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植物分子生物学与现代农业——2010全国植物生物学研讨会

作者：王学敏高洪文中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

actin基因即肌动蛋白基因,普遍存在于维管植物细胞中,在真核细胞进化过程中高度保守,各种生物肌动蛋白的氨基酸序列同源性高达70%～100%。在高等植物体内肌动蛋白具有重要的功能,主要参与细胞质流动、细胞器运动、顶端生长、植物细胞形... 详细信息

actin基因即肌动蛋白基因,普遍存在于维管植物细胞中,在真核细胞进化过程中高度保守,各种生物肌动蛋白的氨基酸序列同源性高达70%～100%。在高等植物体内肌动蛋白具有重要的功能,主要参与细胞质流动、细胞器运动、顶端生长、植物细胞形状控制、植物细胞的有丝分裂、植物对重力的感应性和叶绿体运动等

关键词：东方山羊豆 actin 表达稳定性

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东方山羊豆actin基因的分离和表达稳定性分析

东方山羊豆actin基因的分离和表达稳定性分析

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2010全国植物生物学研讨会

作者：王学敏高洪文中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

actin基因即肌动蛋白基因,普遍存在于维管植物细胞中,在真核细胞进化过程中高度保守,各种生物肌动蛋白的氨基酸序列同源性高达70%~100%。在高等植物体内肌动蛋白具有重要的功能,主要参与细胞质流动、细胞器运动、顶端生长、

关键词：东方山羊豆 actin 表达稳定性

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芍药切花内参基因筛选及乙烯生物合成关键基因表达分析

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北京林业大学学报 2025年第1期47卷 106-115页

作者：戴睿段帅帅肖士奎卫志鹏吕淑芳史国安吴疆范丙友河南科技大学农学院河南洛阳471023 洛阳绿珠园艺有限公司河南洛阳471131 榆林学院信息工程学院陕西榆林719000

【目的】筛选芍药切花开放至衰老过程中和盛开期不同组织中稳定表达的最适内参基因,深入解析ACS和ACO基因在乙烯介导的芍药切花开放至衰老过程中的功能。【方法】(1)以芍药‘桃花飞雪’为材料,基于qRT-PCR技术分析13个候选内参基因在芍... 详细信息

【目的】筛选芍药切花开放至衰老过程中和盛开期不同组织中稳定表达的最适内参基因,深入解析ACS和ACO基因在乙烯介导的芍药切花开放至衰老过程中的功能。【方法】(1)以芍药‘桃花飞雪’为材料,基于qRT-PCR技术分析13个候选内参基因在芍药切花开放至衰老不同时期及盛开期不同组织中表达水平的变化,应用geNorm、NormFinder、BestKeeper等软件和ΔCt法对其表达稳定性进行了评价;通过在线RefFinder网站分析获得候选内参基因表达稳定性的综合排名。(2)利用筛选出的双内参基因,对乙烯生物合成关键基因ACS和ACO在芍药切花开放至衰老不同时期及盛开期不同组织中的表达水平进行定量分析。【结果】(1)在芍药切花开放至衰老的不同时期,geNorm分析表明GAPDH和RAN3表达稳定性最好;NormFinder分析显示RAN3表达最稳定;BestKeeper分析表明18S rRNA表达稳定性最好;RefFinder综合分析表明RAN3和GAPDH为最适内参基因。(2)在盛开期芍药切花花器官不同组织中,geNorm分析表明ARF和PP2A表达稳定性最好;NormFinder分析显示UBQ表达最稳定;BestKeeper分析表明GAPDH表达稳定性最好;RefFinder综合分析表明UBQ和ARF为最适内参基因。(3)在芍药切花开放至衰老过程中,ACS基因表达量显著低于ACO基因表达量,是调控乙烯合成的开关;ACO主要在切花开放前期(瓶插0~12 h)发挥作用;ACS表达量在绽口期和衰败期(瓶插6 h和144 h)均发挥重要作用,并在盛开期对乙烯合成起到限制作用;(4)在芍药切花盛开期不同组织中,ACS基因表达量显著低于ACO,ACS和ACO基因的表达存在组织差异性,且均在茎和花萼中表达较高。【结论】本研究筛选出芍药切花开放至衰老不同时期(RAN3和GAPDH)以及盛开期不同组织中(UBQ和ARF)qPCR定量表达分析的双内参基因组合;乙烯生物合成关键基因ACO主要在芍药切花开放过程发挥作用,ACS基因在芍药切花开放和衰老过程均发挥重要的作用。研究结果将为切花寿命的改良提供参考。

关键词：芍药内参基因表达稳定性开花衰老乙烯生物合成

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毛叶芋兰不同组织qRT-PCR内参基因选择与验证

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热带作物学报 2025年第1期46卷 35-43页

作者：池珈仪刘舒璇向思诗詹若挺何瑞广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心/广州中医药大学岭南中药资源教育部重点实验室/广州中医药大学中药学院广东广州510006

毛叶芋兰(Nervilia plicata)是一种珍稀南药,目前对其有效成分及其分子调控机理鲜有报道。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)在植物基因表达分析中得到了广泛应用,但在毛叶芋兰中缺少研究,限制了相关工作的开展。在... 详细信息

毛叶芋兰(Nervilia plicata)是一种珍稀南药,目前对其有效成分及其分子调控机理鲜有报道。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)在植物基因表达分析中得到了广泛应用,但在毛叶芋兰中缺少研究,限制了相关工作的开展。在前期工作基础上,本研究从毛叶芋兰转录组数据库中筛选出Actin、GAPDH、TUA、UBC、UBQ、EF-1α、EF-1β、CYP、RPL共9个常见管家基因,以毛叶芋兰叶片、叶柄和球茎3个组织部位为材料,开展qRT-PCR内参基因的筛选工作。经过9个基因在不同组织的表达水平、稳定性和综合分析,筛选出最适合的内参基因,并选择毛叶芋兰花青素合成途径关键基因NpDFR、Np3GT进行验证。结果发现:EF-1α和CYP的表达稳定性相近,整体稳定性最好。2个内参基因单独或共同使用时,NpDFR、Np3GT在不同组织的表达情况与转录组测序结果基本一致,表明其均可用作qRT-PCR的内参基因。本研究结果为进一步开展毛叶芋兰药效相关基因的分子作用机理研究提供依据。

关键词：毛叶芋兰内参基因实时荧光定量PCR 表达稳定性

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一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法

一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法

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作者：聂尧徐岩 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院

一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法，属于大肠杆菌表达调控领域。本发明利用基因工程技术，以细菌来源的普鲁兰酶为表达蛋白，构建了表达普鲁兰酶的重组大肠杆菌。通过使用含有lac操纵子和阻遏物基因lacI的pET表达... 详细信息

标准号: CN103555751B

一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法，属于大肠杆菌表达调控领域。本发明利用基因工程技术，以细菌来源的普鲁兰酶为表达蛋白，构建了表达普鲁兰酶的重组大肠杆菌。通过使用含有lac操纵子和阻遏物基因lacI的pET表达载体pET-22b(+)和pET-28a(+)，构建了重组菌***21/pET-22b(+)-pul和***21/pET-28a(+)-PelB- pul，利用lac操纵子严谨的双阻遏调控策略，基本消除了毒性外源蛋白的本底表达，提高了冷冻甘油菌种的表达稳定性和乳糖自诱导后的目标蛋白表达量，增强了大肠杆菌表达系统稳定性。本发明解决了大肠杆菌T7表达系统中常见的系统稳定性问题，开发了增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法。

关键词：大肠杆菌普鲁兰酶构建阻遏大肠杆菌表达系统乳糖大肠杆菌表达基因工程技术重组大肠杆菌表达稳定性系统稳定性阻遏物基因表达蛋白策略增强目标蛋白外源蛋白细菌来源甘油表达量重组菌调控本底菌种一种表达冷冻诱导增强消除开发解决

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铝处理下绣球实时荧光定量PCR内参基因筛选及验证

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华北农学报 2021年第2期36卷 9-18页

作者：陈双双齐香玉冯景陈慧杰王华娣秦紫艺邓衍明江苏省农业科学院休闲农业研究所江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室江苏南京210014 江苏大学生命科学学院江苏镇江212013 南京农业大学园艺学院江苏南京210014

为筛选适合铝处理下绣球中稳定表达的内参基因,在转录组数据分析的基础上,以Al2(SO4)3处理下绣球铝敏感品种Bailer(商品名:Endless SummerTM,中文名译为无尽夏)和不敏感品种Ruby(中文名译为红宝石)的不同组织为材料,分析10个候选内参基... 详细信息

为筛选适合铝处理下绣球中稳定表达的内参基因,在转录组数据分析的基础上,以Al2(SO4)3处理下绣球铝敏感品种Bailer(商品名:Endless SummerTM,中文名译为无尽夏)和不敏感品种Ruby(中文名译为红宝石)的不同组织为材料,分析10个候选内参基因(5个传统内参基因和5个新基因)的表达水平,并利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、ΔCt及RefFinder 5个程序分析候选内参基因的表达稳定性。结果表明,β-TUB(β-微管蛋白)和UPL7(E3泛素蛋白连接酶)的表达水平较高,而且相对较稳定;表达稳定性分析结果显示,在Al2(SO4)3处理下Bailer中最适内参基因为UPL7和β-TUB,其次是ACT7,Ruby中最适内参基因为β-TUB和UBP15,其次是UPL7;适用于不同组织器官以及所有样本的最适内参基因同样为β-TUB、UBP15和UPL7。因此,β-TUB和UPL7为铝处理下绣球实时荧光定量PCR最适内参基因;以β-TUB、UPL7和β-TUB+UPL7作为内参基因时,绣球铝转运蛋白基因HmVALT的表达模式一致。

关键词：绣球铝处理内参基因表达稳定性

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高温胁迫下茄子qRT-PCR内参基因筛选及稳定性分析

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园艺学报 2017年第3期44卷 475-486页

作者：庞强强李植良罗少波陈日远金庆敏黎振兴李德明孙保娟孙光闻广东省农业科学院蔬菜研究所广州510640 华南农业大学园艺学院广州510642 海南省农业科学院蔬菜研究所海口570100

为筛选茄子(Solanum melongena L.)高温胁迫下稳定表达的内参基因,以不同茄子品系(种)为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术对来自茄子高温胁迫转录组数据库8个候选内参基因(SmEF1a、SmEF2、Sm40s RPS29、Sm60s RPL24、SmTRX、SmCK I、Sm... 详细信息

为筛选茄子(Solanum melongena L.)高温胁迫下稳定表达的内参基因,以不同茄子品系(种)为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术对来自茄子高温胁迫转录组数据库8个候选内参基因(SmEF1a、SmEF2、Sm40s RPS29、Sm60s RPL24、SmTRX、SmCK I、SmDAHPS I、SmUCP)和SmActin在不同试验情况下进行表达检测,并结合GeNorm、Norm Finder、Best Keeper和ReFinder软件综合评价9个内参基因的表达稳定性。结果表明,在茄子热敏品系05-1和耐热品系05-4经高温处理不同时间的样品和不同组织样品以及10个耐热性不同的茄子品系(种)中,9个内参基因的表达丰度及稳定性存在差异;茄子热敏品系05-1和耐热品系05-4高温胁迫处理不同时间样品中表达稳定性最好的是SmEF1a和SmUCP;其不同组织中表达水平最稳定的是SmEF1a和SmTRX;高温胁迫下不同茄子品系(种)中以SmTRX和SmEF2的表达稳定性最好。综合来看,SmEF1a和SmTRX在所有茄子试验样品中的表达稳定性最好,而SmActin和SmCK I的表达稳定性较差。

关键词：茄子高温胁迫内参基因表达稳定性实时荧光定量PCR

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非生物胁迫下黄缨菊实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证

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草地学报 2024年第7期32卷 2028-2038页

作者：余明君苏丹丹苏旭陈金元刘玉萍张雨刘涛杨倩牛富英青海师范大学生命科学学院青海西宁810008 青海师范大学青海省青藏高原生物多样性形成机制与综合利用重点实验室青海西宁810008 青海师范大学高原科学与可持续发展研究院青海西宁810016 青海理工大学生态与环境科学学院青海西宁810016

为了筛选基因分析中黄缨菊(Xanthopappus subacaulis)稳定表达的内参基因,本研究以冷、盐和干旱胁迫下黄缨菊的根、茎和叶为材料,依据三代转录组数据选取8个常用内参基因(18S rRNA,GAPDH,PAL,UBQ,TIP,RPS,SAND,TUA)作为候选基因,利用qRT... 详细信息

为了筛选基因分析中黄缨菊(Xanthopappus subacaulis)稳定表达的内参基因,本研究以冷、盐和干旱胁迫下黄缨菊的根、茎和叶为材料,依据三代转录组数据选取8个常用内参基因(18S rRNA,GAPDH,PAL,UBQ,TIP,RPS,SAND,TUA)作为候选基因,利用qRT-PCR技术并结合geNorm,NormFinder,BestKeeper和RefFinder软件综合评价候选内参基因的表达稳定性。结果表明,冷胁迫下黄缨菊根、茎、叶中最佳稳定性的内参基因分别为SAND,TIP和GAPDH;干旱胁迫下最稳定的内参基因分别是SAND,TUA和UBQ;盐胁迫下稳定性最好的内参基因分别为RPS,RPS和SAND。此外,分别以干旱胁迫处理下黄缨菊根、茎、叶中2个稳定性最佳和1个稳定性最差的基因作为内参基因,衡量耐逆基因WRKY表达量的准确性,表明不同胁迫下筛选出的黄缨菊不同组织中内参基因的稳定性结果均是可靠的。研究结果为今后黄缨菊耐逆基因的表达分析提供了基因资源和理论依据。

关键词：黄缨菊内参基因实时荧光定量PCR 非生物胁迫表达稳定性

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老鸦瓣实时定量PCR内参基因的筛选和验证

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中国中药杂志 2021年第4期46卷 938-943页

作者：徐碧霞郭巧生朱再标张军霞南京农业大学中药材研究所江苏南京210095

药用植物老鸦瓣供需矛盾日益凸显,但分子生物学方面研究基础还较薄弱。为开展老鸦瓣相关功能基因表达量的分析检测,需要选择适宜的内参基因以提高实验结果准确性。从老鸦瓣转录组数据中筛选出8个候选内参基因(ACT,TUA,CYP,GAPDH,UBQ,UBI... 详细信息

药用植物老鸦瓣供需矛盾日益凸显,但分子生物学方面研究基础还较薄弱。为开展老鸦瓣相关功能基因表达量的分析检测,需要选择适宜的内参基因以提高实验结果准确性。从老鸦瓣转录组数据中筛选出8个候选内参基因(ACT,TUA,CYP,GAPDH,UBQ,UBI,EF1α,UBC),利用实时荧光定量技术检测候选内参基因在老鸦瓣鳞茎、叶、花以及芽茎不同发育阶段中的表达水平。应用GeNorm,NormFinder和BestKeeper软件以及RefFinder网站综合评估内参基因稳定性。结果表明8个候选内参基因中UBC的Ct变化范围最小,表达水平最稳定,适合作为内参基因;GeNorm和NormFinder软件分析结果显示UBC和UBI的稳定性相对较好;BestKeeper评估CYP和UBC表达较稳定;RefFinder网站综合排序稳定性最好的基因为UBC和UBI,而ACT在所有软件评估中稳定性最差。分别以稳定性最好的UBC,UBI和最差的ACT为内参基因检测老鸦瓣GBSS基因的表达,GBSS基因在UBC和UBI校正下表达模式相同,以ACT为内参时表达趋势有较大差异,进一步验证了筛选结果的可靠性,表明UBC和UBI均适合作为老鸦瓣不同器官和芽茎不同发育时期基因表达研究的内参基因。该研究筛选得到的稳定内参基因UBC和UBI为后续开展老鸦瓣中关键基因表达分析研究奠定了基础。

关键词：老鸦瓣内参基因表达稳定性 GBSS基因

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出芽短梗霉菌株PA-2胁迫下藜qRT-PCR内参基因的筛选与验证

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中国草地学报 2024年第2期46卷 48-56页

作者：刘晓芳程亮郭青云青海大学农林科学院植物保护研究所/青海省农业有害生物综合治理重点实验室/农业农村部西宁作物有害生物科学观测实验站青海西宁810016

为筛选适合出芽短梗霉菌株PA-2胁迫下藜中稳定表达的内参基因,在转录组数据(NCBI登录号为:SRA:SRR12674257)分析的基础上,以PA-2不同时间胁迫的藜叶片为材料,分析藜中ACT-1、TUB-1、GAPDH、eEF1α、eIF3、UBQ、PTB、COX10、UPL6、TIP41L... 详细信息

为筛选适合出芽短梗霉菌株PA-2胁迫下藜中稳定表达的内参基因,在转录组数据(NCBI登录号为:SRA:SRR12674257)分析的基础上,以PA-2不同时间胁迫的藜叶片为材料,分析藜中ACT-1、TUB-1、GAPDH、eEF1α、eIF3、UBQ、PTB、COX10、UPL6、TIP41L、RAN-B1和IDH-5等12个内参基因的表达水平,并利用ΔCt、GeNorm、NormFinder、BestKeeper及RefFinder分析候选内参基因的表达稳定性。结果表明,内参基因COX10是PA-2不同时间胁迫下藜中最稳定的内参基因,最优组合是COX10+eEF1α。通过分析藜ACC基因的相对表达水平,验证了内参基因的可靠性,为今后杂草藜胁迫响应基因的表达分析提供了参考基因和理论依据。

关键词：出芽短梗霉菌株PA-2 qRT-PCR 藜内参基因表达稳定性

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