得到846bp的Tams1基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建Tams1基因的真核表达质粒。经测序验证后,将Tams1基因的真核表达质粒尾静脉注射小鼠进行Tams1基因的瞬时表达。取接种小鼠的肝脏提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1皮下注射免疫小鼠4次后,进行免疫抗体检测。试验结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1含有完整的Tmas1基因片段。经Western-blot检验可得到抗原-抗体复合物产生的特异性条带,说明该重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1具有免疫原性。 3.新疆牛环形泰勒虫GST-Tams1融合蛋白免疫反应性研究采用ELISA方法,结果显示最佳的抗原包被浓度为2.5μg/ml,血清稀释度为1:20。GST-Tams1融合蛋白抗血清效价评估结果显示随着免疫次数的增加,四次蛋白免疫的血清效价逐步升高,其中以人参皂苷为佐剂的免疫组的血清效价最高;其次是以弗氏佐剂为佐剂的免疫组;注射重组真核质粒pcDNA3.1(+)-Tams1的免疫组和注射GST-Tams1融合蛋白的免疫组的血清效价相差不多,而注射生理盐水和空载质粒pcDNA3.1(+)的对照组则很低几乎无抗体产生。

关键词：牛环形泰勒虫 Tams1基因表达条件优化免疫反应

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2,4-D纳米抗体表达条件优化及基于花状纳米金免疫分析方法的构建

2,4-D纳米抗体表达条件优化及基于花状纳米金免疫分析方法的构建

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作者：薛雨河北农业大学

学位级别：硕士

纳米抗体是酶联免疫分析(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)的研究热点和发展趋势。由于纳米抗体比传统抗体具有更小的分子量、更好的特异性和亲和性,其凭借显著优点在农药等环境污染物检测中得到了迅速发展。2,4-D是一种传统... 详细信息

纳米抗体是酶联免疫分析(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)的研究热点和发展趋势。由于纳米抗体比传统抗体具有更小的分子量、更好的特异性和亲和性,其凭借显著优点在农药等环境污染物检测中得到了迅速发展。 2,4-D是一种传统且广泛应用的高效除草剂,近几年在我国抗性杂草治理中又发挥出重要作用。但由于其飘移药害及对非靶标生物构成的危害愈加突出,因此构建其高效检测分析方法具有重要意义。本实验室前期已获得能够特异性识别2,4-D的纳米抗体,但由于未对其表达条件进行优化研究,因此该纳米抗体在原始菌株中的表达量较低,从而制约其在2,4-D检测中的应用。为进一步提高2,4-D纳米抗体的表达量,扩大其应用范围,本研究采用单因素实验分别从质粒和感受态两方面构建不同的表达载体来筛选更优的2,4-D纳米抗体表达菌株,并进一步从诱导剂(异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG))浓度、诱导温度、诱导时间三个方面来确定2,4-D纳米抗体表达的最优条件,最后通过镍柱亲和层析纯化蛋白,并利用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA)对纳米抗体性能进行测定。在明确该纳米抗体性能的基础上,为实现2,4-D的现场快速检测,本研究开发了一种基于花状纳米金和纳米抗体的免疫层析检测方法,为扩大2,4-D纳米抗体的应用范围奠定了基础。具体研究结果如下: 1.2,4-D纳米抗体表达条件的优化。通过筛选不同质粒和表达感受态获得2,4-D纳米抗体表达的最适菌株。经蛋白表达之后进行表达量对比,发现重组后的质粒pET-32a-2,4-D 的蛋白表达量为 8.2 mg/100 mL 2×YT 液体培养基,pET-28a-2,4-D 的蛋白表达量为2.9 mg/100 mL 2 × YT液体培养基,2,4-D纳米抗体原始表达菌株BL21(DE3)的蛋白表达量为0.95 mg/100 mL 2×YT液体培养基;基于感受态Shuffle T7-B的蛋白表达量为2.1 mg/100 mL,基于感受态Rosetta-gami2的蛋白表达量为3.0 mg/100 mL,2,4-D纳米抗体原始表达菌株BL21(DE3)的蛋白表达量为1.0 mg/100 mL。相比2,4-D纳米抗体原始表达菌株而言,更换了不同质粒和表达感受态之后的蛋白表达量均有所提高,重组后的质粒pET-32a-2,4-D 比 pET-28a-2,4-D所获得的纳米抗体的表达量要高,但对2,4-D的亲和性能均受到影响,感受态Rosetta-gami2比感受态Shuffle T7-B表达量高且能更好的与2,4-D纳米抗体进行结合。因此2,4-D纳米抗体的最适表达质粒和表达感受态为原始质粒和Rosetta-gami2。在此基础上采用液体发酵法培养纳米抗体表达菌株,分别从IPTG浓度、诱导温度和诱导时间三个方面明确2,4-D纳米抗体的最优表达条件。结果显示,2,4-D纳米抗体表达菌株的最佳诱导温度为16℃、诱导时间为12 h、IPTG浓度为0.5 mmol/L,利用响应面法对最优表达条件进行了分析,计算出最佳诱导温度为15.25℃、诱导时间为13.96 h、IPTG浓度为0.58mmol/L,得到最大响应值(相对应纳米抗体表达量)为96.05%。表达后的纳米抗体通过镍柱亲和层析进行分离纯化,并利用ELISA对纳米抗体的性能进行测定,所获得的纳米抗体对2,4-D表现出较好的亲和性能,间接竞争ELISA结果显示IC50为13.78 ng/mL。本小节对2,4-D纳米抗体的表达条件进行了优化,提高了纳米抗体的表达量,为实现2,4-D纳米抗体的广泛应用奠定了基础。 2.基于2,4-D纳米抗体的花状纳米金免疫分析方法的构建。将2,4-D纳米抗体表达菌株经最优表达条件进行表达与纯化后与花状纳米金颗粒结合,构建了一种现场快速检测2,4-D残留的免疫分析方法。采用柠檬酸三钠还原法(Frens法)合成球状纳米金作为种子金,然后采用金种子介导生长法制备花状纳米金,通过控制氯金酸、金种子和对苯二酚的加入量来研究花状纳米金的形貌,选择表面分支多、刺突较明显的花状纳米金与所得到的2,4-D纳米抗体进行偶联。结果发现编号为10的花状纳米金(加入0.75 mL氯金酸溶液、0.5 mL种子金、0.22 mL柠檬酸三钠溶液和1 mL对苯二酚溶液)偶联效果较好,将此花状纳米金溶液作为最佳免疫标记材料,之后进行试纸条的优化,发现最优滴加金标抗体的量为15 μL,助跑剂1×PBS中加入40 μL吐温20效果最好。筛选最优偶联条件,结果表明纳米抗体与花状纳米金标记条件最适pH为7(在1 mL花状纳米金溶液里加入2.5 μL 0.2 mol/L K2CO3),抗体最适添加量为 25 μL/mL。 3.花状纳米金免疫分析方法在2,4-

关键词： 2,4-D 纳米抗体表达条件优化花状纳米金免疫层析检测

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Aga0917-PGEX-4T-2-BL21(DE3)plySs表达条件优化

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食品界 2019年第4期 138-140页

作者：王燕马金苏晓满郝英慧新乡医学院生命科学技术学院

琼脂是一类以半乳糖为主要成分的一种高分子多糖,琼脂酶可将琼胶水解,产生的低聚糖具有重要的生理学性质和生物学活性,益于人类健康。在相关分子生物学实验当中,琼脂酶也可以从琼脂糖凝胶当中回收DNA、分离海藻中的原生质体和研究海藻... 详细信息

琼脂是一类以半乳糖为主要成分的一种高分子多糖,琼脂酶可将琼胶水解,产生的低聚糖具有重要的生理学性质和生物学活性,益于人类健康。在相关分子生物学实验当中,琼脂酶也可以从琼脂糖凝胶当中回收DNA、分离海藻中的原生质体和研究海藻细胞壁多糖结构和组成的工具酶。综上,琼胶酶具有十分广阔的研究发展前景。本实验主要探究Aga0917-PGEX-4T-2-BL21(DE3)plySs工程菌株发酵产酶的条件优化,以获得大量有活性的重组酶。

关键词：表达条件优化 Ag 分子生物学实验生物学活性高分子多糖生理学性质琼脂糖凝胶琼脂酶

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重组人胎盘抗凝蛋白变体基因工程表达菌的表达条件优化研究

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东南大学学报（医学版） 2004年第4期23卷 217-220页

作者：袁辉华子春邓海兰南京大学医药生物技术国家重点实验室江苏南京210093

目的 :探索重组人胎盘抗凝蛋白变体大肠杆菌表达菌株的最适表达条件。方法 :详细研究重组人胎盘抗凝蛋白变体在大肠杆菌中表达时重组质粒稳定性、细菌培养、诱导物IPTG的用量和诱导时间与重组蛋白质表达水平之间的关系。结果 :重组人胎... 详细信息

目的 :探索重组人胎盘抗凝蛋白变体大肠杆菌表达菌株的最适表达条件。方法 :详细研究重组人胎盘抗凝蛋白变体在大肠杆菌中表达时重组质粒稳定性、细菌培养、诱导物IPTG的用量和诱导时间与重组蛋白质表达水平之间的关系。结果 :重组人胎盘抗凝蛋白变体大肠杆菌表达菌株具有非常好的质粒稳定性 ,不易发生质粒丢失现象。诱导剂IPTG量越多 ,最终OD6 0 0 值越低 ;诱导时间长会导致较多的靶蛋白积累 ,OD6 0 0 值与总蛋白成正相关关系。结论 :获得了重组人胎盘抗凝蛋白变体的最适表达条件 ,经过纯化后 ,重组人胎盘抗凝蛋白变体的得率为 40mg·L- 1 。

关键词：重组人胎盘抗凝蛋白变体基因工程表达条件优化大肠杆菌基因表达质粒稳定性

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