检索结果-内蒙古大学图书馆

虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)组蛋白H_3启动子的分子克隆及在稀有(鱼句)鲫(Gobiocypris rarus)中的表达活性分析

自然科学进展 2004年第1期14卷 46-50页

作者：茅卫锋汪亚平孙永华吴刚陈尚萍朱作言中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

使用高保真PCR方法从虹鳟鱼基因组中克隆得到虹鳟鱼组蛋白H3启动子.将虹鳟鱼组蛋白H3启动子插入启动子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-1中,构建成重组载体pRH3EGFP-1.通过显微注射法得到转pRH3EGFP-1稀有(鱼句)鲫.在荧光解... 详细信息

使用高保真PCR方法从虹鳟鱼基因组中克隆得到虹鳟鱼组蛋白H3启动子.将虹鳟鱼组蛋白H3启动子插入启动子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-1中,构建成重组载体pRH3EGFP-1.通过显微注射法得到转pRH3EGFP-1稀有(鱼句)鲫.在荧光解剖镜下,可以清楚地观察到EGFP在发育到原肠胚的转pRH3EGFP-1稀有(鱼句)鲫中表达.在稀有(鱼句)鲫幼体鱼苗中也可以清楚地观察到EGFP在多个组织中的泛组织表达.比较CMV启动子、鲤鱼β-actin启动子、虹鳟鱼组蛋白H3启动子的EGFP表达载体pCMVEGFP,pCAEGFP,pRH3EGFP-1在稀有(鱼句)鲫胚胎中的表达特性,结果表明pCMVEGFP最早表达,其后为pRH3EGFP-1和pCAEGFP,表达的强度依次为pCMVEGFP>pCAEGFP>pRH3EGFP-1.这说明虹鳟鱼组蛋白H3启动子可以作为一种有效的启动子,应用于鲤科鱼类(如稀有(鱼句)鲫)的转基因研究.

关键词：虹鳟鱼组蛋白H3启动子增强绿色荧光蛋白转基因鱼分子克隆表达活性

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逆转座子atrl胁迫诱导表达活性研究及植原体对繁昌长枣的影响

逆转座子atrl胁迫诱导表达活性研究及植原体对繁昌长枣的影响

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作者：周张彬安徽农业大学

学位级别：硕士

前期研究表明逆转座子atrl参与了苹果短枝变异,为研究atrl活性表达条件,本试验借助已获得的atr1-LTR,利用荧光定量PCR技术,研究了逆转座子art1在不同胁迫处理条件下的表达活性,为今后利用逆转座子art1创造突变提供借鉴。以苹果幼树为试... 详细信息

前期研究表明逆转座子atrl参与了苹果短枝变异,为研究atrl活性表达条件,本试验借助已获得的atr1-LTR,利用荧光定量PCR技术,研究了逆转座子art1在不同胁迫处理条件下的表达活性,为今后利用逆转座子art1创造突变提供借鉴。以苹果幼树为试材,分别进行SA、2,4-D、ABA及伤害胁迫处理,清水处理为对照,RNA提取后经DNase消化反转录成cDNA,依据atrl-LTR设计引物进行RT-PCR,检测结果表明逆转座子atr1在对照及各处理样品中均有不同程度表达；以GAPDH为内参,荧光定量分析表明ABA、伤害和2,4-D能显著提高atr1表达活性；2,4-D处理后不同时间点取样分析结果表明,atr1转录活性呈现先高后低的趋势,处理后9h表达活性达到高峰。安徽地方枣种质资源丰富,近年来,由植原体引起枣疯病己成为威胁地方枣产业发展的重要障碍。本研究分析了安徽地方枣种质枣疯病16S rDNA序列特性；比较了健康植株及植原体胁迫条件下枣新梢中细胞分裂素和生长素的含量；克隆了枣ipt基因部分片段。1.研究了安徽地方枣种质枣疯病16SrDNA序列特性。以表现枣疯病植原体症状的繁昌长枣叶片DNA为模板,克隆了枣疯病植原体16SrDNA序列,获得-1248bp的片段,命名为JWB-FJP1。同源性分析结果表明,JWB-FJP1属于16Sr V-B组,与重庆地方枣枣疯病植原体JWB-Xch(JQ675716)同源性最高,达到99.92%；与河北枣枣疯病植原体JWB-Hebei(GU184186)同源性最低,为67.06%。说明不同寄主植原体存在不同的生物学类型。本研究为安徽地方枣种质枣疯病病原分类及其快速鉴定提供了理论依据。2.健康植株及植原体感染病株新梢中细胞分裂素和生长素含量的测定。利用ELISA法分别检测了5月和7月健康植株与植原体感染病株新梢中细胞分裂素和生长素,结果表明：植原体感染的病株新梢中细胞分裂素含量高于健康植株。3.枣异戊烯基转移酶基因部分片段的克隆。以繁昌长枣基因组DNA为模板,利用NCBI登录的ipt基因同源部分设计引物,经PCR扩增、回收、克隆、测序后获得一长度为31l bp的序列。将该序列提交至NCBI比对、分析发现该片段与桑树和大豆ipt基因同源性分别达到73%和69%。

关键词：苹果逆转座子表达活性枣植原体细胞分裂素

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绵羊KAP1.3基因启动子的克隆及表达活性分析

绵羊KAP1.3基因启动子的克隆及表达活性分析

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作者：朱汇石河子大学

学位级别：硕士

从1985年利用显微注射法成功获得世界上第一只转基因羊开始，各国致力于转基因羊方面的研究，克隆和转基因技术已成功应用于转基因育种和生物反应器制备等方面的研究。上世纪90年代以来，在\"863\"计划等重大项目的支持下，... 详细信息

从1985年利用显微注射法成功获得世界上第一只转基因羊开始，各国致力于转基因羊方面的研究，克隆和转基因技术已成功应用于转基因育种和生物反应器制备等方面的研究。上世纪90年代以来，在\"863\"计划等重大项目的支持下，由中国农业大学农业生物技术国家重点实验室主持的转基因山羊—乳腺生物反应器的研究工作取得了成功。外源基因在动物体内的有效特异性表达，是制作稳定、高效表达外源基因的转基因个体，实现外源基因所显示出的有益性状以及进行高纯度药物蛋白的大规模、低成本生产的前提条件。要实现这一目标就首先需要获得能够特异高效启动外源基因表达的调控序列。\n 选择在绵羊毛囊组织特异高表达的KAP1.3基因，通过PCR方法克隆得到该基因的5`调控序列，利用预测启动子区域的在线软件（Promoterpredictions、Promoter2.0等）预测KAP1.3基因上游5’端调控序列分析，确定-900~+309区域为绵羊KAP1.3基因启动子区，在-904、-701、-565、-168、-165、-82以及+25、+56存在转录因子结合位点，其中-904、-168、+25和+56分别是bHLH，Sp1，C/EBP，NF转录因子的结合位点，-165及-82为CAATbox，TATAbox。\n 为明确扩增得到的KAP1.3基因5`端序列不同区段对启动子活性的影响，通过PCR方法扩增了长度为1253bp，1016bp，703bp，504bp和313bp的5个片段，分别命名为P1，P2，P3，P4和P5。利用高灵敏且稳定性好的荧光素酶分析系统，将扩增得到的目的片段与pGL4.10载体经Kpn1和XhoI双酶切后连接，构建了5个重组质粒（pGL4.10-P1至pGL4.10-P5）。测序鉴定与NCBI上（NM_001159761）序列只有个别碱基突变，但各转录因子结合位点和核心启动子区域相同。\n 以小鼠成纤维细胞、鸡输卵管上皮细胞和293细胞这三种来源于不同动物和不同组织的细胞作为检测启动子活性的细胞，共转染pGL4.10-P质粒和内参对照pGL-TK质粒，检测含有不同启动子片段的质粒在各细胞中荧光素酶的活性，萤火虫荧光素酶与内参质粒中海肾荧光素酶的相对活性即反应出不同启动子片段在不同细胞中的表达活性。结果表明，除片段P5外，其他片段均具有不同程度的表达活性，且在小鼠成纤维细胞中的表达活性明显高于鸡输卵管上皮细胞及293细胞对照组，表现出明显的特异性表达。核心启动子区域位于-194至+4区段，-707至-394之间存在潜在增强子调控序列，而-394至-195之间可能含有一些负调控序列。P1，P2片段在小鼠成纤维细胞中的表达活性明显高于其他片段，但在其他两组细胞系中却与其他片段相似，推测在-944至-394区段可能与基因组织特异性表达相关。\n 本研究扩增得到不同长度的绵羊KAP1.3启动子片段，利用生物信息学方法预测了转录因子的结合位点，成功构建了启动子活性检测载体5个，在3个细胞系中利用荧光素酶分析了各片段的表达活性。荧光素酶与生物信息学预测的结果表明，扩增得到的目的片段确有较强的组织特异表达活性，且在扩增的全长启动子片段中包括了完整的核心启动子序列，同时还存在了负调控和正调控片段。本研究取得的结果为构建含有优化启动子序列的组织特异表达载体奠定基础，并为后期制备毛囊组织特异表达外源基因的转基因羊提供技术支持，具有重要科学意义和一定的实用价值。

关键词：绵羊毛囊组织 KAP1.3基因启动子区 PCR克隆方法表达活性

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C-Met在人非小细胞肺癌A549细胞系中表达活性与放疗抵抗的关系的实验研究

C-Met在人非小细胞肺癌A549细胞系中表达活性与放疗抵抗的关系的...

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作者：梁语丝中国医科大学

学位级别：硕士

目的 　　探讨c-Met对A549人非小细胞肺癌细胞系的放疗抵抗作用及发生机制。 　　方法 　　采用人肺癌细胞系A549体外培养作为研究对象。将经不同浓度c-Met抑制剂处理后的“沉默”A... 详细信息

目的 　　探讨c-Met对A549人非小细胞肺癌细胞系的放疗抵抗作用及发生机制。 　　方法 　　采用人肺癌细胞系A549体外培养作为研究对象。将经不同浓度c-Met抑制剂处理后的“沉默”A549细胞经或不经放射治疗，用Western-Blot法检测c-Met以及c-Src蛋白磷酸化形式表达水平，观察不同浓度c-Met抑制剂对c-Met和c-Src蛋白活性的抑制作用，同时用MTT法检测不同处理组细胞增殖抑制情况，流式细胞仪(FCM)检测不同处理组的细胞凋亡情况。 　　结果 　　放射治疗可使A549细胞系c-Met磷酸化水平升高(P=0.0040)，经或不经放射治疗c-Met抑制剂(PHA665752)均可使c-Met磷酸化水平降低，即有效抑制c-Met蛋白活性表达(P＜0.05);放射治疗可使A549细胞系c-Src磷酸化水平升高(P=0.0018)，PHA665752在有效抑制c-Met磷酸化水平的同时能够有效抑制c-Src蛋白活性表达(P＜0.05);MTT法及流式细胞法检测结果显示c-Met蛋白活性表达得到有效抑制后，A549细胞放射治疗后增殖抑制率及凋亡率较单纯放疗时明显增高(P＜0.05)。 　　结论 　　放射治疗后c-Met信号通路的活化是使A549人非小细胞肺癌细胞系产生放疗抵抗的重要原因，c-Src可能位于c-Met信号通路下游共同介导放疗抵抗;有效抑制c-Met蛋白活性表达可提高A549细胞放疗敏感性，其机制与抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡有关。

关键词：非小细胞肺癌 c-Met蛋白 A549细胞系表达活性放疗抵抗

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草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肠道紧密连接蛋白基因克隆与表达活性分析

草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肠道紧密连接蛋白基因克隆与表...

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作者：许凡苏州大学

学位级别：硕士

饲料氧化油脂对养殖鱼类健康和生长的毒副作用是一个急待研究的科学问题。饲料首先在肠道消化吸收，饲料氧化油脂及其主要成分首先会对肠黏膜产生损伤作用，如果肠黏膜屏障结构和功能维持正常状态，饲料氧化油脂的损伤作用就还只是肠道... 详细信息

饲料氧化油脂对养殖鱼类健康和生长的毒副作用是一个急待研究的科学问题。饲料首先在肠道消化吸收，饲料氧化油脂及其主要成分首先会对肠黏膜产生损伤作用，如果肠黏膜屏障结构和功能维持正常状态，饲料氧化油脂的损伤作用就还只是肠道内的损伤作用，然而，当该屏障损伤时，细菌、类毒素等大分子物质则会通过屏障进入体循环，对远程实质性器官如肝胰脏造成打击。肠粘膜屏障的损伤主要表现为肠道通透性显著增加，肠道通透性增加的主要途径之一则是肠粘膜上皮细胞间的紧密连接蛋白合成受到影响，紧密连接出现结构性破坏。因此，本实验通过对草鱼中肠紧密连接结构观察、紧密连接蛋白基因的克隆和组织表达分析及中肠损伤后基因表达活性的分析，旨在证实草鱼中肠是否存在紧密连接结构并克隆获得紧密连接蛋白基因的片段序列，同时初步探讨养殖条件下可能存在的与草鱼中肠损伤密切相关的紧密连接蛋白基因。实验一草鱼中肠紧密连接结构观察通过透射电镜（TEM），观察草鱼中肠的紧密连接结构，结果显示：肠上皮细胞侧面存在高电子密度（黑色）连接线，高倍放大观察，能看到连接线处有致密的黑点。将其与已有的紧密连接TEM图对比，确定黑色连接线为肠道上皮细胞之间的连接，其顶部为紧密连接。结论：本实验首次观察到草鱼中肠的上皮连接结构，其顶端应为紧密连接结构，证实了草鱼中肠紧密连接结构的物理性存在。实验二草鱼紧密连接蛋白基因克隆和组织表达分析根据本实验室草鱼肠道转录组测序（RNA-Seq）结果，采用prime5.0设计引物，通过RT-PCR技术克隆草鱼Claudin-3、Claudin-12、Claudin-15a、Claudinb、Claudinc、Occludin、ZO-1、ZO-2isoform2、ZO-3基因片段序列，运用DANMAN进行片段序列的氨基酸推导和氨基酸同源性分析，确定所克隆基因为紧密连接蛋白基因的组成，证实了草鱼中肠紧密连接结构的存在。同时，采用荧光定量PCR（Q-RT-PCR）分析各紧密连接蛋白基因在草鱼脾脏、肝胰脏及中肠的表达情况。结果表明：（1）克隆获得草鱼Claudin-3基因片段序列长1263bp，编码131个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼Claudin-3基因与其他物种的相似性在60%-88%之间;克隆获得草鱼Claudin-12基因片段序列长235bp，编码23个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼Claudin-12基因与其他物种的相似性在78%-100%之间;克隆获得草鱼Claudin-15a基因片段序列长490bp，编码151个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼Claudin-15a基因与其他物种的相似性在50%-92%之间;克隆获得草鱼Claudinb基因片段序列长776bp，编码195个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼Claudinb基因与斑马鱼和鲫鱼的相似性分别为84%、89%;克隆获得草鱼Claudinc基因片段序列长662bp，编码171个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼Claudinc基因与斑马鱼和鲫鱼的相似性分别为95%、91%;克隆获得草鱼Occludin基因片段序列长1183bp，编码375个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼Occludin基因与其他物种的相似性在37%-88%之间;克隆获得草鱼ZO-1基因片段序列长279bp，编码93个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼ZO-1基因与其他物种的相似性在46%-88%之间;克隆获得草鱼ZO-2isoform2基因片段序列长762bp，编码248个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼ZO-2isoform2基因与其他物种的相似性在44%-89%之间;克隆获得草鱼ZO-3基因片段序列长419bp，编码139个氨基酸，氨基酸序列分析表明草鱼ZO-3基因与其他物种的相似性在57%-82%之间。（2）Q-RT-PCR分析表明草鱼脾脏、肝胰脏和中肠中各细胞质蛋白基因和跨膜蛋白基因均有表达，且依次呈现出表达总量逐步增加，主要表达类型逐步多元化，即脾脏以ZO-1和Claudin-12表达为主，肝胰脏以ZO-2isoform2、ZO-3和Claudin-12、Claudin-3表达为主，中肠以ZO-1、ZO-2isoform2、ZO-3和Claudinc、Claudin-15a、Claudin-12、Occludin表达为主。实验三养殖条件下草鱼中肠损伤后各紧密连接蛋白基因表达活性分析本实验采用Q-RT-PCR检测了养殖条件下草鱼中肠损伤后各紧密连接蛋白基因的mRNA相对表达水平。结果显示：草鱼中肠损伤后，ZO-1表达上调，但差异不显著;Claudinb、Claudin-15a、ZO-2isoform2、ZO-3表达下调，但差异不显著;Claudinc、Claudin-3、Claudin-12表达分别显著下调了153、115和1倍。结论：养殖条件

关键词：草鱼 Claudinc Claudin-3 Claudin-12 Claudin-15a Occludin ZOs 克隆表达活性中肠

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核因子-kappa B活化对鼻息肉组织中PKC、IL-8表达活性的影响

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中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2007年第6期15卷 406-412页

作者：孙娟李玲香内蒙古医学院附属医院耳鼻咽喉科呼和浩特010050

目的探讨核因子-kappa B p65(NF-κB p65)活化对鼻息肉组织中蛋白激酶C-α(PKC-α)和白细胞介素- 8(IL-8)表达的影响及其在鼻息肉发病机制中的可能作用。方法息肉组织标本35例,正常下鼻甲黏膜16例,免疫组织化学技术检测NF-κB p65、PKC... 详细信息

目的探讨核因子-kappa B p65(NF-κB p65)活化对鼻息肉组织中蛋白激酶C-α(PKC-α)和白细胞介素- 8(IL-8)表达的影响及其在鼻息肉发病机制中的可能作用。方法息肉组织标本35例,正常下鼻甲黏膜16例,免疫组织化学技术检测NF-κB p65、PKC-α、IL-8的表达活性。结果鼻息肉中的NF-κB p65、PKC-α和IL-8表达活性明显高于下鼻甲黏膜,差异有统计学意义(P<0.01);NF-κB p65表达活性与PKC-α和IL-8呈正相关(r分别为0.902,0.946,P<0.01);PKC-α表达活性与IL-8呈正相关(r=0.970,P<0.01)。结论NF-κB-PKC信号传导通道可以调节IL-8的表达活性,是鼻息肉发病的重要机制之一。

关键词：鼻息肉 NF-065zB PKC IL-8 表达活性发病机制

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恶性肿瘤与外周血 T 淋巴细胞亚群及其酸性非组蛋白表达活性的相关研究

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福州总医院学报 2001年第4期8卷 214-216页

作者：陈樟树余宗阳郑佩婵陈曦倪敏李蓉福州总医院肿瘤科

目的:探讨恶性肿瘤患者外周血 T 淋巴细胞亚群及其核仁组成区酸性组蛋白表达活性的关系与临床意义。方法:采用 KL-Ⅱ型计算机免疫图象分析系统及碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP 法)对391例恶性肿瘤、223例良性肿瘤、216例正常人外周血 T... 详细信息

目的:探讨恶性肿瘤患者外周血 T 淋巴细胞亚群及其核仁组成区酸性组蛋白表达活性的关系与临床意义。方法:采用 KL-Ⅱ型计算机免疫图象分析系统及碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP 法)对391例恶性肿瘤、223例良性肿瘤、216例正常人外周血 T 淋巴细胞亚群及其 Ag-NORs 分别进行检测。结果:恶性肿瘤患者CD3、CD4降低,CD8升高,CD4/CD8比值降低。与正常组和良性肿瘤组比较具有显著性差异,其在大肠癌、淋巴瘤中体现特别明显,构成了恶性肿瘤 T 细胞亚群的特点;恶性肿瘤 T 淋巴细胞 I.S%均值与正常组或良性肿瘤组比较,具有显著统计学意义(P 均小于0.01);而良性肿瘤组与正常组比较,无显著差异。结论:恶性肿瘤患者普遍存在T细胞免疫功能低下,T 淋巴细胞 AgNORs 检测可作为肿瘤普查的一种新方法,有助于临床良、恶性肿瘤的鉴别诊断,估计预后,判断疗效。

关键词：酸性非组蛋白表达活性良性肿瘤恶性肿瘤

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乙型肝炎病毒HBeAg上调S100钙结合蛋白A11基因启动子表达活性的研究

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胃肠病学和肝病学杂志 2004年第5期13卷 458-461页

作者：刘蔚成军张连峰纪冬洪源王建军杨媛解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　探讨乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)对S10 0钙结合蛋白A11(calgizzarinS10 0A11)启动子转录的激活作用。方法　以我室构建的HBeAg反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交 (SSH)筛选结果为基础 ,利用生物信息学技术确定S10 0A11的启动... 详细信息

目的　探讨乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)对S10 0钙结合蛋白A11(calgizzarinS10 0A11)启动子转录的激活作用。方法　以我室构建的HBeAg反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交 (SSH)筛选结果为基础 ,利用生物信息学技术确定S10 0A11的启动子区域 (S10 0A11 p) ,聚合酶链反应 (PCR)扩增S10 0A11 p ,克隆至真核报告载体PCAT3中 ,构建pCAT3 S10 0 p报告载体 ,以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性 ,并与pcDNA3 .1( -) HBeAg共转染HepG2细胞系 ,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果　pCAT3 S10 0 p在HepG2细胞中能够指导CAT的表达 ;共转染实验中pCAT3 S10 0 P pcDNA3 1( -) HBeAg组CAT的表达活性是pCAT3 S10 0 p组的 6 1倍。结论　我室克隆的S10 0A11启动子有顺式激活下游基因的活性 ,HBeAg具有对S10 0A11的反式激活作用。

关键词： S100 HB HepG2细胞钙结合蛋白共转染反式激活作用乙型肝炎病毒表达活性报告载体启动子

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人工饲料组成对BmNPV-Bm表达系统外源基因表达活性的影响

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蚕业科学 2003年第3期29卷 251-254页

作者：尚金燕马芳王厚伟崔为正张志芳山东农业大学林学院蚕学系泰安271018 农业部家蚕生物技术重点开放实验室

为进一步提高家蚕杆状病毒—家蚕 (BmNPV Bm)表达系统的表达活性 ,通过改变人工饲料中桑叶粉、大豆粉、玉米粉和水分的添加量 ,探讨了人工饲料的营养组成对BmNPV Bm表达系统外源植酸酶基因表达活性的影响。在大豆粉含量相同的条件下 ,... 详细信息

为进一步提高家蚕杆状病毒—家蚕 (BmNPV Bm)表达系统的表达活性 ,通过改变人工饲料中桑叶粉、大豆粉、玉米粉和水分的添加量 ,探讨了人工饲料的营养组成对BmNPV Bm表达系统外源植酸酶基因表达活性的影响。在大豆粉含量相同的条件下 ,植酸酶基因表达活性随桑叶粉含量的增加而降低 ,桑叶粉含量为 10 %时表达量最高 ;在桑叶粉含量相同的情况下 ,大豆粉含量为 35 %时表达量最高 ;饲料含水量以添加干物重的 1 9倍时表达量最高。外源基因的表达活性与蚕体重的生长表现出一致的趋势。

关键词：人工饲料营养组成家蚕 BmNPV-Bm表达系统外源基因基因表达表达活性杆状病毒表达系统植酸酶基因生物反应器

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pcDNA3.1(+)TPA构建及其在人脐静脉内皮细胞的表达活性研究

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中国医师杂志 2004年第7期6卷 874-877页

作者：赵永祥胡冬煦杨进福周新民陈勇赵迪成中南大学湘雅三医院胸心外科湖南长沙410013 中南大学湘雅二医院胸心外科中国医学遗传学国家重点实验室

目的　建立TPA基因在人脐静脉内皮细胞外源性表达的方法 ,为缺血性心脏疾病的基因治疗及防止血管再狭窄提供理论依据和新方法。方法　构建真核表达载体pcDNA3 1( +)TPA ,并采用脂质体法将其转入体外培养的人脐静脉内皮细胞 ,并观察外源... 详细信息

目的　建立TPA基因在人脐静脉内皮细胞外源性表达的方法 ,为缺血性心脏疾病的基因治疗及防止血管再狭窄提供理论依据和新方法。方法　构建真核表达载体pcDNA3 1( +)TPA ,并采用脂质体法将其转入体外培养的人脐静脉内皮细胞 ,并观察外源性TPA表达情况。结果　真核表达载体pcDNA3 1( +)TPA在人脐静脉内皮细胞中获有效表达 ,酶联免疫吸附法TPA蛋白表达定量检测结果为 5 68 6ng/10 6细胞 /2 4h ,未转pcDNA3 1( +)TPA的人脐静脉内皮细胞测得为 17 8ng/10 6细胞 /2 4h ;发色底物法测得外源性TPA活性为 10 8 8IU/10 6细胞 /2 4h ,未转pcDNA3 1( +)TPA的人脐静脉内皮细胞测得为 5 6IU/10 6细胞 /2 4h。结论　pcD NA3 1( +)TPA转入人脐静脉内皮细胞后 ,外源性TPA基因获有效表达 ,为缺血性心脏病的TPA基因治疗提供了理论依据和新方法。

关键词： pcDNA3.1(+)TPA构建脐静脉内皮细胞表达活性缺血性心脏疾病

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