检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王拥军上海中医药大学

学位级别：博士

目的:研究大鼠颈椎间盘退变的机理;阐明益气化瘀方延缓大鼠颈椎间盘退变的过程,丰富和发展中医气血理论.方法:建立动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型,运用组织病理学、生物化学、免疫组织化学、分子生物学等方法,多层次综合观察、分析.... 详细信息

目的:研究大鼠颈椎间盘退变的机理;阐明益气化瘀方延缓大鼠颈椎间盘退变的过程,丰富和发展中医气血理论.方法:建立动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型,运用组织病理学、生物化学、免疫组织化学、分子生物学等方法,多层次综合观察、分析.结论:1、颈部动静力失去平衡可以导致颈椎间盘退变,其中\"动力失衡为先,静力失衡为主\";椎间盘退变的实质是营养供应减少导致的细胞外基质降解和细胞内外信号传导降低导致的细胞凋亡.2、\"气虚血瘀、本虚标实\"是颈椎间盘退变的根本原因;益气化瘀方可以增加椎间盘营养供应、抑制炎性物质释放、降低局部免疫反应、延缓椎间盘细胞凋亡、调控椎间盘细胞内信号传导,说明益气化瘀方可以\"防治结合、标本兼顾\",为中医药治疗颈椎病开辟了新的思路.

关键词：退变模型椎间盘益气化瘀方动物模型疗效机理

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磁标记兔脂肪干细胞与建立兔腰椎间盘退变模型及MR定量的研究

磁标记兔脂肪干细胞与建立兔腰椎间盘退变模型及MR定量的研究

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作者：谢光友重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分兔脂肪间充质干细胞的培养鉴定及体外磁标记MR成像目的:研究兔脂肪间充质干细胞（ADSCs）的培养鉴定方法，联合应用超顺磁性氧化铁（SPIO）和多聚赖氨酸（PLL）行体外磁标记细胞，并探讨磁标记示踪的可行性。方法:分离、纯化并... 详细信息

第一部分兔脂肪间充质干细胞的培养鉴定及体外磁标记MR成像目的:研究兔脂肪间充质干细胞（ADSCs）的培养鉴定方法，联合应用超顺磁性氧化铁（SPIO）和多聚赖氨酸（PLL）行体外磁标记细胞，并探讨磁标记示踪的可行性。方法:分离、纯化并培养兔ADSCs，流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD44和CD34。应用SPIO-PLL标记细胞，普鲁士蓝染色和透射电镜检测胞内铁粒子。体外3.0T MR分别对1×107个未标记细胞，经25、50、75μg/ml SPIO-PLL标记的1×107个细胞；1×107个ADSCs（标记1d）、1×107个（标记3d）和5×106个（标记1d）进行成像，包括T1WI、T2WI及T2*WI序列，并测量各组的信号强度和弛豫时间。结果:第3代ADSCs纯度高、排列规则、细胞呈漩涡状，流式结果示CD44和CD90阳性表达率分别为99.2%、98.7%，CD34表达阴性。普鲁士蓝染色和透射电镜示胞浆内蓝色颗粒，磁标记率近100%。MR示随着SPIO-PLL的浓度增高，T2*WI和T2WI序列的信号强度变化较T1WI明显。1×107个ADSCs（标记1d）的信号强度变化率较1×107个（标记3d）和5×106个（标记1d）大，T2*和T2弛豫时间与T1弛豫时间相比均有统计学意义（F=161.47，P<0.05）,但T2*和T2弛豫时间相比差异无统计学意义（F=5.88，P>0.05）。结论:通过分离纯化培养可获得足量的ADSCs，SPIO-PLL能够有效标记ADSCs，体外可行MR细胞成像，以T2*WI和T2WI序列敏感。第二部分髓核针刺抽吸法建立兔腰椎间盘退变模型及MR定量研究目的:建立兔腰椎间盘退变模型并提高其退变机制的认识。方法:18只新西兰大白兔，侧后方入路手术暴露腰椎间盘，18G穿刺针抽吸12只L2/3、L3/4、L4/5髓核，各约5mg，正常L1/2、L5/6和另6只L2-5间椎间盘分别为组内和组间对照。术后第4、8、12周行MR矢状位T2WI和T2-mapping序列检查，取正中矢状面观察各椎间盘的信号并测量T2弛豫时间并与正常组比较。相应各时间点取2只L1-6间椎间盘行HE和Masson染色，观察纤维环形态、髓核细胞及基质的变化并与正常组比较。结果:椎间盘为一豆点大隆起，18G穿刺针经脊柱旁路于横突根部可成功穿刺抽吸髓核。正常椎间盘T2WI序列为均匀高信号，实验组随时间延长信号逐渐降低，第8周明显降低，第12周基本完全呈低信号；第8周实验组与正常组T2弛豫时间差异有统计学意义（p<0.05）。术后随时间进展，HE和Masson染色示椎间盘细胞和胶原逐渐减少，纤维环和髓核分界不清；第8周髓核基质退变纤维化，几乎被纤维组织取代；第12周椎间盘纤维软骨化，局部形成软骨。结论:髓核针刺抽吸法可成功建立兔腰椎间盘退变模型，MR可实时定量监测退变程度，为椎间盘退变机制的动物实验研究提供可靠的模型及影像学监测方法。

关键词：脂肪间充质干细胞超顺磁性氧化铁磁标记磁共振成像体外腰椎间盘髓核抽吸退变模型磁共振成像定量

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椎间盘退变模型的研究进展

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临床与病理杂志 2017年第2期37卷 429-434页

作者：史新瑞徐海栋刘晓伟王与荣许斌南京军区总医院骨科南京210002

椎间盘退变疾病发病率越来越高,但退变的机制尚不明确。椎间盘退变模型是现今研究椎间盘退变疾病的主要方式,退变模型主要分为体内退变模型和体外退变模型两大类。两种退变模型从不同角度研究椎间盘退变的病理生理过程,为揭示退变机制... 详细信息

椎间盘退变疾病发病率越来越高,但退变的机制尚不明确。椎间盘退变模型是现今研究椎间盘退变疾病的主要方式,退变模型主要分为体内退变模型和体外退变模型两大类。两种退变模型从不同角度研究椎间盘退变的病理生理过程,为揭示退变机制及预防、治疗椎间盘退变疾病起着重要作用。本文就目前国内外关于两种不同椎间盘退变模型研究的进展作一综述。

关键词：椎间盘退变退变模型进展

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兔髓核细胞自然传代培养退变模型的构建

兔髓核细胞自然传代培养退变模型的构建

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2016年浙江省骨科学学术年会

作者：陈琪杨曦刘立岷宋跃明四川大学华西医院浙江省人民医院

目的构建兔髓核细胞自然传代培养退变模型,为椎间盘退变研究提供细胞模型。方法:从6-8周龄新西兰大白兔脊柱胸腰椎节段中获取髓核组织,经酶消化法获取原代髓核细胞,计为P0代,于37℃、5%CO2孵育箱培养,待培养孔底面细胞增殖融合超过90%时... 详细信息

目的构建兔髓核细胞自然传代培养退变模型,为椎间盘退变研究提供细胞模型。方法:从6-8周龄新西兰大白兔脊柱胸腰椎节段中获取髓核组织,经酶消化法获取原代髓核细胞,计为P0代,于37℃、5%CO2孵育箱培养,待培养孔底面细胞增殖融合超过90%时,胰酶消化法传代,依次计为P1、P2、P3代,共4代髓核细胞,每代髓核细胞计数后均按1×105/孔种入6孔板。相差显微镜观察4代髓核细胞的细胞形态,记录贴壁、生长倍增、传代时间;双染流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞荧光和Westernblot检测P0-P3代髓核细胞HIF-1α、MMP-2、Aggrecan、ColⅡ蛋白表达水平。结果:髓核细胞形态从P0代的三角形、多角形逐渐向P3代纤维软骨样梭形转变,细胞体积变大,含特征性空泡细胞逐渐减少,细胞贴壁、生长倍增及传代时间逐渐延长;P0-P3代髓核细胞凋亡率依次为5.47±0.91%,13.77±2.42%,33.46±1.82%,38.76±1.50%,细胞凋亡率逐渐增加,组间两两比较具有统计学差异;免疫细胞荧光和Western blot检测,P0-P3代合成代谢相关蛋白HIF-1α、Aggrecan、ColⅡ逐渐降低,分解代谢相关蛋白MMP-2逐渐升高。结论:成功构建兔髓核细胞自然传代培养退变模型,髓核细胞退变时细胞形态向纤维软骨样细胞转变,凋亡率增加,细胞合成代谢减慢,分解代谢加快。

关键词：退变模型凋亡率细胞形态合成代谢分解代谢

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山羊椎间盘髓核摘除退变模型的X线、MRI分析

山羊椎间盘髓核摘除退变模型的X线、MRI分析

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中华医学会第十九届骨科学术会议暨第十二届COA国际学术大会

作者：张凯辉天津医科大学研究生院

目的评价山羊椎间盘髓核摘除退变模型的退变效果方法实验山羊均来自天津医院动物房。该造模手术通过天津医院实验动物伦理委员会批准。随机取8只实验动物。在制造髓核退变模型前均麻醉行腰椎侧位X线片和MRI检查，排除椎间盘退行性疾... 详细信息

目的评价山羊椎间盘髓核摘除退变模型的退变效果方法实验山羊均来自天津医院动物房。该造模手术通过天津医院实验动物伦理委员会批准。随机取8只实验动物。在制造髓核退变模型前均麻醉行腰椎侧位X线片和MRI检查，排除椎间盘退行性疾病及脊柱疾病。羊术前禁食24小时。

关键词：山羊椎间盘退变模型

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兔退变椎间盘模型中髓核细胞凋亡的实验研究

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东南大学学报（医学版） 2010年第1期29卷 62-65页

作者：樊守刚吴小涛王运涛李果东南大学临床医学院江苏南京210009

目的:研究细胞凋亡在兔退变椎间盘模型中的作用。方法:用针刺法制作兔退变椎间盘模型,磁共振检查鉴定模型的建立,HE染色计数髓核细胞,TUNEL法染色标记凋亡髓核细胞,并通过激光共聚焦显微镜计数凋亡细胞比例,RT-PCR检测Bax和Bcl-2凋亡相... 详细信息

目的:研究细胞凋亡在兔退变椎间盘模型中的作用。方法:用针刺法制作兔退变椎间盘模型,磁共振检查鉴定模型的建立,HE染色计数髓核细胞,TUNEL法染色标记凋亡髓核细胞,并通过激光共聚焦显微镜计数凋亡细胞比例,RT-PCR检测Bax和Bcl-2凋亡相关基因的表达水平。结果:兔退变模型建立成功,退变组髓核细胞计数低于正常组,凋亡细胞比例高于正常组,退变组抗凋亡基因表达低于正常组,凋亡基因水平高于正常组。结论:凋亡在椎间盘退变模型中存在,并起重要作用。

关键词：椎间盘退变退变模型凋亡激光共聚焦显微镜兔

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退变大鼠椎间盘器官培养模型的建立及其意义

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中国骨与关节外科 2012年第3期5卷 233-237,197页

作者：徐宏光章平治宋俊兴程加峰卢林明何雷周珏皖南医学院附属弋矶山医院脊柱外科安徽芜湖241001 皖南医学院附属弋矶山医院病理科安徽芜湖241001

背景:椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是慢性腰背疼和脊柱功能损害的主要原因,建立退变的椎间盘器官培养模型能为IDD机制的研究提供一个更好的试验平台。目的:建立退变大鼠椎间盘器官培养模型,观察正常和退变大鼠椎... 详细信息

背景:椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是慢性腰背疼和脊柱功能损害的主要原因,建立退变的椎间盘器官培养模型能为IDD机制的研究提供一个更好的试验平台。目的:建立退变大鼠椎间盘器官培养模型,观察正常和退变大鼠椎间盘的组织形态及细胞活性,以评价培养结果。方法:选取SD大鼠30只,老年组15只,青年组15只。反转录-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法分别检测2组椎间盘蛋白多糖(aggrecan,AGN)和Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,COLⅡ)的基因表达。无菌条件下完整取出两组大鼠腰段椎间盘,在培养液中经过不同时段培养后HE染色观察椎间盘组织学变化,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)和4’,6-二眯基-2-苯基吲哚(DAPI)复染检测椎间盘细胞存活率。结果:老年组大鼠椎间盘较青年组发生明显退变,可视为退变椎间盘组织。两组大鼠椎间盘器官在体外培养4周,其组织学特点和细胞存活率无明显变化。结论:成功建立退变大鼠椎间盘器官培养模型,为研究椎间盘退变机制提供理想的实验模型。

关键词：椎间盘器官培养退变模型

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透骨消痛胶囊及其拆方对退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

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中国组织工程研究 2016年第24期20卷 3568-3573页

作者：吴追乐陈星强陈春蓉于超朱晓勤庄志强福建中医药大学福建省福州市350122 福建中医药大学附属漳州市中医院福建省漳州市363000

背景:前期研究表明,透骨消痛胶囊能调控软骨细胞Rho/Rock信号通路、抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导、改变软骨下骨重塑的速率和模式、改善软骨下骨胶原纤维和钙磷结晶的排列等对骨性关节炎发挥治疗作用。目的:进一步观察透骨消... 详细信息

背景:前期研究表明,透骨消痛胶囊能调控软骨细胞Rho/Rock信号通路、抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导、改变软骨下骨重塑的速率和模式、改善软骨下骨胶原纤维和钙磷结晶的排列等对骨性关节炎发挥治疗作用。目的:进一步观察透骨消痛胶囊及其拆方含药血清对大鼠退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响,揭示方中治疗骨性关节炎的主要治法。方法:(1)取SD大鼠40只随机分为透骨消痛胶囊组、补肾柔肝组、活血祛风组和生理盐水组,按照药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算,前3组分别灌服等效剂量的透骨消痛胶囊、补肾柔肝药、活血祛风药,生理盐水组灌服生理盐水,制备含药血清用于细胞实验。(2)体外培养SD大鼠软骨细胞并分为5组:空白对照组、模型组、透骨消痛胶囊组、补肾柔肝组和活血祛风组。模型组及各给药组用白细胞介素1β干预软骨细胞24 h后,加入各组血清干预软骨细胞72 h,空白对照组用盐水血清培养,同一时间收集空白对照组软骨细胞。(3)采用实时定量反转录-聚合酶链反应和Western blot法分析Wnt 4、β-catenin、基质金属蛋白酶13的表达。结果与结论:(1)与空白对照组相比,模型组Wnt 4、β-catenin、基质金属蛋白酶13表达均明显增加。(2)与模型组相比,透骨消痛胶囊组、补肾柔肝组和活血祛风组的Wnt 4、β-catenin、基质金属蛋白酶13表达均明显降低,且降低程度为透骨消痛胶囊组>补肾柔肝组>活血祛风组。(3)结果提示透骨消痛胶囊对白细胞介素1β诱导的软骨细胞具有协同保护作用,补肾柔肝为透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的主要治法。

关键词：医学,中国传统骨关节炎软骨组织工程组织构建软骨细胞退变模型 Wnt/β-catenin信号通路透骨消痛胶囊补肾柔肝活血祛风国家自然科学基金

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微RNA-887-3p能抑制大鼠椎间盘纤维环细胞中MDM4表达和细胞增殖并促进细胞凋亡

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实验动物与比较医学 2024年第3期44卷 270-278页

作者：朱晓雨袁韩涛李四波上海中医药大学附属第七人民医院脊柱外科上海200137

目的探讨微RNA(microRNA,miRNA或miR)-887-3p对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法取8周龄SPF级雄性SD大鼠的纤维环组织,离心制备并鉴定纤维环细胞。实验随机分为4组:正常组(Normal group)是不做任何处理的... 详细信息

目的探讨微RNA(microRNA,miRNA或miR)-887-3p对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法取8周龄SPF级雄性SD大鼠的纤维环组织,离心制备并鉴定纤维环细胞。实验随机分为4组:正常组(Normal group)是不做任何处理的原代纤维环细胞;对照组(Control group)用10 ng/mL白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理纤维环细胞24 h,形成退变细胞模型;干扰组(miR-887-3p inhibitor)是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p抑制子;过表达组(miR-887-3p mimics)是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p模拟物。采用CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法检测miR-887-3p和鼠双微体4(murine double minute 4,MDM4)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测MDM4、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平。结果免疫荧光染色法鉴定分离培养的细胞发现,大鼠椎间盘纤维环细胞中Collagen I的阳性率在90%以上,提示纤维环细胞纯度大于90%。实时荧光定量PCR结果显示,利用IL-1β构建纤维环退变细胞模型后,miR-887-3p表达水平与正常组相比显著上升(P<0.001);与对照组相比,转染miR-887-3p抑制子后,miR-887-3p表达水平显著下降(P<0.001)。CCK-8法检测结果表明,与正常组相比,对照组细胞活力显著下降(P<0.001);与对照组相比,抑制miR-887-3p的表达后,细胞增殖能力显著增强;miR-887-3p过表达后,细胞增殖能力显著下降。流式细胞仪检测结果表明,与正常组相比,对照组的细胞凋亡率显著增加(P<0.001);与对照组相比,miR-887-3p干扰组的细胞凋亡率显著降低(P<0.001),miR-887-3p过表达组的细胞凋亡率显著增加(P<0.001)。蛋白质印迹法检测结果发现,与正常组相比,对照组中Bcl-2的表达水平显著降低(P<0.001),Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.001);与对照组相比,miR-887-3p干扰组中Bcl-2和MDM4表达水平显著升高(P<0.01),Caspase-3的表达水平显著降低(P<0.01);而miR-887-3p过表达组中Bcl-2和MDM4表达水平显著降低(P<0.05),Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示,干扰miR-887-3p后,MDM4蛋白和mRNA的表达增加(P<0.001);过表达miR-887-3p后,MDM4蛋白和mRNA的表达降低(P<0.01,P<0.001)。结论miR-887-3p可能通过调控MDM4的表达来影响大鼠椎间盘纤维环细胞的增殖和凋亡,进而影响椎间盘退变的发生和发展。

关键词：微RNA-887-3p 椎间盘纤维环细胞退变模型细胞增殖细胞凋亡大鼠

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转录因子FOXO4在大鼠软骨细胞退变中的相关性研究

转录因子FOXO4在大鼠软骨细胞退变中的相关性研究

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作者：吴建雄南昌大学

学位级别：硕士

目的:检测转录因子FOXO4在大鼠软骨细胞中的表达,通过建立有效的软骨细胞退变模型,探讨FOXO4在大鼠软骨细胞退变中的相关性。方法:(1)分别取4周与16周SD大鼠的股骨头软骨,采用Ⅱ型胶原酶分步消化法进行细胞分离培养,以获取正常及自然退... 详细信息

目的:检测转录因子FOXO4在大鼠软骨细胞中的表达,通过建立有效的软骨细胞退变模型,探讨FOXO4在大鼠软骨细胞退变中的相关性。方法:(1)分别取4周与16周SD大鼠的股骨头软骨,采用Ⅱ型胶原酶分步消化法进行细胞分离培养,以获取正常及自然退变的原代软骨细胞;(2)原代软骨细胞在传至第1代后,使用甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色及Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色等方法进行细胞鉴定;(3)将实验分为3组。对照组:取自4周龄大鼠的第2代软骨细胞;自然退变组:取自16周龄大鼠的第2代软骨细胞;诱导退变组:以终浓度10ng/mL1L-1β对4周龄大鼠软骨细胞从第1代开始进行诱导退变处理,并在传至第2代时继续诱导后进行后续实验;(4)显微镜下观察细胞形态改变,并采用β-半乳糖苷酶染色法进行衰老检测;(5)用RT-PCR分别检测各组软骨细胞中FOXO4和col2α的mRNA表达水平,Western Blot分别检测各组软骨细胞中FOXO4和Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果:(1)4周龄大鼠股骨头软骨与软骨下骨结合较为松弛,易于完整取下,呈半透明状,中部厚实,质地韧而脆,易于切割;16周龄大鼠股骨头软骨与软骨下骨结合致密,软骨明显变薄,不易完整取下,质地坚硬,难以切割。(2)4周龄大鼠的原代软骨细胞48h即有大量细胞贴壁,分布均匀,约在1周时可长满培养瓶底进行传代;16周龄大鼠的原代软骨细胞48h仅有极少散在的细胞贴壁,随后形成簇状聚集并逐渐蔓延,约2周方可长满瓶底。(3)两种软骨细胞在第1代时形态差异不明显,均呈三角形或多角形。甲苯胺蓝染色显示胞浆呈蓝色,细胞核呈深蓝色;阿利新蓝染色显示胞浆呈淡蓝色;Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色显示胞浆呈棕黄色,细胞核呈深棕色。三种软骨细胞鉴定方法均为阳性反应。(4)观察第2代软骨细胞,对照组细胞呈梭形,胞质丰富饱满;自然退变组和诱导退变组细胞呈长梭形或不规则形态。β-半乳糖苷酶染色显示对照组细胞未见明显染色,自然退变组和诱导退变组细胞可见大量细胞呈深蓝色。(5)RT-PCR检测显示:与对照组相比,自然退变组和诱导退变组软骨细胞中col2α的mRNA表达量显著降低[(0.07±0.02)vs(0.53±0.06),p<0.001;(0.15±0.03)vs(0.53±0.06),p<0.001];FOXO4的mRNA表达量显著增高[(0.58±0.03)vs(0.08±0.02),p<0.001;(0.83±0.03)vs(0.08±0.02),p<0.001]。(6)Western Blot检测显示:与对照组相比,自然退变组和诱导退变组软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白的表达量显著降低[(0.14±0.01)vs(0.51±0.02),p<0.001;(0.11±0.03)vs(0.51±0.02),p<0.001];FOXO4蛋白的表达量显著增高[(0.16±0.02)vs(0.08±0.01),p<0.05;(0.21±0.02)vs(0.08±0.01),p<0.01]。结论:(1)自发性退变和1L-1β诱导退变是两种有效的软骨细胞退变模型,可用于软骨退变或骨性关节炎的相关实验研究;(2)转录因子FOXO4可在大鼠软骨细胞中表达;(3)FOXO4与大鼠软骨细胞的退变有关,其表达与软骨退变的程度呈正相关。

关键词：骨性关节炎软骨细胞退变模型 FOXO4 Ⅱ型胶原蛋白

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