检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2002年第4期18卷 481-485页

作者：孙仲序杨红花崔得才赵春芝赵淑萍山东农业大学泰安271018

以转 1 磷酸甘露糖醇脱氢酶基因的八里庄杨为试材 ,对获得的杨树转化体进行了不同NaCl梯度的组织培养、水培和盆栽试验。抗盐试验中 ,转基因八里庄杨比对照的始分化天、分化率、芽头密度、苗高、生长势、生根率明显得到提高 ;主根数、... 详细信息

以转 1 磷酸甘露糖醇脱氢酶基因的八里庄杨为试材 ,对获得的杨树转化体进行了不同NaCl梯度的组织培养、水培和盆栽试验。抗盐试验中 ,转基因八里庄杨比对照的始分化天、分化率、芽头密度、苗高、生长势、生根率明显得到提高 ;主根数、侧根数、根长的发生数量均较多。结果表明在 4‰含盐量的基质上 ,转基因苗木比对照有更好的抗性。

关键词：转基因杨树抗盐性组织培养水培盆栽

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8年生嫁接转基因杨树Bt毒蛋白的表达与运输

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林业科学 2016年第7期52卷 46-52页

作者：陈盼飞任亚超张军王进茂杨敏生河北农业大学林学院河北省林木种质资源与森林保护重点实验室保定071000

【目的】研究经历多年生长和对复杂自然环境适应后,嫁接的8年生转基因741杨中外源Bt基因是否稳定存在及表达,探索成年树木Bt毒蛋白的运输部位、运输量、运输的方向性和积累等规律。【方法】利用转Bt Cry1Ac基因741杨与未转基因741杨互... 详细信息

【目的】研究经历多年生长和对复杂自然环境适应后,嫁接的8年生转基因741杨中外源Bt基因是否稳定存在及表达,探索成年树木Bt毒蛋白的运输部位、运输量、运输的方向性和积累等规律。【方法】利用转Bt Cry1Ac基因741杨与未转基因741杨互为砧木和接穗进行嫁接,在自然条件下生长8年后,对2种不同嫁接方式杨树砧木和接穗的Bt Cry1Ac基因进行PCR检测和验证,利用ELISA技术对成年嫁接杨树的不同部位、不同组织进行毒蛋白含量检测。【结果】Bt Cry1Ac基因的PCR检测结果表明,Pb29/741嫁接杨中接穗部分和741/Pb29嫁接杨中砧木部分均扩增出与阳性对照大小一致的特异性条带,其余非转基因部分和阴性对照未扩增出特异性条带,证明Bt基因在嫁接杨树的转基因部分稳定存在,未发现外源基因丢失现象。ELISA检测表明,2种不同嫁接方式处理的741杨砧木和接穗的叶片、韧皮部、木质部和髓中均检测到Bt毒蛋白存在,证明Bt基因在8年生转基因嫁接741杨中稳定表达,且Bt毒蛋白可以在成年嫁接741杨的砧木和接穗间运输。Pb29/741成年株中,根部为非转基因部分,地上枝干部分为转基因组织,地上转基因组织能够表达Bt毒蛋白,其含量呈现出树冠外侧向内侧逐渐升高,树干部分向下又逐渐降低的趋势,且可以向根和树干基部非转基因组织运输和积累,以韧皮部运输为主。741/Pb29成年株中,根部为转基因部分,地上枝干为非转基因组织,根和树干基部组织也可以表达Bt毒蛋白,且可以由根部和干基部由枝干向树冠外侧运输并积累,以韧皮部运输为主;非转基因枝干部分呈现出树干向上逐渐降低,树冠内侧向外侧逐渐升高的趋势。【结论】尽管嫁接方式不同,嫁接的转基因杨树经历8年生长和复杂自然环境的影响和适应后,Bt毒蛋白的运输都呈现出由转基因组织向非转基因组织运输现象,毒蛋白含量呈现出类似由源向库运输和积累的趋势。转基因杨树可以通过传统嫁接方式在生产上应用,以提高转基因林木的生态安全性。

关键词：转基因杨树嫁接 Bt毒蛋白基因表达蛋白运输

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转基因杨树对杨小舟蛾幼虫解毒酶活性的影响

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林业科学 2007年第5期43卷 59-63页

作者：郭同斌嵇保中诸葛强黄敏仁徐州市森林病虫害防治检疫站徐州221004 南京林业大学森林资源与环境学院南京210037

用转Bt单基因和转Bt+CpTI双价基因杨树叶片饲喂杨小舟蛾,幼虫中肠酯酶的活力在饲喂初期显著升高,但在饲喂一定时间后受到抑制:转Bt单基因杨树在饲喂24h开始受到抑制,48h受到明显抑制,较对照下降了15.8%;而转双价基因杨树在饲喂12h受到... 详细信息

用转Bt单基因和转Bt+CpTI双价基因杨树叶片饲喂杨小舟蛾,幼虫中肠酯酶的活力在饲喂初期显著升高,但在饲喂一定时间后受到抑制:转Bt单基因杨树在饲喂24h开始受到抑制,48h受到明显抑制,较对照下降了15.8%;而转双价基因杨树在饲喂12h受到明显抑制,较对照下降了38.1%。转双价基因杨树对中肠酯酶的抑制作用大于转Bt单基因杨树。转Bt单基因杨树对幼虫中肠羧酸酯酶的抑制能力不强,而转双价基因杨树对中肠羧酸酯酶的抑制作用大于转Bt单基因杨树,饲喂12h后活力开始受到抑制,饲喂24、36、48h的活力分别较对照下降了33.4%、22.5%、29.6%,与对照均有显著差异。转基因杨树主要通过抑制幼虫中肠酯酶和羧酸酯酶这2种解毒酶活性而干扰昆虫正常的生理代谢,从而起到毒杀害虫的作用。

关键词：转基因杨树杨小舟蛾解毒酶酯酶羧酸酯酶

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转基因杨树的分子检测及抗逆性评价

转基因杨树的分子检测及抗逆性评价

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作者：李义良北京林业大学

学位级别：博士

杨树速生、种类繁多、分布广泛,是重要的经济树种和短轮伐期工业用材树种之一,在水土保持和维护生态平衡方面发挥着重要作用。但长期以来多以追求速生性为主要育种目标,造成培育的品种适应性和抗逆性较差,以致在我国广大的干旱、半干旱... 详细信息

杨树速生、种类繁多、分布广泛,是重要的经济树种和短轮伐期工业用材树种之一,在水土保持和维护生态平衡方面发挥着重要作用。但长期以来多以追求速生性为主要育种目标,造成培育的品种适应性和抗逆性较差,以致在我国广大的干旱、半干旱、盐碱荒地以及涝渍地区难以发挥其作用,制约了当地生态建设和经济的发展。而基因工程技术的发展,为短期内培育抗逆转基因杨树提供了可能。本文将抗干旱、耐盐碱及耐涝基因转入杨树,并对转基因植株进行了分子检测、温室抗逆性、苗圃生长性状、逆境生境生长表现等进行了评价,得到以下主要研究结果: 1.转果聚糖蔗糖转移酶（SacB）基因银腺杂种杨（Populus alba×***）的分子检测及抗旱性评价。对53株转SacB基因银腺杂种杨抗性植株进行了Southern杂交、RT-PCR检测,结果显示有28株检测到阳性信号,表明该基因已整合到银腺杂种杨基因组中并得到表达。在此基础上,对转基因植株进行了温室干旱胁迫试验,结果表明,随着干旱胁迫时间的延长,对照植株出现叶片变黄和脱落等现象,而转基因株系叶片变得浓绿而厚重,受到的影响明显小于对照植株,在转基因株系内对干旱胁迫的抵抗能力也不同,其中T23、T72在生长量、生物量方面与对照相比差异达到显著水平。从SacB基因表达产物果聚糖含量的测定结果来看,在转基因株系的叶片中检测到了果聚糖的积累,而对照植株未检测到,这一结果初步表明可能由于果聚糖的积累提高了转基因银腺杂种杨的抗旱性。而后对移栽至苗圃的转基因株系进行了生长性状和光合参数的测定,结果表明,有5个转基因株系对于株高和地径性状均高于对照;叶间距、比叶重均超过未转化植株;同时转基因株系的水分利用效率也均高于对照植株。对内蒙古干旱区转基因杨树对比试验林生长量的观测结果表明,在测定的12个转基因株系中有9个在生长量上超过对照植株。以上研究初步表明SacB基因的导入可提高转基因银腺杂种杨的抗旱性,最终获得了抗旱性增强的转基因植株。 2.转茉莉酸和乙烯应答元件结合因子（JERFs）基因银中杨（***×*** Dipple）的分子检测及耐盐性评价。对先前获得的18株转JERF基因的银中杨进行了DNA和RNA水平的分子检测,获得了13株整合并初步得到表达的银中杨植株。在此基础上,选择生长正常且表现较好的5个转化株系及对照进行了不同浓度的NaCl胁迫处理,结果发现,随着盐浓度的上升和处理时间的延长,转化株系和未转化植株在生长上均明显受到抑制,但转基因株系受抑制程度明显低于对照植株;同时转基因株系叶片内的脯氨酸和Na+含量升高而MDA含量下降,而未转化对照植株变化相反,说明由于JERFs基因在银中杨中的表达,促进了脯氨酸含量的提高并加强了细胞膜的稳定性,进而提高了转基因银中杨的耐盐能力。移栽到苗圃后对转基因植株生长量测定结果表明,转基因株系、株高和地径均超过对照植株。另外,转JERFs基因株系叶间距相对较小,比叶重得到了提高,水分利用效率明显高于对照植株。在滨海盐碱地区和内陆盐碱地区营建了转基因杨树的对比试验林,调查结果发现,在参试的8个转基因株系中有4个在成活率、生长量方面表现优于未转化植株。初步证实JERFs基因在银中杨中的表达提高了转基因植株的耐盐性。 3.转透明颤菌血红蛋白（vgb）基因银腺杂种杨的分子检测及耐涝性评价。对73株转vgb基因银腺杂种杨抗性植株进行了分子生物学检测,获得了24株转化植株。温室持续淹水胁迫试验,发现未转化植株在淹水第2d时大部分叶片出现萎蔫,第4d后下部叶片脱落,第10d地上部分变黑直至死亡,死亡率达66.7%,而转基因株系死亡率均明显低于对照。同时在涝渍胁迫下转基因植株叶绿素含量降幅低于非转基因植株,生长受抑制程度低于未转化对照植株,说明在淹水胁迫下vgb基因的表达增强了银腺杂种杨叶绿素含量的积累,进而促进了转基因植株的生长,提高了转基因株系对淹水的忍受能力。在苗圃转基因株系生长性状测定表明,转基因株系株高、地径、叶间距、比叶重均高于对照植株。对湖南汨罗高降雨区转基因杨树对比试验林生长量测定结果表明,3个转基因株系株高、地径均超过对照植株。初步获得了耐涝的转vgb基因银腺杂种杨。上述研究通过对转SacB、JERFs、vgb基因杨树抗性植株进行分子检测及温室抗逆性、苗圃生长性状、逆境生境生长表现进行评价,获得了抗逆性得到明显改良的转基因杨树,建立了转基因杨树抗逆性评价体系,对我国干旱盐碱涝渍地区的环境建设和经济发展具有重要的理论意义和应用价值,也为其它树种抗逆性状的遗传改良奠定了基础。

关键词：银腺杂种杨银中杨分子检测抗逆性转基因杨树

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转基因杨树对杨小舟蛾体内三种保护酶活力的影响

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昆虫学报 2006年第3期49卷 381-386页

作者：郭同斌嵇保中蒋继宏杜伟诸葛强黄敏仁徐州市森林病虫防治检疫站江苏徐州221004 南京林业大学森林资源与环境学院南京210037 徐州师范大学江苏省药用植物生物技术重点实验室江苏徐州221116

用转Bt单基因(FB56)和转Bt+CpTI双价基因(D18)杨树叶片饲喂杨小舟蛾Micromelalophatroglodyta(Graeser),采用酶活力测定方法研究了转基因杨树对幼虫中肠和血淋巴三种保护酶(SOD、CAT和POD)活力的影响。结果表明,幼虫中肠SOD活力显著升高... 详细信息

用转Bt单基因(FB56)和转Bt+CpTI双价基因(D18)杨树叶片饲喂杨小舟蛾Micromelalophatroglodyta(Graeser),采用酶活力测定方法研究了转基因杨树对幼虫中肠和血淋巴三种保护酶(SOD、CAT和POD)活力的影响。结果表明,幼虫中肠SOD活力显著升高,而CAT和POD活力受到了显著抑制。用FB56处理24h,杨小舟蛾幼虫中肠SOD活力增加了41.7%,与对照有显著差异;而用D18处理,SOD活力增加了25.3%,与对照差异不显著。用FB56处理24h,中肠CAT活力受到显著抑制,36h后抑制能力不强;而用D18处理,CAT活力全程受到显著抑制。用FB56和D18处理36h,中肠POD活力均受到显著抑制,分别比对照下降70.1%和89·8%。转基因杨树通过扰乱幼虫中肠SOD、CAT和POD三种保护酶的动态平衡,使虫体内自由基清除遇到了障碍,从而对其产生了毒害作用。转双价基因杨树对幼虫中肠保护酶的毒害作用大于转单基因杨树。用2种转基因杨树叶片饲喂杨小舟蛾幼虫后其血淋巴SOD和POD活力均没有受到显著影响,但CAT活力均显著高于对照,转基因杨树对血淋巴保护酶系统的影响小于对中肠保护酶系统的影响。

关键词：转基因杨树杨小舟蛾保护酶 SOD CAT POD

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转基因杨树嫁接苗中外源Bt-cry3A基因的表达及其产物运输

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分子植物育种 2021年第9期19卷 2906-2911页

作者：王连荣薛拥志张德健甄志先张军河北北方学院农林科技学院张家口075131 河北北方学院动物科技学院张家口075131 内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021 河北农业大学林学院河北省林木种质资源与森林保护重点实验室保定071000

为探索外源Bt-cry3A基因在转基因杨树嫁接苗中的表达情况以及其表达产物在嫁接砧木和接穗间的运输机制,本试验以转Bt-cry3A基因741杨高抗株系CC71与未转基因的741杨、毛白杨嫁接的1 a生嫁接苗为材料,利用RT-PCR技术研究Bt-cry3A基因的m... 详细信息

为探索外源Bt-cry3A基因在转基因杨树嫁接苗中的表达情况以及其表达产物在嫁接砧木和接穗间的运输机制,本试验以转Bt-cry3A基因741杨高抗株系CC71与未转基因的741杨、毛白杨嫁接的1 a生嫁接苗为材料,利用RT-PCR技术研究Bt-cry3A基因的mRNA的表达与运输规律,结果表明同砧嫁接杨树苗中CC71部位外源Bt-cry3A基因均能表达出mRNA,非转基因741杨部位未检测到Bt-cry3A基因的mRNA;利用ELISA技术研究Bt-Cry3A蛋白的表达与运输规律,结果表明同砧嫁接、异砧嫁接和中间砧嫁接的杨树苗,CC71部位的韧皮部、木质部、髓以及叶片中均能表达出Bt-Cry3A蛋白,同时,未转基因的741杨、毛白杨部位的叶片、韧皮部、木质部和髓中也检测出Bt-Cry3A蛋白的存在,但检测到的量很低。本试验研究结果表明外源Bt-cry3A基因的mRNA不能在转基因嫁接杨树苗的砧木和接穗间进行长距离的运输,Bt-Cry3A蛋白可以在砧木和接穗间运输,但运输的量极低。此研究结果为合理安全利用转Bt-cry3A基因杨树提供了理论依据。

关键词：转基因杨树嫁接苗 Cry3A蛋白 mRNA 运输

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转基因杨树快速检测及对环境微生物影响评价

转基因杨树快速检测及对环境微生物影响评价

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作者：姚立珠河北农业大学

学位级别：硕士

杨树因其生长迅速、适应性强等特点,已被广泛种植。为有效解决杨树病虫害问题,转基因技术越来越多的应用于杨树的抗虫研究。随着转基因植物的增多,对其检测技术水平的要求也越来越高,并且转基因植物的生物安全性问题也越来越受到重视。... 详细信息

杨树因其生长迅速、适应性强等特点,已被广泛种植。为有效解决杨树病虫害问题,转基因技术越来越多的应用于杨树的抗虫研究。随着转基因植物的增多,对其检测技术水平的要求也越来越高,并且转基因植物的生物安全性问题也越来越受到重视。本论文以转Bt Cry1Ac基因741杨为对象,利用LAMP技术,建立了一套能够简便、快速、准确的检测杨树中外源基因的方法。对转Bt Cry1Ac基因107杨的干、根、根际土壤DNA样本进行高通量测序,通过与非转基因107杨的对比,探究外源基因对其杨树自身内微生物群落多样性的影响。以及对转Bt Cry1Ac基因107杨试验林中三种不同栽培更新模式的非转基因杨树的干、根、根际土壤DNA样本进行高通量测序,探究转基因107杨对其邻近不同栽培更新模式的转基因受体(非转基因107杨)中微生物群落多样性的影响。主要研究结果如下:(1)利用针对转基因杨树建立的LAMP-PCR最优体系,对不同浓度即2倍倍比和10倍倍比稀释梯度下的DNA进行LAMP-PCR检测,电泳结果表明,与常规PCR相比LAMP-PCR获得了更为清晰的条带。除此之外,阳性反应的发生可以根据LAMP-PCR的副产物即焦磷酸镁的沉淀来直接观察,或者利用Gold View核酸染色剂对LAMP-PCR产物进行染色,根据产物的颜色直接进行判断。因此表明LAMP-PCR的具有较高的灵敏性和简便性。(2)利用针对转基因杨树建立的LAMP-PCR技术检测转基因741杨5个株系PB1、PB3、PB11、PB17、PB29中的Bt Cry1Ac和Npt II基因,均能稳定的扩增出清晰的弥散状条带。因此表明LAMP-PCR的具有较高的准确性和可靠性。(3)对转Bt Cry1Ac基因107杨的高抗株系Pb1和非转基因107杨的干、根和根际土壤DNA样品进行高通量测序,并对微生物群落组成的测序结果进行OTU聚类分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析、LEf Se分析等,结果表明在转基因和非转基因这两个株系之间均没有表现出明显的差异。(4)对转Bt Cry1Ac基因107杨试验林中三种不同栽培更新方式(移栽、萌生、嫁接)的非转基因107杨的干、根和根际土壤DNA样品进行高通量测序,并对微生物群落组成的测序结果进行OTU聚类分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析、LEf Se分析等,结果表明三种不同栽培更新模式之间均没有表现出明显的差异。(5)纵向综合(2)、(3)中杨树的干、根、根际土壤内微生物群落的高通量测序结果得出,根和根际土壤DNA样品中的微生物群落组成相似度极高,而二者均与干内DNA样品的微生物群落组成差异较大。相对而言,根和根际土壤内微生物的多样性高于干内微生物的多样性。

关键词：转基因杨树 LAMP 检测微生物多样性分析生物安全性

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转基因杨树对节肢动物群落的影响及对桑天牛的抗性鉴定

转基因杨树对节肢动物群落的影响及对桑天牛的抗性鉴定

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作者：牛小云河北农业大学

学位级别：硕士

转基因植物生态安全性问题已成为阻碍转基因作物大面积推广的主要因素。本文以转BtCry3Ac基因741杨和转双抗虫741杨为研究对象,通过野外调查研究了两种转基因杨对节肢动物群落的组成、群落特征等的影响。通过室内试验,研究了转BtCry3Ac... 详细信息

转基因植物生态安全性问题已成为阻碍转基因作物大面积推广的主要因素。本文以转BtCry3Ac基因741杨和转双抗虫741杨为研究对象,通过野外调查研究了两种转基因杨对节肢动物群落的组成、群落特征等的影响。通过室内试验,研究了转BtCry3Ac基因741杨对其靶标害虫桑天牛的抗性,并测定了其毒蛋白的时空动态表达情况。旨在为转基因741杨生态安全性评价及转BtCry3Ac基因741杨的推广利用提供科学依据。所取得的主要结果如下。 1对转BtCry3Ac基因741杨及转双抗虫基因741杨对其树冠层节肢动物群落的影响进行研究,结果表明:2种转基因杨林的节肢动物群落较对照杨林节肢动物群落稳定性减小,容易受外界因素及内部因素的影响,但2种转基因杨林各功能团稳定性较对照杨林有所上升;2种转基因杨林对靶标害虫群落都有一定的抑制作用,且害虫群落结构稳定性高,不易造成害虫的大爆发;在整个生长季节2种转基因杨林与对照杨林的节肢动物群落时间动态变化趋势基本一致。 2对转BtCry3Ac基因741杨及转双抗虫基因741杨对其土壤节肢动物群落的影响进行研究,结果表明:2种转基因杨林土壤节肢动物群落较对照杨林结构更合理,稳定性更高,且个体数量稍高;2种转基因杨与对照杨地下节肢动物群落的三种优势种群在空间上和时间上数量动态变化差异不明显。 3对转BtCry3Ac基因抗虫杨树741杨试验林中的6个转基因株系外源基因整合的稳定性、总蛋白和毒蛋白的表达量进行检测,结果表明:外源基因在6个转基因株系中整合稳定,各株系的木质部在整个生长季节均检测到毒蛋白表达,且各木质部呈现一定的时间序列规律,均在8月或者9月达到高峰期,10月份开始急剧下降,但表达量有差异,其中CC84株系的表达量在7～9月份都明显高于其它株系。 4对转BtCry3Ac基因抗虫杨树741杨6个转基因株系对桑天牛的抗性进行鉴定,结果表明:6个株系对桑天牛成虫产卵和2龄幼虫的生长均有一定的抑制作用,表现出一定抗性,其中CC84株系对桑天牛幼虫的致死作用达到50%,并表现出较稳定的抗虫性。根据检测鉴定结果初步认为,转基因株系CC84具有推广应用潜力。 5对抗虫性较稳定的转BtCry3Ac基因741杨试验林PCC1(原CC84)株系作进一步研究,测定PCC1株系在不同发育时期和树冠不同位置枝条木质部、叶片及根部毒蛋白、可溶性蛋白的表达量。结果表明:PCC1株系可溶性蛋白表达量与对照无差别,且树冠不同位置的枝条木质部、叶片及根部可溶性蛋白的表达量在整个生长季节都呈现出一定的规律性,木质部和根部可溶性蛋白呈现一直递增的趋势,叶片可溶性蛋白呈现先降低后升高再降低的规律。毒蛋白表达量,木质部呈现由树冠上部到下部逐渐升高的趋势,叶部呈现由树冠上部到下部逐渐降低的趋势;在整个生长季节,木质部毒蛋白呈现先上升后下降的趋势,9月份毒蛋白的表达量达到最高峰,叶部及根部毒蛋白没有呈现出较明显的规律性。

关键词：转基因杨树节肢动物桑天牛抗虫性毒蛋白

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转基因杨树中农杆菌残存状况分析

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河北农业大学学报 2009年第3期32卷 67-70页

作者：缪丽萍张千千张军杨敏生王连荣河北农业大学林学院河北保定071000 河北北方学院园艺系河北张家口075131

以转发根农杆菌741杨为材料,在继代和移栽过程中对其残存农杆菌进行追踪检测。结果表明:培养基中附加头孢噻钨纳300 mg/L可将农杆菌基本抑制;随着转化植株在含抗生素培养基中继代时间的延长,残存农杆菌的数量和活性逐步下降,在继代18个... 详细信息

以转发根农杆菌741杨为材料,在继代和移栽过程中对其残存农杆菌进行追踪检测。结果表明:培养基中附加头孢噻钨纳300 mg/L可将农杆菌基本抑制;随着转化植株在含抗生素培养基中继代时间的延长,残存农杆菌的数量和活性逐步下降,在继代18个月后,无法培养出目的菌落,但转化植株一旦脱离抗生素环境,农杆菌数量和活性又将得到恢复;残存农杆菌主要分布于植株体表和茎中,且影响组培苗PCR检测结果;将转化株系组培苗移栽到花盆半月和田间6个月后,植株体表、体内均未检测到目的农杆菌,但在室内培养半个月后2个株系根际土壤中检测到目的菌落。

关键词：转基因杨树农杆菌残存

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转基因杨树环境安全评价研究

转基因杨树环境安全评价研究

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作者：陈兴玲沈阳农业大学

学位级别：硕士

基因工程育种技术的日益成熟，为林木育种提供了更快捷有效的手段。随着转基因林木研究的不断深入，已经从实验室、田间试验，发展到环境释放、进行商品化阶段。在我国转Bt基因杨树已在生产上得到商业化应用，种植面积达250公顷。与此... 详细信息

基因工程育种技术的日益成熟，为林木育种提供了更快捷有效的手段。随着转基因林木研究的不断深入，已经从实验室、田间试验，发展到环境释放、进行商品化阶段。在我国转Bt基因杨树已在生产上得到商业化应用，种植面积达250公顷。与此同时，转基因杨树的环境安全问题受到普遍关注，其中以转基因杨树基因漂移为研究重点。然而由于杨树以无性繁殖为主，以往对杨树花粉传播规律的研究相对较少，并且国外对转基因林木的田间试验要求严格，必须在开花之前砍伐，所以对转基因林木基因漂移等环境安全性评价研究相对滞后。本文主要对转基因杨树的遗传稳定性、与近缘种的杂交亲和性、转基因杨树与近缘种的花期相遇问题、转基因杨树花粉传播规律及影响因素、转基因杨树天然杂交后代的繁殖及更新能力进行了研究，进而对转基因杨树的环境安全进行评价。通过对种植在田间多年的转基因杨树植株，以及与近缘种控制授粉杂交后代进行PCR检测，研究转基因杨树Bt基因的遗传稳定性，并探讨其与近缘种的杂交亲和性，为评价基因漂移提供证据。本研究对14个转基因杨树无性系的分析表明，转基因杨树在大田种植12年后，Bt基因在转基因植株中稳定存在，没有发生丢失现象。在此基础上，随机选取其中一个系号进行遗传分析。结果表明，转基因无性系172(♀)中Bt为一显性基因，能够稳定遗传至下一代，杂交后代分离遵从孟德尔遗传规律。同时，对非转基因杨树(♀)×转基因杨树(♂)、少先队杨(♀)×转基因杨树(♂)进行人工控制授粉，获得了大量育性正常的杂交后代说明转基因杨树与非转基因杨树、少先队杨杂交高度亲和，并且对转基因杨树及少先队杨开花散粉情况的调查显示，转基因杨树与少先队杨的花期相遇，授粉期持续约5天，为开展转基因杨树基因漂移研究提供依据。转基因植物的基因漂移规律及影响因素一直备受关注。花粉传播是转基因植物基因漂移的主要途径，本研究采用PCR检测方法对转基因杨树花粉进行跟踪研究，分析了转基因杨树花粉传播的规律及影响因素，从花粉传播的角度对转基因杨树基因漂移进行评价。本研究得到如下转基因杨树花粉传播的规律：(1)转基因杨树花粉传播频率在0m处1.642‰，200m处0.485‰，500m处0.33‰，到800m未检测到转基因杂交后代，随着转基因杨树与少先队杨之间距离的增加花粉传播频率不断降低。(2)一般认为杨树花粉传播距离通常在1km左右。本研究中，SE3(800m)点没有检测到转基因杂交后代，原因可能是相对于周围大量的非转基因杨树(♂)群体(1000株)，转基因杨树(♂)数量较小(22株)，转基因花粉没有传播到这里，或者传播频率太低，没有达到检测水平。(3)风向、风速和隔离带是转基因植物花粉传播的主要影响因素。本试验在东南和东北两个方向的少先队杨分别采样，东南方向500m的距离检测到转基因杂交后代，频率为0.33‰，而在东北方向386m最近距离处，没有检测到转基因杂交后代。转基因植物杂交后代繁殖及生存竞争能力，是转基因植物中外源基因能否成功转移至环境的关键性环节。为了研究转基因杨树后代生存竞争能力和天然更新能力，本试验对转基因杨树种子在不同保存条件下生活力的持续时间以及在田间播种的发芽率和保存率进行分析。结果表明，在室外无阳光直射条件下，仅经过一周时间种子发芽率就降低到12％，而在4℃冰箱中保存的种子到四周后发芽率仍能达到48％，可见天然条件下，转基因杨树种子生活力的持续时间非常短。同时，田间播种试验中，在没有任何田间管理措施条件下，转基因种子的萌发率为0，而采取浇水、整地、除草等措施时，幼苗的保存率可达6.1％，说明在天然条件下，降雨量低的地方，转基因杨树再生是非常困难的。综上所述，虽然转基因杨树的Bt基因能够稳定遗传，与近缘种杂交亲和，花期相遇，外源基因能够在短距离(500m)内有效传播，然而转基因杨树的种植区主要分布在中国的北方地区，不具备转基因杨树天然更新的条件，也不存在转基因杨树近缘种天然林，因此我国北方转基因杨树外源基因通过花粉和种子方式向周围环境扩散或逃逸的可能性很小，不会对该地区产生生态风险。

关键词：转基因杨树基因漂移安全评价花粉传播

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