检索结果-内蒙古大学图书馆

中山大学学报（自然科学版） 2006年第2期45卷 78-82页

作者：孙京臣陈冬妮杨艺峰张勤奋谭佩婵徐兴耀邱宝利华南农业大学动物科学学院广东广州510642 中山大学生命科学院生物防治国家重点实验室

采用在家蚕活体内研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的入侵增殖复制过程,探讨BmCPV的入侵过程和增殖复制机制。实验用健康的三龄起蚕经口接种BmCPV后不同时间取中肠后部固定,制作电镜样品,在透射电子显微镜下观察,结果发现BmCPV病毒被食下1... 详细信息

采用在家蚕活体内研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的入侵增殖复制过程,探讨BmCPV的入侵过程和增殖复制机制。实验用健康的三龄起蚕经口接种BmCPV后不同时间取中肠后部固定,制作电镜样品,在透射电子显微镜下观察,结果发现BmCPV病毒被食下1.5 h后,在中肠上皮组织圆筒形细胞微绒毛之间有病毒粒子存在,6 h后病毒进入微绒毛内,并向细胞质移动,9 h后观察到圆筒形细胞质中有病毒粒子。作者认为病毒入侵是以整个病毒粒子穿越中肠围食膜,吸附并进入微绒毛,感染圆筒形细胞,与前人病毒入侵只是髓核进入细胞,而病毒衣壳仍留在细胞外的推测不同。随后病毒核心物质进入细胞核,启动复制循环。经过隐潜期后病毒复制,在感染24 h后,细胞质中形成病毒发生基质,子代病毒开始形成,逐渐增多。感染48 h后,圆筒形细胞质中的多角体蛋白逐渐沉积并将病毒粒子包埋,最终形成新的多角体。

关键词：家蚕质型多角体病毒入侵复制

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质型多角体病毒与Bt混用防治赤松毛虫

引用

山东林业科技 1999年第6期29卷 31-35页

作者：陈素伟迟仁平徐和光陈汝敏陈庆道封军亭高贵明刘涌涛青岛市林业局森保站 266002 黄岛区农发局平度市森保站

质型多角体病毒(CPV)与Bt混用,可迅速降低赤松毛虫幼虫的取食量,提高杀虫效果。与单用CPV相比,处理后第5天幼虫的排粪量约为单用CPV的2/3～1/2,LT50值最大差3.6天,LT90值最大差6.9天。

关键词：质型多角体病毒 BT 赤松毛虫防治药效

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质型多角体病毒在家蚕体内入侵复制及生理变化研究

质型多角体病毒在家蚕体内入侵复制及生理变化研究

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作者：陈冬妮华南农业大学

学位级别：硕士

该研究采用在家蚕活体内研究家蚕质型多角体病毒（BmCPV）的入侵增殖复制过程,探讨BmCPV的入侵增殖复制机制及对血淋巴蛋白和过氧化物酶（POD）的影响.该研究采用石蜡切片技术,对用来做电镜样品的同一批BmCPV病蚕,同步取样制片,光学显... 详细信息

该研究采用在家蚕活体内研究家蚕质型多角体病毒（BmCPV）的入侵增殖复制过程,探讨BmCPV的入侵增殖复制机制及对血淋巴蛋白和过氧化物酶（POD）的影响.该研究采用石蜡切片技术,对用来做电镜样品的同一批BmCPV病蚕,同步取样制片,光学显微镜下观察家蚕中肠圆筒形细胞组织,作者认为随病毒的入侵复制增殖,病蚕圆筒形细胞出现的病理变化是与病毒复制增殖、多角体形成相关的.该研究应用SDS-PAGE电泳技术,对家蚕感染BmCPV不同时间段后血淋巴的蛋白质进行初步分析,并与健康蚕作比较,发现试验24hr后到96hr这段时间内分子量约为1,000Da的蛋白带,BmCPV病蚕的浓度一直明显低于健康蚕的浓度.另一种分子量约为85,000Da的蛋白带,其变化规律与1,000Da的蛋白带相同.

关键词：家蚕质型多角体病毒生理变化血淋巴蛋白高效液相色谱系统

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新型夹竹桃天蛾质型多角体病毒的分离与初步鉴定

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病毒学报 2016年第5期32卷 619-626页

作者：占智高肖宇宙刘卓荣张稳超王金昌王洪秀关丽梅杨罡黄朝靳亮江西省科学院微生物研究所南昌330029 中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 江西省农业科学院农业应用微生物研究所南昌330200

为了开发新型的夹竹桃天蛾的生物杀虫剂,本文从自然死亡的夹竹桃天蛾幼虫分离到病原微生物。通过电镜观察、FLAC(Full Length Amplification of cDNAs)技术以及病原体的基因组S2和S10片段的同源性分析,初步确认该病原体是一种质型多角... 详细信息

为了开发新型的夹竹桃天蛾的生物杀虫剂,本文从自然死亡的夹竹桃天蛾幼虫分离到病原微生物。通过电镜观察、FLAC(Full Length Amplification of cDNAs)技术以及病原体的基因组S2和S10片段的同源性分析,初步确认该病原体是一种质型多角体病毒(Daphnis nerii Cypovirus,DnCPV))。该病毒基因组电泳分析显示病毒基因组由10条dsRNA组成,大小在89 2bp和(约)4 160bp之间,其条带大小与现有的22类型均不相同。采用FLAC技术克隆了一种该CPV的基因组cDNA,并完成了基因组S2片段和S10片段序列测定工作。测序结果显示,DnCPV基因组S2片段编码RNA聚合酶,S10片段编码多角体蛋白。两者末端保守序列相同,正链5’端和3’端分别存在末端保守序列5’AGUCAAA·AGC3’。基于RNA聚合酶和多角体蛋白的氨基酸序列的系统发育分析显示该质型多角体病毒与19型和5型质型多角体病毒有较近的亲缘关系,但是电泳型上存在明显差异。因此推测该病毒是一种多角体病毒新类型,暂命名为夹竹桃质型多角体病毒南昌株(DnCPV-NC)。

关键词：夹竹桃天蛾质型多角体病毒分离与鉴定 FLAC

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甜菜夜蛾增殖马尾松毛虫质型多角体病毒研究

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应用与环境生物学报 2010年第1期16卷 84-90页

作者：肖宇宙孙修炼汤显春彭辉银病毒学国家重点实验室中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 中国科学院研究生院北京100049

以甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)作为替代宿主增殖马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV)的研究结果表明,DpCPV在甜菜夜蛾体内连续传代3次后得到的DpCPV-Se3与DpCPV具有相同的电泳图谱;多角体和病毒粒子在电镜下观察,未发现形态上的明显变化.... 详细信息

以甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)作为替代宿主增殖马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV)的研究结果表明,DpCPV在甜菜夜蛾体内连续传代3次后得到的DpCPV-Se3与DpCPV具有相同的电泳图谱;多角体和病毒粒子在电镜下观察,未发现形态上的明显变化.生测结果表明,DpCPV-Se3与DpCPV回接松毛虫试验,其半数致死浓度分别为0.92×103 PIB/mL和1.44×103PIB/mL,二者毒力差异不显著.以甜菜夜蛾增殖DpCPV,多角体产量达到2.34×108PIB/头.用DpCPV-Se3和DpCPV的S7和S10片段分别进行同源性序列分析,结果没有明显变化.认为利用甜菜夜蛾增殖DpCPV用于生物防治具有可行性.

关键词：马尾松毛虫质型多角体病毒甜菜夜蛾替代宿主

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质型多角体病毒两个miRNA对家蚕GTP结合核蛋白Ran基因表达及病毒复制的协同调控

质型多角体病毒两个miRNA对家蚕GTP结合核蛋白Ran基因表达及病毒...

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作者：林苏江苏科技大学

学位级别：硕士

家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori Cypovirus,BmCPV)是引发家蚕病害的主要病原之一,十个片段的双链RNA组成了BmCPV的基因组。对于BmCPV感染家蚕的致病机理目前还未研究清楚。研究表明,病毒编码的miRNA在病毒感染宿主和免疫逃逸过程发挥... 详细信息

家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori Cypovirus,BmCPV)是引发家蚕病害的主要病原之一,十个片段的双链RNA组成了BmCPV的基因组。对于BmCPV感染家蚕的致病机理目前还未研究清楚。研究表明,病毒编码的miRNA在病毒感染宿主和免疫逃逸过程发挥重要作用。因此,研究BmCPV编码的miRNA有助于阐明BmCPV与宿主家蚕之间的相互作用机制。我们在前期工作中,采用BmCPV敏感型家蚕品种4008经口接种BmCPV多角体,于接种后72 h解剖取中肠,进行小RNA深度测序,利用生物信息学方法对BmCPV基因组编码的几个候选miRNA进行了靶基因的筛选和预测。本文选取其中的两条候选miRNA进行研究,即由BmCPV基因组第一片段编码的BmCPV-miR-1和由第三片段编码的BmCPV-miR-3,研究其对靶基因的调控作用及对病毒复制增殖的影响。主要结果如下:1、BmCPV感染后家蚕中肠中miRNAs及靶基因的表达趋势。茎环RT-PCR在BmCPV感染的中肠可分别检测到两条miRNABmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3的特异性条带,而且qRT-PCR检测结果表明这两个miRNA在病毒感染的中肠中随时间增加表达量逐渐上升。采用miRanda和targetscan两种靶基因预测软件筛选出家蚕GTP结合核蛋白Ran(GTP-binding nuclear protein Ran,BmRan)为这两个miRNA的共同靶基因,与靶基因的结合位点均位于该靶基因mRNA序列的3’-UTR区域。qRT-PCR定量结果表明BmRan基因的表达量随着感染时间增加而呈现下调表达。2、BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3下调靶基因BmRan的表达。由于BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3均结合于靶基因的3’-UTR,推测其能下调靶基因的表达,且两个miRNA对靶基因的调控具有协同作用。分别构建了BmCPV-miR-1、BmCPV-miR-3和BmRan的慢病毒表达载体,连同三个包装质粒共转染293T细胞,于转染后24 h和48 h收集细胞提取总RNA,实时荧光定量检测BmRan基因的表达量,结果表明BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3均能下调BmRan基因的表达,并且两个miRNA对靶基因表达的负调控作用具有累加效应。进一步化学合成了两个miRNA的mimics和NC(negative control,阴性对照)分别转染BmN细胞,于细胞转染24 h、48 h和72 h后采用qPCR的方法检测靶基因BmRan的表达量,结果表明两个miRNA的mimics均能下调靶基因的表达,且同时转染两个miRNA mimics的细胞中靶基因的下调表达更为明显,进一步证明BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3对BmRan基因的表达起负调控作用,且两个miRNA共同作用时的抑制效果比单个miRNA分别作用时更强。为证明在家蚕体内两个miRNA对靶基因的调控作用,将合成的miRNA mimics、inhibitor和NC通过体腔注射进入蚕体,于注射24 h、48 h、72 h和96 h后解剖家蚕取中肠,提取总RNA,进行反转录,qRT-PCR检测BmRan基因的表达变化,结果表明BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3在正常对照和BmCPV感染的家蚕幼虫均能够负调控靶基因BmRan的表达,且两个miRNA共同作用对靶基因的下调表达更明显。3、BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3促进病毒基因组的复制。将合成的miRNA mimics、inhibitor和NC对病毒感染的家蚕五龄幼虫进行体腔注射,于注射后不同时间点qRT-PCR检测病毒基因组RNA第二、第五和第十片段的复制水平,结果显示,病毒基因组三个片段的复制水平随着感染进展逐渐上升,但与NC注射组相比较,mimics注射组三个基因组片段的复制水平上升更快,而inhibitor注射组三个基因组片段的复制水平明显低于NC注射组。由此推测BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3可能通过抑制靶基因BmRan的表达促进病毒的复制。上述结果表明,由家蚕质型多角体病毒编码的BmCPV-miR-1和BmCPV-miR-3均能负调控靶基因BmRan的表达,并促进BmCPV病毒的复制增殖。GTP结合核蛋白Ran是一个转运蛋白,参与细胞miRNA前体(pre-miRNA)由细胞核向细胞质的转运过程,而宿主的某些miRNA是宿主抵御病毒感染的重要机制。因此推测,BmCPV在侵染家蚕的过程中,可以通过下调BmRan基因的表达,抑制宿主细胞核内pre-miRNA向细胞质的转运,减少了宿主miRNA的生成,为BmCPV的复制创造了有利的细胞内环境,促进了病毒的复制。

关键词：家蚕质型多角体病毒 miRNA 靶基因 BmRan

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家蚕质型多角体病毒荧光定量PCR检测方法的建立

引用

病毒学报 2013年第1期29卷 12-16页

作者：吴萍钱荷英郭锡杰李龙陈涛江苏科技大学蚕业研究所镇江212018 农业部蚕桑产业产品质量监督检验测试中心镇江212018

根据GenBank报道的家蚕质型多角体蛋白基因的保守序列设计特异性引物扩增118bp核苷酸片段,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立家蚕质型多角体病毒的实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct... 详细信息

根据GenBank报道的家蚕质型多角体蛋白基因的保守序列设计特异性引物扩增118bp核苷酸片段,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立家蚕质型多角体病毒的实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值(Y)关系为Y=-3.582lgX+38.748,相关系数R2=0.999,构建的实时荧光定量PCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于家蚕质型多角体病毒病的快速检验及该病的流行性调查研究。

关键词：家蚕质型多角体病毒荧光定量PCR

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利用棉铃虫为宿主增殖松毛虫质型多角体病毒

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林业科学研究 1990年第3期3卷 263-265页

作者：陈昌洁王志贤陶粮刘革中国林业科学研究院林业研究所

应用细胞质多角体病毒JDS-CPV在日本防治赤松毛虫(Dendrolimus spectabilis)以及在我国台湾省防治马尾松毛虫(***)均取得较好的效果。自1983年以来,利用JDS-CPV在我国广东、云南、浙江、安徽等省防治松毛虫,也都具有很好的效果。JDS-CP... 详细信息

应用细胞质多角体病毒JDS-CPV在日本防治赤松毛虫(Dendrolimus spectabilis)以及在我国台湾省防治马尾松毛虫(***)均取得较好的效果。自1983年以来,利用JDS-CPV在我国广东、云南、浙江、安徽等省防治松毛虫,也都具有很好的效果。JDS-CPV的复制,过去主要是利用林间的松毛虫。如何使之成为周期性的连续生产。

关键词：棉铃虫松毛虫质型多角体病毒病毒增殖生物防治宿主

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文山松毛虫质型多角体病毒(DpwCPV)NS5蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

引用

微生物学报 2003年第1期43卷 21-28页

作者：王琼张珈敏文力杨娟胡远扬武汉大学病毒研究所武汉430072

通过对文山松毛虫质型多角体病毒 (DendrolimuspunctatusWenshanensiscytoplasmicpoly hedrosisvirus,DpwCPV)的增殖、纯化 ,获得一株单一类型的质型多角体病毒。提纯的病毒粒子经SDS 热酚法抽提得到基因组dSRNA ,使用低熔点琼脂糖凝胶... 详细信息

通过对文山松毛虫质型多角体病毒 (DendrolimuspunctatusWenshanensiscytoplasmicpoly hedrosisvirus,DpwCPV)的增殖、纯化 ,获得一株单一类型的质型多角体病毒。提纯的病毒粒子经SDS 热酚法抽提得到基因组dSRNA ,使用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离并回收纯化第九片段S9。S9RNA双链经高温变性 ,逆转录合成cDNA双链。根据DpwCPV与BmCPV 1的同源性设计引物 ,将S9进行PCR扩增后 ,克隆到PMD1 8 T载体上。最终获得一个 977bp的序列 ,其中包含一个 963bp的开放阅读框 (ORF)。推测DpwCPVS9基因编码一个 32 0个氨基酸的蛋白 ,分子量约为 35 5 60。

关键词：文山松毛虫质型多角体病毒 NS5蛋白基因 cDNA克隆序列分析

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松毛虫质型多角体病毒的宿主域与交叉感染

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昆虫学报 2004年第1期47卷 117-123页

作者：赵同海陈昌洁徐静张青文中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所北京100091 中国农业大学昆虫学系北京100094

自 1956年从赤松毛虫Dendrolimusspectabilis上首次发现赤松毛虫质型多角体病毒 1型 (D .spectabiliscytovirus 1,DsCPV 1)以来 ,先后从马尾松毛虫D .punctatus、油松毛虫D .tabulaeformis、赤松毛虫、德昌松毛虫D .p .tehchangensis、文山松毛虫D .p .wenshangensis和落叶松毛虫D .superans上发现了质型多角体病毒 (cytoplasmicpolyhedrosisvirus ,CPV)。病毒基因组dsRNA电泳图谱分析表明 ,这些松毛虫CPV的不同分离株均属于质型多角体病毒 1型 (cytovirus 1)。这些松毛虫CPV病毒可以感染鳞翅目 10科 3 5种昆虫 ,其中对多种昆虫具有很高的感染力和良好的杀虫效果 ,可以从中筛选替代宿主生产松毛虫CPV杀虫剂 ,用于害虫生物防治。松毛虫CPV接种某些昆虫后病毒的基因组dsRNA电泳图谱发生了改变。

关键词：松毛虫质型多角体病毒宿主域交叉感染潜伏型病毒

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