检索结果-内蒙古大学图书馆

中国水产学会鱼病学专业委员会2011年学术讨论会

作者：张荣芳董捷杨春荣苏建国西北农林科技大学动物科技学院水产科学系陕西杨凌712100

在应用实时荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)技术检测基因表达的过程中，通常要选择合适的内参基因对目的基因的表达进行校正分析，从而提高qRT-PCR结果的准确性和可靠性。本研究通过对β-actin、18S rRNA、GAPDH、EF1α四种常用内参基因在草... 详细信息

在应用实时荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)技术检测基因表达的过程中，通常要选择合适的内参基因对目的基因的表达进行校正分析，从而提高qRT-PCR结果的准确性和可靠性。本研究通过对β-actin、18S rRNA、GAPDH、EF1α四种常用内参基因在草鱼不同组织间的差异表达、病毒感染条件下的时序表达、草鱼肾细胞GCRV感染和poly(I∶C)刺激条件下的时序表达中的稳定性评价，为研究目的基因在相同或相似实验条件下的表达提供合适的内参。

关键词：草鱼内参基因表达稳定性

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柠条锦鸡儿肌动蛋白基因的克隆和表达稳定性分析

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植物生理学通讯 2009年第8期45卷 765-770页

作者：王学敏王美珍王赞高洪文中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

以几种豆科植物中肌动蛋白的氨基酸保守序列设计简并引物,采用RT-PCR结合RACE扩增技术,从柠条锦鸡儿叶片中克隆到一个编码肌动蛋白的基因,命名为CkACT。该基因cDNA全长为1655bp,开放阅读框1134bp,编码377个氨基酸。氨基酸比对分析表明,... 详细信息

以几种豆科植物中肌动蛋白的氨基酸保守序列设计简并引物,采用RT-PCR结合RACE扩增技术,从柠条锦鸡儿叶片中克隆到一个编码肌动蛋白的基因,命名为CkACT。该基因cDNA全长为1655bp,开放阅读框1134bp,编码377个氨基酸。氨基酸比对分析表明,该基因编码的氨基酸与其他植物肌动蛋白基因具有较高的同源性。不同组织中的表达基本上一致,不同发育时期的基因表达相似,低温、NaCl、干旱和ABA处理后的表达强度没有明显差异,说明CkACT基因表达稳定。

关键词：肌动蛋白柠条锦鸡儿克隆表达稳定性

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刺五加肌动蛋白基因的克隆和表达稳定性分析

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中草药 2013年第13期44卷 1819-1822页

作者：邢朝斌龙月红修乐山柴丽花周秘河北联合大学生命科学学院河北唐山063000

目的克隆刺五加Eleutherococcus senticosus的肌动蛋白(actin,ACT)基因并使其成为可用的内参基因。方法运用RT-PCR法克隆ACT基因的部分序列,并以其为内参基因进行半定量PCR和real-time PCR分析。结果克隆了长度为1 031bp的刺五加ACT基因... 详细信息

目的克隆刺五加Eleutherococcus senticosus的肌动蛋白(actin,ACT)基因并使其成为可用的内参基因。方法运用RT-PCR法克隆ACT基因的部分序列,并以其为内参基因进行半定量PCR和real-time PCR分析。结果克隆了长度为1 031bp的刺五加ACT基因,推测其编码343个氨基酸,与光皮桦Betula luminifera、陆地棉Gossypium hirsutum、茶树Camellia sinensis的ACT氨基酸序列同源性分别为99.42%、98.83%、98.54%。刺五加ACT基因在不同器官和不同生长发育时期的表达量基本恒定,以其为内参基因的半定量PCR和real-time PCR均具有良好的扩增效果和重现性。结论首次分离并报道了刺五加ACT的cDNA克隆,证实该序列可以作为基因表达分析的内参基因,建立了其real-time PCR反应体系。

关键词：刺五加肌动蛋白基因实时定量PCR 表达稳定性 cDNA克隆

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山羊不同组织及不同发育时期骨骼肌内参基因的表达稳定性分析

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畜牧兽医学报 2014年第8期45卷 1228-1236页

作者：陈利赵薇占思远李丹李利仲涛王林杰张红平四川农业大学动物科技学院动物遗传育种研究所雅安625014

为筛选出山羊不同组织、不同时期骨骼肌及骨骼肌卫星细胞(Skeletal muscle satellite cells,SMSCs)中稳定表达的内参基因,以出生后3日龄的山羊不同组织(心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠、背最长肌、臂三头肌和半膜肌)和不同时期(3... 详细信息

为筛选出山羊不同组织、不同时期骨骼肌及骨骼肌卫星细胞(Skeletal muscle satellite cells,SMSCs)中稳定表达的内参基因,以出生后3日龄的山羊不同组织(心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠、背最长肌、臂三头肌和半膜肌)和不同时期(3、30、60、90和120 d)的3种骨骼肌(背最长肌、臂三头肌和半膜肌)以及培养至不同阶段(1、3、4和7 d)的山羊SMSCs为研究对象,运用qRT-PCR技术及geNorm分析软件,探索9个内参基因(ACTIN、GAP—DH、TOP2β、YWHAZ、SDHA、PGK1、RP2、RPL4和HPRT1)mRNA的表达稳定性。结果表明,在同一时期的11个组织中,内参基因表达稳定度的排序:HPRT1>RP2>TOP2β>SDHA>GAPDH>ACTIN>YWHAZ>PGK1>RPL4,需要2个内参基因(HPRT1和RP2)共同校正目的基因的表达;在不同发育时期的骨骼肌中,各内参的稳定度:YWHAZ>ACTIN>HPRT1>RPL4>TOP2β>SDHA>PGK1>GAPDH>RP2,需引入3个内参(YWHAZ、ACTIN和HPRT1)才能准确地校正定量结果;在SMSCs中各内参表达的稳定度排序:PGK1>SDHA>ACTIN>RPL4>GAPDH>TOP2β>YWHAZ>RP2>HPRT1,需要3个合适的内参(PGK1、SDHA和ACTIN)作为标准化指标校正定量数据。本试验分别筛选出了能在山羊同一时期不同组织、不同发育时期的骨骼肌及SMSCs中稳定表达的内参基因及需要引入的内参数目,有利于更加准确地校正基因mRNA水平的表达量,为更好地研究基因功能奠定了基础。

关键词：山羊荧光定量PCR 内参基因表达稳定性

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梨果实细胞分裂期内参基因表达稳定性分析

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经济林研究 2020年第1期38卷 66-74页

作者：蒲小秋田嘉李疆张艳李鹏覃伟铭井春芝新疆农业大学林学与园艺学院新疆乌鲁木齐830052 新疆维吾尔自治区巴音郭楞蒙古自治州沙依东园艺场新疆库尔勒841000 新疆维吾尔自治区巴音郭楞蒙古自治州林业科学技术推广中心新疆库尔勒841000

【目的】果实细胞分裂期是果实品质调控的关键时期,qRT-PCR技术在果实品质研究中发挥着重要作用,qRT-PCR技术中内参基因的选择关系到检测结果的准确性。为了筛选出适合分析梨果实细胞分裂期基因表达水平的内参基因。【方法】分别以杜梨... 详细信息

【目的】果实细胞分裂期是果实品质调控的关键时期,qRT-PCR技术在果实品质研究中发挥着重要作用,qRT-PCR技术中内参基因的选择关系到检测结果的准确性。为了筛选出适合分析梨果实细胞分裂期基因表达水平的内参基因。【方法】分别以杜梨、香梨和鸭梨梨花露红期、盛花期的花托和授粉后10、20、30、40 d的梨果肉为研究材料,应用qRT-PCR技术,对TUB2、TUB1、TUB3、Actin1、Actin2、UBI、EF1α和GAPDH这8个内参基因在不同梨品种果实细胞分裂期的表达情况进行了分析,利用geNorm和NormFinder对候选内参基因的稳定性进行了分析评价;以FWL1为目标基因,验证了候选基因在同一花期不同梨品种之间表达的稳定性。【结果】Actin1在花期花托中的表达稳定性最高,TUB2在果期的表达稳定性最高,TUB2在总样本中的表达稳定性最高。以FWL1为目的基因对表达稳定性不同的TUB2、Actin1、Actin2和TUB1这4个候选基因的验证结果表明,以TUB2、Actin1和Actin2为内参基因时,FWL1在同一时期不同梨品种之间的表达模式基本一致,使用TUB1作为内参基因得到的FWL1在杜梨、香梨和鸭梨中的表达模式与应用TUB2作为内参基因时的表达模式完全不一致。【结论】Actin1是研究梨花期花托基因表达分析的首选内参基因;TUB2是研究果期果肉基因表达分析的首选内参基因,也是梨果实细胞分裂期基因表达分析的首选内参基因。

关键词：梨内参基因实时荧光定量PCR分析表达稳定性

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南美蟛蜞菊WtActin1基因克隆及表达稳定性分析

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南方农业学报 2020年第11期51卷 2626-2635页

作者：李红春肖雨沙王小兰宋莉英广州大学生命科学学院广州510006

【目的】克隆南美蟛蜞菊肌动蛋白基因(WtActin1),并进行生物信息学及表达稳定性分析,为南美蟛蜞菊耐热耐冷功能基因表达及调控研究提供可靠的内参基因。【方法】RACE克隆WtActin1基因,通过在线生物信息学分析软件对其氨基酸序列进行分析... 详细信息

【目的】克隆南美蟛蜞菊肌动蛋白基因(WtActin1),并进行生物信息学及表达稳定性分析,为南美蟛蜞菊耐热耐冷功能基因表达及调控研究提供可靠的内参基因。【方法】RACE克隆WtActin1基因,通过在线生物信息学分析软件对其氨基酸序列进行分析,并利用实时荧光定量PCR检测该基因在不同组织及温度胁迫下的表达情况。【结果】克隆获得的WtActin1基因cDNA全长1682 bp(GenBank登录号MN485900),其中5'非编码区(5'-UTR)170 bp,3'非编码区(3'-UTR)378 bp,开放阅读框(ORF)1134 bp,编码377个氨基酸残基。WtActin1蛋白分子量为41725.81 Da,理论等电点(pI)为5.31,不稳定性指数(II)为37.48,亲水性的平均值(GRAVY)为-0.166,为稳定的亲水性蛋白,无跨膜结构域和无信号肽,主要存在于细胞质中,具有Actin蛋白家族的典型特征结构,其二级结构主要由α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲组成,三级结构同源模型为嵌合肌动(3ci5.1.A),与莴苣、橡胶草和洋蓟的同源蛋白三级结构高度相似。WtActin1基因与其他植物Actin基因核苷酸序列相似性在86.4%以上,其推导氨基酸序列相似性在94.0%以上。从基于Actin氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树可看出,WtActin1与同为菊科的莴苣LsActin7亲缘关系最近,与传统分类学相吻合,其次是菊科的橡胶草TkActin1和锦葵科的棉花GhActin。WtActin1基因在南美蟛蜞菊根、茎、叶和花中的表达量均无显著差异(P>0.05,下同),且在高、低温胁迫下与正常温度处理的表达量也均无显著差异。【结论】WtAtin1基因属于Actin基因家族成员,在不同组织及温度胁迫下均能稳定表达,可作为内参基因用于南美蟛蜞菊耐热耐冷功能基因研究。

关键词：南美蟛蜞菊肌动蛋白基因(Actin) 内参基因基因克隆表达稳定性温度胁迫

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甜菜夜蛾U6 snRNA的克隆及其表达稳定性分析

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江苏农业科学 2022年第17期50卷 53-58页

作者：刘志成张钧博方正吴庆珊翁庆北贵州师范大学生命科学学院贵州贵阳550001 黔南民族师范学院贵州都匀558000

U6 snRNA是真核生物主要剪接体的重要组分,在不同物种中保守且表达水平稳定。为评估甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)U6 snRNA是否适合作为miRNA(microRNA)定量表达检测内参基因,本研究通过克隆甜菜夜蛾U6 snRNA全长序列,分析其进化保守性... 详细信息

U6 snRNA是真核生物主要剪接体的重要组分,在不同物种中保守且表达水平稳定。为评估甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)U6 snRNA是否适合作为miRNA(microRNA)定量表达检测内参基因,本研究通过克隆甜菜夜蛾U6 snRNA全长序列,分析其进化保守性及与其他物种U6 snRNA的系统进化关系,并进一步探究除虫菊提取物、高温培养和甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)感染胁迫下U6 snRNA的表达稳定性。结果表明,克隆的甜菜夜蛾U6 snRNA全长107 nt。多序列比对和系统进化分析表明,不同物种U6 snRNA具较高保守性,甜菜夜蛾U6 snRNA与其他鳞翅目昆虫的系统进化关系最近。利用终浓度为LC_(50)的除虫菊提取物或36℃高温培养胁迫处理Se301细胞,以及SeMNPV感染甜菜夜蛾幼虫(72 h),U6 snRNA均表达稳定。研究结果可为甜菜夜蛾miRNA表达检测内参基因的选择提供依据。

关键词：甜菜夜蛾 U6 snRNA 克隆表达稳定性小RNA 内参基因

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基于高通量测序的梨果实常用内参基因表达稳定性分析

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分子植物育种 2019年第3期17卷 746-753页

作者：王月志戴美松蔡丹英施泽彬浙江省农业科学院园艺研究所杭州310021

合适的内参基因对基因表达分析结果准确性至关重要。通过同源搜索在梨中获取了102个常用内参基因同源基因,其中的89个基因以基因家族形式存在。高通量数据分析揭示,各基因在不同发育时段或家族成员间均检测到不同水平的表达水平差异和... 详细信息

合适的内参基因对基因表达分析结果准确性至关重要。通过同源搜索在梨中获取了102个常用内参基因同源基因,其中的89个基因以基因家族形式存在。高通量数据分析揭示,各基因在不同发育时段或家族成员间均检测到不同水平的表达水平差异和表达稳定性差异。而相同基因在不同材料间的表达水平相对保守。这些基因在不同发育时段梨果实中的表达存在明显分化而聚成不同类型,部分基因在不同材料间表现出所有发育时段或部分发育时段表达变化趋势的保守性。本研究全面收集了相关内参基因家族成员,又有效区分出不同成员的表达特征,结果清晰、直观,为梨果实内参基因选择提供了可靠的实验依据。

关键词：内参基因基因家族表达稳定性高通量测序梨

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防龋用转基因番茄外源蛋白表达稳定性研究

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临床医学进展 2018年第6期8卷 529-539页

作者：邹怡然韩琪白朋元管晓燕白国辉田源陈筑程磊刘建国四川大学口腔疾病国家重点实验室四川成都遵义医学院贵州遵义贵州省普通高等学校口腔疾病研究特色重点实验室暨遵义市口腔疾病研究重点实验室贵州遵义遵义医学院附属贵阳口腔医院贵州贵阳

目的:追踪检测转基因防龋可食番茄中外源蛋白的表达稳定性。方法:田间种植含有编码变异链球菌表面蛋白粘附功能A区(Cell surface protein antigen A, PAcA)、表面蛋白免疫活性P区(Cell surface pro-tein antigen P, PAcP)的外源基因pacA... 详细信息

目的:追踪检测转基因防龋可食番茄中外源蛋白的表达稳定性。方法:田间种植含有编码变异链球菌表面蛋白粘附功能A区(Cell surface protein antigen A, PAcA)、表面蛋白免疫活性P区(Cell surface pro-tein antigen P, PAcP)的外源基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄种子,获得连续的四代番茄植株F0,F1,F2,F3。在植株的开花坐果期,每七天提取样本,通过生物分子技术检测外源蛋白的表达。结果:1) 四代转基因番茄中含嵌合基因pacA-ctxB的植株中有31株表达外源蛋白;含pacP-ctxB的植株中有28株表达。2) 果实中外源蛋白PAcA/CTB占总蛋白的含量是:F0代0.248%,F1代0.088%,F2代0.103%,F3代0.078%;PAcP/CTB的含量是:F0代0.308%,F1代0.300%,F2代0.278%,F3代0.176%。3) 在开花坐果期的第6~8周,果实中外源蛋白PAcA/CTB含量分别为0.236%,0.276%,0.257%;PAcP/CTB为0.568%,0.600%,0.554%。结论:防龋疫苗中外源蛋白能够较稳定地表达,表达含量较高;PAcP/CTB的表达阳性率及含量均较PAcA/CTB高;外源蛋白在果实中的表达较叶片高;外源蛋白在坐果期的6~8周的表达最高;同株的不同果实同期表达含量及比重有差异。

关键词：变异链球菌表面蛋白唾液黏附区转基因番茄表达稳定性防龋疫苗

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外源基因Egfp在转基因小鼠中的遗传和表达稳定性研究

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青岛农业大学学报（自然科学版） 2013年第3期30卷 157-161,173页

作者：周扬张滕潘庆杰青岛农业大学动物生殖发育与基因工程研究所山东青岛266109

本实验随机抽取不同窝的纯合绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠子代进行检测,分别取其尾部组织,提取DNA,质量检测,PCR扩增。经研究发现所有样本在PCR扩增中显示目的条带,对其进行切胶回收纯化,连接转化及克隆测序。测序结果100%匹配且测序... 详细信息

本实验随机抽取不同窝的纯合绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠子代进行检测,分别取其尾部组织,提取DNA,质量检测,PCR扩增。经研究发现所有样本在PCR扩增中显示目的条带,对其进行切胶回收纯化,连接转化及克隆测序。测序结果100%匹配且测序峰图的趋势正常。随后对这些转基因小鼠尾组织样本进行定量实验,检测其外源基因Egfp的表达情况,结果发现有一部分小鼠的mRNA表达水平较低。得出的结论是外源基因Egfp稳定地遗传给了后代但在部分后代个体中不能稳定有效表达。本研究通过对外源基因Egfp遗传和表达稳定性的检测,为通过转基因技术培育家畜新品种的研究提供了坚实的理论基础。

关键词：转基因小鼠外源基因 EGFP 遗传稳定性表达稳定性

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