检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张波中国科学技术大学

学位级别：博士

随着创新药物研发进程的不断加深,常规药物靶点的开发已趋于饱和。这对新药研发造成了巨大的阻碍,导致一些疾病已经出现了无药可用的困境。常规的膜蛋白药物靶点主要集中在胞内区、胞外区或膜蛋白内腔,而跨膜域因为通常具有结构不明确... 详细信息

随着创新药物研发进程的不断加深,常规药物靶点的开发已趋于饱和。这对新药研发造成了巨大的阻碍,导致一些疾病已经出现了无药可用的困境。常规的膜蛋白药物靶点主要集中在胞内区、胞外区或膜蛋白内腔,而跨膜域因为通常具有结构不明确和高度疏水等特点,普遍被认为是难以成药的。为了扩充新的药物靶点,本论文将关注点集中在极具挑战性的跨膜结构域蛋白-蛋白相互作用界面上。潜伏膜蛋白1(LMP-1)作为Epstein-Barr(EB)病毒的致癌蛋白,是一个六次跨膜蛋白。其跨膜域在脂筏上寡聚化会引发下游相关信号通路的激活,从而导致癌细胞的转移和永生化。前期研究已经揭示了 LMP-1的第五跨膜结构域(TMD5)是导致LMP-1寡聚化的关键因素,但是其作用机制尚不明确。因此,本论文以EB病毒LMP-1的第五跨膜域为对象研究跨膜结构域的寡聚化机制,并在此基础上以膜蛋白跨膜结构域为靶点开展了靶向跨膜蛋白-蛋白相互作用(PPIs)的调节剂发现研究。具体研究内容如下: 1.通过计算模拟和wet-lab实验研究TMD5第150位点的天冬氨酸D150如何调控TMD5的寡聚化。研究结果表明D150质子化可稳定TMD5三聚体的存在,而非质子化的D150会导致TMD5在膜中产生弯曲,从而扰动三聚体的稳定结构。D150突变实验进一步证明了 D150的质子化对TMD5三聚化的重要性。鉴于D150对于TMD5三聚化的重要作用,靶向D150或保留D150可以分别作为设计靶向跨膜域寡聚化的小分子或多肽探针的初始原则。 2.鉴于质子化的D150具有一定的亲水性,不利于单体TMD5在膜中的稳定存在,而三聚化的TMD5必须由质子化的D150维持,因此三聚化的过程中必然存在D150质子化状态的改变。因此,我们通过分子动力学模拟和恒定pH分子动力学模拟进一步研究了 TMD5三聚化过程中D150的pKa变化。研究发现相对于在水溶液中,D150的pKa在膜环境中会趋向7(中性pH)。当TMD5为单体时,脂质双层膜的微环境是影响其pKa变化的主要因素,但当TMD5相互靠近时,PPIs就变成了影响其pKa的主要因素。本部分阐明了 TMD5螺旋在其寡聚化过程中的行为以及D150的pKa随TMD5三聚化的变化过程,从原子层面表明了 D150如何通过质子化状态的改变调控TMD5三聚化的动态过程。因此,D150可以作为TMD5寡聚化调节剂的关键作用残基进行先导化合物的发现研究。 3.基于以上LMP-1的TMD5寡聚机制及小分子抑制剂的前期筛选研究,本部分设计并合成了一系列pentamidine(潘他密汀)类似物,通过生物活性测试发现化合物2的IC50为0.6±0.3 μM,相对于先导化合物pentamidine(IC50=9.1 ±0.6 μM)其活性提高了约15倍。分子动力学模拟研究从原子层面阐明了小分子化合物与TMD5相互作用的机制:化合物是以一端脒基与D150作用,而另一端脒基与脂质极性头部基团相互作用的方式来抑制TMD5寡聚化的。Linker长度为7个原子,且linker类型为二酰胺的化合物不仅不会导致TMD5螺旋在膜中弯曲,还具备优良的膜渗透性,因而更易与TMD5结合。这项研究为合理设计靶向跨膜PPIs的小分子抑制剂提供了范例。 4.鉴于有机小分子通常存在毒性大、代谢快以及靶向性差等缺陷,我们进一步进行了多肽抑制剂的设计。鉴于D150对LMP-1的TMD5寡聚化具有重要作用,利用Rosetta理性设计了保留关键残基D150并可与TMD5寡聚化的多肽anti-TMD5。研究发现一分子anti-TMD5与两分子野生型TMD5形成的异源三聚体较TMD5同源三聚体更加稳定,具备破坏TMD5三聚化的潜力。随后通过生物物理测试和细胞实验发现其不但破坏TMD5三聚体结构,还可抑制EB病毒阳性淋巴瘤细胞LMP-1寡聚化诱导的NF-κB活性,表明anti-TMD5可抑制全长LMP-1的寡聚化。综上所述,本论文针对传统认为难以成药的跨膜结构域蛋白-蛋白相互作用界面,选取LMP-1的第五跨膜结构域作为研究对象,通过计算模拟从原子层面阐明了关键残基D150的特性和其对寡聚化的影响,以及TMD5螺旋在寡聚化过程中的行为和寡聚化机制,并在此指导下设计评估了理性设计的小分子抑制剂和多肽抑制剂的作用效果,为设计靶向调控LMP-1 TMD5三聚化的抑制剂提供了指导。本研究为以跨膜域蛋白-蛋白相互作用为靶点的药物设计研究提供了一种范式,并为理性设计靶向跨膜域PPIs的小分子及多肽抑制剂提供了范例。

关键词：跨膜结构域蛋白-蛋白相互作用潜伏膜蛋白1 寡聚化小分子抑制剂多肽理性设计

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GPCR二聚体跨膜结构域界面在激活过程中的构象变化研究

GPCR二聚体跨膜结构域界面在激活过程中的构象变化研究

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作者：薛礼华中科技大学

学位级别：博士

G蛋白偶联受体（GPCR）是细胞膜上重要的一类感受器蛋白，可以介导细胞响应多种内源和外源的信号分子，进而引起细胞内一系列生化反应而参与调控众多生理过程，在多种疾病中有重要的作用。GPCR的特征结构是7次跨膜螺旋结构，因此这类受... 详细信息

G蛋白偶联受体（GPCR）是细胞膜上重要的一类感受器蛋白，可以介导细胞响应多种内源和外源的信号分子，进而引起细胞内一系列生化反应而参与调控众多生理过程，在多种疾病中有重要的作用。GPCR的特征结构是7次跨膜螺旋结构，因此这类受体又名7次跨膜受体。有些GPCR可以通过单体行使生理功能，但是越来越多的研究发现GPCR的二聚化/寡聚化在受体功能的调节、外部信号整合方面起着重要的作用。mGluR2受体属于GPCR C家族成员，是代谢型谷氨酸受体家族（mGluRs）中第二组的成员之一。mGluR2在体内由两个同源单体形成组成型同源二聚体行使生理功能。对于GPCR C家族成员，受体二聚体的结构以及在激活过程中二聚体的构象变化还是未知的。　　在本研究中，我们利用半胱氨酸定点突变，CuP催化半胱氨酸交联和基于SNAP-tag的标记技术在HEK293细胞过表达体系中检测了mGluR2二聚体的交联，发现mGluR2同源二聚体的相互作用界面由跨膜螺旋TM4，5，6组成。我们进一步发现，受体结合激动剂（agonist）和正向变构剂（PAM）的时候，TM4，5的交联率下降，而TM6的交联率上升，说明由于结合了激动剂和正向变构剂导致mGluR2二聚体处于了一种激活状态，在这种状态下，mGluR2同源二聚体的相互作用界面是由TM6-TM6组成的。而TM4，5界面更多地出现在处于非激活的状态的受体中。　　当我们将mGluR2二聚体的TM4，5交联固定在相互作用界面的时候，mGluR2不能被激动剂（LY354740）激活。但是PAM（BINA）还是能够发挥正向变构剂的作用，其可以在低浓度的激动剂存在的情况下激活受体。然而通过基于时间分辨的荧光能量共振转移技术（tr-FRET）发展而来的sensor技术的检测，发现TM4，5被固定在二聚体界面之后，受体的VFT还可以被激动剂诱导关闭，但是观察不到结合PAM而导致的受体胞外区VFT的关闭。另一方面，当我们将mGluR2二聚体的TM6通过交联固定在二聚体界面的时候，受体表现出很强的组成型活性，说明TM6的相互靠近是激活受体的充分必要条件。而通过sensor技术检测到，TM6的交联会导致胞外VFT的关闭。这些进一步证明了mGluR2同源二聚体的相互作用界面在激活过程中会从TM4，5界面转向TM6界面，同时也证明了受体的构象变化是整体协调发生的，胞外VFT的关闭可以带动两个HD区的相对转动，而HD区的相对运动也会导致胞外VFT的关闭。　　我们还发现受体在激活过程中，由于二聚体之间是TM6作为界面，TM4转向二聚体外侧，进而可以和另外一个二聚体的TM4相互交联形成四聚体。虽然mGluR2在体内是严格的同源二聚体，但是我们还是利用人工诱导的方法获得了mGluR2四聚体，TM4正在这个四聚体中是二聚体之间的界面。　　本研究进一步揭示了C族GPCR二聚体激活的机制，从构象的层面研究了GPCR二聚体中两个亚基功能上的协同效应，同时提出了膜上的GPCR之间可以通过异源寡聚化的形式进行信号整合的新思路。

关键词： G蛋白偶联受体 mGluR2二聚体跨膜结构域生理功能半胱氨酸定点突变协同效应

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拟南芥COPT蛋白跨膜结构域在铜稳态平衡中的功能研究

拟南芥COPT蛋白跨膜结构域在铜稳态平衡中的功能研究

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作者：王惠天津师范大学

学位级别：硕士

铜(Cu)是植物必需的微量元素，作为多种酶的辅因子参与植物的许多生理生化反应。Cu缺乏和Cu过量均会影响植物正常的生长发育，因此植物进化出精妙复杂的调控网络来严格控制植物体内的Cu含量。植物Cu转运蛋白COPT(copper transporter)家... 详细信息

铜(Cu)是植物必需的微量元素，作为多种酶的辅因子参与植物的许多生理生化反应。Cu缺乏和Cu过量均会影响植物正常的生长发育，因此植物进化出精妙复杂的调控网络来严格控制植物体内的Cu含量。植物Cu转运蛋白COPT(copper transporter)家族成员具有三个跨膜结构域，其中包含有多个能够与金属离子结合的氨基酸，被认为在COPT的Cu吸收和转运中发挥重要作用。COPT1、COPT2和COPT6定位于细胞膜上，主要负责将Cu转运到细胞内。本论文主要对COPT1和COPT2的跨膜结构域在Cu吸收过程中的功能进行研究。研究结果如下：　　对COPT1和COPT2跨膜结构域中被预测的能够与铜结合的氨基酸位点进行点突变后转化到酵母突变体ctr1Δctr3Δ，对其生长情况进行观察发现，当将COPT1跨膜结构域中的Met、Cys和His突变为其它氨基酸(Ala、Leu、Met)后，与COPT1WT转化子相比，相应转化子的生长均受到不同程度的影响。其中，在正常的YPEG培养基上，转化COPT1(M125A)、COPT1(H139L)和COPT1(H139M)的酵母均不能正常生长，向培养基中添加5-100μM Cu后，其生长缺陷的表型得到不同程度的恢复，表明Met125和His139对正常条件下COPT1的Cu吸收和转运功能是必需的。在正常的YPEG培养基上，转化COPT1(M66A)、COPT1(C70A)、COPT1(M121A)、COPT1(H86L)的酵母均能正常生长，而在Cu缺乏的培养基上，这些酵母转化子均不能正常生长，表明这些位点在Cu缺乏时COPT1的Cu吸收和转运功能中发挥重要作用。无论在正常、Cu缺乏和Cu过量条件下，转化COPT1(M144A)的酵母均能正常生长。然而Cu含量测定结果显示，COPT1(M144A)转化子中的Cu含量低于COPT1WT转化子的，表明Met144在COPT1向细胞内转运充足Cu方面起促进作用。类似地，我们将COPT2跨膜结构域中的Met、Cys和His进行突变，通过酵母功能互补实验研究了这些位点在COPT1功能发挥过程中的作用。实验结果显示Met111对在正常条件下COPT2的Cu吸收和转运过程中发挥重要作用。Met54、Cys58和Met107在Cu缺乏时COPT2的Cu吸收和转运过程中发挥功能。His74则可能在COPT2吸收足量的Cu方面起作用。另外，双分子荧光互补实验表明COPT1的Met125和COPT2的Met111突变并不能够影响其亚细胞定位模式及COPT1和COPT2间的相互作用。　　通过拟南芥杂交技术，获得copt1-1copt2-1copt6的纯合株系，对其表型进行观察后发现，copt1-1copt2-1copt6对Cu缺乏很敏感，根生长受到明显抑制，而在Cu处理下，copt1-1copt2-1copt6的生长优于copt1-1copt2-1和WT，如植株叶片较大，无明显萎黄。Cu含量测定结果显示，正常条件下，copt1-1copt2-1copt6根和地上部的Cu含量均低于copt1-1copt2-1和WT。Cu处理下，copt1-1copt2-1copt6根部Cu含量与copt1-1copt2-1无显著差异，但其明显低于WT的，为WT的67%。copt1-1copt2-1copt6的获得为进一步研究COPT1、COPT2和COPT6的确切功能提供了有用的材料。

关键词：植物生长铜转运蛋白跨膜结构域铜吸收

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五羟色胺2A受体二聚体跨膜结构域界面研究

五羟色胺2A受体二聚体跨膜结构域界面研究

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作者：何倩文华中科技大学

学位级别：硕士

G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor，GPCR）是细胞膜上一类具有7次跨膜螺旋结构的重要的蛋白感受器，可以介导细胞响应多种信号分子。它们在各种生理和病理过程中起着重要的作用。五羟色胺2A受体（serotonin2A receptor，5-HT... 详细信息

G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor，GPCR）是细胞膜上一类具有7次跨膜螺旋结构的重要的蛋白感受器，可以介导细胞响应多种信号分子。它们在各种生理和病理过程中起着重要的作用。五羟色胺2A受体（serotonin2A receptor，5-HT2AR）属于A族GPCR。它广泛分布于中枢神经系统中，既可以介导突触传递兴奋效应也可以介导突触传递抑制效应。其结构和功能异常与许多疾病有关，包括精神分裂症、抑郁、焦虑等，是治疗多种神经系统疾病和精神疾病的药物靶点。研究表明一些GPCR可以通过单体行使功能，也可以通过二聚体或者寡聚体行使功能与整合信号，其作用界面是潜在的药物干预位点。但是针对5-HT2AR二聚体的结构以及不同构象与功能的关联研究并不清楚。　　在本课题中，结合Halo-tag标记技术、半胱氨酸定点突变技术以及CuP诱导半胱氨酸交联技术在HEK293细胞过表达体系中对5-HT2AR作用界面进行了研究。首先，我们确定了5-HT2AR同源二聚体在静息态时其跨膜区的相互作用界面是由跨膜螺旋TM1、4、5组成。由于螺旋之间跨度很大，我们推测为2个独立的界面，一个界面由TM1组成另一个是由TM4、5组成。其次，我们发现受体结合激动剂时TM1、4、5的交联率下降，而结合拮抗剂时TM1、4交联率回复上升而TM5交联率却继续下降，说明当拮抗剂使受体处于非激活状态时，5-HT2AR同源二聚体跨膜区的相互作用界面是由跨膜螺旋TM1、4组成的，而TM5-TM5的相互作用界面对配体敏感，并不倾向于参与受体在激活态或非激活态的二聚体界面组成。当我们将5-HT2AR二聚体的TM1、4固定在相互作用界面时对其进行功能检测，发现5-HT2AR可以被其激动剂激活但是激活程度显著降低。综合表明5-HT2AR处于非激活态时其二聚体跨膜区的界面主要是TM1、TM4。　　最后，在5-HT2AR二聚体界面结构基础上，我们通过做半胱氨酸定点双突变同时固定TM1、4或者TM1、5或者TM4、5为受体跨膜区相互作用的界面，结果显示不仅有单体、二聚体，还会出现寡聚体，并且TM1、4、5都是5-HT2AR寡聚体的单体间相互作用的界面。根据实验结果我们也推断出5-HT2AR在静息状态下在细胞膜上的排列模式。　　综上所述，本研究揭示了5-HT2AR二聚体跨膜结构域在受体处于非激活状态时的构象，并且在人工诱导下发现了寡聚体的单体间相互作用界面。研究结果将为针对5-HT2AR药物设计和开发提供理论依据，同时为其他A族的GPCR作用界面研究提供参考模型。

关键词：五羟色胺2A受体二聚体跨膜结构域寡聚体 G蛋白偶联受体

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EGFR跨膜结构域二聚化位点对ERBB家族磷酸化影响的机制研究

EGFR跨膜结构域二聚化位点对ERBB家族磷酸化影响的机制研究

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作者：乔森楠吉林大学

学位级别：硕士

EGFR作为第一个被发现的受体酪氨酸激酶,在生物体中,主要负责调节细胞增殖、存活以及分化。同时作为最经典的药物靶点,EGFR代表着一个靶向治疗的时代,EGFR靶向药物深刻地改变了肿瘤的治疗方式,给患者带来了极大的益处。目前,虽然关于EGF... 详细信息

EGFR作为第一个被发现的受体酪氨酸激酶,在生物体中,主要负责调节细胞增殖、存活以及分化。同时作为最经典的药物靶点,EGFR代表着一个靶向治疗的时代,EGFR靶向药物深刻地改变了肿瘤的治疗方式,给患者带来了极大的益处。目前,虽然关于EGFR相关信号通路及作用机制的研究已经较为成熟,针对EGFR及其突变研究开发的靶向药物也在癌症的临床治疗中得到了广泛的应用,并且已经有抗体和小分子化合物等多种类型的EGFR抑制剂在临床中被应用,但是EGFR仍然是炙手可热的研究热点。尤其是目前针对EGFR抑制剂的研发主要集中在胞外结构域和激酶结构域,但是这些结构域容易发生耐药突变,从而影响治疗效果,甚至使EGFR靶向药物对患者完全失去作用。目前针对EGFR跨膜结构域的相关研究并不完善,作为一种跨膜蛋白,EGFR的跨膜结构域呈α螺旋结构,主要由疏水氨基酸组成,跨膜结构域可以将EGFR锚定在细胞膜上,还可以与其它蛋白的跨膜结构域相互作用,因此该结构域是影响EGFR相关生物功能的关键结构。EGFR跨膜结构域对EGFR二聚体的形成和下游信号通路的磷酸化和激活都具有不可忽视的作用,并且该区域相对保守,不易产生突变,因此是非常理想的抗肿瘤药物新靶点。本论文在实验室前期分子动力学模拟结果的基础上从理论上分析出了EGFR跨膜结构域二聚结合的关键氨基酸残基,进一步从实验角度分析这些位点是否是影响EGFR跨膜结构域结合和功能的关键位点,以及这些位点是否具备成为EGFR靶向药物新靶点的潜力。本论文首先基于CRISPR/Cas9技术构建了2株EGFR突变型人结肠癌SW480稳转细胞株,根据设计分别命名为SW480646KKK和SW480666KKK。然后通过细胞增殖实验、药物敏感性实验、流式凋亡检测对EGFR跨膜结构域关键氨基酸位点突变可能对细胞生物学功能产生的影响进行分析。最后利用dSTORM超分辨细胞成像实验、磷酸化抗体芯片检测和生物信息学实验对EGFR跨膜结构域关键氨基酸位点突变可能对细胞表面EGFR的聚集状态、ERBB家族磷酸化情况和信号通路产生的差异进行分析。实验主要研究结果如下:（1）采用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了2株EGFR突变型纯合子SW480稳转细胞株。（2）EGFR跨膜结构域上Leu665、Phe666和Met667氨基酸位点突变对人结肠癌SW480细胞的增殖、药物敏感性和凋亡均产生了显著的影响,在细胞增殖检测结果中,SW480666KKK增殖能力明显低于其它两种细胞;EGFR经典二聚化抑制剂如厄洛替尼、吉非替尼等对SW480666KKK的敏感性要更强一些;细胞凋亡检测结果中,SW480wt与SW480646KKK未发现明显差异,SW480666KKK在早期凋亡细胞群和晚期凋亡细胞群产生了显著差异,早期凋亡细胞群占比由SW480wt组2.84%增加为4.93%,晚期凋亡细胞群由SW480wt组2.85%增加为7.81%,同时损伤细胞群的占比也明显偏高。（3）为了进一步研究二聚化和ERBB家族磷酸化,本论文通过细胞dSTORM超分辨细胞成像,实验结果显示Leu665、Phe666和Met667氨基酸位点是EGFR二聚过程中关键的结合位点,在rh EGF刺激后,SW480666KKK细胞表面的EGFR并没有发生明显聚集,且相对分散,与SW480wt和SW480646KKK细胞差异较明显。理论上,突变影响二聚化后会进一步影响ERBB家族的磷酸化。EGFR磷酸化抗体芯片检测数据验证了这种推测,实验结果显示EGFR跨膜结构域关键氨基酸位点突变后,SW480666KKK组在rh EGF刺激后,p EGFR（Tyr992）等十个磷酸化蛋白的磷酸化程度保持不变甚至下降,尤其是p EGFR（Ser1046/1047）、p EGFR（Ser1070）、p EGFR（Tyr1173）和p ERBB2（Tyr1248）这些药物研发的关键磷酸化位点,SW480666KKK对这些磷酸化位点的抑制体现了它成为抗肿瘤新靶点的潜力。（4）在生物信息学分析中,ERBB和PI3K信号通路受到了明显的调控,SW480646KKK组中有更多的磷酸化蛋白参与到信号传导的过程中,SW480666KKK组中磷酸化则受到了一定的抑制。SW480646KKK在理论上是增强EGFR二聚化的突变,实验结果与理论预测基本一致,该突变促进了细胞的增殖,对EGFR二聚化抑制剂敏感性降低,EGFR在细胞膜表面成簇密度更大,更易发生聚集,相关的磷酸化位点与野生型相比磷酸化程度更强。而SW480666KKK在理论上是抑制EGFR二聚化的突变,该突变在细胞生物学功能、EGFR在细胞膜表面聚集状态和相关磷酸化位点的激活方面都受到了一定抑制,但对药物的敏感性更强。综上所述,EGFR跨膜结构域α螺旋的Leu6

关键词：表皮生长因子受体跨膜结构域磷酸化位点 dSTORM成像抗肿瘤靶点

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血小板生成素受体跨膜结构域的研究

血小板生成素受体跨膜结构域的研究

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作者：欧家欣中国科学院大学

学位级别：硕士

血小板生成素受体与血小板生成素结合会引起血小板生成素受体二聚化，从而将信号传导进细胞，激活胞内段的酪氨酸激酶结构域交叉磷酸化，进而激活下游相关通路，影响血小板的生成。　　血小板减少会影响生物体的凝血系统，引起疾病。血... 详细信息

血小板生成素受体与血小板生成素结合会引起血小板生成素受体二聚化，从而将信号传导进细胞，激活胞内段的酪氨酸激酶结构域交叉磷酸化，进而激活下游相关通路，影响血小板的生成。　　血小板减少会影响生物体的凝血系统，引起疾病。血小板减少的治疗手段各有不同，其中针对跨膜结构域的治疗手段是通过药物艾曲波帕进行治疗的，使血小板生成素受体跨膜结构域聚集，从而有效地治疗与血小板减少相关的疾病。而血小板增多则会增加罹患血栓等疾病的风险。研究表明，血小板生成素受体跨膜结构域的一些相关突变会引起血小板生成素受体更易于二聚，使得血小板增多。但是不同突变体的疾病致病机理并不完全相同。跨膜结构域的功能突变体S505N，能导致血小板受体持续二聚化，而W515位点的突变却需要在血小板生成素结合的情况下，才能持续激活血小板生成素受体。　　本研究针对血小板生成素受体的跨膜结构域，主要利用核磁共振技术研究野生型血小板生成素受体和在临床上与疾病相关的功能突变体S505N及W515L的不同二聚体构象与功能的关系，并尝试寻找药物艾曲波帕的结合位点。由于膜蛋白的特殊性，先筛选出合适的蛋白序列作为研究对象，并在此基础上尝试各种类膜体系，找到了适合核磁实验的样品制备条件，获得了高质量的WT、S505N、W515L和S505N/W515L的三维谱图，进行了主链氨基酸的归属。此外，还进行了药物滴定实验，从核磁图谱的变化中研究药物与跨膜结构域的结合，并且利用化学交联实验探索WT与S505N的区别。　　实验结果表明，野生型的跨膜结构域的图谱中氨基酸残基谱峰有变宽和分裂，而功能突变体S505N的跨膜结构域的氨基酸残基只有单一谱峰，其化学位移值与野生型血小板生成素受体相比有很大变化。通过交联实验发现S505N突变体更容易聚集。通过对功能突变体W515L的归属，发现W515L突变体基本不改变跨膜结构域的结构，但是会使跨膜结构域的部分氨基酸呈现不同构象。此外，还进行了S505N/W515L双突变，发现W515位点对跨膜结构域影响较小，S505位点对跨膜结构域的影响至关重要。利用艾曲波帕药物对蛋白进行滴定，实验结果显示S505N与野生型有可能是不同的二聚化机制。以上实验结果为血小板生成素受体相关的药物研究或疾病机理研究，提供初步的结构基础和理论依据。

关键词：血小板减少致病机理血小板生成素受体跨膜结构域

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PEDV E蛋白的跨膜结构域对其细胞定位的影响研究

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黑龙江八一农垦大学学报 2022年第4期34卷 87-92页

作者：郭德轩郑亮张宁郑小会吴志军曹宏伟张华黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院大庆163319 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江八一农垦大学生物技术中心

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为猪流行性腹泻的病原体,感染上该病毒的仔猪出现脱水、腹泻和呕吐,给世界养猪业造成了经济损失。PEDV囊膜蛋白E在病毒包膜形成、病毒离子形成、病毒出芽和释放过程中发挥至关... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为猪流行性腹泻的病原体,感染上该病毒的仔猪出现脱水、腹泻和呕吐,给世界养猪业造成了经济损失。PEDV囊膜蛋白E在病毒包膜形成、病毒离子形成、病毒出芽和释放过程中发挥至关重要的作用。根据软件预测可知,PEDV E蛋白是一种有一个跨膜域的跨膜蛋白。研究将PEDV E蛋白设计好的截短基因(E-T1、E-T2和E-T3)连接至pCMV-myc真核表达载体中,经PCR和双酶切鉴定结果表明已构建成功。最后,将重组质粒pCMV-myc-E、E蛋白截短基因质粒Myc-E-T1、Myc-E-T2和Myc-E-T3转染HEK-293T细胞和IPEC-J2细胞,通过间接免疫荧光技术观察其E蛋白以及截短基因的细胞分布情况,并探究是否与内质网发生共定位。研究结果发现,E蛋白以及E-T1、ET2分布在细胞质并定位在内质网,而E-T3则分布在整个细胞且没有与内质网共定位。说明了E-T1、E-T2可能行使着与E蛋白类似的功能,而E-T3则没有。研究为进一步探讨PEDV的E蛋白功能和分子生物学特性奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 E蛋白跨膜结构域内质网细胞定位

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具有CD28跨膜结构域的嵌合抗原受体（CAR）

具有CD28跨膜结构域的嵌合抗原受体（CAR）

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作者： Y·穆勒 Q·Z·唐 J·A·布卢斯通美国加利福尼亚州

本公开文本总体上涉及免疫治疗剂领域，具体涉及包括来自CD28的跨膜结构域和铰链结构域的新型嵌合多肽，例如嵌合抗原受体(CAR)。在一些情况下，所述铰链结构域能够促进所述CAR的二聚化。本公开文本还提供了组合物和可用于产生此类分子... 详细信息

标准号: CN116113640A

本公开文本总体上涉及免疫治疗剂领域，具体涉及包括来自CD28的跨膜结构域和铰链结构域的新型嵌合多肽，例如嵌合抗原受体(CAR)。在一些情况下，所述铰链结构域能够促进所述CAR的二聚化。本公开文本还提供了组合物和可用于产生此类分子的方法，以及用于检测和治疗诸如增殖性疾病(例如，癌症)的健康病症的方法。

关键词：铰链结构域文本跨膜结构域免疫治疗剂增殖性疾病嵌合抗原新型嵌合二聚化多肽可用癌症检测治疗健康

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源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域

源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域

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作者：金圣俊金均度黄仁秀具根本金天生金范泰安旲均金海洙权永灿韩国大田市

本发明涉及源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域。更具体地，本发明涉及源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域(LRRC24P跨膜结构域)或细胞穿透肽，以及包含它们的细胞内递送系统。本发明的源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域可以用于将货物材料如化合物、... 详细信息

标准号: CN113166216A

本发明涉及源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域。更具体地，本发明涉及源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域(LRRC24P跨膜结构域)或细胞穿透肽，以及包含它们的细胞内递送系统。本发明的源自人LRRC24蛋白的跨膜结构域可以用于将货物材料如化合物、生物分子和各种聚合物材料递送到细胞中。由于与常规的细胞穿透肽相比，本发明的LRRC24P跨膜结构域表现出更高的细胞穿透效率，并且源自人蛋白，因此避免了由源自外源蛋白的肽引起的副作用和免疫应答，它可以有效地用作应用于人体的化合物、生物分子和各种聚合物材料的有效细胞内递送方法。

关键词：跨膜结构域聚合物材料细胞穿透肽蛋白生物分子细胞递送系统免疫应答外源蛋白细胞穿透有效细胞常规的人蛋白有效地递送货物应用表现

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一种外膜转运通道蛋白的非跨膜结构域的表达纯化方法

一种外膜转运通道蛋白的非跨膜结构域的表达纯化方法

引用

作者：褚洪官董士尚秦晓春温康宁王昌辉 250022 山东省济南市南辛庄西路336号

本发明公开了一种外膜转运通道蛋白的非跨膜结构域的表达纯化方法，属于生物技术领域。本发明通过对外膜转运通道蛋白的非跨膜结构域进行截短处理，选择BamA‑POTRA的30‑273这一段氨基酸序列作为截短体，其包含了3个POTRA，涵盖了BamA蛋... 详细信息

标准号: CN111196842A

本发明公开了一种外膜转运通道蛋白的非跨膜结构域的表达纯化方法，属于生物技术领域。本发明通过对外膜转运通道蛋白的非跨膜结构域进行截短处理，选择BamA‑POTRA的30‑273这一段氨基酸序列作为截短体，其包含了3个POTRA，涵盖了BamA蛋白非跨膜结构域的主要功能区域；而且，将编码该截短体的基因序列与pET‑28a质粒连接，并进行原核表达，可以在体外表达大量高纯度的目的蛋白，极大提高了BamA蛋白的非跨膜结构域的体外表达效率，而且所表达的目的蛋白的纯度高，可达90％以上；本发明通过高纯度的BamA‑POTRA截短体蛋白的体外表达，对BamA蛋白的三维结构解析具有十分重要的意义。

关键词：跨膜结构域体外表达截短体蛋白目的蛋白通道蛋白高纯度生物技术领域氨基酸序列功能区域基因序列截短处理三维结构原核表达膜转运外膜质粒转运解析涵盖

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