检索结果-内蒙古大学图书馆

环境科学 2012年第11期33卷 4040-4045页

作者：林怡雯李丹吴舒旭何苗杨天清华大学环境学院环境模拟与污染控制国家重点联合实验室北京100084

以大肠杆菌和粪肠球菌作为研究对象,研究建立了一种逆转录定量pcr(reverse transcription q quantitative pcr,RT-qpcr)方法,以选择性检测水中活性病原菌.研究结果表明,细菌体内的RNA经过RT-pcr逆转录成cDNA后利用qpcr可定量目的基因拷... 详细信息

以大肠杆菌和粪肠球菌作为研究对象,研究建立了一种逆转录定量pcr(reverse transcription q quantitative pcr,RT-qpcr)方法,以选择性检测水中活性病原菌.研究结果表明,细菌体内的RNA经过RT-pcr逆转录成cDNA后利用qpcr可定量目的基因拷贝数,对处于稳定生长期的大肠杆菌(培养6～18 h)和粪肠球菌(培养10～38 h)体内的RNA含量进行检测分别为1 ***-1和7.98×***-1,以此作为细菌定量的依据,达到准确定量检测水体中目的基因RNA拷贝数而确定活性细菌含量的目的.通过3种方法(培养法、qpcr、RT-qpcr)检测热灭活后的大肠杆菌和粪肠球菌,结果表明与qpcr相比,RT-qpcr能够区分1.43 lg copy(大肠杆菌)与2.5 lg copy(粪肠球菌)的非活性菌,进而选择性检测活性病原菌.实际水样底物基质对RT-qpcr方法的影响不大,RT-qpcr与培养法之间有较好的线性相关性(大肠杆菌,R2=0.930,粪肠球菌,R2=0.948),本研究建立的方法可以用于实际水样活性病原菌的检测.

关键词：逆转录定量pcr RNA 大肠杆菌粪肠球菌活性菌

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蛹虫草退化梯度的建立及退化过程中相关分子机制的变化

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现代食品科技 2023年第6期39卷 70-78页

作者：张同宇巫迪马杰钊陈杰豪方玉鸿陈柏雄魏韬华南农业大学食品学院广东省微生态制剂工程技术研究中心广东广州510640 江门市山海堂虫草有限公司广东江门529000

该研究以实验室人工栽培模拟工业生产工艺,对蛹虫草菌株ZGCM进行重复传代培养,人为建立了1至7代的菌种退化梯度株系,以探究蛹虫草退化过程中的形态变化规律及其内在分子机制的变化。实验结果表明,ZGCM菌株自第2代开始退化,至第6代基本... 详细信息

该研究以实验室人工栽培模拟工业生产工艺,对蛹虫草菌株ZGCM进行重复传代培养,人为建立了1至7代的菌种退化梯度株系,以探究蛹虫草退化过程中的形态变化规律及其内在分子机制的变化。实验结果表明,ZGCM菌株自第2代开始退化,至第6代基本不产生子实体。培养基残糖含量随退化梯度菌种代际数目的上升而呈下降趋势,第5代与第1代相比下降了62.40%。培养基残余蛋白质含量在第2代下降后出现回升,提示蛹虫草菌株随着传代次数的上升,吸收外界氮源的能力持续下降。以qRT-pcr法测定过往报道中发现的14个转录水平变化趋势与蛹虫草退化代际数目呈线性相关的基因,结果表明仅有CCM_04090基因的表达量呈上升趋势,第5代与第1代相比提高了39.60%,与过往报道一致。其他基因均无显著变化。以HPLC法测定静置液体发酵液中的虫草素含量,发现其随着传代次数的上升而下降。静置发酵30d时,第5代与第1代相比虫草素产量下降了74.56%。结果表明蛹虫草菌株退化会对子实体产量和虫草素含量等两大产品品质核心因素造成负面影响。

关键词：蛹虫草退化梯度虫草素逆转录定量pcr

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犬细小病毒感染F81细胞microRNA荧光定量pcr内参基因的筛选

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畜牧与兽医 2023年第3期55卷 96-103页

作者：周宏专苏霞林路路齐颀张进徐福洲杨兵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

犬细小病毒(canine parvovirus, CPV)是犬急性胃肠炎的主要病原之一,对犬类的健康造成极大危害。MicroRNA(miRNA)是小的、非编码的RNA,在转录后水平调节基因表达。荧光定量pcr(RT-qpcr)是评估miRNA表达水平最常用的方法,而合适的参考基... 详细信息

犬细小病毒(canine parvovirus, CPV)是犬急性胃肠炎的主要病原之一,对犬类的健康造成极大危害。MicroRNA(miRNA)是小的、非编码的RNA,在转录后水平调节基因表达。荧光定量pcr(RT-qpcr)是评估miRNA表达水平最常用的方法,而合适的参考基因在RT-qpcr数据归一化中起着至关重要的作用。本研究在分析F81细胞空白对照组和感染CPV组小RNA高通量测序结果基础上,结合参考文献,在CPV感染后12 h和24 h,通过poly(A)延伸RT-qpcr定量方法检测候选内参基因小RNA的表达情况,并使用GeNorm、NormFinder和BestKeeper算法评估这些候选小RNA的稳定性。结果选取了5种高通量测序中表达相对稳定的miRNAs(dno-miR-186-5p、pha-miR-152、dno-miR-374a-5p、tch-miR-26a-2-5p和oga-miR-26b)和常用作参考基因的小核RNA U6(RNU6-1)、核仁小RNA(small nucleolar RNA)SNORD95以及SNORD96a,经过扩增分析及对高通量测序中差异表达的dno-miR-7-5p的定量验证发现,这些候选小RNA均具有较好的稳定性。其中pha-miR-152在检测样品中稳定性最好,可在CPV感染F81细胞中作为RT-qpcr法定量miRNA表达及数据均一化的合适参考基因。筛选出的pha-miR-152有助于研究miRNAs在CPV感染过程中的定量表达分析,为进一步研究F81细胞中miRNA调控CPV感染复制的分子机制研究提供可靠手段,也为其他相关物种miRNA定量研究中内参基因的选择提供参考。

关键词：犬细小病毒 MicroRNA 内参基因逆转录定量pcr

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杨梅醇对人肝癌HepG2细胞Caspase-9、Bcl-2、p21和Bax表达水平的影响

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中华中医药杂志 2015年第10期30卷 3656-3658页

作者：陈璇童晔玲任泽明杨锋戴关海浙江省中医药研究院基础实验研究所杭州310007

目的:检测杨梅醇体外对人肝癌Hep G2细胞肿瘤相关基因表达的影响。方法:采用q RT-pcr和Western blot分别检测杨梅醇处理前后Hep G2细胞肿瘤相关基因在m RNA和蛋白质水平的表达变化。结果:杨梅醇降低了Caspase-9和Bcl-2基因和蛋白的表达... 详细信息

目的:检测杨梅醇体外对人肝癌Hep G2细胞肿瘤相关基因表达的影响。方法:采用q RT-pcr和Western blot分别检测杨梅醇处理前后Hep G2细胞肿瘤相关基因在m RNA和蛋白质水平的表达变化。结果:杨梅醇降低了Caspase-9和Bcl-2基因和蛋白的表达水平,同时提高了p21基因和蛋白以及Bax蛋白的表达水平。结论:杨梅醇通过下调Caspase-9和Bcl-2基因表达,同时上调p21和Bax基因表达而发挥抑制Hep G2细胞增殖的作用。

关键词：杨梅醇 Hep G2 Caspase-9 Bcl-2 p21 Bax 逆转录定量pcr Western blot

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适用于流感病毒感染研究的qRT-pcr内参基因评估

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军事医学 2024年第7期48卷 509-515页

作者：赵璐冯烨张森陈月红李靖李裕昌姜涛军事科学院军事医学研究院病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定稳定的内参基因以比较病毒感染下靶标基因的转录水平,为研究宿主⁃流感病毒相互作用提供参考。方法在经典流感感染细胞模型(A549和THP⁃1细胞)中使用逆转录定量实时pcr(RT⁃qpcr)检测6个候选内参基因[甘油醛⁃3⁃磷酸脱氢酶(GAPDH)、... 详细信息

目的确定稳定的内参基因以比较病毒感染下靶标基因的转录水平,为研究宿主⁃流感病毒相互作用提供参考。方法在经典流感感染细胞模型(A549和THP⁃1细胞)中使用逆转录定量实时pcr(RT⁃qpcr)检测6个候选内参基因[甘油醛⁃3⁃磷酸脱氢酶(GAPDH)、β⁃肌动蛋白(β⁃actin)、18S RNA、β2微球蛋白(B2M)、泛素结合酶E2D2(UBE2D2)、核糖体蛋白L37A(RPL37A)]的相对表达量。使用BestKeeper、GeNorm、NormFinder和比较ΔCt法等方法综合评估内参基因的稳定性。结果在不同条件下,内参基因稳定性存在差异。当综合考虑流感病毒感染和免疫激活等因素时,β⁃actin和GAPDH分别是A549细胞和THP⁃1细胞中最稳定的内参基因,其次是UBE2D2和B2M。结论鉴定出的A549和THP⁃1细胞在流感病毒感染、干扰素及脂多糖处理时表达内参基因的稳定性及优选内参基因,对病毒感染机制研究具有借鉴意义。

关键词：内参基因流感病毒干扰素逆转录定量pcr A549细胞 THP⁃1细胞

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卵巢切除对SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表达的影响

卵巢切除对SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表达的影响

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作者：郝澎丽河北医科大学

学位级别：硕士

目的:肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一慢性进行性神经系统变性疾病,主要累及上、下运动神经元,表现为肌无力、肌萎缩和锥体束征。有研究证实在ALS病人和SOD1转基因鼠的脊髓前角运动神经元内内质网应激相关蛋白... 详细信息

目的:肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一慢性进行性神经系统变性疾病,主要累及上、下运动神经元,表现为肌无力、肌萎缩和锥体束征。有研究证实在ALS病人和SOD1转基因鼠的脊髓前角运动神经元内内质网应激相关蛋白水平呈现上调趋势。另有报道在SOD1转基因小鼠症状前期,与内质网应激相关的促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白平衡失常。以上都说明内质网应激与ALS发病及病程进展有关。Caspase-12为位于内质网外膜的半胱氨酸蛋白酶家族成员之一。有报道称caspase-12基因敲除小鼠可对抗内质网应激诱发的凋亡,而对其他形式凋亡信号刺激仍有反应。Caspase-12在内质网应激凋亡过程中处于关键位置,在死亡受体和线粒体凋亡途径中不被激活。说明caspase-12参与内质网应激介导的凋亡,与其他类型凋亡进程无关。本实验室前期研究证实SOD1G93A转基因鼠卵巢切组比SOD1G93A转基因鼠非卵巢切组提前发病,说明雌激素在ALS中发挥神经保护作用(《卵巢切除对家族性肌萎缩侧索硬化动物模型的影响》,学位论文,2012,郑倩)。许多研究显示雌激素可作用于其相应受体干预内质网应激。本实验通过观察卵巢切除对SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表达的影响,探讨caspase-12、雌激素在SOD1G93A转基因鼠发病进程中可能存在的关系。方法:1动物模型及分组繁殖并饲养家族性肌萎缩侧索硬化动物模型即经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,pcr)鉴定为SOD1G93A转基因的雌性小鼠,随机将10只5周龄携带SOD1G93A基因的小鼠分为2个实验组(n=5只):卵巢切除组(OVX组)、阳性对照组(NO-OVX组)。对照组为同窝、同月龄非SOD1G93A转基因雌性小鼠(CON组)。2取材用10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉后,摘除眼球取血后,迅速断头并剥离取出脑和脊髓组织,置于Eppendorf管内,投于盛有液氮的保温桶内,转移至超低温冰箱储存待用(OVX组、NO-OVX组分别于各组发病期取材,CON组与NO-OVX组同时取材)。3基因表达谱研究利用基因芯片技术对3组小鼠腰段脊髓进行基因表达谱分析。4逆转录定量pcr(q RT-pcr)使用q RT-pcr技术检测不同分组SODIG93A小鼠及阴性对照鼠腰段脊髓内caspase-12基因表达情况。5统计学处理采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行统计处理。数据的比较采用单因素方差分析,组间行两两比较采用LSD检验,以a=0.05为显著性检验标准。结果:1基因芯片结果1.1聚类分析结果将OVX组、NO-OVX组、CON组3组样本得到的差异基因进行聚类分析,聚类分析后得到聚类热图,每组样本均聚集在一起。OVX组与NO-OVX组、CON组比较差异基因表达明显。1.2基因筛选结果选取SOD1G93A转基因雌性小鼠OVX组、NO-OVX组、CON组基因表达谱进行对比,取P≤0.05,fold-change值≥+2或≤-2为筛选条件。其中OVX组与NO-OVX组相比共筛选出差异表达基因21个,表达上调的基因有19个,表达下调的基因有2个。OVX组与NO-OVX组差异基因列于Table 1。其中caspase-12基因OVX组与NO-OVX组相比fold-change值为2.2458。2 Caspase-12在OVX组、NO-OVX组、CON组的表达。q RT-pcr结果显示,OVX组腰段脊髓caspase-12基因表达量与NO-OVX组相比升高,差异有统计学意义。NO-OVX组腰段脊髓caspase-12基因表达量与CON组相比差异无统计学意义。结论:1 Caspase-12基因在卵巢切除SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓表达增加。2雌激素可能通过抑制内质网应激介导的凋亡对SOD1G93A转基因鼠发挥神经保护作用。

关键词： Caspase-12 内质网应激凋亡肌萎缩侧索硬化脊髓卵巢切除基因芯片逆转录定量pcr

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基于hsp70 mRNA的RT-qpcr方法评估水中病源微生物的灭活效果

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化学工程师 2016年第9期30卷 14-18,33页

作者：侯阳阳冉治霖李绍峰沈阳建筑大学市政与环境工程学院辽宁沈阳116109 深圳信息职业技术学院交通与环境学院广东深圳518172 深圳职业技术学院深圳市城市节水及工业污水资源化技术重点实验室广东深圳518055

基于热诱导hsp70mRNA的表达,建立一种RT-qpcr方法来评估水中病源微生物的灭活效果。以大肠杆菌为实验对象,通过RT-qpcr方法定量hsp70mRNA表达,以氯胺消毒样本与空白对照样本的hsp70mRNA表达量之比,确定灭活效果。实验结果显示:该方法检... 详细信息

基于热诱导hsp70mRNA的表达,建立一种RT-qpcr方法来评估水中病源微生物的灭活效果。以大肠杆菌为实验对象,通过RT-qpcr方法定量hsp70mRNA表达,以氯胺消毒样本与空白对照样本的hsp70mRNA表达量之比,确定灭活效果。实验结果显示:该方法检测的灵敏度为900cfu·mL^(-1);对氯胺灭活效果的检测,该方法的灭活率明显低于平板培养检测结果。基于hsp70mRNA的RT-qpcr方法,具有准确、快速、特异性强的优点,可用于评价水中病源微生物的灭活效果。

关键词：热休克蛋白70mRNA 逆转录定量pcr 大肠杆菌检测灭活

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关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达分析

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贵州畜牧兽医 2020年第3期44卷 15-18页

作者：周萍陈伟范瑞秦媛陈祥贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州大学贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

为了研究关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达水平及相关功能,试验以关岭牛为实验动物,分别提取心脏、肝脏、小肠、脂肪、大腿肌、背最长肌组织的总RNA,以不同组织的总RNA为模板,逆转录合成cDNA,以GAPDH基因作为内参,应用实时荧光定... 详细信息

为了研究关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达水平及相关功能,试验以关岭牛为实验动物,分别提取心脏、肝脏、小肠、脂肪、大腿肌、背最长肌组织的总RNA,以不同组织的总RNA为模板,逆转录合成cDNA,以GAPDH基因作为内参,应用实时荧光定量pcr技术检测PPAP2B基因mRNA在不同组织中的相对表达量。结果:关岭牛PPAP2B基因mRNA在脂肪中表达量最高,在其他组织中表达量很少甚至几乎不表达。结论:PPAP2B基因可能在牛的脂肪沉积过程中发挥作用。

关键词：关岭牛 PPAP2B基因基因表达逆转录定量pcr

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排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

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中西医结合肝病杂志 2003年第5期13卷 272-274页

作者：钟鸣余胜民农朝赞潘莉莉杨增艳黄琳芸陈少锋广西民族医药研究所广西南宁530001 广西民族医院

目的:探讨排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:采用逆转录定量pcr方法测定不同剂量排钱草总生物碱对大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的相对表达值。结果:高、中剂量组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达显著... 详细信息

目的:探讨排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:采用逆转录定量pcr方法测定不同剂量排钱草总生物碱对大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的相对表达值。结果:高、中剂量组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达显著低于模型组,P<0.05。与正常对照组相比差异无显著性意义。结论:排钱草总生物碱能显著降低猪血清所致免疫性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。

关键词：排钱草总生物碱肝纤维化大鼠Ⅰ型胶原 mRNA Ⅲ型胶原逆转录定量pcr 药理学

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