检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：林崇韫华南农业大学

学位级别：硕士

蛋传病是病原通过染病或带菌母鸡传给子代所引起的疾病。由于种鸡蛋传性疾病的蔓延，种鸡养殖企业普遍采用定期投喂有效抗菌药物的方法控制疾病的发生，但滥用药物，致使耐药菌株迅速增加。于是，人们把目光投放到抗茵多肽方面，这是由... 详细信息

蛋传病是病原通过染病或带菌母鸡传给子代所引起的疾病。由于种鸡蛋传性疾病的蔓延，种鸡养殖企业普遍采用定期投喂有效抗菌药物的方法控制疾病的发生，但滥用药物，致使耐药菌株迅速增加。于是，人们把目光投放到抗茵多肽方面，这是由于抗菌多肽有着与青霉素等传统抗生素完全不同的作用机制，病原菌不易产生对这一大类抗微生物多肽的耐药性。\n 本研究主要探讨在鸡体内输卵管部位定位表达抗菌多肽——蜂毒肽和鸡防御素9，使得抗菌多肽在鸡蛋形成过程中便开始抑制病原体的入侵，并一起组装入鸡蛋，使之存在于蛋清中，以期提高雏鸡的出生率及降低病菌在传代过程中的感染率。\n 本研究克隆了鸡卵清蛋白(Ovalbumin，ov)5’端调控序列1.1kb，将之取代载体pVAX1上的CMV启动子，并将蜂毒肽与鸡防御素9基因分别插入其下游，构建了输卵管定位表达抗菌多肽系统pOV1.1-MLT和pOV1.1-AvBD9。未替换启动子的载体也插入抗菌多肽基因，构建重组真核表达载体pVAXI-MLT和pVAXl-AvBD9。\n 将上述构建的多个重组载体分别转染CHO细胞和Vero细胞，经体外培养后，通过RT-PCR和免疫荧光检测，重组蛋白MLT和AvBD9在CHO细胞中均获得表达，在Vero细胞中只有非定位表达载体获得表达，所得蛋白大小分别为MLT 5.36kD和AvBD9 5.24kD。将含表达产物的细胞浓缩上清液进行体外抑菌试验，结果表明MLT对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌都有较高的抑制效果，AvBD9对金黄色葡萄球菌抑制较强，对大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌的抑制较弱。由ov序列驱动的表达比CMV驱动的表达水平略低。\n 为了能真实反映在鸡体内外源基因的表达以及被调控的状况，本研究采用脂质体包裹，经静脉注射的方法将重组质粒导入鸡体内，使定位表达载体经血液到达输卵管组织，被输卵管细胞吸收后表达。在注射4天后宰杀鸡，取各内脏器官进行冰冻切片，并提取总RNA，经冰冻切片免疫荧光检测和RT-PCR检测，证明ov序列驱动的重组载体能在输卵管上皮细胞中表达，而在其他非输卵管组织，如肝、肾、肌肉、卵巢中都有表达，但与CMV驱动的表达量相比略低。\n 鸡卵清蛋白调控序列受固醇类激素的调节，因此在离体细胞中表达时，需要加入多种类固醇激素（如加入雌二醇、皮质酮和胰岛素），以提高表达水平。而在体内表(达，胸肌注射一定量的雌激素，也有利于定位表达重组质粒的表达。\n 综上研究，鸡卵清蛋白调控的输卵管定位表达系统的建立，为深入研究防治蛋传性疾病，以及利用抗菌多肽开发新型DNA药物都有着重要的理论意义与实际应用价值。

关键词：蛋传病 DNA药物输卵管定位表达蜂毒肽鸡输卵管定位表达

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抗菌多肽(蜂毒肽)的鸡输卵管定位表达及其抗菌活性研究

抗菌多肽(蜂毒肽)的鸡输卵管定位表达及其抗菌活性研究

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者：林崇韫贺聪陈峰毕英佐赵亚华谢青梅华南农业大学生命科学学院华南农业大学动物科学学院

为实现外源抗菌多肽基因在鸡输卵管中的表达,抑制病原菌通过母鸡垂直传播给子代,本文克隆了鸡卵清蛋白（Ovalbumin,ov）5端的调控序列1.1kb,将之取代载体pVAX1的CMV启动子,并将蜂毒肽基因（melittin,MLT）插入其下游,构建了输卵管定位... 详细信息

为实现外源抗菌多肽基因在鸡输卵管中的表达,抑制病原菌通过母鸡垂直传播给子代,本文克隆了鸡卵清蛋白（Ovalbumin,ov）5端的调控序列1.1kb,将之取代载体pVAX1的CMV启动子,并将蜂毒肽基因（melittin,MLT）插入其下游,构建了输卵管定位表达抗菌多肽重组载体pOV-MLT,将该重组质粒转染CHO细胞和导入鸡体内,皆成功检测到目的蛋白的表达,并显示出抗菌活性,实现了输卵管定位表达抗菌多肽基因。

关键词： DNA药物输卵管定位表达抗菌多肽蜂毒肽

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融合启动子调控下鸡IL-2基因cDNA输卵管组织特异性表达

融合启动子调控下鸡IL-2基因cDNA输卵管组织特异性表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：李银聚程相朝张春杰吴庭才刘一尘河南科技大学动物科技学院

将含有鸡卵清溶菌酶5′端激素受体结合位点的DNA片段和卵清蛋白基因5′端调控序列进行融合并与鸡IL-2基因cDNA以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CMV启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-LGP-OVP-IL2。将真核表达载体pcDNA3-... 详细信息

将含有鸡卵清溶菌酶5′端激素受体结合位点的DNA片段和卵清蛋白基因5′端调控序列进行融合并与鸡IL-2基因cDNA以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CMV启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-LGP-OVP-IL2。将真核表达载体pcDNA3-IL2和输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL2、pcDNA3-LGP-IL2及pcDNA3-LGP-OVP-IL2转染鸡输卵管上皮细胞,激素诱导64h后,以淋巴细胞转化试验来检测细胞培养液中IL-2的表达水平及生物学活性。结果显示,转染细胞均可表达IL-2,所表达的IL-2有促进T淋巴细胞转化和促进淋巴母细胞成熟的活性。转染pcDNA3-LGP-OVP-IL2和pcDNA3-OVP-IL2的输卵管上皮细胞表达产物在1:256稀释水平下仍具有促进T淋巴细胞转化和促进淋巴母细胞成熟的活性;在相同激素水平下,融合启动子的调控能力没有明显的提高;转染pcDNA3-LGP-IL2和pcDNA3-IL-2输卵管上皮细胞虽有IL-2的表达,但水平较低。

关键词：鸡融合启动子 IL-2基因cDNA 输卵管定位表达激素

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鸡IL-2基因cDNA输卵管组织特异性表达载体的构建与表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第10期33卷 71-74页

作者：吴庭才李银聚张春杰程相朝河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003

将克隆并测序的鸡卵清蛋白基因5′端调控序列和鸡IL-2基因cDNA,以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CM V启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2。将真核表达载体pcDNA3-IL 2和构建的输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2... 详细信息

将克隆并测序的鸡卵清蛋白基因5′端调控序列和鸡IL-2基因cDNA,以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CM V启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2。将真核表达载体pcDNA3-IL 2和构建的输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2分别转染鸡输卵管上皮细胞,激素诱导72 h后,用淋巴细胞转化试验检测细胞培养液中IL-2的表达水平及生物学活性。结果显示,转染细胞均可表达IL-2,且所表达的IL-2有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性;转染pcDNA3-OVP-IL 2的输卵管上皮细胞表达产物在1∶256稀释水平下仍具有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性。转染pcDNA3-IL 2载体的输卵管上皮细胞虽有IL-2表达,但水平较低。

关键词：鸡 IL-2基因cDNA 输卵管定位表达转染

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