检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：李润天哈尔滨师范大学

学位级别：硕士

MYB家族转录因子广泛参与植物的抗逆与代谢,近年来的研究也发现MYB转录因子也在植物铁稳态的调控中起重要作用。紫花苜蓿具有较高的经济价值。紫花苜蓿具有较强的抗逆性,但土壤中较低的有效铁含量仍是其栽培的限制因素。本研究对MsMYB... 详细信息

MYB家族转录因子广泛参与植物的抗逆与代谢,近年来的研究也发现MYB转录因子也在植物铁稳态的调控中起重要作用。紫花苜蓿具有较高的经济价值。紫花苜蓿具有较强的抗逆性,但土壤中较低的有效铁含量仍是其栽培的限制因素。本研究对MsMYB（登录号MN547959）基因进行表达模式分析,对其启动子进行活性分析;对MsMYB蛋白进行亚细胞定位;分析转MsMYB烟草的表型变化并检测其在铁胁迫下的生理指标;对与MsMYB结合的启动子顺式作用元件进行验证,研究结果如下: ***在肇东苜蓿不同组织中表达水平:叶>花>茎>根。缺铁处理紫花苜蓿1 d、3 d、7 d,MsMYB表达量均极显著上调,分别为对照的4.8倍、10.7倍、84.4倍。高铁处理紫花苜蓿1 d、3 d、7 d,MsMYB表达量均极显著上调,分别为对照的41.1倍、22.3倍、30倍。ABA、SA、MEJA分别处理紫花1 d,表达量均显著上调,分别为对照的286.7倍、225.7倍、116.3倍。 2.将pBI121-MsMYBpro::GUS表达载体转化拟南芥,获得转MsMYBpro::GUS拟南芥植株。GUS染色结果发现,MsMYB启动子在拟南芥各组织中均有染色,在缺铁胁迫处理后染色加深,且在根部最为明显。表明MsMYB启动子活性受缺铁胁迫诱导,且在根部受诱导程度较强。 3.构建p131-MsMYB-YFP表达载体,农杆菌介导瞬时转化本氏烟草叶片,进行MsMYB亚细胞定位,结果表明MsMYB定位于细胞核中。 4.获得L3、L5、L6三个转MsMYB烟草T1代株系。表型分析结果表明相比于同生长时期的WT植株,植株较矮、叶片较少、茎直径较大、相同位置叶片具有较大的长度、宽度。茎横切片观察可见木质部结构和髓结构与WT存在差异。分别缺铁与高铁胁迫转基因烟草与WT,三个转基因株系均有显著高于WT的叶绿素含量与显著低于WT的MDA、O2-、H2O2含量。 5.构建了pGADT7-Rec2-MsMYB载体与的五种pHIS2-元件酵母表达载体（TGGTTA、CTGTTG、TGGTTG、ACCTACC、ACCAACC）及pHIS2-MsNRAMP2pro（280bp）酵母表达载体,进行酵母单杂交实验。结果表明,MsMYB能够与CTGTTG、ACCTACC两种元件及MsNRAMP2启动子片段相结合,而与TGGTTA、TGGTTG、ACCAACC不结合。本研究初步证明MsMYB基因响应缺铁、参与植物抵御缺铁胁迫的功能,初步鉴定了MsMYB能够与CTGTTG、ACCTACC两种元件及MsNRAMP2启动子片段相结合。

关键词： MsMYB 表达模式分析紫花苜蓿缺铁胁迫亚细胞定位 GUS染色酵母单杂交

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水稻OsVDAC8互作蛋白的筛选及OsVDAC3逆境功能分析

水稻OsVDAC8互作蛋白的筛选及OsVDAC3逆境功能分析

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作者：蒋晓涵中南民族大学

学位级别：硕士

VDAC(电压依赖性阴离子通道，Voltage-dependentanionchannel)是ATP和ADP在细胞质和线粒体之间交换的主要通道，并控制线粒体中Ca2+的平衡。实验室前期从水稻基因组中鉴定出8个OsVDAC基因，本实验从生物信息学、表达模式、互作蛋白筛选... 详细信息

VDAC(电压依赖性阴离子通道，Voltage-dependentanionchannel)是ATP和ADP在细胞质和线粒体之间交换的主要通道，并控制线粒体中Ca2+的平衡。实验室前期从水稻基因组中鉴定出8个OsVDAC基因，本实验从生物信息学、表达模式、互作蛋白筛选鉴定等方面分析OsVDAC8的特征，通过转基因植株在逆境中的生理状况分析OsVDAC3对逆境的响应。取得下列结果:　　1.生物信息学分析显示OsVDAC8是一个定位于线粒体的亲水性蛋白，含有1个保守的Porin3_Tom40结构域，11次跨膜。数据库表达模式分析结果显示OsVDAC8在Nip的所有组织和时期都表达，在生殖生长期的叶鞘和胚乳中表达水平最低，在花序出现前后及子房中表达量较高。通过qRT-PCR检测Nip、YTB和YTA三个水稻品种不同组织中OsVDAC8的表达水平，结果显示OsVDAC8除了在这三个水稻品种的叶鞘表达水平都非常高、在花粉内容物充实期很低外，其它组织及不同发育时期表达模式差异明显。在Nip中OsVDAC8在根中的表达量最低，四叶期叶鞘和枝梗原基分化期中都有非常高的表达;YTB中OsVDAC8在根、叶及整个幼穗发育过程中表达量较低，四叶期叶鞘表达水平非常高;YTA中OsVDAC8在四叶期叶、叶鞘和幼穗发育的前期表达水平都较高，根及幼穗发育花粉内容物充实期表达水平最低。亚细胞定位结果显示OsVDAC8定位于线粒体。　　2.构建了pCAMBIA1302-OsVDAC8超表达载体并转化Nip,得到了7株表达量上调的T0代OsVDAC8-OE植株。　　3.将OsVDAC8克隆到pBT3-SUC诱饵蛋白载体上进行膜蛋白酵母双杂交文库筛选。从YTB幼穗cDNA文库中筛选出15个可能的互作蛋白(OsV8IP1-15)。OsV8IP1为编码149个氨基酸的具有泛素水解酶活性的钙调蛋白，点对点实验和BiFC结果表明OsV8IP1与OsVDAC8有相互作用。　　4.对OsVDAC3启动子(POsVDAC3)区域进行生物信息学分析，发现其含有与水稻生长发育和胁迫应答相关的顺式作用元件。构建了DX2181G-POsVDAC3表达载体并转化水稻日本晴。对转基因植株不同组织进行荧光观察，结果表明根、叶、叶鞘及花蕊均显示荧光，但维管组织荧光最强。　　5.非生物胁迫实验结果表明渗透、ABA和盐胁迫中OsVDAC3-OE植株表现出耐受性，低温胁迫中OsVDAC3-OE种子的发芽率比受体品种YTB高10％,推测OsVDAC3可能正调控水稻幼苗耐旱和耐盐，并降低了水稻对ABA的敏感性和低温对萌发的影响。生物胁迫实验结果表明稻瘟病菌侵染后对照组YTB的相对病斑面积比OsVDAC3-OE植株大，且OsVDAC3基因的表达量逐渐增大，推测OsVDAC3可能参与水稻对稻瘟病菌的抗性。白叶枯病菌处理后虽然OsVDAC3-OE的病斑大小与对照YTB没有明显差异，但48h后OsVDAC3的表达量大幅度增加，推测OsVDAC3可能参与白叶枯病信号调控过程。

关键词：水稻 OsVDAC8 表达模式分析膜蛋白酵母双杂交 OsVDAC3 逆境响应

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葡萄E3泛素酶HOS1基因克隆、表达及抗血清制备

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园艺学报 2021年第6期48卷 1173-1182页

作者：俞沁含焦淑珍吴楠张宁波徐伟荣宁夏大学农学院银川750021 宁夏大学食品与葡萄酒学院银川750021

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码1个具有E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确。以欧洲酿酒葡萄品... 详细信息

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码1个具有E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确。以欧洲酿酒葡萄品种‘霞多丽’的叶片为供试材料,克隆了VvHOS1基因,其全长2931bp,编码976个氨基酸,在第74~106个氨基酸处存在RING类型的锌指结构域(zf-C3H43)。系统发育分析表明,葡萄属植物的HOS1蛋白与番茄、烟草、茶树的亲缘关系最近。将VvHOS1抗原表位丰富肽段(1~320 aa)构建至原核表达载体pET28a-SUMO的BamHⅠ与HindⅢ位点,转化大肠杆菌。经IPTG诱导发现,pET28a-VvHOS11-320在大肠杆菌Rosetta(DE3)中高表达,融合蛋白主要以包涵体形式存在。将纯化后的重组蛋白作为抗原免疫大耳白兔,获得anti-VvHOS1多克隆抗体,ELISA检测效价为1︰51200,具有较强的Western特异性。该抗血清能够特异性检测‘霞多丽’葡萄叶片中的VvHOS1蛋白。(4℃)低温胁迫6、36与48 h时VvHOS1上调表达显著。

关键词：葡萄 HOS1 原核表达多克隆抗体低温胁迫表达模式分析

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金银花花形基因的发掘及生物信息学分析

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生物技术进展 2023年第1期13卷 90-101页

作者：李凤梅汤雪媛焦高洋齐玉亭杜献婷鲍倩倩张梦徐小博徐鑫张艳芳新乡学院生命科学与基础医学学院河南新乡453003

金银花作为我国重要的中药材,具有消炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、防癌等多种功效。随着金银花市场供需矛盾日益加剧,通过分子标记辅助选择育种方法来培育高产优质品种势在必行。通过NCBI的Blast工具扫描金银花蛋白组数据发掘花形候选基因... 详细信息

金银花作为我国重要的中药材,具有消炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、防癌等多种功效。随着金银花市场供需矛盾日益加剧,通过分子标记辅助选择育种方法来培育高产优质品种势在必行。通过NCBI的Blast工具扫描金银花蛋白组数据发掘花形候选基因,并执行候选基因的亲缘关系分析、结构域分析、表达模式分析、理化性质分析、蛋白质结构预测等一系列生物信息学分析。依据拟南芥调控花形的ABE类基因,通过NCBI-Blast工具扫描金银花氨基酸序列,筛选出包含MADS结构域的8个调控花形的金银花候选基因。经LjaFGD表达模式分析发现,金银花的花中GWHGAAZE016592和GWHGAAZE014905表达量显著高于其他部位,可能正向调控金银花花形。GWHGAAZE014905是一个包含MADS结构域的调控花器官发育的B类基因;GWHGAAZE016592是AP3同源基因。生物信息学分析发现,GWHGAAZE016592和GWHGAAZE014905均是稳定的亲水蛋白,属于非分泌蛋白,包括Motif1、Motif3、Motif4、Motif2、Motif6和Motif5,蛋白质三级结构模板为6byy.2.A和4ox0.2.C。GWHGAAZE014905被定位到细胞核上,而GWHGAAZE016592被定位到叶绿体上,且包含1个位于151~173 bp的跨膜螺旋区域,属于膜蛋白。研究结果为分子标记辅助选择方式培育道地高产优质金银花品种提供了基因资源和分子标记。

关键词：金银花花形基因表达模式分析生物信息学分析

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欧美杨PdMODD基因克隆与表达特性分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2021年第2期45卷 43-50页

作者：张腾倩张伟溪丁昌俊张静胡赞民苏晓华林木遗传育种国家重点实验室国家林业和草原局林木培育重点实验室中国林业科学研究院林业研究所中国科学院遗传与发育生物学研究所

【目的】研究杨树重要胁迫响应新基因,为揭示杨树抗逆分子机制、培育优良抗逆杨树新品种提供理论依据。【方法】基于水稻MODD氨基酸序列,通过BLAST在美洲黑杨基因组中筛选得到3条基因(Podel.08G114100、Podel.10G158900和Podel.17G09850... 详细信息

【目的】研究杨树重要胁迫响应新基因,为揭示杨树抗逆分子机制、培育优良抗逆杨树新品种提供理论依据。【方法】基于水稻MODD氨基酸序列,通过BLAST在美洲黑杨基因组中筛选得到3条基因(Podel.08G114100、Podel.10G158900和Podel.17G098500),并以其序列为参考,以‘渤丰3号’杨cDNA为模板克隆得到3条基因(PdMODD1、PdMODD2和PdMODD3)。利用生物信息学分析PdMODD蛋白的结构特征及与其同源蛋白的亲缘关系。通过基因枪轰击法分析PdMODD基因亚细胞定位。采用实时荧光定量(qRT-PCR)技术,分析PdMODD基因组织特异性和不同胁迫条件下的的表达模式。【结果】PdMODD1～3基因的开放阅读框(ORF)全长分别为1 065、1 065和1 074 bp,编码354、354和357个氨基酸,均为不稳定的亲水性蛋白。PdMODD基因均为NINJA家族成员,含有3个保守结构域,其中一个为转录抑制基序EAR。系统进化树分析显示,PdMODD1蛋白与毛果杨PtAFP2亲缘性较高并与拟南芥AtAFP1和木薯MeAFP2位于同一个分支;PdMODD2蛋白与麻疯树JcAFP2亲缘关系最近,并与拟南芥AtAFP2聚成一个分支;PdMODD3与毛果杨PtAFP3-1亲缘关系最近,与栓皮槠QsAFP3、拟南芥AtAFP4属于同一分支。亚细胞定位结果表明PdMODD基因均定位于细胞核。组织特异性分析显示,PdMODD1～3在根、茎、叶中均能表达,且在叶中表达量最高,根中表达量最低。胁迫响应表达模式结果显示,NaCl和聚乙二醇(PEG)胁迫处理下,PdMODD1～3在根、茎、叶组织中主要为显著上调表达。【结论】PdMODD1～3均为NINJA家族成员,含有保守的转录抑制基序EAR,具有组织特异性,在叶中高表达,且能被NaCl和PEG胁迫显著诱导表达,推测PdMODD1、PdMODD2和PdMODD3可能会在‘渤丰3号’杨对盐和干旱胁迫响应中发挥重要的调节作用。

关键词： ‘渤丰3号’杨 PdMODD 生物信息学分析表达模式分析

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甘薯Iborf56基因的克隆与表达分析

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山西农业科学 2023年第6期51卷 610-619页

作者：常璐董海涛吕运韬赵彩良唐锐敏贾小云山西农业大学生命科学学院山西太谷030801

为了研究甘薯叶绿体基因Iborf56的表达是否受到盐胁迫的诱导以及对生长发育的影响,为甘薯的品种选育提供参考,以栗子香为研究材料,从中克隆Iborf56基因,通过生物信息学方法分析其蛋白序列特征,亚细胞定位预测、系统发育分析、调控元件... 详细信息

为了研究甘薯叶绿体基因Iborf56的表达是否受到盐胁迫的诱导以及对生长发育的影响,为甘薯的品种选育提供参考,以栗子香为研究材料,从中克隆Iborf56基因,通过生物信息学方法分析其蛋白序列特征,亚细胞定位预测、系统发育分析、调控元件分析、不同组织及盐胁迫表达模式,以及qPCR验证该基因的表达量。结果表明,Iborf56与已知序列相似度为99.28%,开放阅读框长度为929 bp,编码60个氨基酸,含有8个磷酸化位点,没有信号肽和跨膜区,不具有分泌蛋白的特性,主要由α-螺旋组成;亚细胞定位在叶绿体基质中;进化树分析表明,Iborf56与三浅裂野牵牛(Ipomoea trifida)和三裂叶薯(Ipomoea triloba)的遗传距离最近;启动子元件分析发现,该基因启动子区域含有光响应元件、抗逆和激素应答等功能元件。转录组以及实时荧光qRT-PCR定量分析表明,Iborf56在甘薯叶片中的表达量最高且随生长时间增加呈显著上升趋势,推测该基因参与甘薯的生长发育;此外,Iborf56基因的表达量随盐胁迫时间表现为先升后降的趋势,且该基因在盐胁迫下12 h时达到了临界值,暗示其可能参与甘薯盐胁迫响应。

关键词：甘薯 Iborf56基因基因克隆生物信息学分析表达模式分析

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小麦TaTVP1基因的克隆与表达分析

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安徽农业科学 2023年第17期51卷 87-91页

作者：马燕斌李换丽文晋王霞周仙婷王新胜山西农业大学/山西省农业科学院棉花研究所山西运城044000 运城学院山西运城044000

[目的]发掘并研究小麦TaTVP1基因响应耐盐、耐旱等非生物胁迫的功能与机制,为小麦抗逆育种提供新的基因资源。[方法]利用PCR技术克隆小麦TVP1基因,扩增获得cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析,进一步利用qRT-PCR技术分析其表达模式... 详细信息

[目的]发掘并研究小麦TaTVP1基因响应耐盐、耐旱等非生物胁迫的功能与机制,为小麦抗逆育种提供新的基因资源。[方法]利用PCR技术克隆小麦TVP1基因,扩增获得cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析,进一步利用qRT-PCR技术分析其表达模式。[结果]小麦TVP1基因全长2 289 bp,编码762个氨基酸;其氨基酸序列具有12个跨膜结构,该结构中疏水氨基酸具有高度保守性,且肽链N末端与C末端均位于膜外,预测该跨膜结构可形成具有明显孔道的高级3D结构蛋白,推测与其具有的H+离子泵通道功能密切相关;系统发育树分析表明,TaTVP1蛋白与单子叶植物TVP1蛋白的同源性较高,该类蛋白在进化过程中单子叶和双子叶植物可形成2个明显的类群Ⅰ和Ⅱ;定量PCR分析表明,小麦中TVP1基因在根、茎中的表达量要明显高于叶、穗中,具有组织特异性,且不同材料间同一组织中该基因的表达趋势也存在差异,这可能与不同材料间的耐旱等抗逆性存在差异有关。[结论]克隆并分析了小麦TaTVP1基因,为进一步阐明该基因参与抵御非生物胁迫的机理奠定一定的研究基础。

关键词：小麦 TVP1基因生物信息分析表达模式分析

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小麦脱镁叶绿酸a加氧酶基因家族鉴定及其响应衰老特征分析

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激光生物学报 2023年第1期32卷 43-54页

作者：闫荣岳郝辉芳晋秀娟郭峰许成杰汤小莎王曙光范华孙黛珍山西农业大学农学院太谷030801

脱镁叶绿酸a加氧酶(PaO)基因编码叶绿素降解过程中的关键酶。为了解小麦(Triticum aestivum L.)TaPaOs基因家族特征及其在衰老过程中发挥的作用,本试验利用已发布的小麦及其他物种的全基因组信息对TaPaOs家族成员的基因特性进行分析,并... 详细信息

脱镁叶绿酸a加氧酶(PaO)基因编码叶绿素降解过程中的关键酶。为了解小麦(Triticum aestivum L.)TaPaOs基因家族特征及其在衰老过程中发挥的作用,本试验利用已发布的小麦及其他物种的全基因组信息对TaPaOs家族成员的基因特性进行分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)技术初步分析其功能。结果表明:在小麦中共发现18个TaPaOs家族成员,分布在15条染色体上,其编码蛋白均具有亲水性,且大多数为不稳定蛋白,亚细胞定位预测均位于叶绿体中;18个TaPaOs家族成员启动子区包含大量响应元件,其中光响应元件(G-Box)和ABA响应元件(ABRE)最多。分析TaPaOs在不同组织中的表达模式发现,其家族成员表达模式为叶>茎>根,大多数家族成员在ABA诱导衰老、黑暗诱导衰老以及自然衰老时上调表达,尤其是TaPaO_(2)、TaPaO5及TaPaO6,可作为小麦衰老研究的重点关注基因。这些研究结果为进一步研究TaPaOs基因家族的功能奠定基础。

关键词：小麦 TaPaOs基因家族叶绿素表达模式分析衰老

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黄瓜MTP基因家族分析及重金属胁迫下表达特征

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西北植物学报 2021年第6期41卷 933-943页

作者：朱雄萌蒋昕晨席克勇杨静尹军良朱永兴长江大学园艺园林学院湖北荆州434000 长江大学农学院湖北荆州434000 重庆工程职业技术学院重庆402260

该研究以模式物种(拟南芥、水稻、玉米)的MTP序列作为种子序列,对黄瓜MTP基因家族(CsMTP)成员进行了系统鉴定和分析;并以Zn^(2+)、Cd^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)和Mo^(2+)处理后的黄瓜叶片和根系为材料,对CsMTP响应金属离子的表... 详细信息

该研究以模式物种(拟南芥、水稻、玉米)的MTP序列作为种子序列,对黄瓜MTP基因家族(CsMTP)成员进行了系统鉴定和分析;并以Zn^(2+)、Cd^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)和Mo^(2+)处理后的黄瓜叶片和根系为材料,对CsMTP响应金属离子的表达模式进行了研究,为探究该基因家族对黄瓜重金属胁迫调控机制提供理论依据。结果表明:(1)黄瓜含有10个CsMTP,可进一步分为Fe/Zn-CDF(2个)、Mn-CDF(3个)和Zn-CDF(5个)三个亚家族,Mn-CDF成员含有保守基序DxxxD,Zn-CDF和Fe/Zn-CDFs成员含有保守基序HxxxD,大部分CsMTP成员含有6个跨膜结构域。(2)RNA-seq数据分析表明,CsMTP具备组织特异性表达和响应不同处理的特征,CsMTP11、CsMTP3和CsMTP7在不同组织和处理下普遍高水平表达,且外源化学试剂处理可诱导同一基因的不同表达模式。(3)RT-PCR分析表明,CsMTPs可被不同重金属离子诱导差异表达,包括不是MTP家族潜在底物的重金属。

关键词：黄瓜重金属胁迫 CDF家族生物信息学表达模式分析

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陆地棉GhASMT17基因的克隆及功能分析

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中国农业大学学报 2025年第6期 47-56页

作者：马鑫郭云龙侯奥成陈梦李月代培红新疆农业大学生命科学学院新疆农业大学高效基因组编辑技术研发与精准育种应用创新中心新疆农业大学新疆极端环境生物生态适应与进化重点实验室

为探究陆地棉N-乙酰血清素甲基转移酶基因（GhASMT17）在棉花抗黄萎病中的功能，从陆地棉标准体系‘TM-1’中克隆GhASMT17基因并测序，利用生物信息学在线工具分析该基因编码蛋白的理化性质、结构、进化及启动子元件特性，运用qRT-PCR... 详细信息

为探究陆地棉N-乙酰血清素甲基转移酶基因（GhASMT17）在棉花抗黄萎病中的功能，从陆地棉标准体系‘TM-1’中克隆GhASMT17基因并测序，利用生物信息学在线工具分析该基因编码蛋白的理化性质、结构、进化及启动子元件特性，运用qRT-PCR检测其组织表达特异性及黄萎病菌侵染后的表达模式，并用病毒诱导的基因沉默（VIGS）技术分析GhASMT17基因功能。结果表明：1）克隆的棉花GhASMT17基因开放阅读框（ORF）长度为726 bp，编码241个氨基酸、分子量为26 650.66 U，理论PI 4.80，不稳定指数为26.62，平均亲水指数为0.022，表明其为酸性、稳定且亲水的蛋白，可能定位于叶绿体中。2)GhASMT17基因启动子序列存在脱落酸响应元件（ABRE）和低温胁迫响应元件（LTR）。3)qRT-PCR结果显示，在黄萎病菌侵染24和48 h后，未接种（CK）与接种黄萎病（V991）植株的GhASMT17基因表达量均差异显著（P<0.05）。4)VIGS结果显示，GhASMT17沉默植株对棉花黄萎病菌的抵抗力显著降低（P<0.05），维管束褐变严重，并且在茎段恢复培养试验中长出真菌的茎段数量比CK多40%，说明GhASMT17在棉花抗黄萎病中起着正调控作用。

关键词：棉花 GhASMT17 基因克隆表达模式分析 VIGS

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