检索结果-内蒙古大学图书馆

分子植物育种 2019年第11期17卷 3585-3592页

作者：王臣臣王丽华刘言龙纪康伟申震梁坤詹秋文李杰勤安徽科技学院农学院

近年来,随着植物基因工程的快速发展,利用转基因技术进行育种和基因功能研究成为了一种重要研究手段。作物转基因方法经过三十年的不断发展,不管在方法上还是体系方面都取得了显著的进展。本综述主要对目前在作物上应用最广泛的农杆菌... 详细信息

近年来,随着植物基因工程的快速发展,利用转基因技术进行育种和基因功能研究成为了一种重要研究手段。作物转基因方法经过三十年的不断发展,不管在方法上还是体系方面都取得了显著的进展。本综述主要对目前在作物上应用最广泛的农杆菌介导法和基因枪法分别从化学因素(氨基酸,乙酰丁香酮,共培养pH)和物理因素(预培养天数,菌株类型,热激和干燥,髙渗负压处理等)在提高作物转基因效率方法上进行了梳理,以及两种转基因方法都适用的外植体类型和大小,不同继代时间和基因型等方面在提高作物转基因效率方法上进行了梳理;比较了农杆菌介导法和基因枪法优缺点以及限制因素,并总结了相应策略。同时阐明了目前提高作物转基因效率方法面临的问题,展望了其未来发展方向,给作物转基因研究提供理论支撑。

关键词：转基因效率农杆菌介导法基因枪法研究进展

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Tgf2转座子介导鲤Fst1基因元件在鲤中的转基因效率研究

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上海海洋大学学报 2014年第1期23卷 1-7页

作者：闫学春钟莎莎徐鹏邹曙明孙效文中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150070 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 中国水产科学研究院水产生物应用基因组研究中心北京100141

卵泡抑素(follistatin,Fst)蛋白具有拮抗TGF-β超家族许多成员的功能,通过直接的蛋白结合可抑制肌肉抑制素(myostatin)的活性,从而恢复肌肉的生长,表现出增肌效应。参照鲤高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出鲤卵泡抑素Fst1基因的编... 详细信息

卵泡抑素(follistatin,Fst)蛋白具有拮抗TGF-β超家族许多成员的功能,通过直接的蛋白结合可抑制肌肉抑制素(myostatin)的活性,从而恢复肌肉的生长,表现出增肌效应。参照鲤高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出鲤卵泡抑素Fst1基因的编码框(ORF)序列(全长1 260 bp,编码320个氨基酸),构建了包含金鱼Tgf2转座子左臂(220 bp)、右臂(185 bp)、斑马鱼Mylz2启动子和鲤Fst1基因ORF的供体质粒pTgf2-Mylz2-ccfst1。通过显微注射方法,并在体外合成的Tgf2转座酶5'加帽mRNA的介导下,获得了一批转鲤Fst1基因的转基因鲤。经PCR检测,转基因鲤Fst1外源基因的整合率平均为44.7%,对其中4尾转基因阳性鲤的扩增产物进行回收、克隆和测序验证,结果表明阳性鲤中均含有转基因目的片段。说明Tgf2转座子转基因系统可在鲤中实现较高的转座效率,为进一步研究卵泡抑素在鲤肌肉发育中的功能奠定了基础。

关键词： Tgf2转座子 Fst1 鲤转基因效率

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转基因显微注射剂量对鸡胚转基因效率和胚胎发育的影响

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中国家禽 2017年第4期39卷 4-7页

作者：王亚丽王赛赛张丽高波宋成义扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

研究旨在探讨显微注射剂量对鸡胚孵化和转基因效率的影响。将SB转座子介导的转基因载体分别设置为20 ng、50 ng和100 ng,通过显微注射技术注射至14HH鸡胚血管,继续孵化至出雏。检测孵化第7、14和21天的鸡胚成活率,出雏率、初生体重和性... 详细信息

研究旨在探讨显微注射剂量对鸡胚孵化和转基因效率的影响。将SB转座子介导的转基因载体分别设置为20 ng、50 ng和100 ng,通过显微注射技术注射至14HH鸡胚血管,继续孵化至出雏。检测孵化第7、14和21天的鸡胚成活率,出雏率、初生体重和性腺阳性率。结果表明,50 ng剂量组鸡胚性腺阳性率明显高于其它两组,且各剂量组间绿色荧光蛋白基因表达强度差异不显著。各剂量组之间种蛋成活率、出雏率和雏鸡初生重差异均不显著(P>0.05)。本研究为鸡胚显微注射剂量优化提供参考,对提高转基因鸡制备效率具有重要意义。

关键词：鸡注射剂量胚胎发育转基因效率

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影响猪ICSI转基因效率主要因素的研究

影响猪ICSI转基因效率主要因素的研究

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作者：刘成军中国农业大学

学位级别：硕士

本试验以猪体外成熟卵子和冷冻解冻的死精子为材料，探讨了猪ICSI转基因效率的主要影响因素。其中包括注射台温度(30℃，38.5℃)、精子与GFP质粒孵育液温度(4℃，24℃，39℃)、激活后6-DMAP的处理、BSA(牛血清白蛋白)、GFP质粒的浓度及... 详细信息

本试验以猪体外成熟卵子和冷冻解冻的死精子为材料，探讨了猪ICSI转基因效率的主要影响因素。其中包括注射台温度(30℃，38.5℃)、精子与GFP质粒孵育液温度(4℃，24℃，39℃)、激活后6-DMAP的处理、BSA(牛血清白蛋白)、GFP质粒的浓度及结构(线形和环形)和GFP不同的表达载体，并对绿色荧光胚胎做了PCR检测。\n 结果表明，注射台温度为30℃时的转基因阳性率为40.07％，而38.5℃时为20.97％，差异极显著(p＜0.01)；但囊胚率差异不显著(p＞0.05)。精子与GFP的孵育温度(4℃，24℃，39℃)对转基因效率和囊胚率的影响不显著(p＞0.05)，但随着孵育温度升高，转基因率有降低的趋势。精子与GFP孵育时，GFP浓度为0.01μg/μl的转基因率(21.13％)比浓度为0.05μg/μl(50.20％)和0.1μg/μl(48.79％)的转基因率低，差异显著(p＜0.05)，但浓度为0.05μg/μl和0.1μg/μl的转基因率没有显著差异，而且3个浓度的囊胚率也没有显著差异(p＞0.05)。环形GFP的转基因率为28.62％，线形的为40.18％，差异显著(p＜0.05)，但二者的囊胚率没有显著差异。pEGFP-N1和pbCASEGFP-LGL的转基因效率和囊胚率都没有显著差异(p＞0.05)。精子与GFP质粒孵育液添加BSA(0.3％)转基因率和囊胚率差异不显著(p＞0.05)；但添加BSA的囊胚转基因率为55.56％，而对照组为33.33％，差异极显著(p＜0.01)。6-DMAP处理组与对照组的转基因率分别为52.53％和26.25％，差异极显著(p＜0.01)；而且6-DMAP处理组的囊胚率(9.96％)显著比对照组(2.30％)高(p＜0.05)。PCR结果显示绿色荧光胚胎的扩增片断长度大概为800bp，与用pEGFP-N1质粒的扩增产物相近，说明这些胚胎携带了EGFP基因。\n 研究表明注射台温度对转基因效率有明显影响，温度高转基因率低；随着精子与GFP孵育温度的升高，转基因率有降低的趋势，因此在4℃下孵育比较理想。GFP质粒浓度为0.

关键词：转基因效率精子胞质内注射绿色荧光蛋白卵母细胞

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精子膜处理方法对精子介导的外源质粒转基因效率的影响

引用

实验动物与比较医学 2013年第4期33卷 256-260页

作者：贾晓峰徐彦刘淼王亮施惠娟上海市计划生育科学研究所国家卫生和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海200032 第二军医大学长征医院妇产科上海200003

目的探讨超声、NaOH和溶血卵磷脂三种小鼠精子膜处理方法对转染质粒与精子共孵育后卵胞质内单精子注射（ICSI）授精，观察质粒转染的效率。方法采用上述三种方法对小鼠精子进行膜处理，通过Transgreen／PI荧光染色，观察小鼠精子质膜的... 详细信息

目的探讨超声、NaOH和溶血卵磷脂三种小鼠精子膜处理方法对转染质粒与精子共孵育后卵胞质内单精子注射（ICSI）授精，观察质粒转染的效率。方法采用上述三种方法对小鼠精子进行膜处理，通过Transgreen／PI荧光染色，观察小鼠精子质膜的完整性；通过流式细胞仪检测小鼠精子DNA的完整性；将处理后的小鼠精子与带GFP的转染质粒共孵育，再采用ICSI与促排卵后成熟小鼠卵子授精，统计各组受精率、卵裂率及荧光囊胚率，观察三种方法对小鼠精子作为质粒载体ICSI后转基因效率的影响。结果溶血卵磷脂方法处理小鼠精子膜的效果显著优于超声和NaOH组（99．2％vs94．7％％，90．9）（P〈0．05）。三种方法对小鼠精子DNA结构的损伤无显著性差异（P〉0．05），行ICSI后三组小鼠胚胎发育率差异不显著（P〉O．05），各组之间荧光胚胎的形成率无显著性差异（P〉0．05o结论三种小鼠精子膜处理方法的效率均能达到90％以上，且对小鼠精子DNA的损伤、行ICSI后小鼠胚胎的发育率和转基因效率无显著差异，因此，三种方法均可用于ICSI法小鼠转基因研究。

关键词：精子去膜法卵胞质内单精子注射(ICSI) DNA完整性转基因效率小鼠

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一种促进猕猴桃转基因效率的光源组合盒及其应用

一种促进猕猴桃转基因效率的光源组合盒及其应用

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作者：李大卫钟彩虹刘晓莹 430074 湖北省武汉市东湖新技术开发区九峰一路201号

本发明公开了一种促进猕猴桃转基因效率的光源组合盒及其应用，涉及基因工程领域。光源组合盒由红色和蓝色的LED光源组成，同一个LED光源组合盒中，共有100个LED灯珠，呈10×10排列，红光和蓝光的LED灯珠均匀排列，比例为1：4，输... 详细信息

标准号: CN113186220A

本发明公开了一种促进猕猴桃转基因效率的光源组合盒及其应用，涉及基因工程领域。光源组合盒由红色和蓝色的LED光源组成，同一个LED光源组合盒中，共有100个LED灯珠，呈10×10排列，红光和蓝光的LED灯珠均匀排列，比例为1：4，输入电压为220V，功率为300W，工作环境为运行的光合光子通量密度为200±5μmolm^‑2s^‑1，光周期为12光/12h暗，温度为24±1℃。本发明具有下列优点和积极效果：①能够明显提高现有猕猴桃转基因的效率；②适用于加速猕猴桃组培再生等生产条件；③适用于大部分猕猴桃分子实验室。

关键词：猕猴桃光源组合基因工程领域转基因效率光子通量均匀排列生产条件输入电压光周期转基因组合盒红光蓝光组培再生应用

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一种促进猕猴桃转基因效率的光源组合盒及其应用

一种促进猕猴桃转基因效率的光源组合盒及其应用

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作者：李大卫钟彩虹刘晓莹 430074 湖北省武汉市东湖新技术开发区九峰一路201号

标准号: CN113186220B

关键词：猕猴桃光源组合基因工程领域转基因效率光子通量均匀排列生产条件输入电压光周期转基因组合盒红光蓝光组培再生应用

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提高制备转基因小鼠效率的研究

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中国实验动物学报 2001年第3期9卷 160-163页

作者：程萱陈红星杨晓谭晓红黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的　提高制备转基因动物的效率。方法　着重对注射DNA的制备 ,高质量受精卵的获得 ,显微注射及胚胎移植各步骤中的主要影响因素进行了优化。结果　移植后出生的小鼠经PCR及Sonthern Blot检测 ,从最初的 146只仔鼠中检测到 2只阳性鼠 ... 详细信息

目的　提高制备转基因动物的效率。方法　着重对注射DNA的制备 ,高质量受精卵的获得 ,显微注射及胚胎移植各步骤中的主要影响因素进行了优化。结果　移植后出生的小鼠经PCR及Sonthern Blot检测 ,从最初的 146只仔鼠中检测到 2只阳性鼠 ,提高到由 34只仔鼠中检测到 10只阳性鼠 ,阳性鼠概率由 1 4%基本稳定增加到 30 %。结论　通过技术改良后 ,转基因效率得到明显提高。

关键词：阳性仔鼠移植后转基因小鼠注射转基因动物制备转基因效率受精卵技术改良

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一种提高动物转基因效率的新方法

一种提高动物转基因效率的新方法

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作者：苗向阳 100193 北京市海淀区圆明园西路2号

本发明公开了一种提高动物转基因效率的新方法。本发明探索了精子和卵母细胞作为载体的转基因方法，通过方法改进，将外源基因分别导入精子和卵母细胞，并通过受精过程使二者携带的外源基因在胚胎中进一步整合，提高了外源基因导入细胞... 详细信息

标准号: CN102181462A

本发明公开了一种提高动物转基因效率的新方法。本发明探索了精子和卵母细胞作为载体的转基因方法，通过方法改进，将外源基因分别导入精子和卵母细胞，并通过受精过程使二者携带的外源基因在胚胎中进一步整合，提高了外源基因导入细胞核的效率，而后得到高效率的表达。本发明在雌雄小鼠进行交配前，分别采用打点注射法转染雌、雄性生殖细胞系，然后挑选出手术后1～5天与35～40天的公鼠，1～7天的雌鼠进行交配，得到转基因小鼠后代。本发明探索了绵羊的转基因，本发明所述方法可以提高大型哺乳动物转基因效率，为畜牧业的育种提供了一种新途径。本发明探索出一种雌雄生殖细胞联合介导的转基因体系。

关键词：外源基因卵母细胞交配导入精子生殖细胞细胞核动物转基因转基因方法转基因体系转基因小鼠转基因效率雌雄小鼠受精过程雄性生殖探索哺乳动物高效率新途径注射法转基因雌雄公鼠整合转染绵羊胚胎育种畜牧业后代挑选

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优化拟南芥转基因效率的方法

优化拟南芥转基因效率的方法

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作者：黄浩白隆华翟勇进韦莹 530023 广西壮族自治区南宁市长岗路189号

本发明公开了一种提高拟南芥转基因效率的方法，配置转化介质浸染拟南芥植株上的花序，并将每株拟南芥植株用保鲜膜包裹，置于黑暗条件下培养24小时后置于光周期24小时、湿度60‑70％、22℃的条件下培养拟南芥植株，收取种子，其中，光周... 详细信息

标准号: CN108531503B

本发明公开了一种提高拟南芥转基因效率的方法，配置转化介质浸染拟南芥植株上的花序，并将每株拟南芥植株用保鲜膜包裹，置于黑暗条件下培养24小时后置于光周期24小时、湿度60‑70％、22℃的条件下培养拟南芥植株，收取种子，其中，光周期24小时为16小时光照及8小时黑暗。本发明具有可重复实现提高拟南芥植株和转化介质的利用率、提高拟南芥植株转化效率的有益效果。

关键词：拟南芥植株光周期保鲜膜包裹转基因效率黑暗条件小时光照植株转化可重复花序浸染转化黑暗配置

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