检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张维秋扬州大学

学位级别：硕士

全球革兰氏阴性菌喹诺酮类药物耐药不断出现,而传统意义上认为的喹诺酮类药物耐药仅能通过突变或者垂直传播不能完全解释实际存在的高耐药突变率以及喹诺酮类药物耐药与其它抗生素耐药的强烈相关性,近期研究发现的质粒上携带的可水平传... 详细信息

全球革兰氏阴性菌喹诺酮类药物耐药不断出现,而传统意义上认为的喹诺酮类药物耐药仅能通过突变或者垂直传播不能完全解释实际存在的高耐药突变率以及喹诺酮类药物耐药与其它抗生素耐药的强烈相关性,近期研究发现的质粒上携带的可水平传播的喹诺酮类药物耐药基因似乎解释了这种现象。目前已报道了三种不同类型的质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制,并且在不同质粒环境和细菌种属中获得了全球范围内的广泛传播。第一种机制是Qnr介导的,目前已经命名的等位体有QnrA、QnrS、QnrB、QnrC、QnrD,第二种是喹诺酮外排机制,这种流行的染色体编码的耐药机制,也被发现由质粒上的QepA及OqxAB介导。另一种为Aac(6')-Ib-cr,它是氨基糖苷乙酰转移酶的变异体,可以降低结构中含有哌嗪环氨基氮的氟喹诺酮类药物的活性。这些机制虽然仅介导低水平的喹诺酮耐药,但在体外治疗水平的喹诺酮类药物浓度下可有助于筛选出高水平的耐药菌株。为了解质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因在我国的流行传播特点,本研究以大肠杆菌为模式菌,调查质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因在不同源菌株中的流行及分布情况,通过质粒接合实验获得不同质粒介导的喹诺酮类耐药基因阳性接合子并对其喹诺酮类药物的最小抑菌浓度及其它类抗生素的多重耐药表型进行测定,分析PMQR基因对喹诺酮类药物MIC值的影响以及其同时转移的其它类型抗生素耐药基因；对某养殖场qnrS基因进行跟踪监测,以了解基因的流行分布及消长情况,对不同来源qnrS阳性菌株进行遗传关系分析,同时对qnrS阳性质粒大小进行初步鉴定,以了解qnrS基因的传播方式。 1.不同源大肠杆菌分离株质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的流行水平本研究通过PCR和测序方法研究质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因(qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA, oqxAB和aac(6')-Ib-cr)在1993-2010年间不同来源(人源、动物源及环境源)的大肠杆菌中国分离株中的流行及分布情况。在1022株细菌中,共检测到281株PMQR阳性菌株,阳性率为27.5%。PMQR基因在环境源菌株中流行率最高(36.4%),其次为动物源菌株(32.9%)和人源菌株(14.3%)。qnr, qepA, oqxAB和aac(6')-Ib-cr的流行率分别为5.7%(58株),2.6%(27株),20.2%(206株)和4.9%(50株),未检测到qnrC和qnrD阳性菌株。其中qnr基因亚型包括qnrA1(1株),qnrA3(3株),qnrB2(1株),qnrB4(1株),qnrB9(7株),qnrB10(2株),qnrS1(35株)和qnrS2(8株)。首次在鸭源、鹅源菌株中检测到oqxAB基因。在机体内分离株中,PMQR基因在动物源肠道内菌株中的基因检出率为45.6%,显著高于肠道外分离株(23.7%),oqxAB在动物源菌株中的流行率为27.0%(181/671)显著高于人源菌株(5.2%,16/307)(P<0.005)为最流行的PMQR基因。在PMQR阳性菌株中,环境源菌株PMQR基因双阳性或三阳性率(68.8%)显著高于机体内菌株(15.1%),而在分离于动物源的菌株中,肠道内阳性菌株的基因双阳性或三阳性率为24.8%(32/129)显著高于肠道外菌株(6.5%,6/92),说明环境中及动物肠道内菌株可能作为PMQR基因的储存库,在PMQR基因的传播中发挥重要的作用。种系发育种群表明,PMQR基因阳性菌株主要属于A和B1亚群。所有供体菌对美罗培南(碳青霉烯类)均表现敏感,而对其余9大类抗生素可产生耐药。除磷霉素和呋喃妥因这两种抗生素外,其余7类抗生素耐药基因均可随PMQR基因一起转移。PMQR基因的转移可使接合子对喹诺酮类药物的MIC值不同程度的升高。qnr基因对喹诺酮类药物MIC值影响大于其它类型耐药基因,不同作用机制的PMQR基因对喹诺酮MIC值的影响具有加和作用。染色体突变的累加是喹诺酮类药物耐药的主要决定因素,而对于喹乙醇这种喹喔啉类药物来说,染色体突变对它的MIC值影响不大,oqxAB基因是决定其耐药性的主要因素。 ***基因在分离株中的流行传播特点选择qnrS基因为研究对象,通过对某养殖场不同来源样品进行细菌的分离,监测基因的流行水平、分布特点和变化趋势。共采集545份不同来源样品(包括鸡、鸭、鹅、污水、饮用水、泥沙、灰尘及饲料),分离得到379株细菌。各个来源的菌株中均可检出qnrS阳性细菌,该养殖场存在两种亚型的qnrS基因流行。环境源菌株qnrS的阳性率为29.2%,显著高于禽源菌株基因检出率(13.4%),新进的小鸡可迅速从养殖场其它源菌株中获得qnrS阳性基因并且在鸡群中流行。通过对养殖场q

关键词：大肠杆菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药最小抑菌浓度多重耐药表型脉冲场凝胶电泳

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肠杆菌科细菌qnrB介导的喹诺酮类药物耐药机制的研究

肠杆菌科细菌qnrB介导的喹诺酮类药物耐药机制的研究

引用

作者：马晓波四川大学

学位级别：硕士

研究背景及目的：1998年Martinez-Martinez等最早发现在肺炎克雷伯菌UAB1上存在质粒介导的喹诺酮类耐药机制（Plasmid-Mediated Quinolone Resistance，PMQR）。Qnr通过与DNA回旋酶及拓扑异构酶Ⅳ结合而抑制环丙沙星的作用从而导致大肠... 详细信息

研究背景及目的： 1998年Martinez-Martinez等最早发现在肺炎克雷伯菌UAB1上存在质粒介导的喹诺酮类耐药机制（Plasmid-Mediated Quinolone Resistance，PMQR）。Qnr通过与DNA回旋酶及拓扑异构酶Ⅳ结合而抑制环丙沙星的作用从而导致大肠埃希菌J53接合子的耐药性升高。不少研究显示qnr在全球范围内存在。迄今已发现qnr多个亚型，如qnrA、qnrB、qnrS、qnrC。2006年美国学者发现的qnrB是一种全新的基因型，与qnrA1的核苷酸同源性仅为49．5％（氨基酸同源性39．5％），其分布有待研究，来源尚不清楚。目前仅印度、美国、台湾和韩国有关于检出qnrB的报道，qnrB常与产SHV-12、CTX-M-15、IMP-8与DHA等β-内酰胺酶的肠杆菌科细菌密切相关。我们对2005年10月至2006年4月间我院分离的120株头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌进行PCR检测、接合验证等以研究qnrA、qnrB的分布，同时对qnr阳性菌株产SHV或CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）及AmpC酶的情况进行初步分析，从而为PMQR的进一步研究提供实验依据。方法： 1．细菌的鉴定和药敏采用Microscan Walkaway 40?全自动细菌鉴定及药敏分析系统。 2．采用碱裂解变性法(*** plasmid mini Kit)提取细菌质粒DNA，PCR法检测qnr的存在，qnrA和qnrB的引物分别为A-F（5’-ATTTCTCACGCCAGGATTTG）、A-R（5’-GAGATTGGCATTGCTCCAGT）及MFQ1、MFQ2，产物大小分别为413bp、469bp，PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳、成像。每次均设阳性对照和阴性对照，参考菌株Kpneumoniae UAB1（gnrA）及*** *** pMG298（gnrB）由上海华山医院抗生素研究所王明贵教授和美国Lahey Clinic的***教授馈赠。 3．接合实验验证qnr的转移性，受体菌为*** J53（Azide resistant），对接合子的选择采用含100μg╱mL氨苄西林、100μg／mL叠氮钠、8μg╱mL头孢噻肟的胰蛋白酶大豆琼脂（TSA），将接合子分别接种至含与不含0．06μg／mL环丙沙星的TSA平板上观察喹诺酮类药物耐药性的转移。 4．比较受体菌、供体菌及接合子的MIC值，包括多种喹诺酮类药物，采用琼脂对倍稀释法。 ***法分别检测qnrA、qnrB阳性菌株orf513或orf1005的存在。采用引物qnrB／B’-CDS扩增qnrB的全序列，由Invitrogen公司采用ABIPRISMTM 3730XL DNA Analyzer测序，结果于***上进行GenBank+EMBL+DDBJ比对。 6．对来自同一患者的不同菌种进行检测以了解qnr在体内是否存在水平传播。一株鲍曼不动杆菌同时包含qnrA、qnrB，纯化PCR产物后连接到pMD-18T载体上，转化至*** DH5α感受态细胞内，采用抗生素平板筛选单克隆菌落。对经PCR鉴定的阳性克隆，提纯质粒DNA完成测序。 7．采用Nitrocefin法检测供体菌产β-内酰胺酶情况，改良三维实验了解细菌产酶表型，Multiplex-PCR法检测blaSHV、blaCTX-M及多种质粒型AmpC酶的b／a基因（包括DHA、MOX、CIT、ACC、FOX等）。结果： ***的检出：120株肠杆菌科细菌中，分别有37株含qnrA，33株含qnrB，其中13株同时检出qnrA、qnrB；其中肠杆菌属、克雷伯菌属细菌及大肠埃希菌qnr的检出率分别为52．9％、57．1％和50．0％。 2．接合实验：除一株肺炎克雷伯菌外其余56株接合子均能在TSA选择平板上生长；而一株接合子在含环丙沙星的TSA上不能生长。 ***测定：各种抗菌药物对接合子的MIC值较受体菌均有不同程度提高。仅加替沙星、头孢吡肟对qnr阳性菌株的抗菌活性相对较好。 ***513及orf1005检测：qnrA、qnrB阳性菌株中各有7株检测到Drf513或orf1005的存在。 ***全序列扩增：18株细菌可扩增出681bp或645bp的全序列片段。部分菌株的qnrB序列与qnrB1（DQ351241）完全一致，但4株细菌的qnrB序列与qnrB3（DQ303920）相比，存在3个

关键词：质粒介导的喹诺酮类药物耐药 qnrB 分子机制 bla基因肠杆菌科细菌水平传播

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肠杆菌科细菌喹诺酮耐药基因qnrB的研究

引用

中国抗生素杂志 2009年第2期34卷 114-119页

作者：马晓波吕晓菊陈慧莉高燕渝母丽媛俞汝佳杜蓉牛菲菲四川大学华西医院感染性疾病中心成都610041

目的对2005年10月～2006年4月临床分离的120株肠杆菌科细菌检测qnrB的分布,同时研究qnr阳性菌株与blaSHV、blaCTX-M或质粒型AmpCβ-内酰胺酶基因的关系,为进一步研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制(PM QR)提供实验依据。方法采用碱裂解变... 详细信息

目的对2005年10月～2006年4月临床分离的120株肠杆菌科细菌检测qnrB的分布,同时研究qnr阳性菌株与blaSHV、blaCTX-M或质粒型AmpCβ-内酰胺酶基因的关系,为进一步研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制(PM QR)提供实验依据。方法采用碱裂解变性法提纯质粒DNA,PCR法检测qnrA和qnrB的存在,接合实验验证qnr的转移性。扩增qnrB全序列、测序。对所有qnr阳性菌株,采用nitrocefin法检测qnr阳性菌产β-内酰胺酶情况,多重PCR法检测blaSHV、blaCTX-M及多种质粒型AmpCβ-内酰胺酶基因。结果120株肠杆菌科细菌中,qnrA和qnrB的检出率分别为30.8%与27.5%,其中13株细菌同时检出qnrA和qnrB;肠杆菌属、克雷伯菌属细菌及大肠埃希菌qnr的检出率分别为52.9%、59.3%和50.0%。17株细菌可扩增出681bp的全序列片段。测序结果显示,部分菌株包含qnrB1;另有4株细菌的qnrB序列相同,但与qnrB3相比存在3个位点核苷酸序列突变(201位A→T,271位T→G,498位G→A)而导致编码蛋白的氨基酸存在2个位点差异,为新的qnrB亚型(qnrB6),GenBank注册号为:EF520349。所有qnr阳性菌均可使nitrocefin纸片变红色。qnr阳性菌中,49株(89.1%)包含blaSHV或blaCTX-M;约70.0%可检测到质粒型AmpC相关的β-内酰胺酶基因,分别有18和16株细菌可扩增到blaDHA及blaEBC。结论我院临床存在qnr阳性菌株的流行,发现一种新的qnrB亚型(qnrB6)。

关键词：质粒介导的喹诺酮类药物耐药 qnrB bla基因水平传播

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尿源产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌质粒介导氟喹诺酮类耐药性研究

尿源产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌质粒介导氟喹诺酮类耐药性研究

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中国药理学会第十一届全国化疗药理学术研讨会

作者：陈科帆吕晓菊四川大学华西医院感染性疾病中心

目的收集2010年6月至2011年-6月四川大学华西医院临床分离自尿培养的非重复大肠埃希菌140株,筛选[8-9]出产CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株46株进行PCR扩增、测序和MIC测定等,以研究qnrA、qnrB以及qnrS在我院的流行情况和耐药特征,... 详细信息

目的收集2010年6月至2011年-6月四川大学华西医院临床分离自尿培养的非重复大肠埃希菌140株,筛选[8-9]出产CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株46株进行PCR扩增、测序和MIC测定等,以研究qnrA、qnrB以及qnrS在我院的流行情况和耐药特征,为控制产ESBLs细菌感染提供实验依据方法采用琼脂稀释法测定喹诺酮类及氨基糖苷类药物对46株产ESBLs细菌的MIC采用煮沸法提取细菌DNA,PCR法检测qnrA、qnrB以及qmrS的存在,产物经1%琼脂糖凝胶电泳、成像分析。结果 46株产CTX-M型大肠埃希菌对环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率分别为26.1%、19.6%和1 3.0%,对庆大霉素和阿米卡星的耐药率分别为60.9%和43.5%。46株临床分离的产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌,检出2株含qnrB(4.3%),未检出qnrA和qnrS 2株qnrB阳性菌株均与Genbank中qnrB2(注册号HM125702)的基因序列完全一致。结论该院临床分离自尿培养的产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌中发现有qnrB的存在。临床分离自尿培养的产CTX-M型大肠埃希qnrB阳性菌株对喹诺酮类以及氨基糖苷类药物耐药性严重,不宜选择喹诺酮类药物及氨基糖苷类药物治疗产ESBL且qnr基因阳性的大肠埃希菌尿路感染。

关键词：质粒介导的喹诺酮类药物耐药 qnr 超广谱β内酰胺酶 CTX-M 大肠埃希菌

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