检索结果-内蒙古大学图书馆

世界华人消化杂志 2004年第2期12卷 319-322页

作者：张健刘妍成军王琳邵清梁耀东李强刘敏中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:应用基因表达谱芯片研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白7(humangene7transactivatedbynonstructuralprotein5AofhepatitisCvirus,HCVNS5ATP7)的反式调节基因.方法:构建NS5ATP7基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP7,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NS5ATP7转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体pcDNA3.1(-)的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP7后,有12条差异基因表达,其中4条基因表达增强,8条基因表达降低.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了NS5ATP7的反式调节基因,为进一步阐明NS5ATP7的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.

关键词：表达谱芯片技术 NS5ATP7 反式调节基因非结构蛋白5A 反式激活蛋白7 基因表达

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应用表达谱芯片技术对乙型肝炎病毒前-S2抗原结合蛋白S2-29反式调节基因的研究

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世界华人消化杂志 2004年第1期12卷 58-61页

作者：陆荫英刘妍成军梁耀东陈天艳邵清王琳张玲霞中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29 过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响. 方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(R... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29 过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响. 方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增S2-29蛋白编码基因片段,经测序鉴定后构建表达载体pcDNA3.1(-)-S2-29,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-S2-29转染的人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA 进行检测和分析. 结果:筛选出肝文库中HBV前-S2结合蛋白S2-29的编码基因,构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有9个基因表达水平显著下调,包括真核翻译延伸因子2、MAP激酶激活的死亡域、谷胱甘肽过氧化物酶、肌动蛋白、NDRG、Prosaposin、SUMO-1激活酶亚基1、胰岛素受体和1个未知功能蛋白.1个未知蛋白编码基因的表达上调. 结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV前-S2结合蛋白S2—29蛋白的反式调节基因,为进一步阐明S2—29蛋白对细胞表达调控的影响提供了新的依据.

关键词：表达谱芯片技术乙型肝炎病毒前-S2 抗原结合蛋白 S2—29反式调节基因

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应用表达谱芯片技术筛选NS5ATP9反式调节基因的研究

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世界华人消化杂志 2004年第2期12卷 323-326页

作者：李强梁耀东成军王琳王建军张健刘妍程明亮中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039 贵阳医学院传染科贵州省贵阳市550004

目的:应用基因表达谱芯片技术研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9(NS5ATP9)的反式调节基因.方法:构建NS5ATP9基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP9,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NSSATP9转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片技术研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9(NS5ATP9)的反式调节基因.方法:构建NS5ATP9基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP9,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NSSATP9转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体pcDNA3.1(-)的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP9后,有16条差异基因表达水平发生显著改变,其中3条基因表达增强,13条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化、凋亡及细胞的信号转导密切相关.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了丙型肝炎病毒NS5ATP9作用HepG2细胞后差异表达基因,为阐明NS5ATP9的作用提供了新的依据.

关键词：表达谱芯片技术 NS5ATP9反式调节基因肝炎病毒 HCV 基因功能丙型肝炎

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采用表达谱芯片技术筛选肝癌肝肾阴虚证与其他证候差异基因的研究

采用表达谱芯片技术筛选肝癌肝肾阴虚证与其他证候差异基因的研究

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作者：何文婷上海中医药大学

学位级别：硕士

辨证论治是中医理论体系的核心内容，辨证的准确性是决定临床能否取得疗效的关键。“证”是机体在疾病发展过程中某一阶段的病理概括，反应该阶段病理变化的本质。既然同一个“证”具有共同的临床表现和病理基础，那必然有其共同的物质... 详细信息

辨证论治是中医理论体系的核心内容，辨证的准确性是决定临床能否取得疗效的关键。“证”是机体在疾病发展过程中某一阶段的病理概括，反应该阶段病理变化的本质。既然同一个“证”具有共同的临床表现和病理基础，那必然有其共同的物质基础，而且很可能反应在基因和蛋白水平上。肾中所藏之精是禀受于父母的生殖之精，是构成胚胎发育的原始物质，与遗传物质具有一定的同一性。采用基因芯片检测技术探讨肾虚证的实质已经取得了一定的成果，如我们前期工作发现Bc1-2基因剔除小鼠的许多表现都与中医肾虚证非常相似，提出Bc1-2基因家族是中医肾虚物质基础的假说，并已经得到国内同行的广泛验证。 　　目的： 　　肝肾同居下焦，且五行学说属母子关系，在生理和病理上皆关系密切且相互影响，基于“肝肾同源”的理论，我们拟以原发性肝癌患者为例，采用表达谱芯片技术筛选肝肾阴虚症与其他证候的差异基因，尝试为证的客观化研究提供一种新的研究思路。 　　方法： 　　 1、采用“病证结合”的方法，选择病情齐同的原发性肝癌患者纳入研究范围，通过中医辨证筛选出肝肾阴虚证患者50例和非肝肾阴虚证患者25例（包括气滞血瘀证5例、湿热证10例、肝郁脾虚证10例）。 　　 2、收集患者外周血，分离淋巴细胞，提取RNA，检测后最终筛选肝肾阴虚证样本3例作为实验组，非肝肾阴虚证样本3例（其中气滞血瘀证、湿热证、肝郁脾虚证各1例）作为对照组进行芯片检测，利用经随机方差模型修正后的T-检验(RVM-T test)计算芯片探针的显著性水平(p-value)和误判率(FDR)，初步筛选出肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证之间存在表达差异的基因。 　　 3、使用Gene Ontology数据库对筛选出的差异基因进行GO注释，并对其进行分类分析。 　　结果： 　　 1、肝肾阴虚证组与非肝肾阴虚证组相比，存在差异基因共876条，其中表达水平上调的有387条，表达水平下调的有489条。 　　 2、将差异基因进行GO注释，发现差异基因的功能主要涉及免疫功能、代谢、自由基代谢等方面。 　　结论： 　　 1、初步筛选出肝癌肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证相比存在的差异基因。 　　 2、通过功能分析，发现肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证主要在免疫功能、代谢、自由基代谢等方面存在差异，细胞凋亡与肝肾阴虚证之间是否存在直接关系有待进一步探讨。

关键词：表达谱芯片技术原发性肝癌肝肾阴虚证证候差异 Bc1-2基因

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应用表达谱芯片技术筛选HBcAg反式调节基因

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世界华人消化杂志 2004年第12期12卷 2886-2890页

作者：徐志强成军张鸿飞王建军刘妍纪冬中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室感染三科北京市100039

目的:筛选与克隆HBcAg激活基因,了解其在体内的调节功能线索及机制. 方法:以分子生物学技术构建HBcAg的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBcAg,以表达质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg 转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解... 详细信息

目的:筛选与克隆HBcAg激活基因,了解其在体内的调节功能线索及机制. 方法:以分子生物学技术构建HBcAg的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBcAg,以表达质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg 转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA.应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析. 结果:HBcAg表达质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确.经基因表达谱芯片分析,29种基因的表达水平上调,17种基因的表达水平下调. 结论:筛选到一些与细胞内信号传导、免疫调节、细胞凋亡、蛋白质翻译合成、肿瘤发生相关的HBcAg反式调节的靶基因.

关键词：表达谱芯片技术筛选 HBcAg 反式调节基因分子生物学技术

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应用表达谱芯片技术筛选HBeAg反式调节基因

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胃肠病学和肝病学杂志 2004年第5期13卷 462-465页

作者：王建军成军徐志强刘妍纪冬解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心

目的　筛选与克隆HBeAg反式调节基因 ,了解其在体内的调节功能线索及机制。方法　以分子生物学技术构建HBeAg的真核表达载体pcDNA3 1( -) HBeAg ,转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1( -)为平行对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA... 详细信息

目的　筛选与克隆HBeAg反式调节基因 ,了解其在体内的调节功能线索及机制。方法　以分子生物学技术构建HBeAg的真核表达载体pcDNA3 1( -) HBeAg ,转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1( -)为平行对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA。应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析。结果　HBeAg表达质粒pcDNA3 1( -) HBeAg经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确。经基因表达谱芯片分析 ,5种基因的表达水平上调 ,7种基因的表达水平下调。结论　筛选到一些与细胞信号传导、免疫调节、蛋白翻译合成、肿瘤。

关键词： HB 反式调节基因 pcDNA3 表达谱芯片技术转染肿瘤表达水平 RNA 筛选 DNA测序

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应用表达谱芯片技术研究NS5ATP13的反式调节基因

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世界华人消化杂志 2004年第11期12卷 2757-2761页

作者：张黎颖邓红成军党晓燕刘妍蔺淑梅黄燕萍纪冬吴顺华纪泛扑邵清西安交通大学第二医院感染科陕西省西安市710004 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:应用基因表达谱芯片研究HCV非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP13的反式调节基因. 方法:构建NS5ATP13基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)- NS5ATP13,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)- NS5ATP13转染的人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片研究HCV非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP13的反式调节基因. 方法:构建NS5ATP13基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)- NS5ATP13,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)- NS5ATP13转染的人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析. 结果:HepG2细胞经转染NS5ATP13后,有86条差异基因表达,其中46条基因表达增强,40条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化及细胞的信号转导、代谢、凋亡密切相关. 结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了NS5ATP13的反式调节基因,为进一步阐明NS5ATP13的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.

关键词：表达谱芯片技术 NS5ATP13 反式调节基因丙型肝炎病毒外膜蛋白

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