检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈中山第三军医大学

学位级别：博士

视网膜色素变性(retinitis pigmentosa, RP)是一种严重的致盲性疾病,人们对该病的治疗进行了各种尝试,包括视网膜移植、基因治疗、视觉假体、药物干预等,但至今尚无确切有效、能重建视功能的治疗方法,究其根本原因在于视网膜变性的病理... 详细信息

视网膜色素变性(retinitis pigmentosa, RP)是一种严重的致盲性疾病,人们对该病的治疗进行了各种尝试,包括视网膜移植、基因治疗、视觉假体、药物干预等,但至今尚无确切有效、能重建视功能的治疗方法,究其根本原因在于视网膜变性的病理机制极为复杂,在感光细胞丧失之后内层神经元也发生继发变性,因此视功能的维持和重建存在巨大的障碍。视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)以动作电位的方式将视觉信息编码、整合,然后投射至高级视觉中枢,因此节细胞的功能状态决定着视觉信息的最终输出。感光神经节细胞(intrinsically photosensitive RGCs, ipRGCs)是RGCs中含有特殊感光色素melanopsin的一小类细胞(因此也叫melanopsin-containing RGCs, mRGCs),它不需要接受来自视锥视杆的信息输入而直接感光。有学者发现在慢性高眼压状态下ipRGCs较普通RGCs更能抵抗压力的影响而存留,在视网膜变性过程中mRGCs如何变化未见报道。mRGCs与RGCs相比不需要接受来自视锥视杆的信息输入,而所在的视网膜层次、视网膜微环境完全相同,因此对mRGCs在视网膜色素变性过程中形态和功能深入研究,对比RGCs的形态和功能特性,将对揭示RGCs继发变性提供极为重要的线索,也为视网膜变性之后神经元的保护和功能重建提供新的思路。本实验室采用视网膜色素变性的经典动物模型RCS大鼠,在前期的研究中发现变性晚期RGCs数量显著减少,进一步功能研究发现变性RGCs被动膜学特性和动作电位的发放类型、发放频率等也发生改变,部分RGCs甚至失去动作电位的发放。提示在感光细胞变性死亡之后,RGCs在数量和功能上也发生了明显的变性。然而RGCs继发变性死亡的触发机制至今尚不清楚。视网膜神经元胞膜上各种离子通道的表达、电流密度和动力学特性,动作电位的类型、发放频率和幅度,以及神经递质和受体的分布及功能状况共同决定了视网膜神经元的存活或死亡,以及视觉信息的传递。因此研究RCS大鼠视网膜变性过程中RGCs通道特性将对理解其膜学特性改变的分子蛋白基础提供依据。本研究的目的是通过对RCS大鼠视网膜变性过程中mRGCs和RGCs形态、膜特性、通道电流和钙流变化的研究,结合本课题组和既往其他学者的研究结果,对视网膜变性的病理机制有更深入的了解,为未来视网膜变性中神经元的保护、功能的重建提供线索;建立大鼠逆行标记RGCs和mRGCs并在荧光显微镜下对视网膜组织切片上不同类型细胞分类进行膜片钳全细胞记录技术,为未来视网膜细胞和组织、神经网络等进行深入探讨,从而为揭示视觉功能的本质和变性的病理机制建立平台。本研究采用视网膜铺片和切片免疫荧光染色、视交叉上核(SCN) Fluorogold逆行标记,研究了视网膜变性过程中mRGCs在视网膜中的分布情况、形态学特征和数量变化;采用westernblot检测melanopsin蛋白在视网膜变性过程中的表达情况;采用视网膜切片膜片钳,研究变性过程中RGCs钠钾离子电流幅值、密度、I-V曲线等动力学特性;采用免疫组织化学染色和westernblot研究电压依赖性钠通道蛋白在变性过程中的表达变化;运用钙成像技术探讨RGCs在变性过程中胞内钙的强度变化;在立体定位下行SCN逆行标记感光神经节细胞,在荧光显微镜下对mRGCs行膜片钳全细胞记录,研究mRGCs的电生理学特性,并与对照大鼠进行比较。本课题在以下方面进行较为深入的研究后得到如下结果和结论: 第一部分RCS大鼠视网膜变性过程中mRGCs的分布、形态、数量和melanopsin蛋白的表达感光神经节细胞mRGCs是近年来发现的视网膜内一种特殊的神经元,它含有一种特殊的感光色素melanopsin,不需要视锥视杆的输入而直接感光。那么在视网膜变性过程中,mRGCs的分布、形态学特征和数量发生了怎样的改变?melanopsin蛋白的表达如何变化?与RGCs变化的关系如何?本研究采用视网膜铺片和切片免疫荧光染色、视交叉上核(SCN) Fluorogold逆行标记方法,研究视网膜变性过程中mRGCs在视网膜中的分布情况、形态学特征和数量变化;采用westernblot检测melanopsin蛋白在视网膜变性过程中的表达情况。结果发现:1、成功完成在上丘和外膝体逆行Fluorogold对RGCs的标记,以及视交叉上核SCN对mRGCs的逆行标记;逆行标记的mRGCs和RGCs在视网膜变性过程中数量、分布和比例的改变与免疫荧光染色结果一致,表明两种方法确实可信。2、视网膜铺片和切片免疫荧光染色结果发现mRGCs散在分布于RC

关键词： RCS大鼠视网膜神经节细胞感光神经节细胞 melanopsin 全细胞记录视网膜色素变性离子通道逆行标记

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NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂Y1231对视网膜缺血再灌注损伤后RGCs的影响

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眼科研究 2008年第6期26卷 401-404页

作者：邱伟强张纯王薇卫若昕北京大学第三医院眼科北京大学眼科中心 100083

目的研究NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂Y1231对视网膜缺血再灌注损伤后神经节细胞的影响。方法采用视网膜神经节细胞(RGCs)逆行标记,用立体定位仪将大鼠固定,根据大鼠双侧上丘和外侧膝状体在颅骨表面的投影,在投影处钻4个骨孔,每孔注入10g/... 详细信息

目的研究NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂Y1231对视网膜缺血再灌注损伤后神经节细胞的影响。方法采用视网膜神经节细胞(RGCs)逆行标记,用立体定位仪将大鼠固定,根据大鼠双侧上丘和外侧膝状体在颅骨表面的投影,在投影处钻4个骨孔,每孔注入10g/L的荧光金2μL。2周后采用升高眼压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。将35只SD大鼠随机分为正常对照组(7只),缺血再灌注组(7只)和治疗组(21只)。其中治疗组根据再灌注后不同时间予以0.1%Y12315μL右眼玻璃体腔注射分为1、3、6h组,每组7只大鼠。于再灌注后24 h取其视网膜铺片,用荧光显微镜拍照并计算赤道部以内RGCs的数目,对数据进行方差分析。结果缺血再灌注组与治疗组的RGCs数量均少于正常对照组(P<0.01)。与缺血再灌注组相比,治疗组中1h和3h给药组的RGCs数量明显多(P<0.01),而6h给药组差异无统计学意义(P=1.0)。结论在视网膜缺血再灌注损伤中,NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂Y1231可有效地保护RGCs。

关键词： NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂缺血再灌注逆行标记

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核间性眼肌麻痹的神经解剖学研究:展神经核及其向动眼神经核的投射;核间性眼肌麻痹动物模型的建立

核间性眼肌麻痹的神经解剖学研究:展神经核及其向动眼神经核的投...

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作者：李国栋青岛大学

学位级别：硕士

对核间性眼肌麻痹(internuclear ophthalmoplegia,INO)机理的研究,是建立在对动眼环路进行深入研究的基础之上的.该实验一方面应用荧光金(fluorogold,FG)逆行标记技术探讨大鼠展神经核(abducent nucleus,ABN)的细胞构筑及其与动眼神经... 详细信息

对核间性眼肌麻痹(internuclear ophthalmoplegia,INO)机理的研究,是建立在对动眼环路进行深入研究的基础之上的.该实验一方面应用荧光金(fluorogold,FG)逆行标记技术探讨大鼠展神经核(abducent nucleus,ABN)的细胞构筑及其与动眼神经核(oculomotor nucleus,OMN)之间的联系,另一方面应用多种损毁方法建立INO的大鼠模型,用眼外肌肌电表现评价模型成功与否,并对展神经核至动眼神经核的核间通路的行程予以分析,这不但完善了对动眼环路中最重要的环节--最后共同通路(final common pahway,FCP)的研究,而且也为临床进一步揭示INO的机理及寻求有效的治疗手段提供了方法和思路.

关键词：核间性眼肌麻痹展神经核核间神经元动眼神经核荧光金逆行标记动物模型

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皮质脊髓投射神经元的在体分离与基因表达分析

皮质脊髓投射神经元的在体分离与基因表达分析

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作者：曲春生温州医学院

学位级别：硕士

目的:哺乳动物的大脑皮层接受、整合来自身体各处的感觉信息,并依靠第五皮层的下行性投射神经元将控制信息传递出去。来自不同区域的第五皮层投射神经元其下行性投射靶区是不同的。视觉区的下行性投射神经元投射到上丘,运动区则投射到... 详细信息

目的:哺乳动物的大脑皮层接受、整合来自身体各处的感觉信息,并依靠第五皮层的下行性投射神经元将控制信息传递出去。来自不同区域的第五皮层投射神经元其下行性投射靶区是不同的。视觉区的下行性投射神经元投射到上丘,运动区则投射到脊髓。上述的这种现象是由于出生后轴突的选择性修剪引起的。本研究是为了寻找皮质脊髓投射神经元(CSPN)发育的关键基因,尝试建立一种在体分离投射神经元和基因表达分析的方法。 　　方法:我们在P8小鼠椎体交叉处注射逆行标记物,用来标记第五皮层的下行性投射神经元。同时用显微捕获激光切割的方法对视觉区和运动区的投射神经元进行分离。分别提取RNA,通过线性放大后,对其进行质量控制。对于质量合格的RNA,送去上海做基因芯片实验,通过对CSPN表达谱以及皮层组织表达谱的对比分析,寻找特异性表达在CSPN的基因。 　　结果:我们发现有很多个基因在纯化的CSPN上富表达。如遗传痉挛性截瘫病变基因Spg3a与印记基因Meg8。对于这一结果我们也通过RT-PCR和原位杂交的方法进行了验证。结果表明,Spg3a在E18.5至P8期间在大脑第五皮层有高表达。同样,Meg8也在发育的早期选择性表达在小鼠大脑第五皮层中。 　　结论:利用Retrobead的逆行标记、激光捕获显微切割、RNA线性放大、基因芯片以及原位杂交技术,我们系统建立了一种投射神经元的分析方法,这种方法可以成功用于发现投射神经元发育及疾病的关键基因。

关键词：基因芯片锥体神经元大脑皮层逆行标记基因表达动物模型

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大鼠孤束核内吗啡肽能神经元向臂旁核及中脑导水管周围灰质的投射

大鼠孤束核内吗啡肽能神经元向臂旁核及中脑导水管周围灰质的投射

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作者：吕伯昌第四军医大学

学位级别：硕士

内吗啡肽(endomorphin,EM)是新近发现的一种内源性阿片肽,也是与μ阿片受体(μ-opioid receptor,MOR)具有最高选择性和亲和力的内源性配体。内吗啡肽可分为内吗啡肽-1(Endomorphin-1,EM1)和内吗啡肽-2(Endomorphin-2,EM2)两种亚型,它们... 详细信息

内吗啡肽(endomorphin,EM)是新近发现的一种内源性阿片肽,也是与μ阿片受体(μ-opioid receptor,MOR)具有最高选择性和亲和力的内源性配体。内吗啡肽可分为内吗啡肽-1(Endomorphin-1,EM1)和内吗啡肽-2(Endomorphin-2,EM2)两种亚型,它们都具有明确的镇痛作用。EM阳性神经元的胞体在中枢内主要分布于下丘脑和孤束核,在外周主要分布于感觉神经节,而EM阳性纤维及其终末的分布较为广泛,在下丘脑、中脑导水管周围灰质、孤束核、臂旁核、脊髓和延髓背角等许多重要结构都有密集分布。孤束核(nucleus tractus solitarii,NTS)是位于延髓背内侧的纵行核团,是内脏感觉信息传递的重要通路,并参与痛信息的调控。NTS被划分为多个亚核,不同亚核的功能不尽相同。NTS内的神经元可经Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ对颅神经接受头颈和胸腹腔大部分内脏的初级传入信息,被广泛认为是中枢和外周自律活动调节的起点。NTS与其他中枢结构联系广泛,其中包括臂旁核(parabrachial nucleus,PBN)和中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray, PAG)。我们以往的研究已经证实位于下丘脑的EM阳性神经元向PBN以及PAG发出纤维投射,并且观察到下丘脑与孤束核内的EM阳性神经元之间存在往返的纤维联系。在PBN以及PAG内能观察到大量EM阳性纤维和终末,既然位于下丘脑内的EM能神经元向PBN以及PAG都有纤维投射,那么同样位于中枢的NTS内的EM能神经元是否也向PBN和PAG发出纤维投射,则尚未见有文献报道。本研究着重于阐明NTS内EM能神经元与PBN以及PAG之间的联系,完善中枢内EM能神经元与EM阳性纤维密集区域之间的联系,为研究EM参与中枢内源性镇痛系统提供形态学依据,对进一步揭示EM在中枢内源性镇痛系统发挥效应的机制具有重要的意义。本研究利用四甲基罗达明(TMR)逆行追踪与免疫荧光组织化学染色相结合的双标技术,观察了孤束核内EM阳性并向PBN或PAG投射神经元的定位分布: 1.将TMR注入右侧臂旁核(主要位于外侧亚核和内侧亚核)后,TMR逆行标记的神经元在右侧NTS呈优势分布并且在NTS的各亚核内都能观察到逆标神经元,尤以背外侧亚核、内侧亚核以及连合亚核多见;EM1阳性神经元主要分布在NTS的内侧亚核、连合亚核、外侧亚核以及胶状质亚核,而EM2阳性神经元则主要分布于内侧和背外侧亚核;部分TMR逆标神经元同时也呈EM1或EM2阳性。EM1/TMR双标神经元占TMR逆标神经元的9.4%,占EM1阳性神经元的9.1%;EM2/TMR双标神经元占TMR逆标神经元的5.8%,占EM2阳性神经元的6.5%;这些双标神经元多分布于NTS的内侧和背外侧亚核。在连合亚核和胶状质亚核内也有少量EM1/TMR双标神经元。上述研究结果表明NTS内的EM阳性神经元向臂旁核发出纤维投射。从NTS向PBN的EM能投射可能在内脏痛信息传递的调控方面发挥重要作用。 2.将TMR分别注入中脑导水管周围灰质(PAG)的不同亚区后,我们观察到的主要结果如下: (1)将TMR注入腹外侧PAG(vlPAG)后,在NTS内的TMR逆标神经元以内侧亚核最多,连合亚核次之,同时在背外侧和中间亚核也有逆标神经元的分布。NTS内9.62%的EM1(8.6±1.14)或5.54%的EM2(3.8±0.84)阳性神经元被TMR逆行标记; (2)将TMR注入外侧PAG(lPAG)后,在连合亚核、内侧亚核以及背外侧亚核都可见TMR逆标神经元的分布,但主要集中于连合亚核和内侧亚核,且其数量要少于vlPAG组。NTS内6.18%的EM1(5.2±0.84)或4.63%的EM2(3.0±0.71)阳性神经元被TMR逆行标记; (3)将TMR注入背外侧(PAG)dlPAG和背内侧PAG(dmPAG)后,在NTS内TMR逆标神经元的数量要远远少于vlPAG和lPAG组,并且未观察到典型的EM/TMR双标神经元。从以上结果我们可以看出:NTS内向PAG投射的神经元主要分布于连合亚核和内侧亚核,其他亚核分布较少或未见分布;同样EM/TMR双标神经元也主要位于连合亚核和内侧亚核;将TMR注入vlPAG后,在NTS内观察到的逆标神经元最多,其次为将TMR注入lPAG和dlPAG后,将TMR注入dmPAG后观察到的逆标神经元最少。以上结果说明:PAG内的部分EM能纤维和终末来自NTS,且NTS不同亚核向PAG不同亚区的上行EM能投射存在着一定的定位关系,从NTS向PAG的EM能投射纤维和终末可能参了PAG内的信息调控,特别是对内脏信息的调控。上述结果将为EM作用于中枢内源

关键词：内吗啡肽孤束核臂旁核中脑导水管周围灰质四甲基罗达明逆行标记免疫荧光组织化学大鼠

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大鼠股神经不同损伤修复模型中再生趋化性的研究

大鼠股神经不同损伤修复模型中再生趋化性的研究

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作者：艾克热木江·木合热木福建医科大学

学位级别：硕士

随着经济的发展，周围神经的损伤发生正逐年增加，目前已成为一种常见的外科损伤。虽然随着显微外科技术的成熟，神经手术缝合的精确度已有了较大幅度的提高，但周围神经的损伤后功能完全恢复却没能实现。因此，为了进一步提高神经损伤... 详细信息

随着经济的发展，周围神经的损伤发生正逐年增加，目前已成为一种常见的外科损伤。虽然随着显微外科技术的成熟，神经手术缝合的精确度已有了较大幅度的提高，但周围神经的损伤后功能完全恢复却没能实现。因此，为了进一步提高神经损伤后修复的效率，必须从神经再生的生理学特征与机制中寻找突破口。 　　Cajal等提出的神经趋化性再生理论为神经损伤的修复提供了新的思路。此理论提示，要获得神经损伤后功能的完全恢复，不仅要促进神经快速完全再生，更重要的是要保证再生的神经轴突正确对接，即损伤近端再生的运动神经轴突长入远端相应的运动神经束内，近端再生的感觉神经轴突长入远端相应的感觉神经束内。虽然一个世纪以来，尤其自从上个世纪80年代以来的研究已经使神经趋化性再生的理论被广泛接受，但是对其某些特征以及其发生机制尚无统一的结论。 　　目的：本研究在建立大鼠股神经不同损伤与修复模式下神经再生趋化性再生的研究方法的同时对神经趋化性的性质以及其在临床上应用的可能性进行了探索。 　　方法：1.将健康雄性SD大鼠进行股神经主干夹伤。术后8周，除进行大体行为学、电生理和组织学检查外，分别用纯蓝和DiI标记隐神经和股神经肌支，逆行示踪标记运动神经元观测脊髓前角中示踪剂的分布及数目。 　　2.在不同的时间点分别用逆行示踪标记法，电生理学以及行为学观察在大鼠股神经夹伤与冰冻的损伤模式下的修复，评价神经的趋化性再生情况。 　　3.用PPC制作Y型电纺丝导管，并将溶解后的COL-I注入管内制作两种不同形状的神经导管，用于修复大鼠股神经缺损，术后不同的时间点从大体行为学、电生理和组织学方面评价股神经趋化性再生的修复效果。 　　结果：1.大鼠股神经再生的功能评价结果：实验动物术侧活动受限；检测到术侧运动诱发电位其潜伏期延长，波幅降低（P＜0.05）。标记物数量：实验组脊髓前角有红色、蓝色与紫色。对照组中脊髓前角运动神经元仅为红色。 　　2.冰冻损伤组，夹伤组分别有NF-200染色显示神经断端吻合口连续性良好；荧光显微镜下观察到标记组脊髓前角中被纯蓝、DiI标记的神经元红色逐渐增加，蓝色与紫色神经元数量逐渐减少。冰冻损伤组染色数量少，但红色神经元比例高（P＜0.05）。 　　3.Y型神经导管修复大鼠股神经缺损的结果表明：术侧后腿活动范围缩小，伸腿功能受限；导管组一的电刺激诱发最高肌张力显著高于导管组二（P＜0.05）。染色神经元的数量无明显区别呢，但是导管一组红染神经元比例较导管二组高（P＜0.05）。 　　结论：1.在进行周围神经损伤再生评价时，除了进行行为学、电生理和组织形态学常规检测外，采用DiI和纯蓝逆行示踪标记神经元计数的方法可以作为趋化性再生效果评价的一个选择。 　　2.保持了神经束膜的完整性，即使损伤范围较大也能促进轴突再生中准确对接。 　　3.Y型神经导管分叉较早可显著促进股神经分支的再生轴突的趋化性再生。

关键词：股神经损伤修复模型趋化性再生神经导管逆行标记

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S-D大鼠视网膜神经节细胞分布实验研究

S-D大鼠视网膜神经节细胞分布实验研究

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作者：常永杰郑州大学

学位级别：硕士

目的视网膜是一片能感光的脑组织，而视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)是其终端输出神经元，在视网膜信息整合和传导过程中扮演着极为重要的角色。视网膜不同纬度光感受器细胞(视锥细胞和视杆细胞)、双极细胞、RGC密度上... 详细信息

目的视网膜是一片能感光的脑组织，而视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)是其终端输出神经元，在视网膜信息整合和传导过程中扮演着极为重要的角色。视网膜不同纬度光感受器细胞(视锥细胞和视杆细胞)、双极细胞、RGC密度上的差异对视网膜的中枢联系具有重大意义，尤其是RGC在视网膜各处的密度决定其投射到脑的信息量。关于RGC的研究，国内外都有过报道，但存在众多分歧。而且，直至目前，仍未见有关于大鼠RGC分布的系统研究报道。本实验运用荧光金(Fluoro-Gold，FG)经S-D大鼠双侧上丘(superior colliculus，CS)和背外侧膝状体核(dorsal lateral geniculate body nucleus，dLGN)进行四点逆行标记，目的是根据实验结果绘制出RGC分布密度图，从而为在脑上标出视网膜投射局部位点，并进一步研究其传递光学信息的不同生理功能奠定坚实基础，为人类视觉科学研究提供参考。材料与方法配制溶于0.1mol／L的磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS，pH7.4)的10g／L FG，含10g／L二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)。开颅后双侧CS和dLGN四点注射以逆行标记RGC，4周后0.1mol／L PBS和4％多聚甲醛(溶于0.1mol／L PBS，pH7.4)心脏灌注，用缝线和碳素标记方位后摘取双侧眼球，改良的AGFD眼球固定液固定5h。眼球固定过程中，取双侧CS和dLGN组织作冰冻切片，在荧光显微镜下通过UV激发光系统观察，均有荧光发射视为注射成功。注射成功者，制备全视网膜定向铺片标本，在荧光显微镜下观察照相，分别计数每张视网膜嘴侧(rostral，R)、腹侧(ventral，V)、尾侧(caudal，C)、背侧(dorsal，D)、腹嘴侧(rostral-ventral，VR)、腹尾侧(caudal-ventral，VC)、背嘴侧(rostral-dorsal，DR)和背尾侧(caudal-dorsal，DC)共8条半子午线方向上距视盘边缘0.1mm、0.3mm、0.6mm、1.0mm、1.5mm、2.2mm、3.2mm、

关键词：视网膜神经节细胞分布密度图荧光金逆行标记大鼠

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大鼠孤束核向中脑导水管周围灰质的直接和间接投射

大鼠孤束核向中脑导水管周围灰质的直接和间接投射

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作者：槐瑞托河北师范大学

学位级别：硕士

中脑导水管周围灰质属于脑干中线结构，它环绕着从后连合到蓝斑吻侧的中脑导水管。是下行抑制系统中的重要区域之一，在内源性镇痛中起着重要作用，同时也参与发声、恐惧、焦虑、性行为以及循环、呼吸等多种功能的调节。孤束核位于延髓... 详细信息

中脑导水管周围灰质属于脑干中线结构，它环绕着从后连合到蓝斑吻侧的中脑导水管。是下行抑制系统中的重要区域之一，在内源性镇痛中起着重要作用，同时也参与发声、恐惧、焦虑、性行为以及循环、呼吸等多种功能的调节。孤束核位于延髓背侧，在吻尾方向上形成长Y字形的细胞柱，其吻侧1／3是味觉初级传入部位，尾侧2／3是胸腹腔脏器初级传入中枢。近年来的生理学研究表明，孤束核不仅是内脏感觉的中继核，同时也是心血管反射、呼吸、呕吐、吞咽和胃肠反射的初级调节中枢，并与内脏伤害性信息的传递及迷走神经镇痛有密切关系。生理学和药理学的研究证明，中脑导水管周围灰质与孤束核在镇痛、内脏调节等功能中有密切关系；在形态学上，管振龙等对中脑导水管周围灰质向孤束核的定位投射进行过较为细致的研究。但关于孤束核向中脑导水管周围灰质的定位投射尚缺乏系统的形态学研究资料。臂旁核是内脏活动中重要的中继核团。除了参与味觉传递外，还参与呼吸调整、心血管功能调控、胃肠道活动、水盐平衡、机体代谢以及痛觉调制、心理行为和神经内分泌等活动。已有的研究表明，臂旁核与中脑导水管周围灰质和孤束核之间都存在相互联系。本实验利用顺行和逆行追踪技术结合免疫组织化学方法对孤束核直接或经臂旁核接替向中脑导水管周围灰质的投射进行了研究。 1．孤束核向中脑导水管周围灰质的直接定位投射采用荧光金逆行追踪和PHA-L顺行追踪技术，系统地观察了孤束核向中脑导水管周围灰质的投射。将PHA-L分别注入孤束核的中段(包括最后区)和尾段后，顺行标记纤维和终末在中脑导水管周围灰质内的分布有如下特点：(1)在冠状切面上，PHA-L顺行标记纤维和终末较多地分布于中脑导水管周围灰质的腹外侧区，外侧区次之，背内侧区很少，背外侧区没有分布。在吻尾方向上，PHA-L标记纤维和终末的分布呈现从吻段到尾段逐渐增多的趋势；(2)在两个实验组中，中段孤束核注射组的标记纤维和终末多于尾段注射组；(3)上述区域内标记纤维和终末均呈现同侧优势。将荧光金分别注入中脑导水管周围灰质吻、中、尾三段的腹外侧区、外侧区和背内侧区后，孤束核内逆行标记细胞的分布如下：(1)逆行标记细胞在孤束核中段最多，尾段次之，吻段极少分布。从孤束核各亚核内的标记来看，以内侧亚核最多，连合亚核、腹侧和背侧亚核有少量标记，其他亚核很少。在最后区有较多的标记细胞；(2)从中脑导水管周围灰质吻、中、尾三段的不同注射例的结果比较中发现，注射区在尾段腹外侧区者，孤束核的逆标细胞最多。注射区在中脑导水管周围灰质中段腹外侧区和尾、中段的外侧区者，逆行标记细胞较少。在最后区吻侧部内亦有较多的标记细胞。当注射区位于吻段时，在孤束核内仅见极少量中文摘要分散的逆行标记细胞。最后区内未见标记细胞;(3)逆行标记细胞在孤束核和最后区内的分布为同侧优势。对上述顺、逆行追踪实验结果进行分析和总结，发现孤束核和最后区向中脑导水管周围灰质的直接投射有如下规律:①中、尾段内侧和连合亚核向中脑导水管周围灰质投射最多，腹侧亚核与背侧亚核次之，中段多于尾段，内侧亚核多于连合亚核和腹侧亚核;②这些亚核向中脑导水管周围灰质的腹外侧区投射最多，向外侧区投射较少，向背内侧区投射最少，向背外侧区无投射;③最后区的吻侧部向尾段中脑导水管周围灰质的腹外侧区投射最多，向其他部位投射较少;④在中脑导水管周围灰质的吻尾方向上，这些投射从吻段到尾段逐渐增加; ⑤孤束核和最后区向中脑导水管周围灰质的两侧均有投射，但以同侧投射占优势。总体上是中、尾段内侧亚核、连合亚核、腹侧亚核和背外侧亚核和最后区的吻侧部向同侧尾段中脑导水管周围灰质的腹外侧区、外侧区有较多的投射，向背内侧区投射少。 2.大鼠孤束核经臂旁核向中脑导水管周围灰质的间接投射采用荧光金逆行追踪、PHA一L顺行追踪和免疫荧光技术相结合的方法观察了孤束核经臂旁核向中脑导水管周围灰质的间接投射。将荧光金注入中脑导水管周围灰质腹外侧区， PHA一L注入中、尾段孤束核后，臂旁核内的顺行标记纤维和终末与逆行标记细胞有重叠区主要在臂旁外侧亚核的外外侧亚核、中央外侧亚核、腹外侧亚核和背外侧亚核。在吻尾方向上，这些重叠区域在臂旁外侧核的中间部最多，吻侧部次之，尾侧部最少。本研究结果所表现的孤束核、臂旁核和中脑导水管周围

关键词：孤束核最后区中脑导水管周围灰质臂旁核荧光金菜豆凝集素顺行标记逆行标记免疫组织化学免疫荧光组织化学大鼠

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大鼠股神经不同损伤修复模型中再生趋化性的研究

大鼠股神经不同损伤修复模型中再生趋化性的研究

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作者：艾克热木江.木合热木福建医科大学

学位级别：硕士

随着经济的发展，周围神经的损伤发生正逐年增加，目前已成为一种常见的外科损伤。虽然随着显微外科技术的成熟，神经手术缝合的精确度已有了较大幅度的提高，但周围神经的损伤后功能完全恢复却没能实现。因此，为了进一步提高神经损伤后修复的效率，必须从神经再生的生理学特征与机制中寻找突破口。 Cajal等提出的神经趋化性再生理论为神经损伤的修复提供了新的思路。此理论提示，要获得神经损伤后功能的完全恢复，不仅要促进神经快速完全再生，更重要的是要保证再生的神经轴突正确对接，即损伤近端再生的运动神经轴突长入远端相应的运动神经束内，近端再生的感觉神经轴突长入远端相应的感觉神经束内。虽然一个世纪以来，尤其自从上个世纪80年代以来的研究已经使神经趋化性再生的理论被广泛接受，但是对其某些特征以及其发生机制尚无统一的结论。本研究在建立大鼠股神经不同损伤与修复模式下神经再生趋化性再生的研究方法的同时对神经趋化性的性质以及其在临床上应用的可能性进行了探索。方法： 1.将健康雄性SD大鼠进行股神经主干夹伤。术后8周，除进行大体行为学、电生理和组织学检查外，分别用纯蓝和DiI标记隐神经和股神经肌支，逆行示踪标记运动神经元观测脊髓前角中示踪剂的分布及数目。 2.在不同的时间点分别用逆行示踪标记法，电生理学以及行为学观察在大鼠股神经夹伤与冰冻的损伤模式下的修复，评价神经的趋化性再生情况。 3.用PPC制作Y型电纺丝导管，并将溶解后的COL‐I注入管内制作两种不同形状的神经导管，用于修复大鼠股神经缺损，术后不同的时间点从大体行为学、电生理和组织学方面评价股神经趋化性再生的修复效果。结果： 1.大鼠股神经再生的功能评价结果：实验动物术侧活动受限；检测到术侧运动诱发电位其潜伏期延长，波幅降低（P＜0.05）。标记物数量：实验组脊髓前角有红色、蓝色与紫色。对照组中脊髓前角运动神经元仅为红色。 2.冰冻损伤组，夹伤组分别有NF‐200染色显示神经断端吻合口连续性良好；荧光显微镜下观察到标记组脊髓前角中被纯蓝、DiI标记的神经元红色逐渐增加，蓝色与紫色神经元数量逐渐减少。冰冻损伤组染色数量少，但红色神经元比例高（P＜0.05）。 3. Y型神经导管修复大鼠股神经缺损的结果表明：术侧后腿活动范围缩小，伸腿功能受限；导管组一的电刺激诱发最高肌张力显著高于导管组二（P＜0.05）。染色神经元的数量无明显区别呢，但是导管一组红染神经元比例较导管二组高（P＜0.05）。结论： 1.在进行周围神经损伤再生评价时，除了进行行为学、电生理和组织形态学常规检测外，采用DiI和纯蓝逆行示踪标记神经元计数的方法可以作为趋化性再生效果评价的一个选择。 2.保持了神经束膜的完整性，即使损伤范围较大也能促进轴突再生中准确对接。 3. Y型神经导管分叉较早可显著促进股神经分支的再生轴突的趋化性再生。

关键词：外周神经损伤趋化性再生神经导管逆行标记

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大鼠下丘脑与孤束核间内吗啡肽阳性神经元的往返联系

大鼠下丘脑与孤束核间内吗啡肽阳性神经元的往返联系

引用

作者：惠瑞第四军医大学

学位级别：硕士

内吗啡肽(Endomorphin，EM)是与μ阿片受体的亲和力和选择性最高的内源性配体，可分为EM1和EM2两种亚型，具有明确的镇痛作用。EM阳性神经元的胞体在中枢内主要分布于下丘脑、孤束核等，在外周主要分布于感觉神经节，而EM阳性纤维及其... 详细信息

内吗啡肽(Endomorphin，EM)是与μ阿片受体的亲和力和选择性最高的内源性配体，可分为EM1和EM2两种亚型，具有明确的镇痛作用。EM阳性神经元的胞体在中枢内主要分布于下丘脑、孤束核等，在外周主要分布于感觉神经节，而EM阳性纤维及其终末的分布较为广泛，但主要存在于下丘脑、孤束核、脊髓和延髓背角等许多重要结构。以往的研究证明EM1阳性神经元、纤维及终末主要存在于上位中枢，EM2阳性神经元、纤维及终末则主要位于脊髓等下位中枢和感觉神经节，提示EM1可能主要在高位中枢发挥镇痛作用，而EM2主要参与对伤害性刺激初级传入的调控。下丘脑、孤束核是内脏感觉信息传递的重要通路，并参与痛信息的调控，这些核团之间是否有EM阳性纤维往返联系以及它们的EM阳性纤维及终末的来源如何目前仍未见报道。本研究利用荧光金(FG)逆行追踪与EM免疫荧光组织化学染色相结合的双标技术，观察了孤束核和下丘脑之间EM能纤维的往返联系。将FG注入孤束核(以外侧亚核为中心)后，在下丘脑室旁核小细胞部、穹窿周区、下丘脑后区及弓状核等核团内都观察到数量较多的FG逆行标记神经元；EM1和EM2阳性神经元的胞体主要位于下丘脑背内侧核、腹内侧核

关键词：内吗啡肽下丘脑孤束核免疫荧光组织化学荧光金逆行标记大鼠

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