检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张楠西南林业大学

学位级别：硕士

小桐子（Jatropha curcas L.，Euphorbiaceae）原产于热带美洲，目前遍布于亚洲和非洲的热带和亚热地区，具有易繁殖、抗旱、生长迅速、可适应广泛的农业气候条件和含油量高等特点，是具有巨大开发潜力的木本油料树种之一。但小桐子种... 详细信息

小桐子（Jatropha curcas L.，Euphorbiaceae）原产于热带美洲，目前遍布于亚洲和非洲的热带和亚热地区，具有易繁殖、抗旱、生长迅速、可适应广泛的农业气候条件和含油量高等特点，是具有巨大开发潜力的木本油料树种之一。但小桐子种子含油量不稳定且产量相对较低，限制了小桐子在生物柴油产业化开发中的利用。要提高小桐子种子含油量就必须了解其种子发育过程中油脂积累的分子机制。甘油-3-磷酸酰基转移酶（GPAT）是叶绿体中植物磷脂酰甘油生物合成过程中的第一个酰基酯化酶，它将脂肪酰转移到3-磷酸甘油的C-1位上合成1-酰基-sn-甘油-3-磷酸（溶血磷脂酸）。近年来研究发现甘油-3-磷酸酰基转移酶是植物生物合成储存油脂过程中的限速酶，对油料作物种子含油量具有重要的限制作用。因此，通过基因工程的手段对GPAT进行改造可能是改善TAG脂肪酸成分并提高植物油含量的有效途径。本研究以小桐子实验材料，克隆得到了两个小桐子甘油-3-磷酸酰基转移酶的基因，分别命名为JcGPAT1和JcGPAT2。通过序列相似性分析发现两个基因与其他植物中的GPAT有很高的相似性。分析基因在小桐子不同组织及种子发育的不同阶段的表达模式，研究基因在小桐子中的转录水平表达情况，鉴定JcGPAT1和JcGPAT2基因对小桐子油脂合成的调控作用。通过构建基因的酵母表达载体转化酿酒酵母的野生型和突变体菌株，在酵母表达系统鉴定了该基因编码的酶的功能。为研究其在模式植物拟南芥中功能我们还构建了种子特异性表达载体。主要结果如下：根据NCBI已知的小桐子质体GPAT（ACR61638）的序列，设计特异性引物，从小桐子种子中克隆获得JcGPAT1。其cDNA全长为1389bp，编码462个氨基酸，有与其他植物GPAT基因，如蓖麻和红花，有较高的相似性（从63％至79％）。实时定量PCR结果表明，JcGPAT1在发育中的种子的表达量，与在叶片中的表达量相比，处于低水平表达。以不同植物中甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的保守区域序列为基础，设计简并引物，结合RACE技术，从小桐子种子中克隆获得JcGPAT2（HQ395225）的cDNA全长序列。其cDNA核苷酸序列长度为1672bp，开放阅读框为1125bp，编码375个氨基酸。该基因具有明显的GPAT结构域，其编码的氨基酸序列与油桐、蓖麻等植物具有很高的相似性。半定量表达分析表明，该基因在小桐子发育的种子、叶、根尖等多个组织表达。在酿酒酵母的野生型和突变体菌株中对JcGPAT1和JcGPAT2进行了异源表达。运用分光光度法测定转基因酵母的生长曲线，通过香草醛法测定稳定生长期的转基因酵母的油脂含量。结果表明，转入JcGPAT2和转入对照质粒的对酵母的生长趋势和油脂含量没有明显的影响，说明JcGPAT2对酵母油脂的累积没有起到积极的作用；而转入JcGPAT1的酵母菌株比转空载体对照菌株生长慢，但是积累的油脂增多。因此它可能参与甘油磷脂的生物合成。本研究不仅提供了关于两个小桐子GPAT的序列信息，还对其表达和调控模式进行了研究。了解这些信息对于理解油脂合成的分子机制，以及鉴定种子发育过程中油脂积累的限速酶具有很重要的指导意义。

关键词：小桐子 GPAT 基因克隆表达模式分析异源表达

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内蒙古白绒山羊LDH-A基因cDNA的克隆与特性分析

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中国农业科学 2008年第9期41卷 2813-2819页

作者：王志钢其布日包婵婵旭日干内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了... 详细信息

【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了内蒙古白绒山羊LDH-A基因全长cDNA序列。该基因cDNA全长1 649 bp,包含一个996 bp的ORF和642 bp的3′UTR。SMART分析表明ORF编码的蛋白质具有Ldh1Ndomain和Ldh1Cdomain,Psite分析表明有L-乳酸脱氢酶活性位点,PSORT程序分析将其定位于细胞质中。LDH-A基因在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。【结论】内蒙古白绒山羊LDH-A基因编码的蛋白具有典型的乳酸脱氢酶结构,cDNA核苷酸序列与牛的LDH-A基因(NM174099.2)具有较高的同源性。在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。

关键词：内蒙古白绒山羊 LDH-A 基因克隆表达模式分析

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甜瓜谷氨酰胺合成酶基因的克隆及其表达分析研究

甜瓜谷氨酰胺合成酶基因的克隆及其表达分析研究

引用

作者：管闪青上海交通大学

学位级别：硕士

植物对氮素的吸收利用能力是植物生长发育重要的限制因素之一。谷氨酰胺合成酶(GS)在高等植物氮代谢中起着重要的作用。植物谷氨酰胺合成酶具有多种同工酶,根据亚细胞定位,分为胞液型谷氨酰胺合成酶(GS1)和质体型谷氨酰胺合成酶(GS2)。... 详细信息

植物对氮素的吸收利用能力是植物生长发育重要的限制因素之一。谷氨酰胺合成酶(GS)在高等植物氮代谢中起着重要的作用。植物谷氨酰胺合成酶具有多种同工酶,根据亚细胞定位,分为胞液型谷氨酰胺合成酶(GS1)和质体型谷氨酰胺合成酶(GS2)。本研究从网纹甜瓜中克隆了一个质体型谷氨酰胺合成酶的基因并且研究了该基因的表达模式。甜瓜(Cucumis melo L.)是世界十大果品之一,是我国重要的一种设施栽培作物。我们利用RACE-PCR方法在甜瓜叶片中克隆了一个谷氨酰胺合成酶基因M-GS2 (Melon-Glutamine Synthetase Gene, GenBank accession number: AY773090),并利用生物信息学手段对其主要结构特征和功能特征进行了分析。该基因全长1807 bp,包括170bp的5’非翻译区(UTR,untranslated region)和341 bp的3’非翻译区。此序列含有一个1296 bp的开放阅读框(ORF,open reading frame),编码一个432个氨基酸残基的多肽,推测的多肽分子量大小为477 kDa,PI=8.06。经生物信息学分析这个多肽是谷氨酰胺合成酶的前体,在这个多肽的N-端有一个53个氨基酸残基的穿越肽段,这个多肽定位于叶绿体内。氨基酸序列和结构分析显示M-GS2编码的这个蛋白包含了一个GS beta-Grasp功能区和GS催化功能区,这些功能区在植物的谷氨酰胺合成酶中是保守的。进化树分析表明M-GS2和黑核桃(Juglans nigra.)GS2最相近。在研究不同组织中表达模式的分析中表明M-GS2优先在叶中表达,在茎、花和果实中表达较少,而在根中几乎不表达。我们进一步研究了网纹甜瓜质体型谷氨酰胺合成酶(M-GS2)的表达

关键词：谷氨酰胺合成酶基因克隆甜瓜生物信息学分析表达模式分析

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