检索结果-内蒙古大学图书馆

大理医学院学报 2001年第4期10卷 15-16页

作者：章域震张海林杨卫红张云智米竹青袁庆虹云南省流行病防治研究所云南大理671000

目的：对澜沧江下游地区的思茅、澜沧、景洪、勐腊、勐海５个县、市进行三种蚊媒病毒的抗体调查，了解当地蚊媒病毒的流行情况。方法：血凝抑制试验。结果：在人血清中，乙型脑炎的阳性率为４６．９４％，基孔肯雅的阳性率为２．６３％... 详细信息

目的：对澜沧江下游地区的思茅、澜沧、景洪、勐腊、勐海５个县、市进行三种蚊媒病毒的抗体调查，了解当地蚊媒病毒的流行情况。方法：血凝抑制试验。结果：在人血清中，乙型脑炎的阳性率为４６．９４％，基孔肯雅的阳性率为２．６３％，辛德毕斯的阳性率为１．９３％；在鼠血清中，乙型脑炎的阳性率为１６．１５％，基孔肯雅的阳性率为０．７３％，辛德毕斯的阳性率为０．７３％。结论：证实澜沧江下游地区在人群和鼠间存在乙型脑炎、基孔肯雅和辛德毕斯病毒的感染。

关键词：云南乙型脑炎病毒基孔肯雅病毒辛德毕斯病毒血清学调查

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四碘荧光素B介导光动力通过破坏病毒核酸有效灭活包膜RNA病毒的研究

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华南国防医学杂志 2022年第2期36卷 79-82页

作者：丁晓艳杨茂成郭红霞晁晓娟李晋涛陆军军医大学基础医学院军事生物安全教研室重庆400038 新疆军区总医院疾病预防控制科

目的研究四碘荧光素B介导光动力对有包膜RNA病毒的消杀效果,评估该消杀方案在破坏病毒核酸的可行性。方法以有包膜的登革病毒4(Dengue virus 4,DENV4)和辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)作为指示病毒,添加2μg/ml四碘荧光素B,在可见光... 详细信息

目的研究四碘荧光素B介导光动力对有包膜RNA病毒的消杀效果,评估该消杀方案在破坏病毒核酸的可行性。方法以有包膜的登革病毒4(Dengue virus 4,DENV4)和辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)作为指示病毒,添加2μg/ml四碘荧光素B,在可见光波长535 nm下照射10 min,进行灭活处理。观察细胞病变并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-time quantitative reverse transcripition polymerase chain reaction,RT-PCR)进行消杀效果评价。结果四碘荧光素B加光照处理DENV4和SINV后,可通过破坏病毒核酸,有效阻止其对细胞的感染。结论四碘荧光素B作为良好的光敏剂与可见光结合可有效灭活有包膜的RNA病毒,可作为体外病毒灭活的新途径。

关键词：光动力疗法四碘荧光素B 包膜RNA病毒登革病毒4 辛德毕斯病毒

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^(60)Co-γ辐照对板层人工角膜中指示病毒灭活效果的研究

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中国消毒学杂志 2022年第8期39卷 561-563页

作者：岳广智杨立宏徐宏山刘欣玉李玉华中国食品药品检定研究院北京102629

目的研究^(60)Co⁃γ辐照对板层人工角膜中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法板层人工角膜放入经预先精确测定病毒滴度的辛德毕斯病毒、脑心肌炎病毒和猪细小病毒中,4℃浸泡角膜8 h吸附病毒。经-0.75 kPa减压干燥6 h,进行5~25 kGy不同剂... 详细信息

目的研究^(60)Co⁃γ辐照对板层人工角膜中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法板层人工角膜放入经预先精确测定病毒滴度的辛德毕斯病毒、脑心肌炎病毒和猪细小病毒中,4℃浸泡角膜8 h吸附病毒。经-0.75 kPa减压干燥6 h,进行5~25 kGy不同剂量的^(60)Co⁃γ辐照。辐照后每只角膜用稀释液浸泡释放病毒(4℃,5 h)、剪碎、研磨离心取上清,用蚀斑法或微量细胞病变法分别测定3种病毒的残余病毒滴度,验证^(60)Co⁃γ辐照对3种病毒的灭活效果。结果经5~25 kGy ^(60)Co⁃γ辐照,辛德毕斯病毒滴度下降对数值≥5.32~5.41 lg pfu/mL,脑心肌炎病毒下降对数值≥4.68~5.00 lg TCID_(50)/0.1 mL和猪细小病毒下降对数值≥4.06~4.44 lg TCID_(50)/0.1 mL。结论^(60)Co⁃γ辐照对板层人工角膜中的脂包膜病毒和非脂包膜病毒均有较好的灭活效果。

关键词： ^(60)Co⁃γ辐照板层人工角膜辛德毕斯病毒脑心肌炎病毒猪细小病毒病毒灭活

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云南省中老边境地区乙型脑炎现状调查

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中国人兽共患病学报 2009年第7期25卷 701-704页

作者：李佳王丕玉张久松郭晓芳毛祥华王海波周红宁大理学院病原与媒介生物研究所大理671000 云南省寄生虫病防治所普洱665000 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

云南省中老边境地区主要包括澜沧江下游区域的勐腊县和江城县的部分地域,边境线全长793.8km,属浸蚀山地,系横断山纵谷南段,无量山南延尾梢.地势北高南低,由东北向西南呈梯状下降.

关键词：乙型脑炎病毒边境地区云南省澜沧江下游辛德毕斯病毒基孔肯雅病毒人血清检测平均气温

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白纹伊蚊自噬相关蛋白Atg8关键位点鉴定及功能的初步研究

白纹伊蚊自噬相关蛋白Atg8关键位点鉴定及功能的初步研究

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作者：王冰雪武汉大学

学位级别：硕士

白纹伊蚊(Ae albopictus)是多种虫媒病毒如基孔肯雅病毒和登革病毒的传播媒介,目前,这些病毒导致的疾病缺乏有效的疫苗和治疗手段。细胞自噬是真核生物中清除生物大分子或损伤细胞器的生物过程,在真核生物细胞物质周转及细胞器质量控制... 详细信息

白纹伊蚊(Ae albopictus)是多种虫媒病毒如基孔肯雅病毒和登革病毒的传播媒介,目前,这些病毒导致的疾病缺乏有效的疫苗和治疗手段。细胞自噬是真核生物中清除生物大分子或损伤细胞器的生物过程,在真核生物细胞物质周转及细胞器质量控制与生物体的生长发育过程中起着重要作用。细胞自噬能够通过各种方式消除入侵的病原体,所以细胞自噬也是一种潜在的抗病毒感染的机制。自噬相关蛋白(autophagy related protein,Atg)是控制自噬过程的功能蛋白质。其中,Atg8参与自噬过程的各个阶段,是重要的自噬蛋白。辛德毕斯病毒是一种常用于研究病毒感染的模式病毒,能够感染白纹伊蚊并被其携带和传播。本实验室前期结果证实辛德毕斯病毒感染诱导白纹伊蚊C6/36细胞自噬,且诱导的自噬发挥抗病毒功能,但具体机制还需要深入研究。为深入研究细胞自噬影响病毒复制的机制,本论文以自噬相关蛋白Atg8为研究对象,构建了Atg8重要功能位点突变体,经由这些突变体研究了Atg8特性,发现白纹伊蚊Atg8F79位可能与Atg4识别白纹伊蚊pro-Atg8有关,G116位为Atg4切割白纹伊蚊pro-Atg8的位点,K118位与白纹伊蚊Atg8蛋白的稳定性有关,F77位可能改变Atg8的定位,K46-K48位的乙酰化状态与L50位可能影响Atg8的亚细胞分布,Y49A突变与K46Q突变可能改变Atg8的切割形式。同时,我们也检测了Atg8重要功能位点突变对辛德毕斯病毒在C6/26细胞种复制的影响,结果表明,K118R与K47Q突变使病毒胞外滴度减少,G116A、ΔNK、F77A、F79A、K47R、K48R与K46R突变使病毒胞外滴度增加。除此之外,本论文还制备了5个辛德毕斯病毒蛋白多克隆抗体,并证实所制备的抗体均能特异性地检测到相应的辛德毕斯病毒蛋白。本论文初步研究了自噬相关蛋白Atg8的关键位点及其对辛德毕斯病毒在白纹伊蚊C6/36细胞中复制的影响,为深入研究白纹伊蚊细胞自噬与病毒感染之间的关系提供了依据。

关键词：细胞自噬 Atg8 白纹伊蚊辛德毕斯病毒

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CHIKV、SINV和JEV可视化基因芯片的建立及初步应用

CHIKV、SINV和JEV可视化基因芯片的建立及初步应用

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作者：薛斐中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

基孔肯雅病毒(Chikungunya Virus, CHIKV)和辛德毕斯病毒(Sindbis Virus, SINV)是甲病毒属单链RNA病毒，经蚊虫传播，在世界范围内广泛分布，有致病快，传播迅速等特点，其流行对世界公共安全造成威胁。目前缺乏对两种病毒引起疾病的有... 详细信息

基孔肯雅病毒(Chikungunya Virus, CHIKV)和辛德毕斯病毒(Sindbis Virus, SINV)是甲病毒属单链RNA病毒，经蚊虫传播，在世界范围内广泛分布，有致病快，传播迅速等特点，其流行对世界公共安全造成威胁。目前缺乏对两种病毒引起疾病的有效治疗药物，因此，对两种病毒快速有效地进行诊断是预防控制和减缓病毒传播的重要措施。乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)是RNA病毒，能引发病毒性的脑炎，经库蚊等在动物与人之间传播。在亚洲的东部和南部及太平洋等地区广泛流行。目前已应用乙型脑炎疫苗防治，但尚缺乏特异性抗病毒药物，因此，对乙型脑炎的早期诊断显得极为重要。基因芯片技术(Gene Chip Technology)有较高的特异性和灵敏度及高通量等特点，在对环境和临床检测上有良好的应用。目前有多种基因芯片技术，以荧光、同位素、酶标标记在核酸检测中比较普遍。但有灵敏度较低，操作复杂，对条件和设备有着较高的要求等问题，限制了这类技术在检测病例中的应用。纳米金标记比荧光标记检测在敏感性上高100倍，简便快速，不需特殊的仪器，结果肉眼可看见。本文将纳米金标记技术应用在可视化基因芯片制备中，旨在建立对CHIKV、SINV和JEV进行快速、准确、价廉、操作简单的诊断研究的可视化基因芯片方法，分别探讨了CHIKV和SINV荧光检测基因芯片和可视化检测基因芯片的制备及两者的比较与JEV可视化分型基因芯片的制备。主要内容包括: 一、CHIKV和SINV可视化检测基因芯片和荧光检测基因芯片的研制及两者之间的比较本实验室已初步建立了CHIKV和SINV荧光检测基因芯片，在此基础上，建立了两种病毒可视化检测基因芯片和荧光检测基因芯片。我们以已有CHIKV和SINV E基因序列为模板，重新设计检测探针和引物并对探针进行氨基修饰，对引物进行荧光素/生物素修饰。使用芯片点样仪对探针进行点样，在37℃的湿润环境下将检测探针固定到醛基玻片上，同时，以分别含CHIKV和SINV E基因的质粒为模板扩增待检测片段，变性后杂交到探针芯片，洗脱后荧光标记基因芯片通过特殊扫描仪扫描分析结果，而可视化基因芯片利用生物素与链霉亲和素高度亲和的特性在检测芯片上标记纳米金，银增强实现可视化。以酶切鉴定正确的CHIKV和SINV E基因序列为模板反向转录为RNA模拟真实的CHIKV和SINV RNA，将CHIKV和SINV RNA分别与提取的PRRSV，JEV-III，AIV RNA混合逆转录获得cDNA，PCR电泳鉴定各病毒cDNA的存在，使用CHIKV和SINV特异引物对各种病毒PCR扩增靶序列并与探针芯片杂交进行可视化基因芯片特异性实验，同时也进行灵敏度、重复性试验，结果显示，可视化基因芯片比荧光检测芯片方法对CHIKV和SINV的灵敏度检测结果分别为2.4×10-6ng/mL，2.0×10-8ng/mL和2.4×10-4ng/mL，2.0×10-5ng/mL，两者与PCR方法比较差异显著，可视化基因芯片比荧光检测芯片灵敏度可高出100倍，并且可视化基因芯片检测方法对两种病毒都具有良好的特异性和重复性。二、JEV可视化分型基因芯片的研制本实验室已初步建立了JEV荧光分型基因芯片，以此为基础建立了JEV可视化分型基因芯片。将已设计的氨基修饰检测探针点样并固定到醛基玻片上，同时，对已有引物序列5’末端进行生物素修饰，以已有的分别含乙型脑炎病毒I型（JEV-I）和乙型脑炎病毒III型（JEV-III）的PrM和E基因序列的质粒为模板扩增待检测目的片段，变性后杂交到检测探针芯片，利用生物素与链霉亲和素高度亲和的特性在检测芯片上标记纳米金，银增强实现可视化。进行灵敏度、特异性和重复性试验，结果显示，JEV分型可视化基因芯片检测到JEV-I和JEV-III的灵敏度分别为8.1×105拷贝数/mL和7.9×105拷贝数/mL，且具有良好的特异性和重复性。

关键词：基孔肯雅病毒辛德毕斯病毒乙型脑炎病毒基因芯片可视化

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m6A修饰对SINV复制的影响及调控机制

m6A修饰对SINV复制的影响及调控机制

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作者：赵亚静西北大学

学位级别：硕士

辛德毕斯病毒(SINV)属于马特利病毒目(martellivirales)披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)的成员。病毒基因组为单正链RNA,编码非结构蛋白和结构蛋白,非结构蛋白被切割为ns P1～4,结构蛋白包括Capsid、E3、E2、6K和E1。SINV... 详细信息

辛德毕斯病毒(SINV)属于马特利病毒目(martellivirales)披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)的成员。病毒基因组为单正链RNA,编码非结构蛋白和结构蛋白,非结构蛋白被切割为ns P1～4,结构蛋白包括Capsid、E3、E2、6K和E1。SINV在欧亚大陆、非洲、大洋洲等地均有分布,是一种人畜共患病毒,感染人可引起发热、皮疹和关节炎等症状。mA是最丰富的RNA内部修饰之一,通常富集在m RNA终止密码子和末端外显子附近,mA几乎参与调控了RNA加工代谢的各个过程,包括m RNA转录、剪接、核输出、定位、翻译和稳定性。多项研究表明mA修饰在调控病毒的复制中起了十分重要的作用,如可通过影响病毒RNA的稳定性、修饰病毒RNA使病毒逃逸宿主的固有免疫应答等机制调控病毒的复制。目前mA修饰在甲病毒复制中的作用尚不明确。本研究以SINV作为甲病毒的模式病毒,研究了mA修饰与病毒复制的关系,并深入探究了其调控病毒复制的具体机制。研究方法及结果:(1)利用mA免疫沉淀高通量测序技术(Me RIP-seq)确定了SINV基因组中是否存在mA修饰,结果表明SINV基因组的核衣壳区域有显著的mA富集,提示SINV基因组中存在mA修饰。(2)通过免疫荧光技术(IFA)检测mA甲基化修饰相关分子与SINV结构蛋白及核酸的共定位情况,结果表明SINV感染后病毒核衣壳蛋白Capsid、糖蛋白E2和病毒双链RNA(ds RNA)均与mA甲基转移酶METTL3、METTL14在细胞质中存在共定位;同时病毒ds RNA与mA阅读蛋白YTHDF1-3在细胞质中存在共定位。上述结果提示SINV基因组上存在mA修饰,且该修饰可能是由病毒与细胞质中甲基转移酶以及阅读蛋白存在共定位所介导。(3)通过实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)检测SINV感染时甲基化修饰相关分子,结果发现SINV感染不影响mA甲基转移酶METTL3和METTL14的m RNA水平以及阅读蛋白YTHDF1-3的蛋白水平,提示SINV感染不直接调控细胞的mA修饰分子。(4)利用q PCR、Western Blot以及空斑测定实验检测SINV感染后mA修饰抑制剂3-脱氮腺苷(3-DAA)与病毒复制的关系以及mA甲基转移酶与病毒复制的关系。3-DAA作用后,病毒基因拷贝数、核衣壳蛋白表达量以及细胞培养上清中的病毒滴度均有所升高,说明3-DAA促进了SINV的复制,但其具体机制是否依赖mA通路尚不明确。而SINV感染METTL3缺失的细胞中病毒基因拷贝数、核衣壳蛋白表达量均无明显变化,细胞培养上清中的病毒滴度仅在感染早期有影响,而在感染后期基本无影响,说明mA甲基转移酶METTL3对SINV的复制基本无影响。(5)进一步利用Western Blot以及空斑测定实验明确mA阅读蛋白YTHDF1-3是否影响SINV的复制,结果表明YTHDF1和YTHDF2均抑制了病毒粒子的出胞,而YTHDF3促进了病毒粒子的出胞,提示YTHDF1-3均参与调控SINV的复制,但具体的机制有所不同。YTHDF1和YTHDF2可能通过影响m RNA稳定性抑制病毒的增殖,而YTHDF3促进病毒分泌的机制尚需进一步深入研究。(6)为明确YTHDF3是否通过调控IFN通路影响SINV分泌,利用q PCR验证了YTHDF3缺失的细胞在SINV感染后IFN-β、Mx1、IFIT2、BST2等干扰素刺激基因(ISG)分子的表达情况,结果表明YTHDF3不通过干扰素通路调控SINV的出胞。通过RNA-Seq测序分析发现SINV感染后YTHDF3缺失的细胞中多个自噬相关基因发生变化;利用q PCR以及Western Blot检测自噬相关分子的水平,发现自噬受体SQSTM1以及LC3-I和LC3-II的表达量在YTHDF3缺失的细胞中显著下降,这表明在SINV感染期间YTHDF3可能通过阻断宿主细胞中的自噬进程,进而影响病毒粒子的释放。(7)通过免疫荧光以及透射电镜观察SINV感染后,YTHDF3缺失细胞中的细胞自噬情况。结果表明YTHDF3缺失细胞中的自噬溶酶体的数量明显增加,进一步通过Western Blot检测到SINV感染后,YTHDF3缺失细胞中的SQSTM1和LC3-II表达量明显下降,说明发生了完全自噬,而回补YTHDF3可以抵消因YTHDF3缺失引起的自噬进程的改变,提示SINV可以在YTHDF3缺失的细胞中诱导完全自噬。(8)采用自噬的晚期抑制剂巴佛洛霉素和氯喹处理细胞,进一步研究SINV感染在YTHDF3缺失的细胞中诱导完全自噬的机制,结果表明,SINV感染3h后以氯喹和巴佛洛霉素处理发现SQSTM1、LC3-Ⅱ和Capsid的表达量均有所增加

关键词：辛德毕斯病毒 N6-腺苷酸甲基化修饰(m6A修饰) 完全自噬固有免疫应答 RNA稳定性

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揭秘蚊子如何不受病毒感染影响