检索结果-内蒙古大学图书馆

医学综述 2010年第6期16卷 891-893页

作者：顾晓宇任兵石河子大学医学院新疆石河子832002 解放军474医院眼科乌鲁木齐830013

周细胞包裹血管内皮细胞形成血管腔,具有重要的功能,周细胞减少导致出现血管扩张、渗血,导致水肿、新生血管等病变。近年研究发现周细胞通过多种信号通路对于视网膜血管调节、代谢等方面起着重要的作用,具有调节内皮细胞增殖、分化,调... 详细信息

周细胞包裹血管内皮细胞形成血管腔,具有重要的功能,周细胞减少导致出现血管扩张、渗血,导致水肿、新生血管等病变。近年研究发现周细胞通过多种信号通路对于视网膜血管调节、代谢等方面起着重要的作用,具有调节内皮细胞增殖、分化,调控新生血管生长及稳定性等多种功能。现就周细胞在视网膜新生血管疾病中的研究现状予以综述。

关键词：周细胞毛细血管视网膜新生血管疾病

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RNA干扰技术在视网膜疾病治疗中的研究进展

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国际眼科杂志 2013年第5期13卷 901-904页

作者：李光辉彭燕一桂林医学院中国广西壮族自治区桂林市1541004 桂林医学院附属医院眼科中国广西壮族自治区桂林市541001

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种在动物中广泛存在的、通过双链RNA分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因沉默的过程。作为一种阻断基因表达的新手段,RNAi技术日趋成熟完善,开辟了一条基因治疗的新途径。RNAi技术能够有效阻止视网... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种在动物中广泛存在的、通过双链RNA分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因沉默的过程。作为一种阻断基因表达的新手段,RNAi技术日趋成熟完善,开辟了一条基因治疗的新途径。RNAi技术能够有效阻止视网膜新生血管的形成,抑制增生性玻璃体视网膜病变的发生和发展,诱导视网膜母细胞瘤细胞的凋亡。现将RNAi技术在上述视网膜病变中的研究进展作一综述。

关键词： RNA干扰技术视网膜新生血管疾病增生性玻璃体视网膜病变视网膜母细胞瘤

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microRNA与眼部疾病的相关性

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眼科新进展 2009年第5期29卷 391-394页

作者：谢田华樊莹王丰上海交通大学附属第一人民医院眼科上海市200080

microRNA是近年来发现的一类长度约21～25个核苷酸非编码小分子RNA,它们通过与靶mRNA的3’端非编码区结合促使mRNA降解或抑制其翻译来调节靶基因的表达,在细胞的分化、增生、凋亡、个体发育以及机体代谢中都具有重要的作用。研究发现mic... 详细信息

microRNA是近年来发现的一类长度约21～25个核苷酸非编码小分子RNA,它们通过与靶mRNA的3’端非编码区结合促使mRNA降解或抑制其翻译来调节靶基因的表达,在细胞的分化、增生、凋亡、个体发育以及机体代谢中都具有重要的作用。研究发现microRNA在眼部广泛并特异性表达,并可能参与了多种疾病的发生发展过程,但其功能还有待进一步研究。而microRNA作为眼部疾病的检测指标和治疗工具也越来越受到关注,并可能成为治疗的新热点。

关键词：小分子RNA 视网膜退行性病变视网膜新生血管疾病视网膜母细胞瘤

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骨髓间充质干细胞在氧诱导视网膜病变中的作用及机制研究

骨髓间充质干细胞在氧诱导视网膜病变中的作用及机制研究

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作者：程伟靖福建医科大学

学位级别：硕士

视网膜新生血管性疾病是一类以视网膜病理性血管异常增生为特征的疾病,目前治疗方法主要有抗血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）药物治疗等,但抗VEGF药物有其局限性,部分患者无应答甚至发生视网膜萎缩。研究... 详细信息

视网膜新生血管性疾病是一类以视网膜病理性血管异常增生为特征的疾病,目前治疗方法主要有抗血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）药物治疗等,但抗VEGF药物有其局限性,部分患者无应答甚至发生视网膜萎缩。研究表明,骨髓来源的间充质干细胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）可分化为视网膜细胞,并参与眼内血管生成相关的微环境调节,同时可分泌神经营养因子,抑制视网膜细胞凋亡,起到视网膜保护作用。氧诱导的视网膜病变（oxygen-induced retinopathy,OIR）是研究视网膜新生血管疾病的良好模型。本研究采用改良OIR造模法,评估玻璃体腔注射BMSCs对OIR的干预作用,并通过免疫荧光示踪技术探讨BMSCs在视网膜新生血管疾病中的作用机制。第一部分骨髓间充质干细胞对氧诱导视网膜病变的保护作用目的:建立稳定的OIR模型,明确疾病模型中视网膜相关病理损伤指标,探究玻璃体腔移植BMSCs对OIR的干预作用。方法:将新生小鼠分为五组:正常组;氧诱导视网膜疾病（OIR）组（OIR-blank组）;氧诱导视网膜病变（OIR）联合注射DMEM组（OIR-DMEM组）;氧诱导视网膜病变（OIR）联合注射BMSCs组（OIR-BMSCs组）;高氧诱导的视网膜病变（OIR）联合注射康柏西普组（OIR-CON组）。除了正常组,将出生第七天小鼠置于75%的氧舱中饲养5天,回到正常空气氧环境中,回归当日对各组行玻璃体腔干预注射,5天后通过荧光视网膜血管显影术观察视网膜血管情况,石蜡切片联合苏木精-伊红染色（HE染色）观察突破內界膜的新生血管,末端脱氧核苷酸标记法（TUNEL）评估视网膜细胞凋亡,视网膜过碘酸雪夫染色（PAS染色）评估血管网密度和闭塞度,Western blot检测移植后视网膜凋亡蛋白的表达情况。结果:BMSCs干预OIR后,缺血无灌注区和新生血管面积所占比显著减少（OIR组:10.39±0.99%和9.63±0.47%,干预后:0.85±0.25%和0.78±0.55%,P<0.05）,突破內界膜的血管内皮细胞核数减少（148.00±46.27/眼和11.00±8.70/眼,P<0.05）,同时,BMSCs干预后的视网膜血管中,无细胞的毛细血管数量显著减少（35.33±3.68/mm2和15.33±1.25/mm2,P<0.05）,内皮细胞数与周细胞比值（E/P）下调（1.56±0.08/mm2,2.36±0.22/mm2,P<0.05）,最后,TUNEL显示BMSCs可减少视网膜细胞的凋亡（0.61±0.20%和0.17±0.02%,P<0.05）,Caspase-3水平降低,差别具有统计学意义(FOIR=0.97±0.03,FBMSCs=0.74±0.03,P<0.05)。结论:BMSCs可抑制OIR新生血管的发生和发展,增加视网膜血管网密度,减少缺血无灌注区,减少细胞凋亡,对视网膜起保护作用。第二部分骨髓间充质干细胞干预氧诱导视网膜病变的作用机制研究目的:探究BMSCs在眼内迁移、分化情况及其在OIR中的作用机制。方法:在OIR小鼠玻璃体腔内注射表达红色荧光蛋白（RFP）的BMSCs（RFP-BMSCs）,通过荧光视网膜血管显影术示踪BMSCs在眼内整体迁移情况;冰冻切片联合免疫荧光实验观察BMSCs在视网膜内的归巢、分化情况。蛋白质印迹法检测血管生成相关的调控因子、神经营养因子的表达。结果:BMSCs干预后,色素上皮衍生因子（PEDF）蛋白的表达升高(FOIR=0.225,FBMSCs=0.3275,P<0.05)。BMSCs进入体内后,随着时间逐渐迁移并归巢至视网膜血管附近,分化为血管内皮样细胞,参与管壁的组成,并表达血管内皮细胞标志物CD31。结论:BMSCs对OIR病理性新生血管的发生发展具有抑制作用,与干细胞表达PEDF增多、归巢和分化有关。

关键词：间充质干细胞视网膜新生血管疾病氧诱导视网膜病变归巢分化

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慢病毒介导的sFlt-1基因片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用

慢病毒介导的sFlt-1基因片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用

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作者：张敏上海交通大学

学位级别：硕士

1.携带sFlt-1基因不同片段的慢病毒载体的构建及表达目的:建立携带可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)不同基因片段的慢病毒表达质粒,为进一步研究sFlt-1蛋白生物学功能奠定基础。方法:以人新鲜胎盘组织提取的cDNA为模板,分别选取sFl... 详细信息

1.携带sFlt-1基因不同片段的慢病毒载体的构建及表达目的:建立携带可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)不同基因片段的慢病毒表达质粒,为进一步研究sFlt-1蛋白生物学功能奠定基础。方法:以人新鲜胎盘组织提取的cDNA为模板,分别选取sFlt-1第2-3及第2-4免疫球蛋白样结构编码序列设计引物,进行RT-PCR扩增,制备sFlt-1基因片段sFlt-1(2-3)和sFlt-1(2-4)。扩增片断经限制性内切酶BamHI和SalI双酶切后,插入慢病毒载体pRRL-GFP中,构建慢病毒表达质粒pRRL/sFlt-1(2-3)及pRRL/sFlt-1(2-4),分别与慢病毒包装载体pMDLg/pRRE、包被载体PRSV/REV、pMD2.G共转染人胚肾细胞(HEK293T),获得重组慢病毒***-1(2-3)及***-1(2-4),并感染人视网膜色素上皮细胞,通过RT-PCR和Western blot检验***-1(2-3)及***-1(2-4)在人类细胞的表达。结果:经酶切鉴定及基因测序证实pRRL/sFlt-1(2-3)和pRRL/sFlt-1(2-4)的序列与Genebank完全相同,包装成病毒后能有效感染人视网膜色素上皮细胞。结论:本实验成功构建了分别携带sFlt-l基因第2-3和第2-4免疫球蛋白样区域编码序列的慢病毒载体,包装成病毒后能有效感染人类细胞,为今后视网膜新生血管疾病的基因治疗提供了新的可能途径。 2.小鼠视网膜新生血管模型的建立及鉴定目的:建立稳定可靠的视网膜新生血管动物模型,为今后探究视网膜新生血管疾病的治疗方法奠定模型基础。方法:将新生C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组。将模型组小鼠于生后第7天置于75%氧浓度环境,生后第12天返回正常空气中;正常组小鼠则始终置于正常空气环境喂养。至小鼠生后第17天进行心脏荧光素灌注造影视网膜铺片和眼球连续切片苏木精-伊红(H-E)染色鉴定视网膜新生血管生成情况。结果:模型组小鼠心脏荧光素灌注造影视网膜铺片结果显示视网膜中央区域无灌注缺血,另外视网膜有明显的异常表现诸如血管迂曲扩张、荧光渗漏等。眼球连续切片H-E染色发现模型组小鼠视网膜有许多突出内界膜的血管内皮细胞核,计数为平均48.65±6.24个/片/眼,而正常组小鼠为平均0.38±0.21个/片/眼,两组比较P<0.01。结论:氧诱导的视网膜缺血模型可成功诱导小鼠产生视网膜新生血管,可作为今后探究视网膜新生血管疾病治疗方法的可靠动物模型。 3.可溶性Flt-1基因不同片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用目的:探究sFlt-1基因不同片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用。方法:建立氧诱导的小鼠视网膜新生血管模型,于小鼠生后第12天进行玻璃体内分别注射慢病毒介导的sFlt-1(2-3)和sFlt-1(2-4),于小鼠生后第17天通过心脏荧光素灌注造影视网膜铺片和眼球连续切片苏木精-伊红(H-E)染色观察并比较两者对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用,并通过Western blot和免疫组织化学的方法检测两者对视网膜血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2(KDR/Flk-1)表达的影响。结果:通过荧光素灌注造影视网膜铺片观察到***-1(2-3)和***-1(2-4)转移后小鼠视网膜新生血管均显著减少,眼球连续切片H-E染色发现***-1(2-3)转移较***-1(2-4)更能有效地减少突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数。通过Western blot和免疫组织化学的方法检测到视网膜VEGF表达无明显改变,而视网膜KDR/Flk-1的表达下降较显著,并且***-1(2-3)的作用较***-1(2-4)更明显。结论:慢病毒介导的sFlt-1基因片段转移能够明显阻碍小鼠视网膜VEGF与其功能受体的结合,从而抑制视网膜新生血管的形成。

关键词： sFlt-1 基因片段慢病毒载体视网膜新生血管疾病基因治疗视网膜新生血管氧诱导小鼠心脏荧光素灌注造影视网膜铺片眼球连续切片苏木精-伊红染色视网膜新生血管疾病 sFlt-1 慢病毒基因转移氧诱导视网膜新生血管模型小鼠

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