检索结果-内蒙古大学图书馆

核技术 2008年第10期31卷 761-765页

作者：赵慧茹谷运红押辉远焦浈秦广雍河南省离子束生物工程重点实验室郑州大学物理工程学院郑州450052 洛阳师范学院生命科学系洛阳471022

本实验采用不同剂量低能N^+注入小麦种子,研究种胚在萌动的不同阶段反转录转座子WIS2-1A的表达活动,分析低能N^+注入对WIS2-1A表达的时间效应和剂量效应。结果显示种子培养初始的60 h内,室温对照组、真空对照组、0.5×10^(17) N^+/c... 详细信息

本实验采用不同剂量低能N^+注入小麦种子,研究种胚在萌动的不同阶段反转录转座子WIS2-1A的表达活动,分析低能N^+注入对WIS2-1A表达的时间效应和剂量效应。结果显示种子培养初始的60 h内,室温对照组、真空对照组、0.5×10^(17) N^+/cm^2注入组和1.0×10^(17) N^+/cm^2注入组的种胚中,反转录转座子WIS2-1A始终维持低水平的表达,且随着种子培养时间延长,表达活性显著下降。经过0.5×10^(17)N^+/cm^2处理的小麦,在培养30 h时,种胚内WIS2-1A的相对表达量最高,达到对照的138倍。该发现表明反转录转座子WIS2-1A可能在低能离子束对当代小麦的诱变效应中起一定作用。掌握WIS2-1A对不同剂量低能N^+注入的敏感性和它的表达活动规律,能够为低能离子注入生物有机体产生诱变效应的理论研究提供基础。

关键词： WIS2-1A 小麦反转录转座子低能N^+注入表达活性

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Z-ajoene引起HL-60细胞G_2/M期阻滞及端粒酶表达活性的降低

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中华肿瘤杂志 2005年第9期27卷 516-520页

作者：叶颖杨华瑜吴军李敏闽吉梅崔景荣北京大学医学部天然药物及仿生药物国家重点实验室 100083

目的探讨Z-ajoene诱导细胞周期阻断于G2/M期的分子机制以及对端粒酶活性的抑制作用。方法采用MTT法测定Z-ajoene对HL-60细胞的增殖抑制率;以流式细胞仪测定Z-ajoene对HL-60细胞的周期阻断作用,并采用Westernblot法测定相关蛋白p34cdc2、... 详细信息

目的探讨Z-ajoene诱导细胞周期阻断于G2/M期的分子机制以及对端粒酶活性的抑制作用。方法采用MTT法测定Z-ajoene对HL-60细胞的增殖抑制率;以流式细胞仪测定Z-ajoene对HL-60细胞的周期阻断作用,并采用Westernblot法测定相关蛋白p34cdc2、cyclinB1、cyclinA的表达水平;TRAP-银染法测定端粒酶活性的变化,同时采用RT-PCR方法检测端粒酶hTRT和TP1mRNA的表达。结果10μmol/LZ-ajoene作用后能明显将HL-60细胞阻滞于G2/M期。在药物作用10h后,G2/M期细胞的比例达到顶峰,与对照组比较增加了1.95倍。另外,10μmol/LZ-ajoene作用后出现cyclinB1蛋白的聚集及p34cdc2蛋白表达的降低,但cyclinA蛋白的水平并无显著性变化。经Z-ajoene作用24h后,HL-60细胞端粒酶活性显著降低。而不同浓度的药物作用12h,其端粒酶活性均无显著性变化。在10μmol/LZ-ajoene作用24h后,能够降低端粒酶hTRT和TP1mRNA的水平。结论Z-ajoene能够在作用较短时间内明显将细胞周期阻断于G2/M期,同时伴有cyclinB1聚集及p34cdc2的抑制;而HL-60细胞的端粒酶活性仅在药物作用较长时间后才有一定降低,并且端粒酶hTRT和TP1mRNA的表达也同时降低。结果表明,Z-ajoene的细胞周期阻断作用可能是造成端粒酶缺失及HL-60细胞生长抑制的重要原因。

关键词： Z-ajoene HL-60细胞端粒酶细胞周期 G2/M期阻滞细胞端粒酶活性 cyclinB1蛋白表达活性 p34^cdc2 端粒酶hTRT

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一氧化氮合酶同工酶在前列腺增生组织中表达活性的检测

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中华老年医学杂志 2002年第6期21卷 458-459页

作者：刘玉强史本康徐祗顺柳豪许复郁山东大学齐鲁医院泌尿外科济南市250012

为探讨一氧化氮和3种一氧化氮合酶(NOS)同工酶与前列腺增生(BPH)病理生理变化的关系，我们对30例BPH患者进行了神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)检测，现将结果报道如下。

关键词：一氧化氮合酶同工酶前列腺增生免疫组织化学表达活性检测

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有效增强重组腈代谢酶系表达活性的策略

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现代化工 2003年第9期23卷 23-26,28页

作者：史悦孙旭东于慧敏罗晖沈忠耀清华大学化工系北京100084

讨论并提出了有效增强重组腈代谢酶系表达活性的多种策略。根据所选用的载体和宿主的不同表达特性,同时克隆目的基因上、下游的正向调控序列可直接增强酶表达水平;强化翻译后的修饰,可有效提高活性;除了常用的大肠杆菌克隆表达体系外,... 详细信息

讨论并提出了有效增强重组腈代谢酶系表达活性的多种策略。根据所选用的载体和宿主的不同表达特性,同时克隆目的基因上、下游的正向调控序列可直接增强酶表达水平;强化翻译后的修饰,可有效提高活性;除了常用的大肠杆菌克隆表达体系外,开发新型宿主-载体系统可为重组酶的活性表达提供新的途径;随着生物信息学技术的迅速发展,利用已知三维结构的蛋白对目标酶进行突变位点设计及结构与功能预测,将有望加快腈代谢酶系的定点突变研究进程。

关键词：腈水合酶腈代谢酶系表达活性载体重组酶

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pcDNA3.1(+)TPA构建及其在人皮肤成纤维细胞的表达活性

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基础医学与临床 2005年第1期25卷 20-24页

作者：杨进福夏家辉周新民陈勇赵迪成胡冬煦中南大学湘雅第二医院胸心外科长沙410011 中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

为建立TPA基因治疗缺血性心脏疾病及防止血管再狭窄的新方法。构建真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA ,并采用脂质体法将其转入体外培养的人皮肤成纤维细胞 ,并观察外源性TPA表达情况。结果发现 :真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA在人皮肤成纤维细... 详细信息

为建立TPA基因治疗缺血性心脏疾病及防止血管再狭窄的新方法。构建真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA ,并采用脂质体法将其转入体外培养的人皮肤成纤维细胞 ,并观察外源性TPA表达情况。结果发现 :真核表达载体pcDNA3.1(+)TPA在人皮肤成纤维细胞中获有效表达 ,酶联免疫吸附法TPA蛋白表达定量检测结果为 6 4 7.8ng/(10 6细胞·2 4h) ,未转pcDNA3.1(+)TPA的人皮肤成纤维细胞测得为 19.2ng/ (10 6细胞·2 4h) ;发色底物法测得外源性TPA活性为 12 5.0U/ (10 6细胞·2 4h) ,未转pcDNA3.1(+)TPA的人皮肤成纤维细胞测得为 5.8U/ (10 6细胞·2 4h)。提示 :pcDNA3.1(+)TPA转入人皮肤成纤维细胞后 ,外源性TPA基因获有效表达。

关键词： TPA 人皮肤成纤维细胞 pcDNA3 外源性真核表达载体基因治疗发色底物法表达活性脂质体法构建

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铝胁迫对拟南芥根尖AtPIN2蛋白表达活性的影响

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广西植物 2016年第1期36卷 121-126,82页

作者：曹华苹吴道铭甘海华沈宏华南农业大学农学院广州510642

铝胁迫能影响根尖生长素的运输,这与生长素运输载体密切相关,PIN2作为根尖生长素的运输蛋白,其独特的组织定位可能诱导PIN2蛋白参与了铝调节生长素的运输过程。该研究以拟南芥PIN2缺失突变体(pin2)、PIN2□∷□GFP融合体及其野生型(WT)... 详细信息

铝胁迫能影响根尖生长素的运输,这与生长素运输载体密切相关,PIN2作为根尖生长素的运输蛋白,其独特的组织定位可能诱导PIN2蛋白参与了铝调节生长素的运输过程。该研究以拟南芥PIN2缺失突变体(pin2)、PIN2□∷□GFP融合体及其野生型(WT)为材料,应用激光扫描共聚焦显微技术,研究铝处理对拟南芥根尖生长素运输蛋白PIN2的表达活性、蛋白在组织及亚细胞水平分布及其对铝内置化作用的影响。结果表明:短期铝处理或低铝浓度能明显增加拟南芥根尖细胞PIN2蛋白表达活性,而长期铝处理或高铝浓度抑制其表达活性;以100μmol·L-1Al Cl3处理4 h的蛋白表达活性最高。蛋白印迹反应发现,铝处理促进PIN2蛋白在细胞膜上累积,减少胞内囊泡中PIN2蛋白的含量;囊泡运输抑制剂(BFA)能抑制铝诱导PIN2蛋白的分配。铝胁迫增加拟南芥根尖细胞H2O2累积,pin2的H2O2累积量大于WT,而相对根长小于WT。Morin染色结果显示,pin2的铝内置化显著小于WT。上述研究表明,PIN2蛋白在100μmol·L-1Al Cl3处理条件下活性最高,细胞膜累积程度加强,铝内置化能力增强,从而调节根系的生长发育。该研究结果进一步为铝抑制生长素的运输机制提供了理论基础。

关键词：铝胁迫拟南芥 AtPIN2 表达活性

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家蚕脂质运载蛋白基因BmLip32的特征与表达活性分析

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蚕业科学 2009年第2期35卷 264-272页

作者：牛伟涛李珊珊聂作明陈健吕正兵王丹吴燕吴怡高攀于威盛清沈红丹张耀洲浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所浙江家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 浙江理工大学生命科学学院生物技术系杭州310018

从已构建的家蚕蛹期cDNA文库中筛选得到一条新的cDNA片断,经生物信息学分析发现其编码框具有脂质运载蛋白(lipocalin)保守结构域,命名为BmLip32基因,GenBank登录号为FJ602775。构建融合表达质粒pET-28a-BmLip32后转化大肠杆菌BL21并诱... 详细信息

从已构建的家蚕蛹期cDNA文库中筛选得到一条新的cDNA片断,经生物信息学分析发现其编码框具有脂质运载蛋白(lipocalin)保守结构域,命名为BmLip32基因,GenBank登录号为FJ602775。构建融合表达质粒pET-28a-BmLip32后转化大肠杆菌BL21并诱导表达,将纯化的His-BmLip32融合蛋白免疫新西兰大白兔成功制备多克隆抗体,效价大于1∶12 800。RT-PCR检测结果表明BmLip32在家蚕蛹期转录水平最高,在5龄幼虫头部中的转录水平明显高于其它组织。Western blotting分析结果显示BmLip32在5龄幼虫头部大量表达。免疫细胞化学实验显示BmLip32蛋白存在于家蚕Bm5细胞的细胞质中。推测BmLip32基因是家蚕神经系统发育相关的重要调控基因。

关键词：家蚕 BmLip32基因表达活性实时荧光定量PCR 免疫印迹免疫细胞化学

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核桃JreIF1A基因启动子的鉴定及表达活性分析

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西部林业科学 2019年第5期48卷 15-21页

作者：张英杰闫鹏宇李文凯崔茂凯张彤杨桂燕杨凌职业技术学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学林学院陕西杨凌712100

真核生物翻译起始因子(eIF1)对逆境响应具有一定正响应;启动子能有效预测基因功能。以本研究鉴定获得核桃eIF1A基因(即JreIF1A)为其上游启动子,通过生物信息学、瞬时转化及GUS活性测定等不同技术,分析JreIF1A启动子的基本生物功能。结... 详细信息

真核生物翻译起始因子(eIF1)对逆境响应具有一定正响应;启动子能有效预测基因功能。以本研究鉴定获得核桃eIF1A基因(即JreIF1A)为其上游启动子,通过生物信息学、瞬时转化及GUS活性测定等不同技术,分析JreIF1A启动子的基本生物功能。结果显示,JreIF1A上游1200bp启动子序列中包含众多与逆境响应相关的元件,病害响应相关的BIHD1OS、热胁迫响应相关的CCAATBOX1、Dof转录因子识别的DOFCOREZM、WRKY识别的WRKY71OS等。将JreIF1A启动子瞬时转入烟草测定GUS酶活性,发现JreIF1A启动子具有表达活性,且受干旱、盐、寒、热等胁迫诱导。表明JreIF1A启动子具有逆境响应表达活性,可能调控JreIF1A基因参与多重逆境响应。

关键词：核桃真核翻译起始因子 eIF1A基因启动子表达活性

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乙型肝炎病毒X蛋白上调前-X基因启动子表达活性

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世界华人消化杂志 2005年第15期13卷 1904-1906页

作者：白桂芹成军刘妍刘蔚张树林北京地坛医院传染病研究所北京市100011 西安交通大学第一医院传染科陕西省西安市710061

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)前-X基因启动子的调节作用,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用.方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增HBV前X基因启动子,以T-A克隆法,将前-X基因启动子(promoter)的基因片段连入载体pGEM-T.... 详细信息

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)前-X基因启动子的调节作用,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用.方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增HBV前X基因启动子,以T-A克隆法,将前-X基因启动子(promoter)的基因片段连入载体pGEM-T.将获得的质粒pGEMT-前-X-promoter与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnⅠ和BglⅡ双酶切后构建前-X启动子报告基因表达载体pCAT3-前-X-promoter,以重组表达质粒pCAT3-前-X-promoter分别与PcDNA3.1空载体和HBxAg表达载体pcDNA-HBxAg瞬时转染HepG2细胞,以转染pCAT3basic的HepG2细胞为阴性对照,48h后收获细胞.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以了解HBxAg对前X基因启动子的调节作用.结果:构建的报告载体pCAT3-前-X-promoter经过序列分析和酶切鉴定正确.真核表达载体pcDNA3.1(-)-X和pCAT3-前-X-promoter共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3启动子的3.12倍,是pCAT3-前-X-pro-moter的2.65倍,是pCAT3-3.1空载体和pCAT3-前-X-promoter共转染的2.28倍.结论:HBxAg可以上调乙型肝炎病毒基因组中前-X基因启动子的活性.

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白基因启动子表达活性乙型肝炎病毒(HBV) promoter HepG2细胞聚合酶链反应(PCR) 上调基因表达载体

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60Coγ辐照对小麦反转录转座子WIS2-1A表达活性的影响

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河南农业科学 2009年第3期38卷 20-22页

作者：赵慧茹押辉远谷运红焦浈秦广雍河南省离子束生物工程重点实验室郑州大学物理工程学院河南郑州450052 洛阳师范学院生命科学系河南洛阳471022

研究了不同剂量60Coγ辐照小麦种子后,种胚在萌动的不同阶段反转录转座子WIS2-1A的表达活性,分析了60Coγ射线对WIS2-1A表达的时间效应和剂量效应。结果表明,WIS2-1A的表达活性随培养时间的延长而降低;种子培养时间不同,对于60Coγ辐照... 详细信息

研究了不同剂量60Coγ辐照小麦种子后,种胚在萌动的不同阶段反转录转座子WIS2-1A的表达活性,分析了60Coγ射线对WIS2-1A表达的时间效应和剂量效应。结果表明,WIS2-1A的表达活性随培养时间的延长而降低;种子培养时间不同,对于60Coγ辐照剂量有不同的敏感性,相对于其他培养时间和剂量,在种子培养45h受到100 Gy60Coγ辐照的时候更能有效激活反转录转座子WIS2-1A的表达。

关键词：小麦 WIS2-1A 60Coγ辐照表达活性时间效应剂量效应

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