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南方医科大学学报 2008年第1期28卷 30-33页

作者：王卫东蒋立新徐江平陆兵勋南方医科大学南方医院神经内科广东广州510515 国家863计划生物领域病毒基因载体研发基地北京100176

目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进... 详细信息

目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功。靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2最为明显。结论成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒。

关键词： RNA干扰质粒表达载体短发卡样RNA hVEGF165基因

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中华血液学杂志 2006年第8期27卷 552-554页

作者：王海嵘顾春红钟济华王婷韩洁英陈芳源欧阳仁荣上海交通大学医学院附属仁济医院血液科、上海血液学研究所 200001

硫化砷作用后急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡相关基因PNAS-2（apoptosis—related protein）表达显著降低。Busch等认为PANS-2基因与细胞增殖有关。我们前期的研究发现硫化砷作用后的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者白血病细胞... 详细信息

硫化砷作用后急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡相关基因PNAS-2（apoptosis—related protein）表达显著降低。Busch等认为PANS-2基因与细胞增殖有关。我们前期的研究发现硫化砷作用后的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者白血病细胞及NB4细胞PNAS-2基因表达特异性下调，且呈时间依赖性而K562和U937细胞则无此较应。为了进一步研究封闭该基因后对细胞凋亡的影响，我们扩增其5’端未知序列，构建了PNAS-2 siRNA质粒表达载体并转染U937细胞，筛选、纯化转染细胞后检测U937细胞凋亡的变化以初步了解PNAS-2的作用。

关键词：细胞凋亡相关基因质粒表达载体转染细胞筛选方法早幼粒细胞白血病细胞系急性早幼粒细胞白血病 U937细胞凋亡硫化砷作用 NB4细胞鉴定

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ATX-shRNA质粒表达载体的构建及其对肝癌细胞体外增殖和运动能力的影响

ATX-shRNA质粒表达载体的构建及其对肝癌细胞体外增殖和运动能力...

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作者：谢应海徐州医学院

学位级别：硕士

目的：构建ATX基因短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体，研究其对人MHCC-97肝癌细胞ATx基因表达、增殖和运动能力的抑制作用，探索RNAi用于肝癌治疗的新途径。方法： 1.设计合成含有短发夹结构的ATX-shRNA对应模板DNA序列两对及... 详细信息

目的：构建ATX基因短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体，研究其对人MHCC-97肝癌细胞ATx基因表达、增殖和运动能力的抑制作用，探索RNAi用于肝癌治疗的新途径。方法： 1.设计合成含有短发夹结构的ATX-shRNA对应模板DNA序列两对及随机阴性对照，煺火处理后克隆至pSliencer 2.1-U6质粒，构建重组质粒pSlienc-er-ATX。 2.培养人肝癌MHCC-97细胞株，在阳离子脂质体的介导下将pSliencer-ATX 转染人肝癌MHCC-97细胞。 3.实验分空白组、脂质体组、阴性对照组、实验组。 4.分别于转染后1、2、3、4、5、7天收集细胞。 ***-PCR检测 ATX mRNA的表达。 ***方法检测细胞增殖。 8.肿瘤细胞运动实验检测肝癌细胞运动能力的变化。结果： 1.酶切及测序证实质粒表达载体pSliencer-ATx构建成功。 ***-shRNA可显著抑制人Ml-Ice-97肝癌细胞ATX mRNA的表达，半定量RT-PCR检测显示ATXmRNA的表达在转染后第一天开始降低，第四天抑制作用最明显，第五天抑制作用减弱。检测显示shRNA转染肝癌细胞第四天ATX mRNA的表达较空白组受到明显抑制[73.7±4.5]％(P<0.01)。 3抑制细胞的增殖：与空白对照相比，转染ATX-shRNA后显著抑制肝癌细胞的增殖[63.3±5.3]％(P<0.05)。 4．细胞的侵袭力减弱：与空白对照相比，转染ATX-shRNA后肝癌细胞穿过人工基底膜的个数明显减少[(98±10)vs(222±12)](P<0.01)，表明侵袭力明显减弱。 5．细胞运动能力减弱：与空白对照相比，转染ATX-shRNA后肝癌细胞穿过Tran-swell小室滤膜的个数明显减少[(18l±6)vs(379±7)](P<0.01)，表明运动能力明显减弱。 ***-shRNA转染肿瘤细胞诱导ATX基因沉默存在时间效应，随时间延长其效果减弱，其抑制作用时间在第四天最强，第五天开始减弱。结论：成功构建ATX-shRNA质粒表达载体，它能特异性抑制人MHCC-97肝癌细胞ATX基因的表达，抑制肿瘤细胞增殖、转移，阻断肿瘤细胞运动，为肝癌的基因治疗打下基础。

关键词：肝癌 ATX基因肿瘤细胞细胞增殖细胞运动基因治疗质粒表达载体

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一种提高类球红细菌辅酶Q₁₀产量的质粒表达载体的构建方法

一种提高类球红细菌辅酶Q<Sub>10</Sub>产量的质粒表达载体的构建...

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作者：赵志平王娟聂鑫唐阔 643000 四川省自贡市汇兴路学苑街180号

本发明公开了一种提高类球红细菌辅酶Q10产量的质粒表达载体的构建方法。ubiG、ubiE和dxsA是类球红细菌Rhodobacter sphaeroides辅酶Q10合成途径中三个重要的催化酶基因，分别编码3‑去甲基泛醌‑9 3‑甲基转移酶、甲基萘醌甲基转移酶和1‑... 详细信息

标准号: CN107574174A

本发明公开了一种提高类球红细菌辅酶Q₁₀产量的质粒表达载体的构建方法。ubiG、ubiE和dxsA是类球红细菌Rhodobacter sphaeroides辅酶Q₁₀合成途径中三个重要的催化酶基因，分别编码3‑去甲基泛醌‑9 3‑甲基转移酶、甲基萘醌甲基转移酶和1‑脱氧‑D‑木酮糖‑5‑磷酸合成酶。利用PCR技术扩增类球红细菌辅酶Q₁₀生物合成途径中三个重要的催化酶基因ubiG、ubiE和dxsA，再将三个基因克隆到质粒DNA表达载体pRKpuf，获得同时过量表达ubiG、ubiE和dxsA的表达载体pRKpuf‑ubiE‑ubiG‑dxsA。通过大肠杆菌S17‑1将表达载体转化到类球红细菌中获得同时过量表达ubiG、ubiE和dxsA基因的工程菌，最后利用工程菌发酵生产辅酶Q₁₀。该发明提供了一种增加辅酶Q₁₀产量的方法，能将辅酶Q₁₀的产量提高约80％，适合辅酶Q₁₀大规模工业化生产。

关键词：辅酶类球红细菌表达载体甲基转移酶过量表达催化酶工程菌基因大规模工业化生产生物合成途径质粒表达载体大肠杆菌磷酸合成酶合成途径基因克隆甲基萘醌质粒DNA 木酮糖去甲基泛醌构建扩增脱氧发酵转化生产

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一种基于Tac启动子的质粒表达载体构建及其用途

一种基于Tac启动子的质粒表达载体构建及其用途

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作者：伍树明陈晓刘永江张海江薛俊莲王学红高文双张瑞霞姜绪林沈迩萃王建英 100176 北京市大兴区北京经济技术开发区荣昌东街7号隆盛工业园A2幢201-202

本发明涉及一种基于Tac启动子的质粒表达载体改造和构建方法，其中替换其SD序列并进一步敲除标签序列，如此构建的表达载体在重组外源蛋白表达中的应用，特别是在人乳头瘤病毒L1抗原蛋白表达及其L1抗原蛋白表达产物在预防宫颈癌中的用途。

标准号: CN116200416B

关键词：构建蛋白表达产物人乳头瘤病毒质粒表达载体重组外源蛋白标签序列表达载体蛋白表达宫颈癌敲除替换预防应用改造

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一种基于Tac启动子的质粒表达载体构建及其用途

一种基于Tac启动子的质粒表达载体构建及其用途

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作者：伍树明陈晓刘永江张海江薛俊莲王学红高文双张瑞霞姜绪林沈迩萃王建英 100176 北京市大兴区北京经济技术开发区荣昌东街7号隆盛工业园A2幢201-202

标准号: CN116200416A

关键词：构建蛋白表达产物人乳头瘤病毒质粒表达载体重组外源蛋白标签序列表达载体蛋白表达宫颈癌敲除替换预防应用改造

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一种提高类球红细菌辅酶Q10产量的质粒表达载体的构建方法

一种提高类球红细菌辅酶Q10产量的质粒表达载体的构建方法

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作者：赵志平王娟聂鑫唐阔 643000 四川省自贡市汇兴路学苑街180号

标准号: CN107574174B

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一种用于编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌内溶素的线性DNA、线性RNA及其质粒表达载体

一种用于编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌内溶素的线性DNA、线性RNA...

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作者：高璐曾晶蒋凯田成立 100094 北京市海淀区永腾北路9号院18号楼1层101

本发明提供一种用于编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌内溶素的线性DNA、线性RNA及其质粒表达载体，为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的治疗和预防提供了一种治疗方案。

标准号: CN117965624A

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌质粒表达载体线性DNA 治疗预防

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一种提高类球红细菌类胡萝卜素产量的质粒表达载体的构建方法

一种提高类球红细菌类胡萝卜素产量的质粒表达载体的构建方法

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作者：赵志平唐艺聂鑫余瑶唐阔 643000 四川省自贡市汇兴路学苑街180号

本发明公开了一种提高类球红细菌类胡萝卜素产量的质粒表达载体的构建方法。利用PCR技术扩增类球红细菌Rhodobacter sphaeroides类胡萝卜素合成途径中的八氢番茄红素合成酶基因crtB，构建过量表达质粒DNA载体pRKpuf‑crtB，利用接合转移... 详细信息

标准号: CN107746855A

本发明公开了一种提高类球红细菌类胡萝卜素产量的质粒表达载体的构建方法。利用PCR技术扩增类球红细菌Rhodobacter sphaeroides类胡萝卜素合成途径中的八氢番茄红素合成酶基因crtB，构建过量表达质粒DNA载体pRKpuf‑crtB，利用接合转移技术将质粒DNA表达载体转化到类球红细菌中获得过量表达crtB的基因工程菌，诱导表达crtB提高类球红细菌发酵生产类胡萝卜素的产量。本发明提供了一种增加类胡萝卜素产量的方法，能将类胡萝卜素的产量提高约284.0％，适合类胡萝卜素大规模工业化生产。

关键词：类胡萝卜素类球红细菌过量表达构建八氢番茄红素合成酶基因crtB 大规模工业化生产质粒表达载体质粒DNA载体基因工程菌表达载体合成途径诱导表达质粒DNA 接合扩增发酵转化生产

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杜氏盐藻荧光素酶基因表达载体的构建

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郑州大学学报（医学版） 2004年第1期39卷 29-31页

作者：柴玉荣王天云侯桂琴侯卫红谢华袁保梅王建民薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

目的 :构建盐藻荧光素酶基因表达载体。方法 :分别用合适的限制性内切酶消化载体pGL3-Enhancervector、pD -B、pMD -CA和pMD -rbcS ,胶回收适当的片段 ,T4DNA连接酶过夜连接 ,转化宿主菌大肠杆菌JM1 0 9。挑取阳性克隆 ,提取质粒DNA ,... 详细信息

目的 :构建盐藻荧光素酶基因表达载体。方法 :分别用合适的限制性内切酶消化载体pGL3-Enhancervector、pD -B、pMD -CA和pMD -rbcS ,胶回收适当的片段 ,T4DNA连接酶过夜连接 ,转化宿主菌大肠杆菌JM1 0 9。挑取阳性克隆 ,提取质粒DNA ,酶切鉴定。结果 :得到含盐藻自身启动子碳酸酐酶 (CA)基因启动子、双倍重复碳酸酐酶 (DCA)基因启动子和来自衣藻的 1 ,5二磷酸核酮糖羧化酶 /加氧酶小亚基 (rbcS)基因启动子 ,以及荧光素酶(Luc)基因为外源基因的 3个盐藻表达载体。结论 :构建了 3个杜氏盐藻荧光素酶表达载体。

关键词：杜氏盐藻荧光素酶基因质粒表达载体

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