检索结果-内蒙古大学图书馆

中国食品学报 2015年第5期15卷 189-193页

作者：王长远刘祎婷张丽萍姚笛黑龙江八一农垦大学食品学院黑龙江大庆163319 齐齐哈尔疾病预防防控中心黑龙江齐齐哈尔161005

为了提高甜味蛋白Brazzein的产量及甜度,将第29位的天冬氨酸、第31位的组氨酸和第41位的谷氨酸突变为赖氨酸、丙氨酸、赖氨酸,然后结合乳酸乳球菌密码子偏嗜性,对甜味蛋白编码序列进行优化。将优化的Brazzein基因克隆入表面表达载体p NZ... 详细信息

为了提高甜味蛋白Brazzein的产量及甜度,将第29位的天冬氨酸、第31位的组氨酸和第41位的谷氨酸突变为赖氨酸、丙氨酸、赖氨酸,然后结合乳酸乳球菌密码子偏嗜性,对甜味蛋白编码序列进行优化。将优化的Brazzein基因克隆入表面表达载体p NZ8112,构建甜味蛋白Brazzein的乳酸乳球菌表面表达系统。通过SDSPAGE、免疫印迹及免疫荧光等方法验证甜味蛋白Brazzein成功表达于乳酸乳球菌表面,这为甜味蛋白Brazzein的商品化开发奠定基础。

关键词：甜味蛋白 Brazzein 乳酸菌表面表达

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噬菌体6肽随机表面表达文库的构建

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病毒学报 1996年第3期12卷 267-273页

作者：张英李爱民侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

体外合成编码６肽的随机ＤＮＡ片段以及用于随机ＤＮＡ片段扩增的一对ＰＣＲ引物，再经ＰＣＲ扩增、ＢｇｌＩ酶切扩增产物，获得编码６肽的随机ＤＮＡ克隆片段，并利用已构建的噬菌体表面表达载体（ＦＵＳＥ５）的特性，将随机ＤＮＡ克... 详细信息

体外合成编码６肽的随机ＤＮＡ片段以及用于随机ＤＮＡ片段扩增的一对ＰＣＲ引物，再经ＰＣＲ扩增、ＢｇｌＩ酶切扩增产物，获得编码６肽的随机ＤＮＡ克隆片段，并利用已构建的噬菌体表面表达载体（ＦＵＳＥ５）的特性，将随机ＤＮＡ克隆片段与ＦＵＳＥ５载体连接，连接物电转化ＭＣ１Ｏ６１宿主菌，经抗性和插入复活筛选，获得１．６ｘ１０８个独立克隆。构成文库的克隆经酶切、ＰＣＲ扩增、斑点杂交、序列测定、亲和素富集等方法的综合鉴定和评定，以及６肽随机克隆体外增殖和表达特性观察，结果均表明，我们已成功构建了编码６肽的噬菌体随机表面表达文库。对原库作不同批次连续扩增所获扩增库，又进一步证实，已构建的原库具备以质粒和丝状噬菌体二种形式在体外稳定增殖的特性。

关键词：噬菌体表面表达 6肽随机文库构建

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传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白在干酪乳杆菌的表面表达

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中国预防兽医学报 2010年第1期32卷 19-22页

作者：刘敏赵丽丽葛俊伟乔薪瑗刘巍巍赵永欣李一经东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为获得传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白在菌体表面表达,本研究将IPNV VP3基因定向插入乳酸杆菌表面表达型载体pPG1,构建的重组质粒pPG1-VP3电转化干酪乳杆菌,获得了重组干酪乳杆菌表达系统pPG1-VP3/Lactobacillus casei393。经1%糖诱... 详细信息

为获得传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白在菌体表面表达,本研究将IPNV VP3基因定向插入乳酸杆菌表面表达型载体pPG1,构建的重组质粒pPG1-VP3电转化干酪乳杆菌,获得了重组干酪乳杆菌表达系统pPG1-VP3/Lactobacillus casei393。经1%糖诱导表达后,SDS-PAGE和western blot检测表明,有约31ku蛋白得到了表达,其大小与理论值相符;诱导表达的菌体进行间接免疫荧光试验表明,重组蛋白在菌体表面获得了表达。该病毒VP3蛋白在乳酸菌的表面表达为进一步探讨传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白免疫原性及相关功能奠定了基础。

关键词：传染性胰腺坏死病毒 VP3蛋白干酪乳杆菌表面表达

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猪水肿病毒素B亚单位的表面表达

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中国预防兽医学报 2002年第3期24卷 219-223页

作者：徐建生崔治中成大荣董国雄李俊宝扬州大学畜牧兽医学院动物医学系江苏扬州225009

用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从大肠杆菌PPSLT_ⅡeB中扩增出猪水肿病素 (SLT_Ⅱe)的B亚单位基因 (slt_ⅡeB)的 2 0 4bp的编码序列。将此PCR扩增产物按预定的阅读框架克隆进质粒表达载体PZSPAX ,并转化到大肠杆菌HB10 1中 ,筛选到含有s... 详细信息

用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从大肠杆菌PPSLT_ⅡeB中扩增出猪水肿病素 (SLT_Ⅱe)的B亚单位基因 (slt_ⅡeB)的 2 0 4bp的编码序列。将此PCR扩增产物按预定的阅读框架克隆进质粒表达载体PZSPAX ,并转化到大肠杆菌HB10 1中 ,筛选到含有slt_ⅡeB的重组质粒PZBSPAX。将重组质粒PZBSPAX进行序列分析 ,结果表明 :重组质粒PZBSPAX中的插入序列与发表的slt_ⅡeB是一致的 ,证明PZBSPAX就是含有slt_ⅡeB的重组表达质粒。含有重组质粒PZBSPAX的大肠杆菌HB10 1命名为重组大肠杆菌PZBSPAX。通过在不同温度条件下、不同培养时间情况下、不同IPTG诱导条件下 ,利用荧光抗体染色证明重组大肠PZBSPAX可表面表达预期的融合蛋白PP_SLT_ⅡeB_SPAX ;利用SDS_PAGE、Western_blot对重组大肠杆菌PZBSPAX的表达进行了分析 ,结果表明重组大肠杆菌PZBSPAX表达的融合蛋白PP_SLT_lleB_SPAX与预期大小一致。

关键词：仔猪水肿病毒素 B亚单位表面表达传染病大肠杆菌抗原性

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产肠毒素大肠杆菌K88ac-STa-LTB嵌合抗原多克隆抗体制备及植物乳杆菌表面表达研究

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黑龙江畜牧兽医 2019年第1期 13-17+25+175页

作者：刘琼刘永仕尚晓敏李桂玲姜延龙王春凤吉林工程技术师范学院食品工程学院吉林农业大学动物科学技术学院/吉林省动物微生态制剂工程研究中心/教育部动物生产和产品质量安全重点实验室

为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,***)表面表达黏附素-肠毒素(K88ac-STa-LTB)嵌合抗原的可行性,试验利用原核表达载体pET28a表达纯化此嵌合抗原,蛋白复性后免疫Babl/c小鼠制备多克隆抗体,以制备的多克隆抗体作为一抗,采用We... 详细信息

为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,***)表面表达黏附素-肠毒素(K88ac-STa-LTB)嵌合抗原的可行性,试验利用原核表达载体pET28a表达纯化此嵌合抗原,蛋白复性后免疫Babl/c小鼠制备多克隆抗体,以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Western-blot、流式细胞术及间接免疫荧光试验研究此嵌合抗原在植物乳杆菌表面表达情况。结果表明:K88ac-STa-LTB嵌合抗原在大肠杆菌中以包涵体形式表达,纯化并复性的重组蛋白大小约为32.5 ku,制备的抗体效价为12lb。重组菌株NC8-pLP1261-8576表达的K88ac-STa-LTB嵌合抗原经Western-blot分析,能被鼠抗LTB单克隆抗体及自制的鼠抗K88ac-STa-LTB多克隆抗体识别,流式细胞术及荧光显微镜观察证明此嵌合抗原在菌体表面表达。

关键词：植物乳杆菌产肠毒素大肠杆菌黏附素-肠毒素嵌合抗原多克隆抗体表面表达

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幽门螺杆菌ureB基因抗原片段的乳酸乳球菌表面表达体系的研究

幽门螺杆菌ureB基因抗原片段的乳酸乳球菌表面表达体系的研究

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作者：谷贵章浙江工商大学

学位级别：硕士

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种定植于人胃上皮组织引起胃炎、消化性胃溃疡和胃癌的呈螺旋状的病原菌。目前，临床根除Hp的手段主要是联合应用抗生素，但该菌感染的普遍性、耐药菌株的不断增加、较高的花费以及病人的低依... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种定植于人胃上皮组织引起胃炎、消化性胃溃疡和胃癌的呈螺旋状的病原菌。目前，临床根除Hp的手段主要是联合应用抗生素，但该菌感染的普遍性、耐药菌株的不断增加、较高的花费以及病人的低依从性等因素，限制了抗菌药物的疗效。因此，免疫防治正成为Hp防治的一个研究热点。尿素酶是Hp主要的抗原成分。在Hp疫苗研究中，尿素酶，以其保护力、表面暴露和保守性等优势，占据支配地位。尤其是其UreB亚基，被证明可以刺激机体产生具有较好保护作用的免疫应答。但是，UreB分子较大，不易重组表达。另外，以重组UreB为抗原虽然可以诱使机体产生大量抗体，但这些抗体不能抑制尿素酶活性。而以线性表位为抗原所获取的抗体能够强烈抑制尿素酶活性。也有文献报道，抑制尿素酶活性可以清除和防御Hp。我们推测以UreB线性表位或其小片段为抗原来制备疫苗，免疫效果更好。此外，Hp通过突破胃粘膜上皮组织感染机体，必将其抗原暴露于粘膜，刺激上皮组织有效地分泌IgA以中和Hp的毒性。因此，刺激粘膜免疫系统产生免疫保护的最有效方式是直接接种抗原于粘膜表面而引起粘膜上皮分泌IgA抗体，该途径可以通过口服免疫实现。以乳酸乳球菌(***)为载体来递呈抗原已被证实能够有效地刺激粘膜系统产生特异性免疫应答，而保护性免疫应答不仅依赖于抗原及递呈载体，也强烈取决于抗原定位。抗原表面表达于***能够直接刺激肠道粘膜系统，更好地提供免疫保护效率。本研究以UreB的E片段为抗原尝试构建展示表达E片段的***表面表达系统——*** MG1363(pAMJ399-spax-e)和*** MG1363(pAMJ399-ca-e)，旨在探讨E片段能否更有效地诱生免疫保护，希望通过两种锚定片段(spax和ca)所构建的抗原表面表达系统的研究，为口服免疫的研究奠定基础。本研究内容如下： 1、设计引物分别从*** CowanⅠ菌株基因组*** MG1363菌株基因组中克隆出蛋白A锚定域序列spax和AcmA锚定域序列ca。 2、为构建靶蛋白表面表达载体，经单酶切(酶切SpeⅠ位点)将spax序列融合到分泌型载体pAMJ399中，构建了共价型表面表达载体pAMJ399-spax；经分步酶切(先酶切PstⅠ位点，再酶切SalⅠ位点)将ca序列融合到分泌型载体pAMJ399中，构建了非共价型表面表达载体pAMJ399-ca。 3、为将ureB基因e片段分别与上述两种表面表达载体融合，通过单酶切(酶切BglⅡ位点)和双酶切(酶切BglⅡ位点和PstⅠ位点)构建了融合有ureB基因e片段的共价型表面表达载体pAMJ399-spax-e和非共价表面表达载体pAMJ399-ca-e。 4、对诱导后的重组大肠杆菌*** JM109(pAMJ399-spax-e)和*** JM109(pAMJ399-ca-e)全蛋白及上清进行SDS-PAGE分析发现：诱导后的*** JM109(pAMJ399-spax-e)总蛋白中约42kDa的位置出现目的条带。随后，将pAMJ399-spax-e质粒和pAMJ399-ca-e质粒通过电转化法导入*** MG1363感受态细胞中，获取了抗原E片段的乳酸乳球菌表面表达系统，*** MG1363(pAMJ399-spax-e)和*** MG1363(pAMJ399-ca-e)。

关键词：幽门螺杆菌乳酸乳球菌尿素酶 ureB基因表面表达

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细菌表面表达载体的构建与鉴定

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河南科技大学学报（农学版） 2004年第4期24卷 14-19页

作者：徐建生成大荣孙怀昌崔治中扬州大学兽医学院江苏扬州225009 山东农业大学山东泰安271000

用聚合酶链式反应(PCR)技术,从金黄色葡萄球菌中扩增出769bp的编码SPA细胞壁跨膜区的编码序列。将扩增的片断克隆进pEZZ 18载体BamHI和SalI位点之间。重组质粒转化大肠杆菌HB101后,根据酶切分析筛选到含有目的基因的重组质粒pZSPAX。序... 详细信息

用聚合酶链式反应(PCR)技术,从金黄色葡萄球菌中扩增出769bp的编码SPA细胞壁跨膜区的编码序列。将扩增的片断克隆进pEZZ 18载体BamHI和SalI位点之间。重组质粒转化大肠杆菌HB101后,根据酶切分析筛选到含有目的基因的重组质粒pZSPAX。序列测定结果表明,该重组质粒中的插入序列与已发表的SPA X是一致的。通过水肿病毒素B亚单位(SLT IIeB)基因(slt IIeB)证实质粒pZSPAX能作为在细菌表面表达目的基因的载体。

关键词：细菌表面表达表达载体重组质粒 PCR SPA pEZZ-18 抗原

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乳酸乳球菌食品级表面表达系统建立和报告基因检测

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南通大学学报（医学版） 2015年第4期35卷 280-282页

作者：庄重季莉徐莹莹李珊珊季玉红段义农南通大学医学院病原生物学系南通226001

目的 :建立乳酸乳球菌食品级高效表面表达系统。方法 :克隆并表达枯草芽孢杆菌基因组中γ-多聚谷氨酸合成酶亚基跨膜蛋白Pgs A,同时将报告基因——金黄色葡萄球菌耐热核酸酶融合在Pgs A蛋白C-末端,通过甲苯胺蓝-DNA琼脂平板检测酶活性... 详细信息

目的 :建立乳酸乳球菌食品级高效表面表达系统。方法 :克隆并表达枯草芽孢杆菌基因组中γ-多聚谷氨酸合成酶亚基跨膜蛋白Pgs A,同时将报告基因——金黄色葡萄球菌耐热核酸酶融合在Pgs A蛋白C-末端,通过甲苯胺蓝-DNA琼脂平板检测酶活性。结果:耐热核酸酶基因被成功表达并锚定在细胞表面,具有较高酶活性。结论:该系统的成功建立为未来高致病性病原微生物抗原簇重组表达,进而研制新型基因工程口服疫苗奠定基础。

关键词：乳酸乳球菌表面表达 PgsA 核酸酶

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脓毒血症病人外周血单核细胞CD14、HLA-DR表面表达的临床意义

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中华腹部疾病杂志 2003年第2期3卷 82-85页

作者：李文雄夏成青陈惠德齐曼北京朝阳医院SICU100020

目的通过研究脓毒血症病人单核细胞CD14、HLA-DR的表面表达来评价其免疫状况和预后，并据此来寻找对脓毒血症病人进行免疫调节治疗时机和方法。方法在病人被确诊为脓毒血症后的第1、3、5、7、14、21、28天测定外周血单核细胞CD14、HLA... 详细信息

目的通过研究脓毒血症病人单核细胞CD14、HLA-DR的表面表达来评价其免疫状况和预后，并据此来寻找对脓毒血症病人进行免疫调节治疗时机和方法。方法在病人被确诊为脓毒血症后的第1、3、5、7、14、21、28天测定外周血单核细胞CD14、HLA-DR的表面表达量及它们的平均荧光强度(MFI)，一旦病人脓毒血症消失，上述检测自动停止。并在抽血的当天对病人进行APACHE-Ⅱ和SOFA评分。病人被诊为脓毒血症后的第1次测量为初次测量，最后一次测量为末次测量。结果 31例脓毒血症病人中，10例死亡，21例存活。死亡组％CD14、MFI(CD14)均明显低于存活组，APACHE-Ⅱ评分、SOFA评分均明显高于存活组；HLA-DR、MFI(HLA-DR)分别与存活组比较均无明显差异。存活组初次％CD14、MFI(CD14)、HLA-DR、MFI(HLA-DR)分别与死亡组比较，均无明显差异(P>0．05)；存活组末次CD14、HLA-DR均明显高于初次CD14、HLA-DR(P<0．05)，死亡组无明显差异(P>0．05)。结论脓毒血症病人外周血单核细胞CD14、MFI(CD14)、HLA-DR、MFI(HLA-DR)表面表达量的初次测定值与预后无关；％CD14或HLA-DR值呈下降趋势而APACHE—II或SOFA评分升高者，提示病人处于免疫抑制状态，预后较差，此时可能是采用rINF-γ进行免疫调节治疗的最佳时机。

关键词：脓毒血症单核细胞 CD14 HLA-DR 表面表达研究方法

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乳酸菌表面表达系统的构建及幽门螺杆菌保护性抗原HpaA的表达鉴定

乳酸菌表面表达系统的构建及幽门螺杆菌保护性抗原HpaA的表达鉴定

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2011中国生物制品年会暨第十一次全国生物制品学术研讨会

作者：国敏徐帆洪上海生物制品研究所

目的:利用乳酸菌作为载体表面表达幽门螺杆菌的保护抗原hpaA,构建了hpaA基因工程活菌载体。方法:采用PCR搭桥技术合成含有usp45的启动子、信号肽和终止子的表达原件;采用PCR方法扩增hpaA基因和锚定序列CWAm6,并且将含有各表达原件、锚... 详细信息

目的:利用乳酸菌作为载体表面表达幽门螺杆菌的保护抗原hpaA,构建了hpaA基因工程活菌载体。方法:采用PCR搭桥技术合成含有usp45的启动子、信号肽和终止子的表达原件;采用PCR方法扩增hpaA基因和锚定序列CWAm6,并且将含有各表达原件、锚定序列及目的基因插入到大肠杆菌和乳酸菌的穿梭质粒pSUW811中构建重组质粒,电转法转至乳酸球菌中进行表达,Western blot分析和荧光免疫显微镜检测蛋白的表达及定位。结果:构建基于CWAmn6锚定序列的hpaA的乳酸菌的表面表达载体p8l1/hpaA-m6并且在乳酸菌中组成型表达HpaA,经鉴定发现HpaA在乳酸菌上表面表达。结论:构建了乳酸菌表面表达系统并实现了幽门螺杆菌保护性抗原HpaA在乳酸菌表面的锚定表达。

关键词：乳酸乳球菌表面表达幽门螺杆菌 HpaA 保护性抗原

来源：评论

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