检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2016年第2期30卷 216-219页

作者：周杰英林应标曹友德段招军湖南省郴州市第一人民医院郴州423000 湖南省人民医院长沙410005 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100050

目的建立偏肺病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（RT-pcr）,并检测临床样本,了解偏肺病毒感染患儿的临床流行病学特点.方法针对保守基因F合成引物和探针,制备偏肺病毒转录RNA标准品并建立标准曲线,检测线性范围、最低检测限、重复... 详细信息

目的建立偏肺病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（RT-pcr）,并检测临床样本,了解偏肺病毒感染患儿的临床流行病学特点.方法针对保守基因F合成引物和探针,制备偏肺病毒转录RNA标准品并建立标准曲线,检测线性范围、最低检测限、重复性、灵敏度和特异性.对采集自2010年12月至2011年11月兰州地区急性呼吸道疾病患儿的222份下呼吸道临床标本进行偏肺病毒筛查,同时对阳性标本进行常见呼吸道病毒的共感染筛查,并对偏肺病毒进行相关流行病学分析.结果方法线性检测范围是10-108拷贝/μl,最低检测限是10拷贝/μl,曲线相关系数是1,扩增效率是91.62％,Ct值组内CV值小于2％.以传统pcr产物的测序结果为参照,逆转录实时荧光定量pcr的敏感性和特异性分别是100％和96.17％.偏肺病毒检出22例（9.46％）,其中男童13例（5.86％）,女童8例（3.60％）.春、夏、秋、冬的检出率分别是15.71％、0％、5.08％、11.11％.偏肺病毒载量与混合感染、疾病种类、临床症状差异均无统计学意义.结论该方法是检测偏肺病毒灵敏度、特异性和重复性均较好的方法;偏肺病毒在兰州地区儿童呼吸道感染中占有重要地位,长期系统的监测具有重要意义.

关键词：逆转录实时荧光定量pcr 偏肺病毒

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葡萄浆果内坏死病毒RT-q pcr检测技术建立及其在葡萄砧木中的时空分布规律

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中国农业科学 2024年第14期57卷 2771-2780页

作者：张英原青云任芳胡国君范旭东董雅凤中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心

【背景】葡萄浆果内坏死病毒（grapevine berry inner necrosis virus,GINV）是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒，该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GIN... 详细信息

【背景】葡萄浆果内坏死病毒（grapevine berry inner necrosis virus,GINV）是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒，该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GINV逆转录实时荧光定量pcr(reverse transcription real-time quantitative pcr,RT-qpcr)检测体系；明确不同葡萄砧木对GINV的敏感性；明确GINV在寄主植株中的时空分布规律，为该病毒的监测预警提供技术支撑。【方法】根据GenBank已登录GINV的复制酶（replicase,RP）、移动蛋白（movement protein,MP）和外壳蛋白（coat protein,CP）基因保守序列设计6套引物，通过常规RT-pcr和RT-qpcr筛选特异性强、扩增效果好的引物。再通过对退火温度和引物浓度等反应条件的优化建立GINV的SYBR Green I染料法RT-qpcr检测体系，并进一步对该技术的灵敏度、特异性和田间适用性进行评价。将GINV接种到贝达、SO4、101-14、140R和1103P 5种葡萄砧木上进行症状观察和病毒检测，以筛选GINV敏感性较高的指示植物。基于所建立的RT-qpcr技术对接种GINV葡萄砧木的不同生长时期、不同部位样品进行GINV检测，从而明确GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。【结果】建立了GINV SYBR Green I染料法RT-qpcr检测技术体系，其最佳引物为GINVRPYGF2/R2，最佳引物浓度为300 nmol·L-1，最佳退火温度为58.4℃。该技术对GINV的检测特异性强，其检测灵敏度达常规RT-pcr的1 000倍。症状观察结果表明贝达感染GINV的症状最为严重，表现为叶片系统性坏死，而其他砧木叶片仅表现褪绿斑驳和环斑症状。RT-qpcr检测结果表明GINV在EL27时期（坐果期）的相对含量最高，5个品种间的病毒相对含量在EL12（花序分明期）和EL27时期间无显著差异，EL31时期（果实增大期）的贝达与SO4、101-14、140R和1103P的病毒相对含量存在显著差异；GINV的相对含量在不同组织部位存在较大差异，由高到低依次为下部叶片、上部叶片、上部茎秆、下部茎秆、根部。【结论】建立了灵敏度高、特异性强的GINV RT-qpcr检测方法，利用该方法明确了GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。

关键词：葡萄浆果内坏死病毒逆转录实时荧光定量pcr 葡萄砧木时空分布

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滇西部分地区鼠形动物冠状病毒的感染、组织嗜性与遗传进化研究

滇西部分地区鼠形动物冠状病毒的感染、组织嗜性与遗传进化研究

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作者：徐粉慧大理大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在了解滇西部分地区鼠形动物感染冠状病毒(CoV)现状,CoV的组织嗜性,并对鼠形动物携带CoV进行遗传进化研究,为研究冠状病毒防控提供科学指导。方法:采用笼夜法,使用现炸的油条为诱饵,在云南省大理州大理市和鹤庆县、怒江州... 详细信息

目的:本研究旨在了解滇西部分地区鼠形动物感染冠状病毒(CoV)现状,CoV的组织嗜性,并对鼠形动物携带CoV进行遗传进化研究,为研究冠状病毒防控提供科学指导。方法:采用笼夜法,使用现炸的油条为诱饵,在云南省大理州大理市和鹤庆县、怒江州泸水市和贡山县的居民区、耕地区以及野生灌木丛区进行鼠形动物样本的采集。将收集到的鼠形动物按医学伦理学原则实施安乐死后,带回实验室,先初步根据形态学进行物种鉴定,之后通过线粒体(mt)-Cytb基因的序列分析对物种进一步进行分子生物学鉴定。解剖取心、肝、脾、肺、肾和直肠等组织,使用传统半巢式-pcr(RT-pcr),和我们建立的实时荧光定量pcr(qRT-pcr)进行检测,并对鼠形动物携带CoV的组织嗜性进行研究。获得的阳性样品,进行DNA测序,并通过高通量测序,获得CoV基因组。采用Graph Pad Prism8.0、Excel对数据进行处理和统计分析,用Arc Map 10.8制作地图,用Geneious、TBtool、Clustal X2、MEGA-X等软件对序列进行处理和遗传进化分析,以及RDP4和Simplot软件进行重组分析。结果:从2020年8月至2023年10月在云南大理州和怒江州的居民区和野外共捕获4目12属18种641只鼠形动物。β-CoV在高山姬鼠(Apodemus chevrieri)、澜沧江姬鼠(***)感染率分别为3.54%(4/113)、4.11%(6/146);α-CoV在大足鼠(Rattus nitidus)、大长尾鼩鼱(Episoriculus leucops)感染率分别为100%(5/5)、5.88%(1/17)。β-CoV和α-CoV在克钦绒鼠(Eothenomys cachinus)、褐家鼠(***)的双重感染率分别为1.89%(2/106)、3.85%(1/26),冠状病毒有广泛的宿主感染谱和遗传多样性。2株来自克钦绒鼠与来自印度牛(Bovine)BOV-36/IND/2015和来自墨西哥单峰骆驼(Camelus dromedarius)Dc CoV-HKU23相似性最高,通过高通量测序获得其中一株的全基因组序列,属于牛冠状病毒,并存在重组。通过定量研究发现鼠形动物直肠组织中CoV病毒载量均值为1.35×10～6copies/g,肝、心、脾、肺和肾组织中CoV病毒载量均值在0.97×10～3～3.95×10～3copies/g范围,CoV在鼠形动物中有广泛的组织嗜性,直肠组织中病毒载量最高(P<0.0001)。结论: 1.滇西地区鼠形动物中携带α-CoV和β-CoV冠状病毒,总感染率为3.59%(23/641)。 2.在克钦绒鼠和褐家鼠中同时发现了α-CoV和β-CoV的感染。提示同一亚属的冠状病毒可以感染不同种类的动物,而不同种类的动物也可以感染同一亚属的冠状病毒。 3.本次研究共捕获鼠型动物641只,属于4目12属18种,在澜沧江姬鼠、高山姬鼠、克钦绒鼠、大足鼠、褐家鼠和大长尾鼩鼱中检测到CoV,表明CoV具有广泛的宿主感染谱。 4.本研究设计了一种基于探针法(Taqman probe)的逆转录实时荧光定量pcr(qRT-pcr)方法,用于鼠形动物及其组织中CoV的检测,可分别检出鼠形动物样本的α-CoV和β-CoV。qRT-pcr方法具有良好的灵敏度、特异度、稳定性和重复性。 5.首次在克钦绒鼠中检测到牛冠状病毒,并获得一株全基因组序列,发现了与其他参考株的重组事件。 6.通过定量研究发现鼠形动物直肠组织含有的CoV拷贝数最高(P<0.0001),表明了感染鼠形动物的冠状病毒具有肠道嗜性。然而,在肝、心、脾、肺和肾组织中也检测到不等量的病毒拷贝数,提示冠状病毒可能存在其他传播途径。

关键词：鼠形动物冠状病毒逆转录实时荧光定量pcr 组织嗜性遗传进化

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八种灭活型病毒保存液对病毒核酸稳定性的影响

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中华实验和临床病毒学杂志 2021年第5期35卷 500-504页

作者：杨怡宋庆贺王霞董莲华中国计量科学研究院前沿中心北京100029 上海海洋大学食品学院 201306 中国科学过程工程研究所北京100190

目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24℃和37℃条... 详细信息

目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24℃和37℃条件下,保存时间为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,分别提取各保存液中的病毒核酸,采用逆转录荧光定量pcr(RT-qpcr)和逆转录数字pcr方法(RT-dpcr)检测病毒核酸的含量变化。结果四种商业化病毒保存液A、E、G、H在不同温度和时间条件下对病毒核酸的保存效果明显。另外四种保存液保护效果较差:保存液B和C在37℃条件下12 h后保存效果变差,保存液D的保存效果在24℃和37℃下6 h后均明显减弱;保存液F对病毒核酸没有任何保护作用。结论病毒保存液的保护效果差会导致核酸检测的假阴性,建议开展核酸检测时对使用的病毒保护液进行质量控制。

关键词：病毒保存液禽流感病毒新型冠状病毒假病毒标准物质逆转录实时荧光定量pcr 逆转录数字pcr

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尼帕病毒Taqman qRT-pcr检测方法的建立

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病毒学报 2020年第3期36卷 371-376页

作者：王浩麻粉莲王超黄益曼郭琼郑丽舒中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京100052

尼帕病毒(NiV)是一种高致病性人畜共患病原体,可引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病,目前尚无有效的抗NiV药物和疫苗,建立NiV检测方法十分必要。建立针对尼帕病毒N基因的Taqman qRT-pcr检测方法,应用于样本尼帕病毒检测及定量。针... 详细信息

尼帕病毒(NiV)是一种高致病性人畜共患病原体,可引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病,目前尚无有效的抗NiV药物和疫苗,建立NiV检测方法十分必要。建立针对尼帕病毒N基因的Taqman qRT-pcr检测方法,应用于样本尼帕病毒检测及定量。针对尼帕病毒N基因保守区域设计引物和探针,建立Taqman qRT-pcr检测方法,评价该检测方法灵敏度、特异性和可重复性,并应用此方法进行样本检测。本研究建立的Taqman qRT-pcr检测方法可以特异性的检测尼帕病毒,检测灵敏度为10~2拷贝/μL,标准曲线线性范围为1.0×10~9~1.0×10~2拷贝/μL,可重复性较好,能够有效检出尼帕病毒马来西亚病毒株和孟加拉病毒株,可用于样本尼帕病毒的检测及定量。

关键词：尼帕病毒逆转录实时荧光定量pcr 核酸检测

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反转录实时荧光定量pcr用于检测白血病相关融合基因分型的性能及应用评价

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中国卫生检验杂志 2020年第1期30卷 4-8页

作者：白园园杨慧洁余坚杨军军郑晓群陈占国温州医科大学附属第二医院检验医学学科

目的评价反转录实时荧光定量pcr(RT-qpcr)检测白血病相关融合基因的性能,以确定临床使用该方法的可行性。方法采用RT-qpcr检测临床骨髓标本中的白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的RNA,验证准确性、特异性、最低检出限、... 详细信息

目的评价反转录实时荧光定量pcr(RT-qpcr)检测白血病相关融合基因的性能,以确定临床使用该方法的可行性。方法采用RT-qpcr检测临床骨髓标本中的白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的RNA,验证准确性、特异性、最低检出限、精密度、抗干扰和融合基因亚型检出能力等性能指标,并对其临床应用进行初步评价。结果RT-qpcr检测白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的阴阳性符合率为100%,特异性和准确性得到验证;该方法检测下限为100 copies/每反应,其批内和批间精密度CV值均<10%;精密度符合实验要求;胆红素、甘油三酯和血红蛋白对该方法无明显干扰作用;均能检出融合基因亚型;白血病患者治疗前融合基因表达为阳性,完全缓解、巩固、维持各期的相关融合基因表达均为阴性,此结果与疾病进展关系一致。结论采用RT-qpcr检测白血病相关融合基因试剂盒符合规定的性能指标,该检测方法具有较高的灵敏度和较好的准确性和重复性等优势,适合应用于临床。

关键词：融合基因白血病逆转录实时荧光定量pcr 性能评价

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尼帕病毒检测方法建立及应用

尼帕病毒检测方法建立及应用

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作者：王浩中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

尼帕病毒(Nipah virus,NiV)最初于1998年在马来西亚暴发,引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病。NiV因致病性强、宿主范围广及大流行的潜在威胁等特点,成为人们关注的公共卫生问题。截至2018年6月,NiV已造成643名实验室确诊病例,导... 详细信息

尼帕病毒(Nipah virus,NiV)最初于1998年在马来西亚暴发,引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病。NiV因致病性强、宿主范围广及大流行的潜在威胁等特点,成为人们关注的公共卫生问题。截至2018年6月,NiV已造成643名实验室确诊病例,导致至少380人死亡。目前尚无有效的抗NiV药物和疫苗,为防范NiV疫情在我国发生和流行,建立NiV的检测方法尤为必要。研究方法:本研究基于NiV N基因保守区设计引物和探针,建立逆转录实时荧光定量pcr检测方法,并对检测方法进行评价和应用;针对在NiV侵入宿主细胞发挥关键作用的F和G蛋白,利用真核表达载体构建NiV假病毒,对NiV假病毒进行鉴定,并应用于血清中和抗体检测及效价评定;利用昆虫杆状病毒表达系统表达NiV N蛋白,对重组蛋白进行鉴定,为进一步筛选单克隆抗体,建立NiV抗原检测方法奠定基础。研究结果:一、尼帕病毒Taqman qRT-pcr检测方法的建立及应用1.建立NiVTaqmanqRT-pcr检测方法,引物和探针具有良好的特异性,检测下限为102 copies/μL,标准曲线线性范围为 1.0×109～1.0×102 copies/μL;标准曲线 R2=0.995,线性关系较好;重复试验变异系数小于5%,稳定性和重复性较好。2.本检测方法可有效检出NiV马来西亚株和孟加拉株,利用本方法检测83份蝙蝠肺组织和脑组织匀浆样本核酸,检测结果均为阴性。二、尼帕病毒假病毒的制备及血清中和抗体检测方法的建立和评价1.优化并合成 NiV F 和 G 基因,利用真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro表达NiV膜蛋白F和G,借助人类免疫缺陷病毒载体***.R-E-在293T细胞中成功包装出NiV假病毒,并对包装条件进行优化。对包装的NiV假病毒进行鉴定,Western Blot证实细胞裂解液中存在F和G蛋白,透射电镜下观察到NiV假病毒颗粒,为直径约为100～200nm的圆形或椭圆形的颗粒,颗粒内部为致密的电子核心,周围附有包膜,膜上有刺突。2.利用原核表达载体pET30a表达NiV F和G蛋白,采用Ni2+亲和层析纯化NiV F和G蛋白。F和G蛋白分别皮下免疫家兔获得免疫血清,间接ELISA法检测两种蛋白兔血清抗体滴度均达到1:40960。3.血清中和实验表明NiV假病毒与F和G蛋白家兔血清均发生中和作用,证明本研究构建的NiV假病毒可以应用于血清抗体中和实验检测及效价评定。三、尼帕病毒核蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定1.利用杆状病毒表达系统(pFastBacHTA载体)和Ni2+亲和层析技术表达及纯化NiV N蛋白,经SDS-PAGE检测,重组蛋白rBac-N纯度达到90%以上。2.对重组杆状病毒rBac-N进行鉴定,间接免疫荧光检测可见特异性绿色荧光,Western blot检测可见特异性目的条带。研究结论:1.建立尼帕病毒TaqmanqRT-pcr检测方法,该方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可用于NiV的核酸检测。2.成功包装NiV假病毒,家兔血清抗体中和实验证明该假病毒可用于血清中和抗体检测。3.表达和纯化NiV N蛋白,为制备抗体及建立针对NiV抗原的血清学检测方法奠定基础。

关键词：尼帕病毒逆转录实时荧光定量pcr 假病毒血清中和试验原核表达杆状病毒表达

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豚鼠结肠黑变病模型中原癌基因c-myc、K-ras和p53差异表达的实验研究

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癌症进展 2020年第1期18卷 22-25页

作者：程一乘郁强刘薇刘仍海北京中医药大学北京100029 北京中医药大学东方医院肛肠科北京1000780

目的研究豚鼠结肠黑变病模型(MC)结肠组织中原癌基因c-myc、K-ras和p53的表达相对正常组织的差异,探讨MC与结肠癌变的关系。方法采用大黄灌胃法建立豚鼠MC模型,逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(pcr)法检测豚鼠结肠组织中c-myc、K-ras和p... 详细信息

目的研究豚鼠结肠黑变病模型(MC)结肠组织中原癌基因c-myc、K-ras和p53的表达相对正常组织的差异,探讨MC与结肠癌变的关系。方法采用大黄灌胃法建立豚鼠MC模型,逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(pcr)法检测豚鼠结肠组织中c-myc、K-ras和p53 mRNA的表达水平,比较模型组和正常对照组豚鼠结肠组织中c-myc、K-ras、p53 mRNA的相对表达量。结果模型组豚鼠结肠组织中c-myc mRNA的相对表达量明显高于正常对照组(P﹤0.01);模型组豚鼠结肠组织中K-ras mRNA的相对表达量略高于正常对照组,p53 mRNA的相对表达量略低于正常对照组,但差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论MC豚鼠结肠组织中原癌基因c-myc的表达明显上调,提示MC具有向结肠癌演变的潜能。

关键词：原癌基因结肠黑变病逆转录实时荧光定量pcr 结肠癌

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1.中国广州地区G6PD缺乏症男性患儿的遗传学分析 2.G6PD基因与早期不明原因流产的关系探讨

1.中国广州地区G6PD缺乏症男性患儿的遗传学分析 2.G6PD基因与早...

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作者：陈晓丹中山大学

学位级别：硕士

第一部分中国广州地区G6PD缺乏症男性患儿的遗传学分析葡萄糖6磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)是红细胞磷酸戊糖途径中的关键酶,该途径能产生NADPH(还原型辅酶Ⅱ)以保护红细胞免受氧化物质的损伤。而葡萄糖6磷酸... 详细信息

第一部分中国广州地区G6PD缺乏症男性患儿的遗传学分析葡萄糖6磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)是红细胞磷酸戊糖途径中的关键酶,该途径能产生NADPH(还原型辅酶Ⅱ)以保护红细胞免受氧化物质的损伤。而葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症[OMIM:305900](G6PD缺乏症)是一种X连锁不完全显性的酶缺乏症,全球范围内约有4亿人受累,尤其是在热带和亚热带地区高发。在中国,G6PD缺乏症呈“南高北低”的分布趋势,主要集中在长江以南的地区,包括广东、广西、海南、云南等省份。该病临床症状多样,男性半合子G6PD活性呈显著性下降,而女性杂合子酶活性变化范围则较大,可呈显著性降低,也可在正常范围,因此我们选择了临床症状较统一的男性半合子做为研究对象。G6PD缺乏症大多由G6PD基因突变引起。该基因是一种看家基因,位于X染色体长臂(Xq28),长23182bp,含13个外显子和12个内含子,酶分子含545个氨基酸残基。截至2016年,在人类基因突变数据库(The Human Gene Mutation Database,HGMD)中查到的G6PD缺乏症致病基因总数为209种,其中错义突变及无义突变191种、基因调控区突变1种、剪切突变3种、小片段缺失10种、小片段插入2种、较大片段缺失2种。致病性突变可以导致G6PD活性水平降低,使红细胞容易受到外源性氧化剂攻击而引发损伤,进而导致红细胞溶解引起急性溶血性贫血。有报道显示,在G6PD缺乏症的高发地区,有近1/3的新生儿溶血是由G6PD缺乏引起的。考虑到不同的基因型所导致的临床表现不同,因此研究不同基因突变型的基因表达量及G6PD酶活性之间的相关性将有利于更深入地研究G6PD缺乏症的发病机制。中国人的G6PD缺乏症基因突变类型主要以c.1388 G>A(G6PD Kaiping)、c.1376G>T(G6PD Canton)、c.95 A>G(G6PD Gaohe)、c.871G>A(G6PD Viangchan)等错义突变为主,其中前两种基因型在中国常见基因型中占主要比例,均大于30%。因此,本研究通过构建G6PD基因的定量标准曲线,用于比较中国人群中常见的两种基因型(c.1376G>T,c.1388G>A)在酶活性和逆转录水平上的相关性。另外,G6PD基因11号外显子上c.1311C>T的突变在中国人群中也十分常见,但是对于该突变是否致病仍存在争议。该基因突变常与IVSXI+93T>C及rs1050757G呈连锁不平衡,以单倍型c.1311C>T/IVSXI+93 T>C/rs1050757G的基因型被检出,是由同义突变及SNPs组成。但有研究认为在亚洲人口中检测出该种单倍型与G6PD酶活性下降有一定的相关性。为证实此单倍型是否致病,本文欲通过对其c DNA的研究去分析G6PD单倍型c.1311C>T/IVSXI+93 T>C/rs1050757G是否因剪切突变而引起G6PD酶活性缺乏。[目的]:通过G6PD基因绝对定量法研究中国广东地区男性儿童常见突变基因型间表型及转录水平的关系,并通过对单倍型c.1311C>T/IVSXI+93 T>C/rs1050757G标本的c DNA测序分析,比对是否存在剪切位点改变进而引发疾病的可能。[方法]:收集正常对照及G6PD缺乏症患儿的血液标本共203例,提取其DNA进行基因型分析。将单倍型c.1311C>T/IVSXI+93 T>C/rs1050757G的c DNA标本和正常对照进行直接测序分析,并应用Cluster软件比对两者之间是否存在剪切位点的差异。另外对所有受试者的c DNA采用实时荧光定量pcr检测其G6PD基因表达量。用SPSS20.0版软件统计各基因型间表达量及酶活性比值的差异,并通过Western blot方法验证得到的表达量结果。以P<0.05为差异具有统计学意义。[结果]:正常对照与G6PD缺乏症患儿(男孩)的G6PD基因表达量间差异有统计学意义(P<0.05);不同基因型间(c.1376G>T,c.1388G>A及其他基因型)G6PD酶活性差异也有统计学意义(P<0.05);但不同G6PD基因型间的基因表达量差异无统计学意义(P>0.05)。在10例单倍型c.1311C>T/IVSXI+93 T>C/rs1050757G的标本中有8例检出了已知的致病性突变,但这10例均未发现剪切错误。[结论]:我们的实验结果不支持G6PD单倍型c.1311C>T/IVSXI+93 T>C/r s1050757G由于剪切而致病的推断。G6PD缺乏症患者较正常人的G6PD基因表达量有显著性降低,而基因型为G6PD c.1376 G>T的患者会比c.1388 G>A产生更为严重的临床表型。第二部分G

关键词： G6PD缺乏症逆转录实时荧光定量pcr 绝对定量基因型基因表达量 G6PD 不明原因流产绒毛

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逆转录实时荧光定量pcr检测p73 mRNA在结肠癌的表达

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中国临床医学 2005年第3期12卷 520-521页

作者：郭玮莫惠芳周琰赵瀛潘柏申复旦大学附属中山医院检验科上海200032

目的:建立一种实时定量pcr方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量pcr检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于... 详细信息

目的:建立一种实时定量pcr方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量pcr检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度、分化及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:p73的高表达可能与结肠癌的发生、发展及预后有联系。

关键词：结肠癌逆转录实时荧光定量pcr

来源：评论

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