检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2013年第7期44卷 1160-1166页

作者：庄利利吴俊波胡德宝蔡丽娟张也李钟淑方南洙延边大学农学院动物科学系延吉133002

研究输卵管上皮细胞共培养对小鼠早期胚胎发育的影响,探索输卵管上皮细胞共培养克服胚胎发育阻滞的机理。建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系,并与合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力,用RT-PCR... 详细信息

研究输卵管上皮细胞共培养对小鼠早期胚胎发育的影响,探索输卵管上皮细胞共培养克服胚胎发育阻滞的机理。建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系,并与合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力,用RT-PCR检测CAT及GPX的转录状况。输卵管上皮细胞共培养能够显著提高2-细胞早期、4-细胞期胚胎发育率(P<0.05),囊胚率也有所提高(P>0.05)。输卵管上皮细胞共培养能够显著降低2-细胞早期胚胎内部的H2O2含量(P<0.05)。小鼠阻滞胚胎中有H2O2蓄积,输卵管上皮细胞共培养能够降低Ⅰ和Ⅱ型阻滞胚胎的比例(P>0.05),显著地提高Ⅲ型阻滞胚胎的比例(P<0.05)。当胚胎发育到2-细胞早期时共培养细胞活力上升(P>0.05),抗氧化基因CAT及GPX转录量增加(P>0.05)。以上结果表明,输卵管上皮细胞共培养通过细胞-细胞间的相互作用降低胚胎细胞内部的活性氧,克服胚胎发育阻滞,促进胚胎发育,提高胚胎质量。

关键词：输卵管上皮细胞共培养早期胚胎阻滞活性氧

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输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育机理的探索

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中国农业大学学报 2013年第4期18卷 155-161页

作者：庄利利胡德宝蔡丽娟张也李钟淑方南洙延边大学农学院吉林延吉133002

为研究输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎发育质量及胚胎对共培养细胞活力和基因转录量的影响,探索输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育的机理,建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系并对合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以... 详细信息

为研究输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎发育质量及胚胎对共培养细胞活力和基因转录量的影响,探索输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育的机理,建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系并对合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力,用RT-PCR检测CAT及GPX的转录状况。结果表明:1)共培养能够提高2-细胞早期、4-细胞期胚胎发育率(0.951 3%VS 0.903 3%,0.857 6%VS0.700 5%,P<0.05)和囊胚发育率(0.537 9%VS 0.573 3%,P>0.05);2)2-细胞早期胚胎内部的H2O2含量显著降低(0.047 9VS 0.068 2,P<0.05);3)Ⅰ和Ⅱ型阻滞胚胎的比例降低(0.158 3%VS 0.192 6%,0.213 3%VS0.433 9%,P>0.05),Ⅲ型阻滞胚胎的比例提高(0.621 6%VS 0.373 3%,P<0.05);4)共培养细胞活性上升(0.216 7VS 0.195 7,P>0.05);5)CAT及GPX的转录量增加(1.202 0VS 0.984 9,1.310 1VS 0.998 3,P>0.05)。结果显示输卵管上皮细胞共培养通过增强自身的抗氧化能力,利用细胞-细胞间的相互作用降低胚胎细胞内部的活性氧,提高胚胎质量,促进胚胎发育。

关键词：输卵管上皮细胞共培养早期胚胎阻滞活性氧小鼠

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输卵管上皮细胞共培养技术对受精卵体外发育的影响及临床应用价值

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生殖与避孕 2001年第3期21卷 183-187页

作者：叶新红徐国江严敬明复旦大学医学院附属妇产科医院上海200011

目前 IVF-ET的成功率仍较低 ,主要是由于胚胎过早移植入宫腔所致。输卵管上皮细胞共培养体系可以延长胚胎的体外培养时间 ,提高发育至囊胚期的胚胎数 ,从而提高IVF-ET成功率 ,减少多胎妊娠。

关键词：输卵管上皮细胞共培养受精卵体外发育临床应用

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输卵管上皮细胞对小鼠受精卵体外发育的影响

输卵管上皮细胞对小鼠受精卵体外发育的影响

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作者：叶新红复旦大学

学位级别：硕士

该文建立了羊和人的输卵管上皮细胞共培养体系,并探讨输卵管上皮细胞共培养体系对受精卵体外发育的影响.目的:了解输卵管上皮细胞共培养体系对受精卵体外发育的影响.结果表明:1.输卵管上皮细胞共培养体系有助于小鼠早期胚胎克服体外发... 详细信息

该文建立了羊和人的输卵管上皮细胞共培养体系,并探讨输卵管上皮细胞共培养体系对受精卵体外发育的影响.目的:了解输卵管上皮细胞共培养体系对受精卵体外发育的影响.结果表明:1.输卵管上皮细胞共培养体系有助于小鼠早期胚胎克服体外发育中的阻断.2.输卵管上皮细胞共培养体系可提高早期胚胎发育至囊胚期的胚胎数.

关键词：小鼠胚胎输卵管上皮细胞体外发育

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培养时间和传代次数对山羊输卵管上皮细胞周期和凋亡的影响

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解剖学报 2009年第2期40卷 269-273页

作者：谭秀文游伟刘晓牧宋恩亮万发春山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疾病防治与繁育重点实验室

目的利用山羊输卵管上皮细胞（OECs）探讨体外培养时间和传代次数对细胞生长的影响。方法建立山羊OECs的体外培养体系,用流式细胞术分别对半数贴壁、刚贴满（贴壁1d）、贴满3d和贴满5d,以及原代、Ⅲ代和Ⅴ代细胞分别进行细胞周期和凋亡... 详细信息

目的利用山羊输卵管上皮细胞（OECs）探讨体外培养时间和传代次数对细胞生长的影响。方法建立山羊OECs的体外培养体系,用流式细胞术分别对半数贴壁、刚贴满（贴壁1d）、贴满3d和贴满5d,以及原代、Ⅲ代和Ⅴ代细胞分别进行细胞周期和凋亡检测。结果细胞贴满3d和传至Ⅲ代时,细胞凋亡比率较低,处于静止期（G0/G1）细胞明显降低,极性线粒体受损明显降低;培养时间延长和传代次数增加后,凋亡比率显著升高,处于增殖期（S,G2/M）的比率显著降低,极性线粒体受损明显升高。结论采用OECs培养胚胎时,细胞应控制在Ⅲ代以内,且贴满时间不超过3d。

关键词：输卵管上皮细胞培养时间传代细胞周期流式细胞术山羊

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牛输卵管上皮细胞转人胶原蛋白cDNA基因及转基因克隆胚胎

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中国兽医学报 2012年第1期32卷 144-150页

作者：吕自力王亮刘婷婷石国庆石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国科学院新疆理化技术研究所新疆乌鲁木齐830011 新疆金牛生物有限公司新疆乌鲁木齐830026 新疆农垦科学院畜牧兽医所新疆石河子832000

以2岁奶牛输卵管为材料,用胰酶消化法分离得到了牛输卵管上皮细胞。输卵管上皮细胞在DMEM/F12培养基中生长良好。用一代牛输卵管上皮细胞为靶细胞,对其进行了电穿孔转染,转染对象是分子大小为31 085bp的以β-casein启动子为基础的含有... 详细信息

以2岁奶牛输卵管为材料,用胰酶消化法分离得到了牛输卵管上皮细胞。输卵管上皮细胞在DMEM/F12培养基中生长良好。用一代牛输卵管上皮细胞为靶细胞,对其进行了电穿孔转染,转染对象是分子大小为31 085bp的以β-casein启动子为基础的含有人胶原蛋白cDNA基因和EGFP、Neor双标记基因的质粒。电穿孔试验发现,牛输卵管上皮细胞在低渗缓冲液中电转染可以获得阳性转染子,其中以90mOsm/kg为最佳。电压以800V为好,电压高和低都不利于电穿孔的成功。成功转染的细胞用800mg/L G418进行筛选,在10d后获得了较大的阳性细胞克隆簇。对获得的阳性细胞克隆簇进行扩大后,得到了较纯的阳性细胞克隆系,流式细胞仪检测其纯度为81.6%。在荧光显微镜下选择阳性细胞作为核移植供体细胞进行了转基因克隆试验,结果显示以转基因和非转基因细胞为核供体获得的重构胚融合率差异显著(51.9%比63.2%),获得的桑椹胚/囊胚率差异不显著(20.3%比25.5%)。对获得的具有绿色荧光的胚胎进行DNA分析,结果显示这些胚胎成功转入了外源基因,并且转入的外源基因结构完整。

关键词：牛输卵管上皮细胞电穿孔胶原蛋白转基因克隆

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山羊输卵管上皮细胞的分离与培养

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第6期38卷 71-76,82页

作者：李港杨艳王爱华靳亚平李倩西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

【目的】分离并培养山羊输卵管上皮细胞,研究其生长特性。【方法】采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果;选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定;向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、EGF和血清,探讨其对输... 详细信息

【目的】分离并培养山羊输卵管上皮细胞,研究其生长特性。【方法】采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果;选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定;向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、EGF和血清,探讨其对输卵管上皮细胞体外培养的影响。【结果】胰酶对山羊输卵管上皮细胞的分离效果较差,胶原酶次之,机械刮取方法较好。机械刮取法分离的细胞以细胞团居多,接种后8~12 h开始贴壁生长,生长2~3d细胞呈现明显的铺路石形态。免疫细胞化学染色显示,细胞角蛋白阳性率在95%以上。上皮细胞培养体系中含少量血清及人EGF、胰岛素,能有效促进原代和传代输卵管上皮细胞的生长,以体积分数5%血清＋EGF的培养效果较好。【结论】采用机械刮取法分离培养的输卵管上皮细胞,在体外可连续传到第8代,传代细胞活性强、纯度高,可为输卵管上皮细胞相关功能的研究提供材料。

关键词：山羊输卵管上皮细胞胶原酶

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孕酮对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1 mRNA表达的影响

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西北农业学报 2020年第3期29卷 334-340页

作者：王东阳杨燕燕白萨日娜纳仁高娃包图雅内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 内蒙古农牧科学院呼和浩特010031

旨在研究孕酮(P4)对绵羊输卵管上皮细胞内β-防御素-1(SBD-1)mRNA基因表达的影响及可能参与的信号通路,利用10-8 mol/L P4培养绵羊输卵管上皮细胞2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,利用RT-qPCR技术检测SBD-1 mRNA的表达变化,选取P4诱导SBD-1 ... 详细信息

旨在研究孕酮(P4)对绵羊输卵管上皮细胞内β-防御素-1(SBD-1)mRNA基因表达的影响及可能参与的信号通路,利用10-8 mol/L P4培养绵羊输卵管上皮细胞2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,利用RT-qPCR技术检测SBD-1 mRNA的表达变化,选取P4诱导SBD-1 mRNA表达的最佳时间。分别添加P4核受体阻断剂RU-486、蛋白激酶C(PKC)阻断剂H-7、蛋白激酶A(PKA)阻断剂H-89干预绵羊输卵管上皮细胞1 h,再使用P4处理细胞。结果显示,用10-8mol/L P4诱导绵羊输卵管上皮细胞6 h,SBD-1 mRNA表达显著升高;添加RU-486和H-89显著抑制P4诱导的SBD-1 mRNA的表达;添加H-7后SBD-1 mRNA的表达量无显著性差异。以上结果表明,P4诱导的绵羊输卵管上皮细胞中SBD-1 mRNA的表达通过孕酮核受体(PR)和PKA信号通路介导,与PKC信号通路激活无关。

关键词：输卵管上皮细胞绵羊β-防御素-1 孕酮信号通路

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雌二醇对蒙古绵羊输卵管上皮细胞内β-防御素(sBD-1)表达的影响

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动物学杂志 2008年第4期43卷 41-47页

作者：李淑凤曹贵方宋艳华姜丽萍郭宏儒邵艳红内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018 内蒙古医学院基础医学院呼和浩特010059

为了探索雌二醇与β-防御素（sBD-1）表达量的关系,体外模拟蒙古绵羊（Ovis aries）生理周期,用添加雌二醇浓度10-11、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的培养液及不添加雌二醇的培养液（即对照组）分别培养蒙古绵羊输卵管上皮细胞,... 详细信息

为了探索雌二醇与β-防御素（sBD-1）表达量的关系,体外模拟蒙古绵羊（Ovis aries）生理周期,用添加雌二醇浓度10-11、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的培养液及不添加雌二醇的培养液（即对照组）分别培养蒙古绵羊输卵管上皮细胞,作用24 h、48 h、72 h后,提取细胞总RNA,应用SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR法进行定量分析。结果显示,添加不同浓度雌二醇培养的输卵管上皮细胞中sBD-1的相对表达量0.000 740~0.001 758,与对照组0.000 190之间差异显著（P〈0.05）,且小于10-8mol/L雌二醇添加浓度与sBD-1基因相对表达量变化基本呈正相关。此结果为进一步研究雌激素参与机体防御功能奠定了基础。

关键词：雌二醇绵羊β-防御素-1(sBD-1) 基因表达量输卵管上皮细胞蒙古绵羊

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17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-2(SBD-2)表达的可能信号通路研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2013年第11期41卷 32-36,44页

作者：包图雅曹贵方凃勇杜晨光内蒙古医科大学基础医学院内蒙古呼和浩特010110 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L... 详细信息

【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRNA表达水平的变化。【结果】10-8 mol/L 17β-雌二醇可显著上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2mRNA的表达(P<0.05);雌激素受体拮抗剂ICI182780、NF-κΒ阻断剂PDTC、PKC阻断剂H-7均可阻断17β-雌二醇对SBD-2的上调作用,PKA阻断剂KT-5720对17β-雌二醇介导的SBD-2上调无明显影响。【结论】17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2的表达由雌激素核受体、NF-κΒ、PKC信号转导通路所介导,而PKA不参与17β-雌二醇对SBD-2的上调作用。

关键词： 17β-雌二醇输卵管上皮细胞 SBD-2 信号通路

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