检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈锦华湖南农业大学

学位级别：硕士

本研究以甘蓝型油菜(Brassica napus)种子发育中同化产物转化关键时期的SSH文库为基础,分析EST序列并与拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组比对,筛选得到一个同源性较高的拟南芥基因序列,命名为AtCS82。采用生物信息学、分子生物学和... 详细信息

本研究以甘蓝型油菜(Brassica napus)种子发育中同化产物转化关键时期的SSH文库为基础,分析EST序列并与拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组比对,筛选得到一个同源性较高的拟南芥基因序列,命名为AtCS82。采用生物信息学、分子生物学和基因工程相关技术对AtCS82基因进行了初步研究,获得了如下研究结果： 1、对AtCS82基因编码的蛋白进行了氨基酸序列推导、疏水性／亲水性预测、信号肽的预测、编码蛋白二级结构预测、编码蛋白的跨膜结构预测,结果表明AtCS82基因序列全长792bp, CDS全长432bp,共编码143个氨基酸,蛋白质分子量为14323.3Da,理论等电点(pI)为11.09,能编码形成结构稳定的蛋白,推测该蛋白具有一个跨膜结构域和一个信号肽,为亲水性胞外分泌蛋白。 2、将AtCS82蛋白的氨基酸序列与所有己测序的植物基因数据库中氨基酸的序列进行比对后发现,AtCS82蛋白与琴叶拟南芥(Arabidopsis lyrata)、盐芥(Thellungiella halophila)、荠菜(Capsella rubella)和白菜(Brassica rapa)中的一些蛋白质的氨基酸序列同源性最高,且这些蛋白具有同一功能未知的保守结构域。 3、半定量RT-PCR结果显示,AtCS82基因在Col野生型拟南芥的茎、叶、花和果荚中均有一定量的表达,其中,在花后4d、7d的果荚中表达量最高,在茎和花中的表达量次之,在叶中的表达量最低。 4、筛选得到了AtCS82基因沉默的T-DNA插入突变体纯合子拟南芥植株。 5、构建了AtCS82基因的过表达载体pCAMBIA1300-35S::CS82,并通过农杆菌介导的浸花法转化Col野生型拟南芥,筛选得到了AtCS82基因过表达的转化子株系。

关键词： AtCS82基因生物信息学分析突变体筛选过表达载体构建遗传转化

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AtCS25基因过表达载体的构建和拟南芥的遗传转化

引用

作物研究 2012年第3期26卷 205-208,223页

作者：刘博宇阮颖湖南农业大学生物科学技术学院长沙410128

AtCS25基因是拟南芥中一个功能未知的基因。生物信息学分析发现,该基因可能与花粉和花粉管的发育有关。为了进一步探究该基因的功能,克隆了AtCS25基因的全长CDS序列,并将克隆得到的片段插入到过表达载体pBI121相应的位置,构建了AtCS25... 详细信息

AtCS25基因是拟南芥中一个功能未知的基因。生物信息学分析发现,该基因可能与花粉和花粉管的发育有关。为了进一步探究该基因的功能,克隆了AtCS25基因的全长CDS序列,并将克隆得到的片段插入到过表达载体pBI121相应的位置,构建了AtCS25基因的过表达载体pBI121-AtCS25。通过农杆菌GV3101介导将该载体转入拟南芥Col生态型中,获得了5株转基因植株,为进一步研究AtCS25基因的功能奠定了良好的基础。

关键词： AtCS25 生物信息学分析过表达载体构建遗传转化

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拟南芥响应多环芳烃（菲）胁迫基因的差异表达与功能分析

拟南芥响应多环芳烃（菲）胁迫基因的差异表达与功能分析

引用

作者：崔波福建农林大学

学位级别：硕士

多环芳烃（PAHs）污染是全球面临的一个严重的环境问题。随着社会工业化进程的加快,特别是石化燃料的大量使用,PAHs污染已经达到了非常严重的程度。由于其能引起癌症、组织细胞突变等许多人类健康问题,而引起人们的高度关注。植物能从... 详细信息

多环芳烃（PAHs）污染是全球面临的一个严重的环境问题。随着社会工业化进程的加快,特别是石化燃料的大量使用,PAHs污染已经达到了非常严重的程度。由于其能引起癌症、组织细胞突变等许多人类健康问题,而引起人们的高度关注。植物能从大气、土壤中吸收PAHs,并最终起到修复环境的作用。然而,植物在分子水平上对PAHs的胁迫响应机制尚缺系统研究。本研究选用拟南芥幼苗为材料,以PAHs（菲）等为研究对象,在研究了PAHs（菲）对拟南芥胁迫响应紧密相关的特异蛋白基础上,应用荧光定量PCR技术分析拟南芥响应PAHs（菲）胁迫基因在RNA转录水平上的差异表达情况,为研究植物对PAHs（菲）胁迫的应答及调控机制、为了解PAHs（菲）的信号传导途径提供一定的科学依据。主要研究结果如下: 不同时间PAHs（菲）胁迫下,鉴定的29个差异表达蛋白质编码的基因在转录水平上的表达都呈现出显著的差异。其中23个蛋白质编码基因在胁迫过程中表现出上调趋势,6个蛋白质编码基因在胁迫过程中表现出为下调。信号转导蛋白及甲基化酶类编码的基因的表达差异反映出PAHs（菲）胁迫过程中植物核苷二磷酸激酶（At4g11010）及鸟嘌呤核苷酸结合蛋白（G蛋白,At1g18080）参与了细胞内的信号传递,并通过胞嘧啶甲基化或去甲基化来调控相关基因的表达或沉默以积极的响应及防御菲胁迫,胁迫24h时响应达到高峰。活性氧相关蛋白、植物防御蛋白等防卫相关蛋白的编码基因表达量除了在胁迫24h时响应达到峰值外,随着时间的延长,胁迫48h时57%的防卫相关蛋白基因表现出第二个响应高峰。光合作用、糖分解代谢及氨基酸合成等代谢相关蛋白编码基因的表达量在胁迫24h时也表现出显著的峰值,反映出植物虽然在胁迫24h内通过加快光合作用、糖分解代谢及氨基酸的合成来积极响应菲胁迫,但随着胁迫时间的延长,光合作用、糖分解代谢及氨基酸的合成等代谢在RNA水平上开始受到一定程度的抑制。此外,本研究还试图从基因失活与激活两方面研究这些差异表达基因的功能。以T-DNA插入失活突变体为材料,研究了差异表达基因失活状态下,突变体拟南芥在PAHs胁迫下的表型变化。研究发现,9个单基因失活突变体中,只有一个突变体（SALK046009）(失活基因号:AT1g48030)在根长这一表型上与野生型有显著性差异,而对于其他的突变体,与野生型相比表型差异则并不显著。同时,本研究还构建了两个拟南芥响应PAHs（菲）胁迫的基因的过表达载体（AT1G18080、AT3G16420）,用农杆菌介导法转化拟南芥,为进一步研究这些基因的功能奠定基础。

关键词：多环芳烃(PAHs) 拟南芥荧光定量PCR 失活突变体过表达载体构建

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