检索结果-内蒙古大学图书馆

分子植物育种 2024年

作者：曾丹饶席兵谢林艳田景梅李富生何丽莲云南农业大学农学与生物技术学院丽江市种子管理站

甘蔗是对温度要求较高的热带作物，而蔗茅(Erianthus fulvus)是甘蔗近缘野生属，具有较强的耐寒特性。本研究通过蔗茅与甘蔗的杂交，获得了耐寒性杂种后代，并以此为基础挖掘耐寒相关基因。本研究克隆了蔗茅中的EfWRKY15基因(基因登录号... 详细信息

甘蔗是对温度要求较高的热带作物，而蔗茅(Erianthus fulvus)是甘蔗近缘野生属，具有较强的耐寒特性。本研究通过蔗茅与甘蔗的杂交，获得了耐寒性杂种后代，并以此为基础挖掘耐寒相关基因。本研究克隆了蔗茅中的EfWRKY15基因(基因登录号为CP072009)，并构建了其过表达载体pu1300-EfWRKY15。通过转录组测序、理化性质分析和系统进化树分析，以及实时荧光定量PCR，分析了EfWRKY15在不同低温胁迫条件下的表达情况。结果表明，EfWRKY15基因在低温诱导下的表达差异显著，尤其在‘昆明蔗茅99-1’中的表达量最高。该研究为甘蔗耐寒性改良提供了重要的基因资源和理论依据，对实际生产具有重要的指导意义。

关键词：蔗茅(Erianthus fulvus) EfWRKY15基因耐寒性基因克隆过表达载体构建

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拟南芥(Arabidopsis thaliana)DWF4基因克隆、生物学信息分析及过表达载体构建

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种子 2021年第1期40卷 1-5,10页

作者：韦春杨莉琴秦利军贵州大学农业生物工程研究院/山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室/生命科学学院贵阳550025

BRs(Brassinosteroids)是植物体内一种重要的类固醇激素,具有十分重要的生理功能。DWF 4是BRs生物合成的关键限速酶,显著影响BRs在植物体中的含量。本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)为材料,利用同源克隆技术从*** cDNA中克隆到全长... 详细信息

BRs(Brassinosteroids)是植物体内一种重要的类固醇激素,具有十分重要的生理功能。DWF 4是BRs生物合成的关键限速酶,显著影响BRs在植物体中的含量。本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)为材料,利用同源克隆技术从*** cDNA中克隆到全长为1542 bp的特异性条带,测序结果表明该条带为AtDWF4基因;生物学信息分析显示该基因可编码513个氨基酸(amino acid,aa),Proscale在线预测该蛋白为亲水性蛋白,且SOPM分析表明DWF 4蛋白含有α-螺旋(alpha-helix)、β-折叠(beta-fold)、β-转角(beta-angle)等多个二级结构。同时,研究还构建了含AtDWF4基因的超量表达载体pRI 201-RdDwf 4,并遗传转化烟草K 326,已获得抗性愈伤组织及抗性芽。本研究为进一步探究过表达AtDWF4基因对烟草形态及抗逆胁迫能力的影响提供理想的实验材料。

关键词：拟南芥 BRs DWF4基因过表达载体构建

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野生番茄LA2157中热稳定抗根结线虫基因Mi-9候选基因的分离与过表达载体构建

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中国蔬菜 2017年第12期 30-34页

作者：王银磊陈伟男赵丽萍周蓉宋刘霞余文贵赵统敏江苏省农业科学院蔬菜研究所江苏南京210014 江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室江苏南京210014 扬州大学园艺与植物保护学院江苏扬州225009

根结线虫是番茄上的重要土传病害,选育抗根结线虫品种是最有效的防治方法,但是目前转育到栽培番茄中的抗根结线虫基因Mi-1在土温高于28℃时就丧失了抗性。本试验利用热稳定抗根结线虫野生番茄材料LA2157,根据Mi-1基因的序列信息,对其中... 详细信息

根结线虫是番茄上的重要土传病害,选育抗根结线虫品种是最有效的防治方法,但是目前转育到栽培番茄中的抗根结线虫基因Mi-1在土温高于28℃时就丧失了抗性。本试验利用热稳定抗根结线虫野生番茄材料LA2157,根据Mi-1基因的序列信息,对其中热稳定抗根结线虫Mi-9基因进行同源克隆,在LA2157中共获得2个候选基因片段;通过In-Fusion克隆技术,将候选基因与过表达载体p BI121进行连接,经电泳检测和测序分析,最终构建Mi-9候选基因的过表达重组载体。

关键词：番茄根结线虫 Mi-9基因同源克隆过表达载体构建

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花生AhFAB2-2生物信息学分析、克隆及过表达载体的构建

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吉林农业大学学报 2024年

作者：吴秋霖张君韩笑丛炜轩杨松楠姚丹朱静静李雪莹吉林农业大学农学院吉林农业大学国家农作物品种审定特性鉴定站吉林农业大学生命科学学院

以吉林农业大学选育的花生品种吉农花7号、吉农花8号和花育668为试验材料，对编码硬脂酰-ACP脱饱和酶的SAD基因家族中的亚型AhFAB2-2进行了生物信息学分析与克隆，并进行了pCAMBIA3301-FAB2-2过表达载体的构建。结果显示：AhFAB2-2位于... 详细信息

以吉林农业大学选育的花生品种吉农花7号、吉农花8号和花育668为试验材料，对编码硬脂酰-ACP脱饱和酶的SAD基因家族中的亚型AhFAB2-2进行了生物信息学分析与克隆，并进行了pCAMBIA3301-FAB2-2过表达载体的构建。结果显示：AhFAB2-2位于栽培种花生16号染色体上，主要在花生籽粒中表达；其编码的蛋白属于不稳定疏水非泌性蛋白；与其他物种已验证功能的SAD基因亚型编码的蛋白存在多个相同保守结构域；蛋白互作预测发现与其互作蛋白负责调控细胞氮化合物生物合成、DNA模板转录的启动及高分子生物的合成；荧光定量PCR结果显示其在高油酸品种中的表达量高于低油酸品种，同时还发现低油酸品种中表达量随着籽粒成熟而升高，高油酸品种中表达量随着籽粒成熟而降低。启动子元件预测结果分析发现AhFAB2-2的启动子存在光响应、激素调控、抗逆境相关转录因子结合位点的元件。以上结果可以为后续研究AhFAB2-2对于花生油酸含量的调控与油料组成成分的改良提供一定的探索经验。

关键词：花生硬脂酰-ACP脱饱和酶基因克隆过表达载体构建

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硒诱导的黄瓜耐镉转录本鉴定分析及表达载体构建

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江苏农业科学 2023年第11期51卷 46-53页

作者：王小云孙红艳史梦于佳山西农业大学水土保持科学研究所山西太原030045 太原科技大学环境与资源学院山西太原030024

以黄瓜乙烯响应因子CsERF7转录本为研究对象,通过外源硒缓解黄瓜镉胁迫试验分析其表达及黄瓜生长状况,并克隆CsERF7基因,构建过表达载体转化拟南芥,同时分析CsERF7的理化性质和功能。结果表明,外源硒显著升高了镉胁迫引起的黄瓜生长指... 详细信息

以黄瓜乙烯响应因子CsERF7转录本为研究对象,通过外源硒缓解黄瓜镉胁迫试验分析其表达及黄瓜生长状况,并克隆CsERF7基因,构建过表达载体转化拟南芥,同时分析CsERF7的理化性质和功能。结果表明,外源硒显著升高了镉胁迫引起的黄瓜生长指标的降低,CsERF7在镉处理下的表达丰度是对照的56%,而镉+硒比单独镉处理上调表达4.53倍,与RNA-seq结果相符,此基因可能在硒调控黄瓜镉胁迫响应中起作用。同时,成功构建超表达载体pEGOEP35S-H-ERF7-GFP,转化拟南芥获得转基因株系。生物信息学分析表明,黄瓜CsERF7基因属于AP2/ERF家族的AP2亚家族,开放阅读框ORF长度588bp,编码196个氨基酸,有1个AP2结构域;该蛋白属于非跨膜亲水性蛋白,亚细胞定位预测定位在线粒体中,存在22个氨基酸磷酸化位点;其二级结构主要由α-螺旋和延伸链构成,与三级结构预测结果高度一致,所得蛋白序列与黄瓜、甜瓜同源性最高。

关键词：黄瓜 ERF 基因克隆过表达载体构建生物信息分析

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森林草莓FvESE3基因克隆及其过表达分析

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分子植物育种 2024年

作者：贺煜李爱张梁葛侯佳聪舒李祥任子政天津农学院园艺园林学院

ERF转录因子家族在植物抵抗环境胁迫中扮演着重要角色。为探究森林草莓FvESE3基因响应低温胁迫中的作用，本研究以二倍体森林草莓为试验材料，克隆出FvESE3基因，对其进行生物信息学分析和表达分析，并构建了pK7WG2D-FvESE3过表达载体... 详细信息

ERF转录因子家族在植物抵抗环境胁迫中扮演着重要角色。为探究森林草莓FvESE3基因响应低温胁迫中的作用，本研究以二倍体森林草莓为试验材料，克隆出FvESE3基因，对其进行生物信息学分析和表达分析，并构建了pK7WG2D-FvESE3过表达载体。对草莓进行4℃胁迫处理，分析FvESE3基因在低温胁迫下表达模式变化。结果表明：FvESE3基因包含两个外显子和一个内含子，有一个AP2/ERF保守结构域，编码区长度为630 bp，编码209个氨基酸。蛋白的相对分子量为23.83 kD，理论等电点为6.01；热稳定性高；亲水性蛋白，体外不稳定。森林草莓FvESE3蛋白与栽培草莓和月季位于同一进化分支，亲缘关系最近。qRT-PCR分析结果显示FvESE3基因响应低温诱导。本研究表明FvESE3基因在森林草莓响应低温诱导中起重要作用，进一步为解析ERF家族相关基因抵御低温胁迫的遗传机理提供理论依据。

关键词：森林草莓 FvESE3 低温胁迫 AP2/ERF家族过表达载体构建

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纳豆芽孢杆菌men基因过表达菌株的构建及提高溶氧强化MK-7合成

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应用与环境生物学报 2022年第6期28卷 1393-1399页

作者：李楚王晗王丽王鹏郑之明安徽大学物质科学与信息技术研究院合肥230601 中国科学院合肥物质科学研究院合肥230031

近年来,维生素K2更多的生理功能被发现,除了促进凝血之外,还能预防骨质疏松症和心血管疾病,有望治疗肿瘤和帕金森症.纳豆芽孢杆菌是被美国食品药品管理局认证的一种益生菌,可以用来生物制备维生素K2,其主要的产物形式为人体内半衰期较... 详细信息

近年来,维生素K2更多的生理功能被发现,除了促进凝血之外,还能预防骨质疏松症和心血管疾病,有望治疗肿瘤和帕金森症.纳豆芽孢杆菌是被美国食品药品管理局认证的一种益生菌,可以用来生物制备维生素K2,其主要的产物形式为人体内半衰期较长、生物利用度较高的MK-7,在规模化生物制备维生素K2中的应用潜力较大.本研究优化枯草芽孢杆菌的Sipizizen转化法,使其适用于纳豆芽孢杆菌的分子转化;构建甲萘醌合成途径所涉及的全部8个men基因的过表达载体,并考察其转化纳豆芽孢杆菌之后发酵MK-7的性能变化;筛选出对MK-7合成影响较大的3个酶,分别为异戊烯基转移酶(MenA)、1,4-二羟基-2-萘甲酰辅酶A合酶(MenB)和去甲基萘醌甲基转移酶(MenG).通过对menA、menB和menG组合过表达筛选出一株MK-7产率较高的改造菌株(BN-pABG).在5L发酵罐中,通过供氧调控进一步优化其合成MK-7的生理过程,改造菌株的终产量为62.21 mg/L,较出发菌提高了1.26倍.这些结果表明menA、menB和menG组合过表达后对纳豆芽孢杆菌合成MK-7具有较强的促进作用,同时供氧条件的优化也对MK-7的合成有提升效果.(图6表6参21)

关键词：纳豆芽孢杆菌 Sipizizen转化法优化甲萘醌途径过表达载体构建 men基因

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水稻OsPP6C基因的克隆、过表达载体构建与生物信息学分析

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华北农学报 2013年第5期28卷 59-65页

作者：王青云王润青方聪燕侯佩苏亮李建平宋梅芳杨建平李雪梅吴大付沈阳师范大学化学与生命科学学院辽宁沈阳110034 中国农业科学院作物科学研究所北京100081 河南科技学院资源与环境学院河南新乡453003

为克隆水稻蛋白磷酸酶6(PP6)催化亚基基因OsPP6C,并构建该基因的过表达载体以及进行生物信息学分析。采用RT-PCR技术从水稻中花11叶片cDNA中扩增OsPP6C基因全长,并构建与GUS融合的pBI121-OsPP6CGUS表达载体。通过生物信息学方法分析了Os... 详细信息

为克隆水稻蛋白磷酸酶6(PP6)催化亚基基因OsPP6C,并构建该基因的过表达载体以及进行生物信息学分析。采用RT-PCR技术从水稻中花11叶片cDNA中扩增OsPP6C基因全长,并构建与GUS融合的pBI121-OsPP6CGUS表达载体。通过生物信息学方法分析了OsPP6C蛋白的理化性质、与拟南芥AtPP6C(即AtFyPP)之间的同源性以及不同物种间的系统发育关系,此外,对OsPP6C基因的启动子进行了顺式作用元件分析。结果表明,该基因转录序列包含一个912 bp的开放阅读框,编码303个氨基酸残基,蛋白的分子量约为3.47 kDa,等电点为5.13;具有疏水性,但不存在信号肽,属于非分泌型蛋白。OsPP6C与拟南芥AtFyPP1和AtFyPP3氨基酸序列一致性分别为93.73%和93.40%,系统进化树显示OsPP6C与小麦TaPP6C的亲缘关系最近,而与其他物种亲缘关系相对较远。对该基因启动子中含有的顺式作用元件分析表明,该启动子中除TATA盒和CAAT盒外,还含有多种参与光应答、激素(ABA、乙烯、生长素、MeJA和赤霉素等)应答以及低温、热激和干旱等非生物胁迫因子应答的调控元件。为进一步研究水稻OsPP6C基因的表达特性和功能奠定了基础。

关键词：水稻蛋白磷酸酶6 过表达载体构建生物信息学分析

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食用玫瑰抗坏血酸合成基因GGP的筛选及功能验证

食用玫瑰抗坏血酸合成基因GGP的筛选及功能验证

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作者：苟云霞安徽农业大学

学位级别：硕士

玫瑰（Rose rugosa Thunb）是一种极具经济价值的蔷薇科（Rosaceae）花卉。提高其营养品质是玫瑰育种工作重点关注的问题。维生素C（Vitamin C,Vc）,又称抗坏血酸（Ascorbic acid,AsA）,是维持动植物生命非常重要的营养物质之一,人体内... 详细信息

玫瑰（Rose rugosa Thunb）是一种极具经济价值的蔷薇科（Rosaceae）花卉。提高其营养品质是玫瑰育种工作重点关注的问题。维生素C（Vitamin C,Vc）,又称抗坏血酸（Ascorbic acid,AsA）,是维持动植物生命非常重要的营养物质之一,人体内无法合成,需从植物中摄取。目前,影响玫瑰花瓣中AsA含量的基因并不明确,调控其合成的分子机制不够明确,解析玫瑰花瓣中AsA合成分子机制及验证AsA合成相关基因在玫瑰基因组中的表达机制,对于定向改良玫瑰基因并培育出更具有经济价值的玫瑰品种有重要意义。本研究筛选出与AsA合成密切相关的GGP（GDP-L-半乳糖磷酸化酶）家族基因,在建立‘滇红’玫瑰快繁体系和再生体系的基础上,利用农杆菌介导法将过表达载体导入‘滇红’玫瑰中,试图验证GGP家族基因在玫瑰花瓣AsA合成途径中的作用,并培育出高AsA含量的玫瑰品种。本论文的主要研究内容如下: ***家族基因的筛选测定了6个食用玫瑰品种花瓣4个生长发育时期AsA含量,并对AsA含量差异较大品种的GGP家族基因蛋白序列进行比对,发现其氨基酸序列相似,确定品种间AsA含量的差异不是GGP家族基因氨基酸序列差异引起的。利用qPCR（实时荧光定量PCR）分析了GGP家族基因在6个食用玫瑰品种花瓣4个生长发育时期的表达模式,将AsA含量与GGP家族基因相对表达量进行相关性分析,结果发现,RcGGP1基因相对表达量与AsA含量在始花期、盛花期和末花期呈正相关;RcGGP2和RcGGP3基因相对表达量与AsA含量均在现蕾期呈正相关,说明RcGGP家族基因表达与AsA合成可能有联系。 ***家族基因的克隆及载体构建以‘滇红’玫瑰花瓣为试材,提取其RNA,以反转录cDNA为模板克隆目的基因,构建RcGGP家族基因过表达载体,导入农杆菌GV3101保存备用,为目的基因转化拟南芥和‘滇红’玫瑰奠定基础。 ***家族基因在拟南芥中的生物学功能将RcGGP家族基因过表达载体利用花序侵染法转化拟南芥,经PCR检测,RcGGP家族基因已成功转入拟南芥。测定过表达植株AsA水平,结果发现,转化RcGGP1转基因植株AsA含量是野生型1.5倍;转化RcGGP2转基因植株AsA含量是野生型1.4倍;转化RcGGP3转基因植株AsA含量和野生型没有明显差异。 4.‘滇红’玫瑰快繁体系和再生体系的建立在快繁体系中,6-BA和2,4-D的组合比6-BA和其他植物生长调节剂组合更适合初代培养;在2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基上,芽生长速度最快,丛生芽发生较多,增殖效果最好;最适合生根的培养基是:1/2 MS+0.08 mg/L NAA。在再生体系中,3.0 mg/L的2,4-D和NAA分别单独使用时,有利于愈伤组织诱导;在2,4-D和KT浓度分别为2.0 mg/L和0.1 mg/L时,最适合愈伤组织增殖;在3.0 mg/L TDZ+3.0mg/L 2,4-D培养基上胚性发生较多,在后续的萌发试验中顺利萌发;在1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA3+0.1 mg/L NAA处理上,子叶胚萌发成子叶。 ***1对‘滇红’玫瑰的遗传转化以低AsA含量的‘滇红’玫瑰体细胞胚为受体材料,借助上述体细胞胚再生体系,利用农杆菌介导法将RcGGP1基因导入体细胞胚中,对其遗传转化进行了初步研究。研究发现,侵染时长50 min,共培养4 d,150μmol//L AS,80 mg/L Hyg,300 mg/L Timentin脱毒浓度等条件下,体细胞胚受到农杆菌的抑制影响小,部分体细胞胚增殖,转化率高。经PCR和qPCR检测,最终获得6株抗性植株,过表达株系的基因相对表达量是野生型的9～10倍。

关键词：食用玫瑰 AsA 过表达载体构建 GGP 遗传转化

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湖羊Sp1基因CDS区克隆及其对颗粒细胞增殖和凋亡的影响

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畜牧兽医学报 2017年第11期48卷 2098-2106页

作者：姚一龙李隐侠安外尔.热合曼张俊孟春花王慧利钱勇曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所南京210014 南京农业大学动物科技学院南京210095 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京210014 江苏省农业种质资源保护与利用平台南京210014

旨在探讨湖羊Sp1基因序列特征及其对颗粒细胞增殖及凋亡的影响。采用克隆、测序获得湖羊Sp1基因CDS区并用生物信息学方法分析其序列特征;NJ方法构建基于Sp1氨基酸序列的系统进化树;RT-PCR方法检测Sp1基因湖羊组织表达谱;克隆方法构建湖... 详细信息

旨在探讨湖羊Sp1基因序列特征及其对颗粒细胞增殖及凋亡的影响。采用克隆、测序获得湖羊Sp1基因CDS区并用生物信息学方法分析其序列特征;NJ方法构建基于Sp1氨基酸序列的系统进化树;RT-PCR方法检测Sp1基因湖羊组织表达谱;克隆方法构建湖羊Sp1过表达载体;试剂盒检测Caspase-3活性和CCK-8值;利用流式细胞术检测人卵巢颗粒细胞(KGN)凋亡率。结果表明,湖羊Sp1CDS区长2 340bp,编码779个氨基酸残基,与人的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为94.28%和95.75%;湖羊与牛的亲缘关系最近;Sp1基因在湖羊卵巢、卵泡等组织中广泛表达。本研究成功构建了湖羊Sp1过表达载体并转染人卵巢颗粒细胞(KGN);试验组Caspase-3活性显著高于对照组(P<0.05),CCK-8值检测结果相反。表明过表达Sp1基因抑制KGN-细胞增殖(P<0.05)、促进KGN-细胞凋亡(P<0.05)。Sp1基因在哺乳动物中高度保守,湖羊Sp1基因可抑制人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖、诱导其凋亡。

关键词： Sp1基因过表达载体构建 KGN-细胞细胞增殖细胞凋亡

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