检索结果-内蒙古大学图书馆

应用昆虫学报 2021年第1期58卷 108-116页

作者：魏笑佳何岚阿地拉·阿吉季荣扈鸿霞新疆师范大学生命科学学院中亚区域跨境有害生物联合控制国际研究中心乌鲁木齐830054

【目的】筛选出微孢子Paranosema locustae感染条件下东亚飞蝗Locusta migratoria实时定量PCR最适内参基因。【方法】本研究应用实时荧光定量PCR技术测定东亚飞蝗甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(Glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18s核糖体RNA(18s RNA)、微管蛋白基因(Tubulin,TUB)、肌动蛋白基因(Actin,ACT)和延伸因子1基因(Elongation factor1,EF1)5个候选基因在3个微孢子浓度(1×10^(4)、1×10^(6)和1×10^(8)个孢子/头)感染12 d后的表达稳定性;应用ge Norm、Bestkeeper和Normfinder 3个软件综合分析5个内参基因的稳定性。【结果】ge Norm软件对5个内参基因在不同微孢子虫浓度感染下稳定性分析结果表明:18S基因稳定性最低,平均表达稳定性值M值最高为0.6584,TUB基因稳定性最高,M值最低为0.2784。Norm Finder软件分析在不同微孢子虫浓度感染下的5个内参基因的稳定值分别为0.152(EF1)、0.181(ACT)、0.212(TUB)、0.329(GAPDH)和0.395(18S),可知内参基因稳定性顺序为:EF1>ACT>TUB>GAPDH>18S。由Best Keeper软件分析表明5个候选内参基因的SD值均小于1.0,表达均较稳定。根据其变异系数值CV的大小可知,ACT基因最为稳定。【结论】综合3种软件分析结果,在不同微孢子虫浓度感染下,可选择的较为稳定的内参基因ACT、EF1和TUB基因作为相对定量的参照基因。

关键词：微孢子东亚飞蝗内参基因实时定量PCR 表达稳定性

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牧草盲蝽实时定量PCR内参基因的筛选

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昆虫学报 2019年第12期62卷 1379-1391页

作者：贾冰马亿庞保平单艳敏鲍青龙韩海斌谭瑶内蒙古农业大学草原昆虫研究中心呼和浩特010020 内蒙古草原工作站呼和浩特010020 赤峰市草原工作站内蒙古赤峰024000 中国农业科学院草原研究所呼和浩特010019

【目的】筛选出适合牧草盲蝽Lygus pratensis在不同条件下稳定表达的内参基因。【方法】选取编码牧草盲蝽α-微管蛋白、β-微管蛋白、肌动蛋白、延伸因子、琥珀酸脱氢酶复合体A、泛素、转录起始因子TFIID亚基、谷胱甘肽S-转移酶、核糖... 详细信息

【目的】筛选出适合牧草盲蝽Lygus pratensis在不同条件下稳定表达的内参基因。【方法】选取编码牧草盲蝽α-微管蛋白、β-微管蛋白、肌动蛋白、延伸因子、琥珀酸脱氢酶复合体A、泛素、转录起始因子TFIID亚基、谷胱甘肽S-转移酶、核糖体蛋白L32及TATA盒结合蛋白的10条基因为候选内参基因,采用qRT-PCR技术测定其在牧草盲蝽不同性别成虫、成虫不同组织、不同龄期、对功夫菊酯不同抗性成虫、不同温度及不同杀虫剂分别处理后的成虫共6类样品中的表达量;采用BestKeeper,geNorm,NormFinder及RefFinder 4种计算程序对各候选基因的表达稳定性进行评价。【结果】依据获得的有效qRT-PCR数据前提,利用不同计算方法综合分析得出:在牧草盲蝽成虫不同组织中和对功夫菊酯不同抗性成虫中最稳定表达的内参基因均为RPL32;不同温度处理、不同性别成虫中、不同杀虫剂处理和不同龄期牧草盲蝽中最稳定表达的内参基因分别为UBQ,SDHA,β-tubulin和TAF。通过geNorm软件判断配对变异数确定的内参基因最佳数目,结合RefFinder对基因表达稳定性综合排序的结果可得:牧草盲蝽不同成虫组织中、不同性别成虫中、不同龄期、对功夫菊酯不同抗性成虫中、不同温度及杀虫剂分别处理的成虫等各组的最优内参基因组合分别为RPL32+TAF,SDHA+GST,TAF+GST+UBQ,RPL32+GST,UBQ+ACT+β-tubulin和β-tubulin+TAF+RPL32。【结论】本研究获得的牧草盲蝽在不同条件下表达最稳定及最适内参基因组合,都可用于后续的基因定量表达研究。

关键词：牧草盲蝽 qRT-PCR 内参基因基因表达分析表达稳定性

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葡萄不同摘心处理下qRT-PCR内参基因的筛选与验证

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江西农业大学学报 2019年第5期41卷 890-900页

作者：赖呈纯潘红张静王琦高慧颖陈源黄贤贵福建省农业科学院农业工程技术研究所福建福州350003 福建省农产品(食品)加工重点实验室福建福州350003

摘心处理是保证葡萄产量和品质的关键栽培技术之一,选择稳定可靠的内参基因,有利于葡萄摘心响应分子机制相关基因表达的研究。本研究以不同摘心处理的葡萄叶片和茎杆为材料,利用qRT-PCR分析15个候选内参基因Actin、AP-2、Cyclophilin、E... 详细信息

摘心处理是保证葡萄产量和品质的关键栽培技术之一,选择稳定可靠的内参基因,有利于葡萄摘心响应分子机制相关基因表达的研究。本研究以不同摘心处理的葡萄叶片和茎杆为材料,利用qRT-PCR分析15个候选内参基因Actin、AP-2、Cyclophilin、EF1-α、GAPDH、VAG、SAND、α-Tubulin、β-Tubulin、UBQ-L40、NAD5、ADH2、60SRP、18S rRNA、UBQ等在所供材料中的转录水平,并用RefFinder软件对候选内参基因稳定性进行综合评价。试验结果表明,葡萄叶片为材料的试验体系的最稳定内参基因为SAND和VAG,而葡萄茎杆为材料的试验体系以AP-2和Actin为最稳定的内参基因,且采用双内参基因组合,可以进一步提高试验结果的精确度;通过目的基因VvSS4转录水平数据标准化的验证,所获得的2组内参基因在各自的试验体系中可靠性高,可用于后续相关目的基因定量表达的研究。

关键词：葡萄摘心实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 内参基因表达稳定性

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重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种的稳定性考察

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华西药学杂志 2007年第3期22卷 295-297页

作者：姜立春郭晓萍涂朝勇舒晓燕阮期平绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室四川绵阳621000 西南科技大学生命科学学院四川绵阳621000

目的研究基因工程菌***10F’在LB培养基中传代50代过程中菌种的稳定性。方法以菌体和菌落的形态、质粒稳定性(ST)、质粒酶切图谱和重组嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase)的表达量和酶活性为指标进行考察,以评价工程菌的稳定性。结果重组PyNPas... 详细信息

目的研究基因工程菌***10F’在LB培养基中传代50代过程中菌种的稳定性。方法以菌体和菌落的形态、质粒稳定性(ST)、质粒酶切图谱和重组嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase)的表达量和酶活性为指标进行考察,以评价工程菌的稳定性。结果重组PyNPase工程菌在传代50代的过程中质粒稳定性高,传代10代内质粒稳定性(ST)为100%,其表达产物可达发酵液总蛋白的20%,其活性为1.18 ***-1,传代50代的菌体与菌落呈典型的大肠杆菌形态。结论重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种稳定。

关键词：重组嘧啶核苷磷酸化酶质粒稳定性表达稳定性工程菌稳定性

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重组人尿激酶原基因的克隆及工程菌的构建与鉴定

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南京大学学报（自然科学版） 2001年第4期37卷 401-406页

作者：陈于红张菁朱镇华傅一工刘建宁南京大学分子医学研究所南京210093 Landing Biotech Inc Boston

利用RT PCR技术 ,从人脐带静脉上皮细胞中克隆重组人尿激酶原基因 ,用表达质粒pET2 9a构建了重组质粒 pET2 9a/ prouk ,并转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,作为工程菌 .经IPTG诱导表达 ,在 4 6kDa处有一明显表达条带 ,表达量为约占菌体总... 详细信息

利用RT PCR技术 ,从人脐带静脉上皮细胞中克隆重组人尿激酶原基因 ,用表达质粒pET2 9a构建了重组质粒 pET2 9a/ prouk ,并转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,作为工程菌 .经IPTG诱导表达 ,在 4 6kDa处有一明显表达条带 ,表达量为约占菌体总蛋白的 2 0 % .

关键词：重组人尿激酶原基因工程菌质粒稳定性表达稳定性基因克隆菌株表达

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枫香树不同组织内参基因的筛选及稳定性评价

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分子植物育种 2024年

作者：石从广朱欢腾杨少宗徐梁何庆海张丽芳吴锋颖周芳伟浙江省林业科学研究院文成县林业技术服务总站

选择合适的内参基因是保证实时荧光定量PCR分析（quantitative real-time PCR， qRT-PCR）准确性的前提条件。以枫香树（Liquidambar formosana Hance）的叶片、叶柄、叶芽、果实和嫩茎为试验材料，以枫香树基因组数据库的9个基因（Lif... 详细信息

选择合适的内参基因是保证实时荧光定量PCR分析（quantitative real-time PCR， qRT-PCR）准确性的前提条件。以枫香树（Liquidambar formosana Hance）的叶片、叶柄、叶芽、果实和嫩茎为试验材料，以枫香树基因组数据库的9个基因（LifUBQ， LifACT， Lifα-TUB1， LifDnaJ， LifCDC2， LifGAPDH， LifH2A， Lifβ-TUB， LifSAND）为候选内参基因，利用qRT-PCR检测了这9个候选内参基因在以上5种材料中的表达水平，并使用扩增曲线和熔解曲线分析，LinRegPCR扩增效率分析，BestKeeper、geNorm、NormFinder、Delta Ct和RefFinder软件对各候选内参基因表达量的稳定性进行评价。结果表明，9个候选内参基因均能特异扩增并显示较高的扩增效率，经基因表达稳定性分析和验证，发现LifUBQ和LifACT基因的Ct值、Delta Ct值、稳定性M值在9个候选基因中均处于较低水平，它们的SD数值均小于1，表达稳定性排在前2位，并且2个基因的配对差异值V2/V3＜0.15，表明在进行枫香树不同组织荧光定量分析时，无须引入第3个内参基因进行校正，仅需LifUBQ和LifACT作为2个校正内参基因，稳定性验证结果也表明这2个内参基因是稳定可靠的。本研究获得了2个在枫香树不同组织中表达稳定的荧光定量内参基因LifUBQ和LifACT，填补了枫香树内参基因的空白，为枫香的分子生物学和遗传育种研究提供了衡量基因表达水平的标尺。

关键词：枫香树实时荧光定量PCR 内参基因扩增效率表达稳定性

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一心维纳斯蝴蝶兰花香物质合成相关基因RT-qPCR内参基因筛选

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热带作物学报 2023年第11期44卷 2188-2195页

作者：章杨婷张燕萍黄静妍王文君童妍赵凯周育真福建农林大学风景园林与艺术学院/兰科植物保护与利用国家林业和草原局重点实验室福建福州350002 福建师范大学生命科学学院福建福州350117

一心维纳斯蝴蝶兰(PhalaenopsisI-HsinVenus)花型优雅、花期持久、花香馥郁,是优良的香花品种,具有较高的园林观赏价值和经济价值。为筛选适用于一心维纳斯蝴蝶兰花香物质合成相关基因表达分析的内参基因,本研究以一心维纳斯蝴蝶兰不同... 详细信息

一心维纳斯蝴蝶兰(PhalaenopsisI-HsinVenus)花型优雅、花期持久、花香馥郁,是优良的香花品种,具有较高的园林观赏价值和经济价值。为筛选适用于一心维纳斯蝴蝶兰花香物质合成相关基因表达分析的内参基因,本研究以一心维纳斯蝴蝶兰不同花期(中蕾期、初开期、盛开前期、盛开中期、盛开后期、衰败期)的转录组数据为基础,选取了ACT1、ACT2、ACT3、GAPDH、EF1α、TUA、TUB和Ubi共8个管家基因作为候选内参基因,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测候选内参基因在花朵不同发育时期的表达情况,并利用geNorm、NormFinder、BestKeeper三个内参基因稳定性分析软件对候选内参基因进行分析。综合分析结果表明,ACT1的稳定性最高,可作为一心维纳斯蝴蝶兰相关基因表达分析的最适内参基因。

关键词：一心维纳斯蝴蝶兰内参基因实时荧光定量PCR 表达稳定性

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草鱼脂肪组织及脂肪细胞qRT-PCR内参基因的筛选

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水产科学 2023年第4期42卷 547-555页

作者：胡泽超邹孝翠孙健边晨晨吉红西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为探究4个内参基因在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中的稳定表达情况及筛选稳定性最佳的内参基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了在水温26.5~27.5℃下,摄食脂肪含量为4%、8%和12%的饲料4周、体质量为(15.0±0.5)g的草鱼腹腔脂肪... 详细信息

为探究4个内参基因在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中的稳定表达情况及筛选稳定性最佳的内参基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了在水温26.5~27.5℃下,摄食脂肪含量为4%、8%和12%的饲料4周、体质量为(15.0±0.5)g的草鱼腹腔脂肪组织中及在成脂培养基中诱导分化至第6天时,用含0、40、80、120 mmol/L的油酸处理的草鱼脂肪细胞中的18S rRNA基因、β-actin基因、GAPDH基因和EF1α基因等4个候选内参基因的转录水平,随后采用GeNorm、NormFinder和Bestkeeper软件分析其表达稳定性,以筛选出特定条件下草鱼脂肪组织及脂肪细胞中稳定表达的内参基因或其组合。结果显示,候选内参基因的定量PCR引物均可获得特异性扩增产物和理想的扩增效率。在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中,候选内参基因表达稳定性顺序分别为18S rRNA>β-actin>GAPDH>EF1α和18S rRNA=β-actin>GAPDH>EF1α。GeNorm标准化因子配对差异分析显示,其配对变异值均小于0.15,即草鱼脂肪组织及脂肪细胞中最适内参基因数至少有2个。结果表明,在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中稳定表达的是18S rRNA基因,建议选择18S rRNA、β-actin基因作为草鱼脂肪组织及脂肪细胞内参基因组合。

关键词：实时荧光定量PCR 草鱼内参基因筛选脂肪组织脂肪细胞表达稳定性

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绵羊基因表达定量分析内参基因的筛选

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中国畜牧杂志 2021年第8期57卷 77-82页

作者：周胜花薛丽娜宋献艺山西农业大学动物科学学院山西太谷030801

内参基因在基因表达定量分析中常用于修正基因的表达量,但不同条件下内参基因的表达并不稳定。本实验旨在选出在绵羊不同组织稳定表达的内参基因。选取6月龄广灵大尾羊的皮肤、肾周脂肪、肝脏、背部最长肌组织为实验样本,用实时荧光定量... 详细信息

内参基因在基因表达定量分析中常用于修正基因的表达量,但不同条件下内参基因的表达并不稳定。本实验旨在选出在绵羊不同组织稳定表达的内参基因。选取6月龄广灵大尾羊的皮肤、肾周脂肪、肝脏、背部最长肌组织为实验样本,用实时荧光定量PCR方法分别测定内参基因GAPDH、18S rRNA、B2M、ACTβ、RPLPO、YWHAZ在绵羊各组织内的mRNA丰度,经GeNorm、NormFinder及BestKeeper综合分析内参基因的稳定性。结果表明:在绵羊背部最长肌和肾周脂肪中,3个软件都得出GAPDH表达最稳定;在肝脏中,3个软件都得出RPLPO表达最稳定;在皮肤中,GeNorm和NormFinder均得出18S rRNA表达最稳定,而GeNorm和BestKeeper均得出GAPDH表达最稳定,所以选取18S rRNA或GAPDH作为内参基因;比较4个组织中表达最稳定的基因时,GeNorm和NormFinder软件均得出RPLPO表达最稳定,而BestKeeper分析表明B2M基因稳定性最好,所以选取RPLPO或B2M作为内参基因。

关键词：广灵大尾羊实时荧光定量PCR 内参基因表达稳定性

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朱红毛斑蛾实时荧光定量PCR内参基因的筛选

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环境昆虫学报 2021年第1期43卷 15-24页

作者：陈炼田忠王小云陈学敏陆温王小平郑霞林广西大学农学院南宁530004 华中农业大学植物科学技术学院武汉430070

筛选朱红毛斑蛾Phauda flammans(Walker)在不同成虫组织、性别及发育阶段处理条件下稳定表达的内参基因,为进一步开展朱红毛斑蛾相关基因的定量研究提供参考。本研究以不同成虫组织(头、胸、腹、足、翅和触角)、不同成虫性别和不同发育... 详细信息

筛选朱红毛斑蛾Phauda flammans(Walker)在不同成虫组织、性别及发育阶段处理条件下稳定表达的内参基因,为进一步开展朱红毛斑蛾相关基因的定量研究提供参考。本研究以不同成虫组织(头、胸、腹、足、翅和触角)、不同成虫性别和不同发育阶段(卵、幼虫、蛹和成虫)为实验材料,对10个候选内参基因进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR),并使用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件及RefFinder网站对候选内参基因的表达稳定性进行评价和综合分析。结果表明:在朱红毛斑蛾不同成虫组织基因定量研究中,TUB2>GAPDH>TUB1>AK>EF1α>ACTIN3>TBP>TUB3>ACTIN2>RPL32,建议以TUB2和GAPDH作为内参基因;在不同成虫性别基因定量研究中,TUB1>EF1α>ACTIN3>RPL32>ACTIN2>TUB2>AK>GAPDH>TUB3>TBP,建议以TUB1和EF1α作为内参基因;在不同发育阶段基因定量研究中,ACTIN3>TBP>TUB1>EF1α>TUB3>ACTIN2>GAPDH>RPL32>TUB2>AK,建议以ACTIN3和TBP作为内参基因。基于GeNorm分析,最佳内参基因使用数目为2个。

关键词：基因表达表达稳定性 GeNorm NormFinder BestKeeper RefFinder

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