检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2011年第3期32卷 61-65页

作者：许道军余兴龙刘雪燕薛立群湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

构建PADRE-tGFβ1原核表达质粒,并对其进行诱导表达和反应原性分析。对PADRE、联接序列(Linker)及tGFβ1的基因序列进行密码子优化,采用全基因合成的方法人工合成全长PADRE-Linker-tGFβ1序列,合成产物克隆至pEt-28a(+)质粒。将构建好... 详细信息

构建PADRE-tGFβ1原核表达质粒,并对其进行诱导表达和反应原性分析。对PADRE、联接序列(Linker)及tGFβ1的基因序列进行密码子优化,采用全基因合成的方法人工合成全长PADRE-Linker-tGFβ1序列,合成产物克隆至pEt-28a(+)质粒。将构建好的质粒转化至***21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPtG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在约19.87 ku处出现与预期目的蛋白一致的新蛋白条带,Western blot鉴定结果显示,该蛋白能够与tGFβ1抗体发生特异性结合。表明成功构建了pEt28-PADRE-tGFβ1原核表达质粒,表达的融合蛋白质具有tGFβ1的反应原性,为tGFβ1自体疫苗的制备及应用奠定了基础。

关键词：转生长因子β1 通用型辅助性t淋巴细胞表位融合蛋白原核表达

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t细胞表位对新型冠状病毒疫苗诱导抗体反应的影响

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微生物学免疫学进展 2022年第6期50卷 7-14页

作者：李少帅张一帆万延民闫冬梅佳木斯大学基础医学院微生态-免疫调节网络与相关疾病重点实验室黑龙江佳木斯154007 郑州大学第一附属医院检验科河南省检验医学重点实验室河南郑州450052 复旦大学附属华山医院感染科上海200040

目的通过构建严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)S1蛋白与通用型辅助性t淋巴细胞表位(pan HLA DR-binding epitope,PADRE)融合的DNA疫苗,探讨PADRE对S1蛋白DNA疫苗诱导抗体水平的影响。方法以pJW4303质粒为载体分别构建表达S1蛋白的重组质粒(pJW4303-S1)、表达S1和PADRE融合蛋白的重组质粒(pJW4303-S1-PADRE)。以人源密码子优化的SARS-CoV-2刺突蛋白基因为模板设计引物,PCR扩增获得基因片段,并将其克隆入真核表达载体pJW4303。对pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE进行PCR扩增和酶切,产物通过琼脂糖凝胶电泳验证,并将重组质粒进行测序。构建正确的质粒转染293t细胞,Western blot验证蛋白体外表达情况。以C57BL/6小鼠为实验动物并分组,采用不同的免疫接种策略进行动物免疫,每次免疫间隔2周,免疫前采血,第6次免疫2周后处死小鼠并采血。通过ELISA检测不同免疫策略诱导的针对SARS-CoV-2 S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)的特异性抗体水平及其亲和力指数。结果PCR扩增和酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果及质粒测序结果表明质粒构建成功;Western blot结果表明这2个质粒可以在体外稳定表达S1蛋白、S1融合PADRE蛋白;ELISA结果显示,pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE单次免疫均可以诱导产生明显的针对RBD的抗体水平(P<0.0001,P=0.0034)。不同的免疫策略在进行6次免疫后,针对RBD的特异性抗体水平在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。抗体亲和力检测结果显示,第6次免疫后不同免疫策略诱导的针对RBD的抗体亲和力指数差异也无统计学意义(P>0.05)。结论pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE均具有较强的体液免疫原性,但PADRE不能进一步提高S1蛋白DNA疫苗的体液免疫原性。

关键词：抗体滴度 DNA疫苗通用型辅助性t淋巴细胞表位严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 刺突蛋白重组质粒疫苗评价

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