检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：沈琪中国药科大学

学位级别：硕士

促黄体素（LH）是下丘脑前叶分泌的一种糖蛋白激素,也称为ICSH.在哺乳动物中,糖蛋白激素的α亚基完全相同.相反,β-亚基有不同的密码子编码并表现不同的生物活性.我们的最终目的是将LH制成核酸疫苗,使人体内产生抗LH抗体,中和内源LH的分... 详细信息

促黄体素（LH）是下丘脑前叶分泌的一种糖蛋白激素,也称为ICSH.在哺乳动物中,糖蛋白激素的α亚基完全相同.相反,β-亚基有不同的密码子编码并表现不同的生物活性.我们的最终目的是将LH制成核酸疫苗,使人体内产生抗LH抗体,中和内源LH的分泌,降低体内二氢睾酮（DHT）的水平,使前列腺增生得到抑制.实验中我们利用RT-PCR法获得了LH基因的β亚基并在大肠杆菌中利用载体克隆了大鼠的促黄体素基因β亚基,构建了pcDNA3/LH真核表达系统,利用脂质体转染在COS细胞中进行表达,已经检测到了LH的表达活性.为进一步进行动物体内实验奠定了基础,提供了体内表达的可能性.

关键词：促黄体素前列腺增生核酸疫苗真核表达表达活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

除虫菊GLIP启动子功能特性及除虫菊酯定位分析

除虫菊GLIP启动子功能特性及除虫菊酯定位分析

引用

作者：陈雨华中农业大学

学位级别：硕士

除虫菊(Tanacetum cinerarrifolium)为菊科多年生草本,可作为优良的观赏植物应用,是天然杀虫剂除虫菊酯的植物源材料,在世界多国已作为经济植物进行较大规模的栽培,但其天然除虫菊酯含量较低,产品供不应求,现代分子生物技术为提高除虫... 详细信息

除虫菊(Tanacetum cinerarrifolium)为菊科多年生草本,可作为优良的观赏植物应用,是天然杀虫剂除虫菊酯的植物源材料,在世界多国已作为经济植物进行较大规模的栽培,但其天然除虫菊酯含量较低,产品供不应求,现代分子生物技术为提高除虫菊酯产量提供了可能。目前,已经鉴定出除虫菊合成路径上的多个关键基因,但除虫菊酯酯化反应合成相关基因的表达调控和除虫菊酯的生物合成分布研究较少。除虫菊GLIP(GDSL lipase-like protein)基因,属于GDSL脂肪酶蛋白家族,是除虫菊酯合成路径最后一步的关键酶,催化菊酰辅酶A和除虫菊酮醇反应形成除虫菊酯,但该反应的发生部位尚不明确。本研究主要通过除虫菊不同生长发育时期GLIP基因的组织表达差异和GLIP基因启动子全长及缺失片段的功能研究,探明除虫菊GLIP基因的表达调控模式及其启动子组织定位和功能活性,为揭示除虫菊酯的合成和转运提供理论依据。在转化模式植物烟草的同时,尝试将GLIP启动子融合GFP表达载体转化除虫菊,在转化过程中,通过改变外植体材料和转化条件等,优化除虫菊的遗传转化体系。本研究的主要结果如下:1.除虫菊GLIP基因时空表达差异分析除虫菊不同生长发育时期的GLIP基因表达差异表明,除虫菊GLIP基因在营养生长期和开花期不同组织部位表达差异较大。GLIP基因在根中基本不表达,生长期茎段表达水平大于叶片,开花期表达水平从高到低依次是花序、花梗、叶片、茎段,这与除虫菊酯在干花花头中含量最高相一致。***启动子的组织表达特异性及功能分析将除虫菊GLIP启动子融合GUS表达载体转化早花烟草,GUS染色结果表明GLIP启动子在T0代及T1代早花烟草的茎段、叶柄、叶脉等维管组织特异表达。同时,通过干旱胁迫处理转基因烟草植株,6h后启动子活性显著提高,表明干旱胁迫能诱导GLIP启动子的表达。***启动子核心区域鉴定构建GLIP启动子5’端缺失片段GUS融合表达载体并转化烟草,GUS染色结果表明,长片段GLIP-1822启动子染色程度最深,染色率最高,约66.7%,在叶脉和茎段等部位均有明显蓝色反应。其他片段染色率低,且染色程度较浅。不同长度的启动子片段GUS酶活性差异显著,507bp片段GUS酶活性显著降低。4.除虫菊花器官萜类及酯类化合物组织化学染色对除虫菊不同花期的花器官分别通过NADI和苏丹III进行组织化学染色,结果表明花托、舌状花、管状花等部位都有明显的蓝色油状物质,初步鉴定为萜类化合物。苏丹III染色结果表明,在子房的胚和种皮之间有明显的黄色油状物质,初步推测其为除虫菊酯类物质。在子房发育不同时期,其油状物质的含量和分布也发生相应变化,从子房表皮组织逐渐过渡到种皮与胚间隙。

关键词：除虫菊酯 GLIP基因启动子表达活性组织定位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

阿特拉津氯水解酶基因的同源性分析和在大肠杆菌中的表达

阿特拉津氯水解酶基因的同源性分析和在大肠杆菌中的表达

引用

作者：任毅南开大学

学位级别：硕士

该文以该实验室从河北宣化农药厂的工业废水中分离的高效降解阿特拉津的土壤杆菌(Agrobacterium sp.)AD4菌株总DNA为模板,以假单胞菌ADP的atzA为参考序列设计PCR引物,通过PCR扩增,得到atzA基因中心区片段,并克隆测序,得知此片段长528bp... 详细信息

该文以该实验室从河北宣化农药厂的工业废水中分离的高效降解阿特拉津的土壤杆菌(Agrobacterium sp.)AD4菌株总DNA为模板,以假单胞菌ADP的atzA为参考序列设计PCR引物,通过PCR扩增,得到atzA基因中心区片段,并克隆测序,得知此片段长528bp,在对AD1菌株,ADP菌株和AD4菌株的atzA基因同源性比较中,发现其基因片段与其它两个同源基因有3个碱基不同,37(G->A),330(A->G),187(G->T),同源性为99﹪.经DNAstar软件分析其读码框架,有一个氨基酸不同,ADP菌株和AD1菌株的第177个密码子是CAA,编码谷氨酰胺,AD4菌株PCR片段的第110个密码子是CGA,编码精氨酸.认为不同降解菌株之间,atzA基因同源性较高.该文以PCR反应扩增的atzA基因片段作为探针,与其它阿特拉津降解菌株杂交,认为很多阿特拉津降解菌株的atzA基因都是同源的.但AD2菌株没有阳性结果,认为其降解阿特拉津的基因与atzA不同,而且该文将AD1菌株的atzA基因定位于染色体上.该文以该实验室克隆制得的AD1菌株阿特拉津氮水解酶基因为材料,克隆至pGEM<'k>-T载体,转化至大肠杆菌DH5α中表达,并检测其降解阿特拉津的能力,通过阿特拉津平板降解情况,酶液与阿特拉津溶液温育后,OD<,220>值的变化,表明此工程菌能够降解阿特拉津,有表达活性.

关键词：假单胞菌AD1菌株土壤杆菌AD1菌株阿特拉津氯水解酶基因 pGEM-T载体 PCR反应大肠杆菌表达活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

金属离子对NAOase表达影响及作用机制的研究

金属离子对NAOase表达影响及作用机制的研究

引用

作者：吴圆丽南京工业大学

学位级别：硕士

N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶(N-acetylornithinedeacetylase，简称NAOase;EC3.5.1.16)是一种具有广泛底物特异性的新型手性拆分酶源，在医药、农林等领域都有应用。NAOase是一种金属酶，酶活性依赖于Mg2+、Mn2+、Zn2+及Co2+中的某种金属离子... 详细信息

N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶(N-acetylornithinedeacetylase，简称NAOase;EC3.5.1.16)是一种具有广泛底物特异性的新型手性拆分酶源，在医药、农林等领域都有应用。NAOase是一种金属酶，酶活性依赖于Mg2+、Mn2+、Zn2+及Co2+中的某种金属离子，至今未见该酶构象及相应的构效关系的研究报道。本文以高表达NAOase的重组DH10B/argE-pHsh为研究对象，系统研究了四种金属离子在不同表达条件及不同催化体系中对酶活性的影响，并综合运用HPLC、HPCE、ICP等法对酶中金属离子含量及其活性进行分析，推导出Mn2+而非文献报道的Zn2+为N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶活性中心的重要组成部分，Co2+是酶的激活剂。\n 以高表达NAOase的重组DH10B/argE-pHsh为研究对象，考察了不同培养条件下Mg2+、Mn2+、Zn2+及Co2+四种离子对重组菌的生长、酶的表达活性及蛋白表达量的影响。结果同种离子在不同条件下对重组菌的生长影响不大，但对酶活性影响显著。四种离子在合适浓度时皆能提高酶活性，促进强度从高到低依次为Mn2+，Mg2+，Co2+和Zn2+。在TB培养基中，Mn2+为15mmol·L-1时酶活性达到1272.7U/mL，是未添加时的4.67倍，激活作用显著高于其它离子。SDS-PAGE电泳实验表明四种离子的蛋白表达量基本相同。酶表达结果表明Mn2+可能是N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶活性中心的重要组成部分，而非Co2+或者Zn2+。\n 通过硫酸铵分级沉淀及SOURCE30阴离子交换层析进行目的蛋白纯化，以达到SDS-PAGE电泳纯85％的酶为研究对象，系统研究了四种金属离子对不同条件下表达的酶的催化活性的影响。结果表明:在反应体系中添加Co2+对不同来源的酶活性皆呈现出钟罩型趋势，峰值用量皆为40μmol/L。富足Mn2+与Co2+表达条件下的酶活性明显高于其它条件下的酶活，其中Mn2+源酶的峰值活力达到3863.4U/mL，为对照组的2.77倍。反应体系中添加Mn2+、Zn2+、Mg2+对不同来源的酶皆呈现不同程度的抑制作用。\n 以EDTA络合及透析去络合法制备脱辅酶和重构全酶，比较脱辅酶、自然酶和与金属离子重新结合后的重构全酶的活力变化，结果脱辅酶检测不出活性，金属离子对重构酶的活力影响和自然酶相似，Mn2+重构酶活性可达自然酶的69.87％以上，Co2+对Mn2+重构酶同样有激活效果，其它离子呈不同的抑制作用。\n 分析培养基中氨基酸及金属离子对酶表达活性的影响。以HPCE分析发酵液中金属离子含量的变化，结果在酶蛋白表达前的菌体发酵阶段，各离子皆已被菌体吸收完毕。通过柱前衍生高效液相色谱法分析有无Mn2+时培养基中的氨基酸变化情况，发现添加Mn2+后菌体对Asp的利用显著增强，而其它氨基酸消耗趋势基本相似。根据Asp消耗量在培养体系中外加Asp，结果重组菌的生物量及酶活性仅稍有增加。推测酶表达过程中被消耗的Mn2+和Asp共同参与了酶活性中心的形成。\n 通过微量电泳法分别纯化得到了SDS-PAGE电泳纯的原酶（表达时不外加金属离子），锰源酶及EDTA络合后的脱辅酶，并以ICP分析各种纯酶内的金属离子含量，结果Mn2+在Mn2+源酶中的含量最高，达到1.031mg/L，而Zn2+含量仅为0.032mg/L，Co2+含量为0.018mg/L。在不添加任何离子的原酶中，Mn2+含量为0.638mg/L，Zn2+和Co2+含量皆低于0.02mg/L。脱辅酶中，三种离子皆检测不出。\n 综合考虑酶表达、酶催化及酶分子中的离子含量等数据，Mn2+参与酶的活性中心的组成，为NAOase的辅基，酶表达时需要外加Mn2+;Co2+在催化反应时起协同激活作用，为该酶的激活剂，酶催化时外加Co2+能显著提高酶活;Mn2+、Zn2+、Mg2+为NAOase的抑制剂，反应体系中外加这些离子抑制酶活力。

关键词： N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶金属离子表达活性催化体系

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

玉米幼嫩叶片中特异表达基因Zmglp1的表达分析和启动子缺失突变研究

玉米幼嫩叶片中特异表达基因Zmglp1的表达分析和启动子缺失突变研...

引用

作者：韩翠丽山东师范大学

学位级别：硕士

Zmglpl是从玉米中克隆得到的一个基因，该基因在玉米幼嫩叶片中特异表达。本文首次分析该基因的表达，研究启动于的缺失突变，以期了解其表达活性，掌握表达规律，用来驱动抗虫基因在玉米中稳定表达，减少国家因虫害造成的损失，提高玉... 详细信息

Zmglpl是从玉米中克隆得到的一个基因，该基因在玉米幼嫩叶片中特异表达。本文首次分析该基因的表达，研究启动于的缺失突变，以期了解其表达活性，掌握表达规律，用来驱动抗虫基因在玉米中稳定表达，减少国家因虫害造成的损失，提高玉米的产量。启动子缺失突变研究表明Zmglpl基因在双子叶植物拟南芥中的表达存在周期节律，不同的缺失片段驱动下的周期节律也不相同。组织特异性分析证明了—70nt——98nt序列中含有调控基因在拟南芥绿色组织及花丝中表达的必要元件，△1215序列中—171nt——70nt片段则为基因在根中表达的必要条件。启动子缺失片段—70——171nt和—359——749nt可能含有增强基因表达活性的顺式调控元件，而它们的上游序列—171——359nt和—749——1255nt能够抑制这些元件的功能，或者—70nt——98nt和—171——359nt区段含有降低基因表达活性的顺式调控元件，而它们的上游序列—70——171nt和—359——749nt能够抑制这些元件的负调控作用。 △637在拟南芥大部分发育时期都有很高的表达活性；在16 h／8 h光照／黑暗周期条件下，平均活性约为35S CaMV启动子的3倍。因此，玉米Zmglpl基因启动子的△637片段在今后改良作物或蔬菜品质及提高抗虫性的基因工程育种研究中，有潜在的应用价值。以上结果为进一步研究调控高等生物基因的组织特异表达和周期节律提供了初步的线索，也为玉米抗螟基因工程提供了一个高效率的启动子。

关键词：玉米玉米螟汤叮助基因表达活性缺失突变

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Livin与Caspase-3在喉癌及癌旁组织中的表达特征及临床意义

引用

中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2012年第3期20卷 161-166页

作者：李树华张涛源山西医科大学第一临床医院耳鼻咽喉头颈外科山西太原030001

目的比较研究喉癌、癌旁及正常组织中Livin与Caspase-3的表达活性及其与临床病理学特征的关系。方法 46例喉癌患者,采用SP免疫组化法及RT-PCR技术分别检测其癌组织、癌旁组织和正常组织中Livin与Caspase-3的表达活性,分析检测结果与患... 详细信息

目的比较研究喉癌、癌旁及正常组织中Livin与Caspase-3的表达活性及其与临床病理学特征的关系。方法 46例喉癌患者,采用SP免疫组化法及RT-PCR技术分别检测其癌组织、癌旁组织和正常组织中Livin与Caspase-3的表达活性,分析检测结果与患者临床病理学特征的相关性。结果无论是在基因表达还是蛋白质活性水平,喉癌组织Livin的表达活性明显高于癌旁组织和正常组织(P<0.01),而癌旁、正常组织Caspase-3的表达活性却明显高于喉癌组织(P<0.01)。两指标的表达水平均与肿瘤临床分期、有无淋巴结转移及其病理分型有显著相关性(P<0.05),而且喉癌组织Livin与Caspase-3的表达水平呈现负相关(P<0.01)。结论 Livin与Caspase-3的表达活性特征可能在喉癌的发生、发展过程中发挥重要作用。

关键词： Livin Caspase-3 喉癌表达活性比较研究

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

rd29A启动子克隆及对低温响应的研究

引用

甘肃农业大学学报 2004年第3期39卷 249-254页

作者：白斌张金文郭志鸿陈正华甘肃省作物改良与种质创新重点实验室甘肃亚盛集团博士后科研工作站甘肃兰州730035

研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA克隆了rd29A基因启动子,序列分析表明该启动子具有两个干旱、高盐和低温响应顺式作用元件(DRE),在851～856 bp碱基处为TATA box,其它主要调控区域也存在。然后,分别用rd29A启动子和CaMV 35... 详细信息

研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA克隆了rd29A基因启动子,序列分析表明该启动子具有两个干旱、高盐和低温响应顺式作用元件(DRE),在851～856 bp碱基处为TATA box,其它主要调控区域也存在。然后,分别用rd29A启动子和CaMV 35S启动子,构建了具有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pBIG和pBIRG。通过基因枪导入法转化洋葱表皮细胞,在25 ℃和4 ℃条件下培养16 h后,用荧光显微镜观察GFP基因的表达水平。结果表明,在低温条件下,rd29A启动子的活性明显高于CaMV 35S启动子,说明rd29A启动子是一低温诱导型启动子,可满足在低温条件下使目的基因在转基因植物中进行表达的目的。

关键词： rd29A启动子绿色荧光蛋白基因基因枪法低温诱导表达活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鼻咽癌及癌前病变基因组稳定与修复基因表达

引用

中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2010年第1期18卷 8-13页

作者：周小军王士贞田道法阮岩邱宝珊刘蓬卢标清孔祥廉广州中医药大学附属中山市中医院耳鼻咽喉科 528400 广州中医药大学第一临床医学院湖南中医药大学

目的研究鼻咽癌及鼻咽癌前病变患者鼻咽组织标本基因组稳定与修复基因的表达活性特征。方法在鼻咽癌高发区中山市,筛选鼻咽炎、鼻咽癌前病变及鼻咽癌患者作为研究对象,获取鼻咽黏膜组织,应用基因组稳定和修复功能分类基因芯片(128个基因... 详细信息

目的研究鼻咽癌及鼻咽癌前病变患者鼻咽组织标本基因组稳定与修复基因的表达活性特征。方法在鼻咽癌高发区中山市,筛选鼻咽炎、鼻咽癌前病变及鼻咽癌患者作为研究对象,获取鼻咽黏膜组织,应用基因组稳定和修复功能分类基因芯片(128个基因)检测相关基因表达活性,以2倍活性表达差异为比较评判标准,并以实时荧光定量PCR技术对相关基因表达活性水平进行验证。结果相比于鼻咽炎组,鼻咽癌前病变组织表达活性上调基因有22个,活性下调基因20个;鼻咽癌组织表达活性上调基因20个,活性下调基因18个。相比于鼻咽癌前病变者,鼻咽癌组织表达活性上调基因有24个,下调基因24个。乳腺癌易感基因2、Ku70结合蛋白3基因在鼻咽癌前病变及鼻咽癌组织依序呈现高表达;鼻咽癌组织表达明显下调的基因有碱基切除基因OGG1及错配修复基因MSH4、MLH3,表达明显上调的基因有RAD18;鼻咽癌前病变组织表达明显下调的基因为RAD18和泛素类基因UBE2B。结论鼻咽癌及鼻咽癌前病变患者靶器官鼻咽黏膜的基因组稳定与修复基因表达活性存在特征性表现模式。

关键词：鼻咽癌鼻咽癌前病变基因组稳定性 DNA修复基因表达活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

缺氧诱导因子-1α与Survivin在喉鳞癌中的表达及其意义

引用

中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2014年第4期22卷 241-244页

作者：陈歆维李大伟谢晋董频谢芳上海交通大学附属第一人民医院耳鼻喉头颈外科上海200080 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉头颈外科

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和Survivin表达活性与喉鳞癌浸润及转移行为的关系。方法 86例喉鳞癌及32例正常喉黏膜上皮组织标本,应用免疫组化染色技术检测HIF1α和Survivin表达活性,分析其与患者临床病理特征的关系。结果喉鳞癌... 详细信息

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和Survivin表达活性与喉鳞癌浸润及转移行为的关系。方法 86例喉鳞癌及32例正常喉黏膜上皮组织标本,应用免疫组化染色技术检测HIF1α和Survivin表达活性,分析其与患者临床病理特征的关系。结果喉鳞癌组织中,HIF1α与Survivin阳性表达率均明显高于正常喉黏膜上皮组织(P<0.05),且其阳性表达率与肿瘤临床分期、淋巴结转移明显关(P<0.05),而Survivin阳性表达率更与肿瘤病理分级显著相关(P<0.05)。HIF1α和Survivin表达水平呈正相关(r=0.456,P<0.05)。结论喉鳞癌组织HIF-1α活性升高,可能通过诱导Survivin高表达而对喉鳞癌细胞的侵袭、转移生物学行为发挥促进作用。

关键词：喉鳞状细胞癌缺氧诱导因子-1 表达活性临床意义

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对喉癌细胞中MGMT基因表达水平的影响

引用

中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2009年第2期17卷 71-73页

作者：杨静何丽霞宋岩孙欣王铁季文樾中国医科大学附属盛京医院耳鼻咽喉科 110004 辽宁省抚顺第二医院耳鼻咽喉科

目的探讨5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza—dC）对喉癌细胞系抑癌基因MGMT表达活性的影响。方法体外培养Hep-2喉癌细胞，以不同药物浓度的5-aza—dC进行干预处理，应用逆转录PCR方法检测药物干预前后MGMT的表达活性，比较分析不同药物浓度... 详细信息

目的探讨5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza—dC）对喉癌细胞系抑癌基因MGMT表达活性的影响。方法体外培养Hep-2喉癌细胞，以不同药物浓度的5-aza—dC进行干预处理，应用逆转录PCR方法检测药物干预前后MGMT的表达活性，比较分析不同药物浓度的干预效应。结果Hep-2喉癌细胞系经不同药物浓度的5-aza—dC作用后，能够诱导靶细胞中受抑制而处于不表达状态的抑癌基因MGMT重新恢复表达活性，尤以7μmol／L浓度时效应明显。结论MGMT基因启动子甲基化可能是导致该基因失活的主要原因，5-aza—dCN能显著增强Hep-2喉癌细胞肿瘤抑制基因的表达活性。

关键词：喉癌抑癌基因表达活性诱导表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：