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中华实验眼科杂志 2024年第2期42卷 202-208页

作者：郭笑霄(综述) 李新宇(审校) 华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科武汉430030

角膜缘干细胞缺乏(LSCD)是眼科常见疾病,严重的LSCD是角膜病致盲的主要原因之一。LSCD新疗法的探索仍是当今研究的热点。建立LSCD动物模型有助于更深入了解LSCD的发病机制以及评估治疗方法的有效性。目前,LSCD建模的主要方式有机械法、... 详细信息

角膜缘干细胞缺乏(LSCD)是眼科常见疾病,严重的LSCD是角膜病致盲的主要原因之一。LSCD新疗法的探索仍是当今研究的热点。建立LSCD动物模型有助于更深入了解LSCD的发病机制以及评估治疗方法的有效性。目前,LSCD建模的主要方式有机械法、灼烧法、化学法、化学+手术法及基因敲减法。机械法成熟可靠,应用广泛,但可能会引起严重的机械损伤。其中,使用旋转毛刺工具造模损伤均匀且创伤小,但对于工具的使用需要一定的经验积累。灼烧法造模表型稳定,但操作复杂可控性差。化学法造模快速简单,病因与临床病例的吻合度较高,但损伤的深度及范围不可控。化学+手术法角膜表面光滑平整,但易导致角膜中央与角膜缘厚度不一致,影响新生血管生长。基因敲减法复杂且动物饲养困难,应用较少。虽然造模方法众多,但各研究中的造模质量参差不齐。因此,建立可靠、成功率高的LSCD动物模型十分必要。本文就近年来常用LSCD动物模型的建立方法及优缺点进行综述,以期为后续构建合适模型提供借鉴。

关键词：角膜缘干细胞缺乏动物模型造模

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角膜缘干细胞缺乏影像学诊断的研究进展

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中华眼科杂志 2023年第8期59卷 673-676页

作者：王乐滢梁庆丰首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心、北京市眼科研究所、北京市眼科学与视觉科学重点实验室北京100730

角膜缘干细胞缺乏(LSCD)是由于角膜缘干细胞数量或功能异常导致的角膜上皮稳态失衡,其症状缺乏特异性,且裂隙灯检查难以与其他眼表疾病鉴别。印迹细胞学实验室检查只能在一定范围内进行定性诊断。近年来,出现了新型影像学检查,为LSCD的... 详细信息

角膜缘干细胞缺乏(LSCD)是由于角膜缘干细胞数量或功能异常导致的角膜上皮稳态失衡,其症状缺乏特异性,且裂隙灯检查难以与其他眼表疾病鉴别。印迹细胞学实验室检查只能在一定范围内进行定性诊断。近年来,出现了新型影像学检查,为LSCD的诊断和分期带来了新的曙光。本文归纳总结了多种检查方法,包括眼前节光学相干层析成像术观察角膜上皮厚度和角膜缘Vogt栅栏状结构、眼前节相干光层析血管成像术检测角膜新生血管、角膜活体共聚焦显微镜测量角膜上皮厚度、基底细胞密度和基底膜下神经,以及全场/频域光学相干层析成像术在LSCD诊断方面的应用。旨在为LSCD的临床诊疗及相关研究奠定基础。

关键词：角膜缘干细胞缺乏体层摄影术,光学相干活体显微镜检查显微镜检查,共焦眼前半段上皮,角膜

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角膜缘干细胞缺乏是否可导致归巢因子基质细胞衍生因子1水平变化

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中国组织工程研究 2016年第19期20卷 2844-2849页

作者：张伟黄文志张玉平广州市第一人民医院老年病科眼科广东省广州市510180 广州市第一人民医院血液病科广东省广州市510180

背景:如何提高细胞移植的效率,促进来源有限、数量稀缺的角膜缘干细胞走向组织修复的第一步即归巢,是提高移植效率的关键。在视网膜色素上皮细胞的损伤修复中基质细胞衍生因子1可发挥着重要作用。目的:观察大鼠及小鼠眼局部角膜缘干细... 详细信息

背景:如何提高细胞移植的效率,促进来源有限、数量稀缺的角膜缘干细胞走向组织修复的第一步即归巢,是提高移植效率的关键。在视网膜色素上皮细胞的损伤修复中基质细胞衍生因子1可发挥着重要作用。目的:观察大鼠及小鼠眼局部角膜缘干细胞缺乏是否会引起外周血中归巢因子基质细胞衍生因子1质量浓度的变化,以期明确角膜缘干细胞缺乏是否会启动外周血中该因子产生变化,从而吸引外周血干细胞向角膜方向归巢。方法:剖切法制作大鼠和小鼠角膜缘干细胞缺乏模型眼,在为期1个月的观察期内连续抽取外周血,ELISA法检测基质细胞衍生因子1质量浓度。结果与结论:1大鼠外周血基质细胞衍生因子1质量浓度:在建模后24 h即发生变化,呈增长态势,在建模后第3天达到增长峰值,其后逐渐下降,但在第25天又出现1个增长峰值,较第3天的峰值低,其后恢复至正常数值;2小鼠外周血中基质细胞衍生因子1质量浓度:在建模后12 h即发生变化,呈增长态势,在建模后第3天达到增长峰值,其后逐渐下降,但在第20天又出现1个增长峰值,较第3天的峰值低,其后恢复至正常数值;3结果说明:外周血中基质细胞衍生因子1水平与角膜缘干细胞缺乏造成的损伤刺激存在一定关联,可能在干细胞迁移修复角膜损伤中起重要的作用。

关键词：干细胞组织工程角膜分化角膜缘干细胞角膜缘干细胞缺乏外周血基质细胞衍生因子1 归巢因子 ELISA 大鼠小鼠国家自然科学基金

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兔全角膜缘干细胞缺乏模型的构建和鉴定

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中华实验眼科杂志 2013年第2期31卷 151-155页

作者：柯红琴刘磊栗静王虎杰黎冬平华中科技大学同济医学院附属同济医院眼屈光治疗中心武汉430030

背景角膜缘干细胞缺乏（LSCD）可导致各种眼表功能异常，严重的LSCD会导致角膜结膜化、慢性炎症、持续的角膜上皮缺失、角膜混浊和伴发的长期视力丧失。目的研究成功构建兔全LSCD模型的适宜方法和最佳时间，观察造模后各时间点模型眼角... 详细信息

背景角膜缘干细胞缺乏（LSCD）可导致各种眼表功能异常，严重的LSCD会导致角膜结膜化、慢性炎症、持续的角膜上皮缺失、角膜混浊和伴发的长期视力丧失。目的研究成功构建兔全LSCD模型的适宜方法和最佳时间，观察造模后各时间点模型眼角膜的病理结构改变。方法选择3～5月龄健康日本大耳白兔20只，用手术刀切除左眼360。角膜缘内1mm、角膜缘外2mm的角膜缘上皮组织和剩余的全部中央角膜上皮组织和浅层基质，切除组织厚度为100～150μm。分别在术后2～5周行裂隙灯检查，以角膜混浊、角膜新生血管情况和上皮荧光素钠染色情况为观察指标，按照国际通用LSCD模型评分标准对模型眼进行评分。分别于术后2、3、4、5周获取模型眼的角膜组织标本，行苏木精一伊红染色和过碘酸希夫染色观察角膜组织结构和杯状细胞的改变，用间接免疫荧光染色法检测细胞角蛋白3（CK3）在角膜组织中的表达。手术后不同时间点造模成功率的差异比较采用Fisher精确概率法。结果术后第2、3、4、5周时的模型成功率分别为12．5％、62．5％、81．3％和87．5％，术后第3周造模成功率明显高于第2周，差异有统计学意义（P=0．009）；第3周与第4周相比差异无统计学意义（P=0．465），第3周与第5周相比差异有统计学意义（P=0．049），第4周与第5周相比差异无统计学意义（P=0．200）。造模成功的平均时间为（3．21±0．80）周。造模成功的标准为模型眼角膜明显混浊，角膜新生血管形成和荧光素钠染色阳性。模型眼的组织病理学检查示角膜基质水肿，较多炎性细胞浸润和新生血管形成。过碘酸希夫染色发现，仅在造模后第5周的角膜组织中发现杯状细胞。各时间点造模成功模型眼角膜组织中均未见到CK3阳性表达。结论用手术切除角膜缘及全部中央角膜上皮的方法可以成功构建全LSCD动物模型，造模成功的时间约为手术后3．2周。

关键词：角膜缘干细胞缺乏动物模型兔

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翼状胬肉的发生与角膜缘干细胞缺乏的病理研究

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中国实用眼科杂志 2003年第7期21卷 499-501页

作者：刘新肖颖盛传家郭健念其钱陈勤福州市第二医院眼科 350007 福州市第二医院病理科

目的 :研究翼状胬肉的发生与角膜缘干细胞缺乏的相关性。方法 :通过对 5 4例翼状胬肉手术病例切除的标本进行病理检查 ,在镜下观察翼状胬肉颈部组织的上皮细胞和正常角膜缘结膜上皮细胞以及干细胞的移行变化。结果 :翼状胬肉头颈部表面... 详细信息

目的 :研究翼状胬肉的发生与角膜缘干细胞缺乏的相关性。方法 :通过对 5 4例翼状胬肉手术病例切除的标本进行病理检查 ,在镜下观察翼状胬肉颈部组织的上皮细胞和正常角膜缘结膜上皮细胞以及干细胞的移行变化。结果 :翼状胬肉头颈部表面上皮细胞层数减少 ,形态扁平 ,部分萎缩 ;翼状胬肉颈部与正常角膜缘球结膜的交界处上皮细胞排列层数逐渐移行减少 ,基底膜破坏 ,细胞排列不规则 ,缺乏基底的柱状细胞 (角膜缘基底部柱状细胞包含角膜缘干细胞与短暂扩充细胞 )。结论 :角膜缘干细胞的缺乏和破坏可能是翼状胬肉发生的重要因素之一。

关键词：翼状胬肉发生角膜缘干细胞缺乏病理

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角膜缘干细胞缺乏的临床诊疗

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国外医学（眼科学分册） 2004年第3期28卷 145-150页

作者：朱志忠上海和平眼科医院上海200437

许多严重的眼表疾病与角膜缘干细胞缺乏相关:先天性无虹膜症、眼表烧伤、接触镜相关眼病、眼表多次手术、长期局部滴眼剂损伤和各种眼表自身免疫性疾病等都将因角膜缘干细胞缺乏导致角膜结膜化或血管化而致盲。本文对角膜缘干细胞缺乏... 详细信息

许多严重的眼表疾病与角膜缘干细胞缺乏相关:先天性无虹膜症、眼表烧伤、接触镜相关眼病、眼表多次手术、长期局部滴眼剂损伤和各种眼表自身免疫性疾病等都将因角膜缘干细胞缺乏导致角膜结膜化或血管化而致盲。本文对角膜缘干细胞缺乏的诊疗原则作一系统介绍,着重讨论角膜缘干细胞移植术的多种术式和术后处理。

关键词：角膜缘干细胞缺乏治疗诊断角膜缘干细胞移植术

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角膜缘干细胞缺乏的临床诊断及手术治疗进展

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医学综述 2020年第23期26卷 4672-4677页

作者：潘玉苗杨燕宁武汉大学人民医院眼科中心武汉430060

角膜缘干细胞缺乏(LSCD)可以与许多眼表及全身免疫系统疾病相关,已成为角膜盲的重要原因之一。过去对LSCD的诊断主要基于病史及临床症状,然而LSCD的临床表现缺乏特异性,甚至根据部分临床表现不足以诊断LSCD。近年来,新开发的眼部成像技... 详细信息

角膜缘干细胞缺乏(LSCD)可以与许多眼表及全身免疫系统疾病相关,已成为角膜盲的重要原因之一。过去对LSCD的诊断主要基于病史及临床症状,然而LSCD的临床表现缺乏特异性,甚至根据部分临床表现不足以诊断LSCD。近年来,新开发的眼部成像技术以及分子生物标志物的应用使LSCD的诊断进入了新时代。随着人们对角膜缘上皮干细胞作用的进一步认识以及组织工程领域技术的发展,LSCD的手术治疗方式有了较大进展,在我国角膜供体材料匮乏的情况下,为患者带来了新希望。

关键词：角膜缘干细胞缺乏移植手术治疗

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大鼠角膜缘微环境细胞诱导口腔黏膜上皮干细胞转分化为角膜样上皮细胞治疗角膜缘干细胞缺乏症的研究

大鼠角膜缘微环境细胞诱导口腔黏膜上皮干细胞转分化为角膜样上皮...

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作者：赵心悦华中科技大学

学位级别：博士

目的:培养的口腔黏膜上皮细胞因其可以用作眼表重建植片,而广泛应用于角膜缘干细胞缺乏症(Limbal stem cell deficiency,LSCD)的治疗。作为角膜缘微环境的重要组成部分,角膜缘微环境细胞(Limbal niche cells,LNCs)在成体干细胞分化的方... 详细信息

目的:培养的口腔黏膜上皮细胞因其可以用作眼表重建植片,而广泛应用于角膜缘干细胞缺乏症(Limbal stem cell deficiency,LSCD)的治疗。作为角膜缘微环境的重要组成部分,角膜缘微环境细胞(Limbal niche cells,LNCs)在成体干细胞分化的方向上起着关键作用。在本研究中,本课题组研究了LNCs在体外诱导大鼠口腔黏膜上皮细胞(OMECs)向角膜上皮样细胞的转分化的能力。方法:分别采用中性蛋白酶II和胶原酶A从大鼠体内分离了OMECs和LNCs,建立了由它们组成的三维或Transwell共培养体系。3T3和更新的LNCs也被用作Transwell系统的滋养层细胞,以比较它们支持OMECs的能力。采用气液交换法培养,获得复层上皮片。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot)、H-E染色和免疫荧光等方法对共培养的上皮片进行了表型检测。结果:在大多数共培养体系中,共培养的OMECs表现出角膜上皮样的铺路石形态,并表达角膜上皮特异性标记物CK12和Pax6。此外,本研究发现,与其他组相比,通过更新Transwell中的LNCs,CK12、Pax6和增殖标记Ki67的表达水平得到了上调,这可能是一种提高转化效率的潜在方法。获得的复层上皮片表达CK3和CK12。结论:通过体外联合培养OMECs和LNCs,成功地培养了角膜上皮样的OMECs。此项研究对LSCD的治疗及眼表重建具有重要意义。目的:角膜缘干细胞缺乏是对患者视力的严重威胁,本研究拟观察在体外与角膜缘微环境细胞共培养的口腔黏膜上皮干细胞治疗角膜缘干细胞缺乏的能力。方法:使用碱烧伤的方法构建大鼠全角膜缘干细胞缺乏模型,将在Transwell中培养形成复层的口腔黏膜上皮细胞消化为单个细胞后,进行模型动物结膜下注射,并以注射PBS的组为对照,比较经过注射治疗后角膜透明度,角膜荧光素钠染色及新生血管长度和面积评分。采用CM-Dil活体示踪剂标记注射的细胞,观察它们结膜下注射后的迁移,存活情况。结果:通过HE染色,印记细胞学,免疫荧光染色证实,利用碱烧伤的方法成功构建了大鼠全角膜缘干细胞缺乏模型。结膜下注射转分化的口腔黏膜上皮细胞的组相对PBS注射组具有更少的新生血管面积评分,且对于碱烧伤后,防止结膜侵入具有一定作用。注射后14天时,观察到有少部分CM-Dil标记的细胞进入角膜缘,并依然表达角膜特异性标志物CK12。结论:结膜下注射转分化口腔黏膜上皮细胞对治疗角膜缘干细胞缺乏症,防止角膜结膜化,维持正常角膜表型,有一定作用。

关键词：角膜缘微环境细胞口腔黏膜上皮干细胞细胞转分化角膜缘干细胞缺乏眼表重建角膜缘干细胞缺乏症转分化口腔黏膜上皮细胞结膜下注射抗新生血管

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鉴定角膜缘干细胞缺乏方法的研究进展

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国际眼科杂志 2017年第1期17卷 59-61页

作者：兰梅杨芳余锦强湖北医药学院附属人民医院眼科中国湖北省十堰市442000 中国湖北省十堰市人民医院临床医学研究所 442000

角膜缘干细胞缺乏引起的角膜疾病是眼科门诊较为常见的疾病,角膜缘干细胞移植已成为治疗该疾病的研究热点。根据角膜缘干细胞是否缺乏以及角膜缘干细胞的缺乏程度,选择的干细胞治疗方式不同。因此鉴定角膜缘干细胞缺乏是选择移植手术的... 详细信息

角膜缘干细胞缺乏引起的角膜疾病是眼科门诊较为常见的疾病,角膜缘干细胞移植已成为治疗该疾病的研究热点。根据角膜缘干细胞是否缺乏以及角膜缘干细胞的缺乏程度,选择的干细胞治疗方式不同。因此鉴定角膜缘干细胞缺乏是选择移植手术的重要依据,能够为后续移植实验奠定坚实的基础。本文主要总结了近年来鉴定角膜缘干细胞缺乏方法的研究进展。

关键词：角膜缘干细胞缺乏印迹细胞学免疫组化光学相干断层扫描活体共聚焦显微镜

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脂质过氧化致新生开睑大鼠角膜缘干细胞缺乏的机理研究

脂质过氧化致新生开睑大鼠角膜缘干细胞缺乏的机理研究

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作者：张兆强厦门大学

学位级别：博士

角膜(cornea)是眼睛前端的一层透明组织，角膜上皮(cornealepithelium)位于角膜的最外层，传统观点上认为角膜上皮的自我更新能力主要依赖于角膜缘干细胞，角膜缘干细胞缺乏(limbal stem cell deficiency，LSCD)可导致角膜混浊、结膜化... 详细信息

角膜(cornea)是眼睛前端的一层透明组织，角膜上皮(cornealepithelium)位于角膜的最外层，传统观点上认为角膜上皮的自我更新能力主要依赖于角膜缘干细胞，角膜缘干细胞缺乏(limbal stem cell deficiency，LSCD)可导致角膜混浊、结膜化、血管化和视力下降。多种因素可导致角膜缘干细胞缺乏，但目前角膜缘干细胞缺乏的发病机制尚未明确。脂类代谢(lipidmetabolism)是机体的重要的三大代谢之一，过氧化物酶体增殖物激活受体alpha(peroxisome proliferators-activated receptor alpha，PPARα)在脂代谢中发挥着重要作用，非诺贝特（fenofibrate，Fen）是PPARα的激动剂，可以促进脂肪酸β氧化。脂类代谢异常可导致脂质过氧化(lipid peroxidation)，对机体造成损伤。　　目的:利用新生大鼠强行开睑（forcing-eye-open-at-birth，FEOB）角膜缘干细胞缺乏模型，研究脂类代谢和脂质过氧化在LSCD病变中的变化和影响，探讨脂类代谢和角膜缘干细胞缺乏的关系。　　方法:本课题实验分为两个部分，第一部分为研究角膜脂类代谢和脂质过氧化在角膜缘干细胞缺乏病变过程中的变化，其实验大鼠随机分为正常对照组和FEOB实验组两个组，每组按出生天数分为P0、P1、P5、P10、P15、P30，每组15只;第二部分实验采用非诺贝特处理FEOB大鼠角膜10天，观察其对FEOB角膜缘干细胞缺乏是否有治疗作用，本实验共分为3组:Normal组、(FEOB+PBS)组和(FEOB+Fen)组，每组大鼠15只。实验采用裂隙灯检查，HE染色和PAS染色观察其组织病理学形态;采用油红O染色检测角膜表面的中性游离脂肪酸;实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(Real-timefluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)检测LSC的标志物(P63、ABCG2)、脂类代谢相关因子[PPARα、肉碱棕榈酰基转移酶(carnitine palmitoyltransferase1alpha，Cpt1)、脂酰辅酶A合酶(long chain acyl-CoA synthetase，Acsl)、脂酰辅酶A脱氢酶(medium chain acyl-CoA dehydrogenase，Acadm)、烯酰辅酶A水合酶(short chain enoyl-CoA hydratase，Ech)]、脂质过氧化相关因子5-脂氧合酶(5-lipoxygenase，ALOX5);采用原位杂交(in situ hybridization，ISH)检测PPARα在角膜的定位，采用免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)的方法检测炎症细胞的标记物(ED1、PMN);采用试剂盒检测丙二醛(malonaldehyde，MDA)的含量和超氧岐化酶(superoxide dismutase，SOD)的活性。　　结果:第一部分:与正常大鼠相比，在发育过程中，FEOB大鼠角膜角膜透明性降低，出现新生血管，角膜上皮细胞病理性增生、细胞排列紊乱，PAS染色阳性，LSC标志物P63、ABCG2表达下调，角膜特异性角蛋白K12表达下降，K10、K13表达上调，角膜上皮基底层PCNA阳性细胞数显著下降，符合角膜缘干细胞缺乏诊断标准;FEOB大鼠角膜表面油红O染色阳性，说明角膜表面出现脂类沉积，与此同时调控脂类代谢的核受体PPARα表达下调，脂质代谢相关酶类Cpt1α、Acsl、Acadm和Ech的表达也下调;脂质过氧化酶ALOX5表达上调，脂质过氧化产物MDA增多，表明脂类代谢异常，脂质发生过氧化;第二部分:与FEOB+PBS组对照，Fenofibrate处理FEOB大鼠后，角膜未见溃疡，新生血管数量减少，PCNA阳性细胞增多，角蛋白K12表达上调，K10、K13表达下调，说明Fenofibrate可以减轻LSCD病症;处理后油红O染色转为阴性，Fenofibrate作为PPARα的激动剂，可以激活PPARα表达，上调Cpt1α、Acsl、Acadm和Ech的表达，促进脂类β氧化;角膜中的ALOX5和ALOX5ap均表达下调，脂质过氧化的产物MDA含量下降。　　结论:新生大鼠开睑之后，角膜微环境发生改变，角膜表面出现脂类沉积，同时脂类代谢相关调控因子PPARα下调，脂类β氧化被抑制，脂类代谢异常，脂质发生过氧化导致损伤，是引起角膜缘干细胞缺乏的可能关键因素;Fenofibrate通过激活PPARα，促进脂类代

关键词：角膜缘干细胞缺乏发病机制脂质过氧化脂类代谢

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