检索结果-内蒙古大学图书馆

分子植物育种 2018年第12期16卷 3785-3793页

作者：杨雪崔喜艳李艳丽杨美英吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发教育部工程研究中心长春130118

海藻糖-6-磷酸磷酸酶(TPP)是海藻糖合成的关键酶,通过合成具有渗透能力的海藻糖增加植物在逆境中的存活能力。本研究通过克隆得到水稻OsTPP3基因并构建原核表达载体进行体外表达,对基因启动子顺式作用元件组成、表达模式和模拟蛋白三维... 详细信息

海藻糖-6-磷酸磷酸酶(TPP)是海藻糖合成的关键酶,通过合成具有渗透能力的海藻糖增加植物在逆境中的存活能力。本研究通过克隆得到水稻OsTPP3基因并构建原核表达载体进行体外表达,对基因启动子顺式作用元件组成、表达模式和模拟蛋白三维结构等生物信息学分析,揭示OsTPP3基因在水稻抵抗逆境胁迫中的作用。结果显示,OsTPP3基因编码366个氨基酸,预测分子量39.99 kD,成功构建原核表达载体并体外表达。OsTPP3蛋白具有三个保守的基序构成酶活性位点,蛋白两个结构域之间是底物结合位点。OsTPP3基因的基因芯片结果显示在正常生长条件下各器官均检测到表达信号,是组成型表达基因。但在花和种子各器官中表达量明显较高;7 d幼苗经干旱和盐胁迫处理后,OsTPP3基因在根和芽中表现出表达量明显增加的特点。OsTPP3基因启动子组成元件预测基因表达模式与基因芯片表达情况一致。通过对OsTPP3基因表达模式的研究,发现其在生长发育和渗透性胁迫中发挥重要功能,可作为转基因遗传育种的备选基因。

关键词：海藻糖-6-磷酸磷酸酶基因克隆表达模式分析蛋白质结构模拟

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长叶红砂RtMYB1基因的克隆及表达

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草业科学 2018年第6期35卷 1416-1424页

作者：杜超孙晓梅王迎春郑琳琳牧草与特色作物生物技术教育部重点实验室内蒙古大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010021

MYB转录因子家族在植物抵抗非生物胁迫过程中发挥着重要的调控作用。基于转录组测序数据,从珍稀泌盐盐生植物长叶红砂(Reaumuria trigyna)中克隆一个MYB转录因子基因,命名为RtMYB1。RtMYB1基因具有780bp的ORF(open reading frame)序列,... 详细信息

MYB转录因子家族在植物抵抗非生物胁迫过程中发挥着重要的调控作用。基于转录组测序数据,从珍稀泌盐盐生植物长叶红砂(Reaumuria trigyna)中克隆一个MYB转录因子基因,命名为RtMYB1。RtMYB1基因具有780bp的ORF(open reading frame)序列,编码236个氨基酸残基组成的蛋白。RtMYB1能够被盐、冷、高温、紫外照射(UV)和干旱(PEG)5种非生物胁迫诱导表达,这表明RtMYB1基因可能参与长叶红砂响应非生物胁迫的调节途径。本研究为深入了解长叶红砂的抗逆机理及发掘优异的抗逆基因奠定了基础。

关键词： MYB转录因子抗逆基因长叶红砂抗逆机理非生物胁迫基因克隆表达模式分析

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杧果CONSTANS-Like17(MiCOL17)基因的克隆与表达分析

杧果CONSTANS-Like17(MiCOL17)基因的克隆与表达分析

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2019年全国热带作物学术年会

作者：卢新喜罗聪张秀娟余海霞刘源黄方谢小杰范志毅何新华亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室/农学院广西大学

开花时间是开花植物适应不同环境的重要特征,CCT基因在昼夜节律钟和光周期开花通路中均起重要作用。CCT基因根据其非CCT结构域可分为COL (Constant-like)、PRR (Pseudo-response regulator)和CMF (CCT motif family)三个家族。本实验以... 详细信息

开花时间是开花植物适应不同环境的重要特征,CCT基因在昼夜节律钟和光周期开花通路中均起重要作用。CCT基因根据其非CCT结构域可分为COL (Constant-like)、PRR (Pseudo-response regulator)和CMF (CCT motif family)三个家族。本实验以四季蜜芒为材料,从转录组测序结果中挖掘得到1个CO全长序列基因,命名为MiCOL17,生物信息学分析结果显示该基因编码区序列长度为1023bp,编码340个氨基酸,蛋白分子量为38.6Ka,等电点为5.10;功能结构预测表明该基因仅含一个CCT结构域,属于CO家族基因。组织表达分析结果表明,MiCOL17在四季蜜芒的茎、叶、花三个组织中均有表达,其中茎中的相对表达量最高,花次之,叶中最低;不同发育时期表达模式结果显示该基因在成花诱导期和花芽分化期的相对表达量较高;昼夜节律表达模式分析表明:MiCOL17的表达水平在白天逐渐降低,在夜间积累,黎明时分达到表达峰值,符合昼夜节律。该研究结果为研究MiCOL17基因在四季蜜芒中的功能奠定了基础。

关键词：杧果 CONSTANS-Like17 基因克隆表达模式分析

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一种棉花GhBsr-k1基因的应用

一种棉花GhBsr-k1基因的应用

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作者：李月周垚均代培红任燕萍刘超刘晓东 830052 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市农大东路311号

本发明公开了提供一种棉花GhBsr‑k1基因的应用，本发明根据同源基因的序列信息，采用RT‑PCR方法从棉花中克隆得到了一个基因，命名为GhBsr‑k1，如SEQ ID NO：1所示，对该基因进行表达模式分析和VIGS介导功能验证，结果表明GhBsr‑k1在棉... 详细信息

标准号: CN111154794A

本发明公开了提供一种棉花GhBsr‑k1基因的应用，本发明根据同源基因的序列信息，采用RT‑PCR方法从棉花中克隆得到了一个基因，命名为GhBsr‑k1，如SEQ ID NO：1所示，对该基因进行表达模式分析和VIGS介导功能验证，结果表明GhBsr‑k1在棉花抗黄萎病和/或枯萎病中发挥重要的负调控作用，通过沉默GhBsr‑k1基因后，棉花增强了对黄萎病和枯萎病的抗性，表明该基因可用于棉花广谱抗病育种中，通过创制Ghbsr‑k1的棉花突变体材料，以期大大增强棉花对黄萎病和/或枯萎病的抗性，从而减少每年因棉花病害对棉花产业所造成的直接经济损失。

关键词：棉花黄萎病枯萎病抗性基因表达模式分析功能验证经济损失抗病育种棉花病害棉花产业同源基因序列信息负调控突变体广谱介导可用克隆应用

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花生FATB（AhFATB）基因的克隆与功能分析

花生FATB（AhFATB）基因的克隆与功能分析

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作者：张会新疆农业大学

学位级别：硕士

花生(Arachis hypogaea L.)起源于南美洲,是世界上重要的油料作物之一,在全球许多地区都有种植。花生是我国重要的食用油来源,随着经济水平提高以及人们对于食用油需求量越来越大,对于食用油的品质也更加注重。我国食用油自给率严重不足... 详细信息

花生(Arachis hypogaea L.)起源于南美洲,是世界上重要的油料作物之一,在全球许多地区都有种植。花生是我国重要的食用油来源,随着经济水平提高以及人们对于食用油需求量越来越大,对于食用油的品质也更加注重。我国食用油自给率严重不足,长期依赖进口,导致我国油料作物价格走低,种植面积减少,会进一步恶化食用油短缺带来的危害。提高花生产量一直是人们长期关注的研究重点,但是对于花生含油量和花生油品质方面的研究却相对不足。因此如何利用基因工程手段和分子生物技术调节花生油脂合成相关基因、进而提高花生油品质和含油量越来越受到人们的重视。在高等植物中,脂肪酸(fatty acid,FA)的合成主要发生在质体中。FA的转运取决于脂酰酰基载体蛋白硫酯酶的(fatty acyl-ACP thioesterase,FAT)的活性,它水解酰基-ACP释放游离FA和ACP,因此FAT对于控制植物FA含量和组成具有重要作用。本研究从花生栽培种“丰花1号”中克隆得到了2个酰基载体蛋白硫酯酶基因(Ah FATB),对其进行了生物信息学、表达模式以及亚细胞定位分析;转化酵母和拟南芥验证AhFATBs的功能;最后克隆了AhFATBs基因的启动子并构建了GUS-植物表达载体。研究结果如下:(1)为了全面了解花生FAT(Ah FAT)家族基因,本研究对Ah FAT家族基因进行了全基因组生物信息学分析。在花生基因组中共有20个FAT基因,不均匀分布在2个基因组的12条染色体上,由于Araip.T3UA2基因不完整,可能会对分析结果产生一定影响,所以不予分析。通过进化树分析发现,植物FAT广泛存在,是较古老的基因。19个Ah FAT基因分为Ah FATA和Ah FATB两个亚家族,Ah FATA亚家族有2个基因,Ah FATB亚家族有17个基因。Ah FATA家族基因具有6或8个外显子,Ah FATB家族基因结构较为复杂,外显子数目5-8个。Ah FAT家族基因都不具有跨膜结构域但是都具有保守的Acyl-ACP＿TE结构域。对Ah FAT家族基因进行可变剪接分析,结果发现Ah FAT家族基因只有少数发生了可变剪接,约占该家族基因总数的25%,且存在组织特异性表达差异。(2)根据转录组测序得到的序列信息,设计引物从花生栽培种“丰花1号”中克隆得到2个Ah FATB基因,分别命名为Ah FATB2-1和Ah FATB2-2。序列分析发现二者的核苷酸序列相似性达到99.36%,都编码414个氨基酸;氨基酸序列相似性100%。Ah FATB2同其他植物FATB一样都具有典型的Acyl-ACP＿TE保守结构域。系统进化树分析显示花生Ah FATB2-1首先与野生花生种聚在同一分支,表明二者亲缘关系最近;又与大豆、苜蓿、绿豆聚在一起,表明它们具有较近的亲缘关系。(3)AhFATBs的表达模式分析结果显示,2个基因在所有组织中都有表达,但是在不同组织和种子发育不同时期的表达模式具有显著性的差异。在根、茎、叶、花四个不同组织中,2个基因都在花中表达量最高,其次是在根中,在茎和叶中的表达量相对较低。在种子发育的四个时期中,在种子发育前期(15 d和30 d)的表达量都比较高,而在种子发育后期(45 d和60 d)表达量都较低。(4)利用拟南芥原生质体瞬时表达系统对AhFATBs进行亚细胞定位分析,结果显示2个AhFATBs都定位在叶绿体中。(5)构建酵母表达载体对酵母菌株进行遗传转化。用气相色谱法检测各转基因酵母菌株FA含量与组成成分。分析发现重组菌与对照菌的主要FA组成没有发生改变,但FA总量有所提高。转Ah FATB2-1和Ah FATB2-2菌株中,C16:1、C18:0、C18:1的含量提高比较显著,与对照相比,分别提高24.7%、36.5%、56.1%和24.7%、22.6%、50.6%。(6)构建植物过表达载体对拟南芥进行遗传转化。用气相色谱法检测各转基因株系的FA含量与组成成分。分析结果显示,Ah FATB2-1和Ah FATB2-2转基因拟南芥种子相比野生型拟南芥种子的FA总量和主要几种FA含量都有很大的提高,其中FA总含量分别提高了约69.0%、67.8%,两者C16:0和C18:0含量分别为87.5 mg/g干重、19.3 mg/g干重和88.0 mg/g干重、19.5 mg/g干重,比野生型分别提高了5.4和3.5倍。(7)启动子克隆与载体构建克隆得到2个基因的启动子序列,长度分别为1316 bp和1489 bp。序列分析显示二者均具有启动子典型的CAAT-box和TATA-box元件,此外还含有一些光响应元件和与防御、胁迫相关的顺式作用元件。为了验证启动子功能,我们成功构建了GUS-植物表达载体。

关键词：花生脂酰酰基载体蛋白硫酯酶功能验证表达模式分析亚细胞定位分析启动子

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木薯TCP转录因子家族的鉴定及MeTCP4的抗逆功能研究

木薯TCP转录因子家族的鉴定及MeTCP4的抗逆功能研究

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作者：雷宁海南大学

学位级别：硕士

低温和干旱严重影响植物生长和繁殖。为适应不良环境变化,植物在生理及生化水平上发育了多种调节机制。早有研究证明,植物在适应逆境胁迫的过程中,常伴随着逆境胁迫相关基因的表达。TCP转录因子家族基因参与植物生长及环境胁迫的多重调... 详细信息

低温和干旱严重影响植物生长和繁殖。为适应不良环境变化,植物在生理及生化水平上发育了多种调节机制。早有研究证明,植物在适应逆境胁迫的过程中,常伴随着逆境胁迫相关基因的表达。TCP转录因子家族基因参与植物生长及环境胁迫的多重调节,目前该家族基因在木薯中少有研究。因此研究木薯TCP家族基因在低温及干旱胁迫下的系统发育及表达模式,对木薯育种有指导意义。本研究通过生物信息学和分子生物学方法对木薯TCP家族进行了系统的研究。同时克隆了 MeTCP4基因,通过对该基因在拟南芥中的超量表达研究其功能。主要研究结果如下:1.木薯全基因组共编码36个TCP家族成员基因,命名编号分别为:MeTCP2至MeTCP23。木薯TCP家族基因具有典型的TCP结构域。36个木薯TCP基因编码蛋白质所含氨基酸的个数范围是73到562;相关分子质量范围是8.3到58.1KDa;等电点范围是5.53到10.08。系统进化树分析结果显示木薯TCP家族基因能够被分为8个不同亚族(A—H),木薯TCP家族基因与拟南芥TCP家族基因亲缘关系最为接近。2.木薯TCP家族基因结构及保守结构域分析显示:同一亚族中的木薯TCP基因,其外显子的长度及内含子的个数呈现出相似的外显子-内含子分布,此结论与系统进化分析结果一致。36个木薯TCP基因中有16个基因没有内含子;除了 MeTCP16基因含有4个内含子外,其它的基因含有1至3个内含子。木薯TCP家族成员基因编码的蛋白质共有20个保守结构域,命名为:motif1到motif20。同一亚族木薯TCP基因具有相似的结构域构成,不同亚族之间高度分离。3.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示:木薯MeTCP家族成员在不同组织中表达量不同,大部分基因在茎、叶、牙尖中的表达量均高于根中的表达量。木薯TCP家族成员基因在不同组织中的表达量差异很大,而且单个基因在不同组织中的表达量也有差异。木薯TCP家族差异性表达基因中,有一些基因在特定组织中的表达量很高。例如:MeTCP2a、MeTCP3a、MeTCP5b、MeTCP8a、MeTCP13a 和MeTCP20d在叶中特异性高表达,表明这些基因在叶器官中发挥重要作用。4.实时荧光定量PCR检测ABA、GA3、IAA、JA、ZT和6-BA处理下36个木薯TCP基因的表达水平。结果发现:6种激素均能够引起木薯TCP家族基因出现差异性表达水平。同时发现木薯TCP家族中有22个TCP基因对ABA特别敏感,说明这些基因或许介导ABA信号途径参与调控植物非生物胁迫过程。5.低温和干旱胁迫下,RNA-seq分析木薯TCP家族基因表达模式显示:低温和干旱胁迫处理下,分别有18个和24个木薯TCP基因的表达量显著改变,且倍数变化大于2倍,推测其可能参与木薯适应低温和干旱胁迫过程。木薯MeTCPs家族基因启动子区顺式作用调控原件分析发现:低温和干旱胁迫下,12个显著上调或下调表达的木薯TCP基因其启动子区存在共有的顺式作用调控原件,推测这些共有的顺式作用原件可能参与胁迫响应过程。***4基因开放性阅读框(ORF)长1269bp,编码422个氨基酸,预测编码蛋白质相对分子质量为45.75KD,理论等电点为6.17。从木薯基因组中成功克隆得到MeTCP4基因全长cDNA。荧光定量RT-PCR结果显示:MeTCP4基因在各组织器官都有表达,根部表达最低、茎次之、叶子中表达最高并且MeTCP4基因受干旱及低温胁迫抑制。7.拟南芥转化获得35s::rMeTCP4过表达拟南芥植株,表型观察发现:转基因拟南芥相比野生型拟南芥来说,其莲座叶较小、较圆、常暗绿色,整体长势较紧凑,簇状型生长;叶片边缘较野生型拟南芥圆滑。低温胁迫下,转基因拟南芥中MeTCP4的过表达提高了脯氨酸和可溶性糖含量;降低了 MDA的含量。说明MeTCP4基因能够增强转基因拟南芥对低温胁迫的适应机制。qRT-PCR分析结果显示:35s::rMeTCP4过表达拟南芥植株中响应低温胁迫关键基因(CBF转录因子、RD29a、COR15a和COR47)均较野生型显著上调表达,说明MeTCP4直接影响了低温胁迫关键基因的表达,增强了 35s::rMeTCP4过表达转基因拟南芥植株的耐寒性。8.低温胁迫下,转基因型与野生型拟南芥差异表达基因GO富集分析发现:其差异基因GO富集主要集中在氧化还原酶活性、过氧化物酶活性、抗氧化剂活性和催化剂活性方面。RNA-seq结果显示:许多响应低温和ABA胁迫相关的基因出现显著差异性表达,多数在转基因拟南芥中显著上调表达;qPCR验证与RNA-seq结果保持一致。

关键词：木薯 TCP转录因子生物信息学表达模式分析 RNA-seq MeTCP4 功能验证

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内蒙古白绒山羊蛋白激酶B/AKT基因的克隆及表达模式分析

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中国农业科学 2011年第13期44卷 2787-2795页

作者：杨娇馥史偈君梁燕郑旭张涛秦毅王志钢刘东军内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western ... 详细信息

【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长1 443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊(NM001161857.1)同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的STKc结构域。Psite分析表明,含有1个cAMP-/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、10个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶ATP结合区信号和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域。PSORT程序预测其定位于细胞质中。AKT基因mRNA丰度在睾丸、脑和肾中较高,在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低。绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制mTOR活性,AKT表达量降低。【结论】内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA全长ORF的核苷酸序列与绵羊的AKT基因具有很高的同源性,AKT基因在脾、睾丸、脑、肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达,其AKT的表达受mTOR信号通路的调控。

关键词：内蒙古白绒山羊 AKT 基因克隆表达模式分析

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大白菜BrAtg6基因在抵抗根肿菌侵染中的功能分析

大白菜BrAtg6基因在抵抗根肿菌侵染中的功能分析

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作者：常虹沈阳农业大学

学位级别：硕士

大白菜根肿病在中国多个区域发生,该病已造成一些地区大白菜产量的急剧下降。本课题组前期利用双向电泳(2-DE)-质谱(MS)技术筛选出一个在接菌的大白菜‘742’品种根系中显著上调表达的蛋白质G17。本研究利用同源克隆技术得到该蛋白所对... 详细信息

大白菜根肿病在中国多个区域发生,该病已造成一些地区大白菜产量的急剧下降。本课题组前期利用双向电泳(2-DE)-质谱(MS)技术筛选出一个在接菌的大白菜‘742’品种根系中显著上调表达的蛋白质G17。本研究利用同源克隆技术得到该蛋白所对应的全长cDNA序列;运用实时荧光定量(qRT-PCR)和原位杂交方法分析了该蛋白所对应基因的表达模式;对其拟南芥突变体进行抗病鉴定。得到如下结果:1.由质谱分析得知该蛋白为Bra003466。将Bra003466的cDNA序列在NCBI数据库中与其同源基因进行比对,发现该基因序列5’端存在大约600bp的冗余序列。根据与之同源性最高的Brassica napus(XM-013793011.2)的cDNA序列设计引物,在‘742’品种的大白菜中扩增该目的基因的cDNA全长。2.对目的基因的开放阅读框及蛋白结构进行分析,发现其表达产物由521个氨基酸残基构成,分子量约为58.90KDa,等电点为6.21。预测它是一个无信号肽序列的蛋白,无明显跨膜结构域,推断该蛋白可能位于细胞质基质或细胞器基质中;该蛋白只有一个保守结构域(APG6 superfamily),且该结构域属于自噬蛋白家族。故将此基因命名为BrAtg6。3.利用qRT-PCR对BrAtg6在大白菜接菌处理及未接菌处理的根、茎、叶中的表达情况进行分析,发现BrAtg6只在接菌处理的根中有较高表达。进一步对BrAtg6在接菌处理的大白菜根系中侵染期及发病期的表达情况进行分析(以同时期未接菌的根为对照),结果表明BrAtg6在接菌处理的根系中侵染期及发病期的表达量明显高于对照,在发病期表达量更高。从而推测,BrAtg6可能参与了大白菜与根肿菌互作的过程。4.对未接菌处理的根、茎、叶进行原位杂交,发现均无杂交信号。进一步对根肿菌接菌处理后侵染期和发病期的根系进行原位杂交(以同时期未接菌根系为对照),发现杂交信号出现在侵染根系和发病根系中,且发病期杂交信号较强,而对照中无肉眼可见的杂交信号。表明BrAtg6的表达与根肿菌的侵染程度有关,也进一步说明BrAtg6可能在大白菜抵抗根肿菌侵染中具有一定的作用。5.在TAIR网站获取拟南芥突变体atg6,利用“三引物”法对突变体atg6进行纯合体筛选后,与野生型WT一起进行抗根肿病鉴定。对根肿菌侵染后的12h、24h、36h、48h、60h及72h的根部进行观察,发现突变体与野生型在被根肿菌侵染的时间上存在差异,突变体atg6在36h开始有孢子侵入根毛,而野生型WT则是在72h时孢子才开始侵入根毛。综上所述,ATG6基因可能与根肿病的抗性相关。

关键词：大白菜根肿病 BrAtg6 自噬表达模式分析

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沟叶结缕草蛋白质二硫键异构酶基因家族耐盐功能研究

沟叶结缕草蛋白质二硫键异构酶基因家族耐盐功能研究

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作者：肖晓琳南京农业大学

学位级别：硕士

我国目前约有80%的盐碱荒地丞待改良和开发利用,草坪草作为生态建设和荒地重新利用的重要组成部分,通常作为盐碱地改良的重要先锋植物,培育耐盐性强的草坪草是对盐渍土地进行绿化和建设改良的根本措施,也是近年来草坪草育种的重要方向... 详细信息

我国目前约有80%的盐碱荒地丞待改良和开发利用,草坪草作为生态建设和荒地重新利用的重要组成部分,通常作为盐碱地改良的重要先锋植物,培育耐盐性强的草坪草是对盐渍土地进行绿化和建设改良的根本措施,也是近年来草坪草育种的重要方向。沟叶结缕草(Zoysia matrella)是禾本科(Gramineae)画眉草亚科(Chloridoideae)结缕草属的多年生暖季型草坪草,具有较强的耐盐性。目前对沟叶结缕草等的盐生植物的耐盐机制的研究仍较匮乏,其中关于分子调控机制方面的研究更是鲜有相关报道。蛋白质二硫键异构酶(Protein Disulfide Isomerase,PDI)属硫氧还蛋白(Trx)超家族成员,是存在于内质网中一种重要的具有促进蛋白质折叠作用的催化剂,能通过催化蛋白形成二硫键(氧化活性)和修正错误配对二硫键的重排(异构酶活性)来促进蛋白的正确折叠。本文首次对参与沟叶结缕草耐盐调控的蛋白质二硫键异构酶基因(ZmPDIs)进行了一系列较为深入的研究,包括对克隆得到的ZmPDIs进行系统进化关系、基因结构等的比较分析,随后详细分析了不同ZmPDI基因的组织表达特异性和盐胁迫下的诱导表达特异性,最后使用酵母表达系统对其互补盐敏感酵母生长表型进行了分析比较。论文研究结果不仅丰富了沟叶结缕草等耐盐草坪草种的盐胁迫应答调控分子机理,也为培育耐盐草坪草新品种提供了重要的理论依据。论文主要结论如下:1.从沟叶结缕草‘Diamond’中总共克隆获得了 5个PDI基因,并对其进行了系统进化关系比对与基因结构预测等的生物信息学分析,结果显示5个ZmPDI基因均为PDI基因家族成员,5个ZmPDI与拟南芥、玉米、水稻等植物中已验证的PDI基因均具有较高的序列相似性,其中ZmPD11,ZmPDI2,ZmPDI 3序列高度相似,推测其可能通过基因加倍产生。2.定量PCR结果显示5个ZmPDI基因均在茎中有优势表达,在盐胁迫的条件下,5个ZmPDI基因的表达量总体均有不同程度的上调,表明盐处理对ZmPDI基因的表达具有诱导效果。3.将连入不同ZmPDI基因的pYES2载体转化EUG1缺失型突变体酵母菌株进行酵母生长比较分析,发现在含有500mMNaCl的SD/-His/-Ura培养基上,ZmPDI1、ZmPDI2、ZmPDI3、ZmPDI4提高了对盐敏感的EUG1缺失型突变体酵母的耐盐性,提示这四个ZmPDI蛋白具有提高细胞耐受盐胁迫的功能。

关键词：沟叶结缕草蛋白质二硫键异构酶生物信息学分析表达模式分析基因功能分析

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层粘连蛋白基因家族在猪多能干细胞中的表达谱分析

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生物工程学报 2017年第8期33卷 1304-1314页

作者：李焕于童马洋洋王华岩西北农林科技大学动物医学院动物生物技术系陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100

层粘连蛋白(Laminin)是细胞外基质的重要成分,对细胞生长、分化、运动、组织修复和再生等发挥重要调节作用。Laminin包括有A1-5、B1-4和C1-3共12个编码基因,以不同的表达模式发挥功能。其中Laminin A5作为可以支持多能细胞生长的重要基... 详细信息

层粘连蛋白(Laminin)是细胞外基质的重要成分,对细胞生长、分化、运动、组织修复和再生等发挥重要调节作用。Laminin包括有A1-5、B1-4和C1-3共12个编码基因,以不同的表达模式发挥功能。其中Laminin A5作为可以支持多能细胞生长的重要基因,得到广泛研究。但是,在所有猪相关数据库中,均未能查到Laminin A5的信息。文中通过生物信息学分析,首次确认了猪Laminin A5的存在,并进行了克隆和测序验证。为揭示Laminin基因家族在猪诱导多能干细胞(i PSCs)中的表达特性,检测了Laminin在猪各组织、体细胞和i PS细胞中的不同表达模式。发现Laminin B1基因在猪多能干细胞中存在特异性可变剪接体(LAMB1-a),且该可变剪切体的表达量与猪多能干细胞的重编程程度呈正相关。为进一步揭示和利用Laminin作为细胞外基质,用于猪多能干细胞的获取和培养优化奠定了基础。

关键词：猪多能干细胞层粘连蛋白 LAMA5 表达模式分析

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