检索结果-内蒙古大学图书馆

基于酵母双杂交技术对与纳尔逊海湾正呼肠孤病毒σNS相互作用宿主蛋白的筛选

吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1313-1321页

作者：孙绿茵马竹萍李润林李永刚陶晓莉锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000

目的:探讨小鼠成纤维L929细胞中与纳尔逊海湾正呼肠孤病毒(NBV)σNS蛋白相互作用(互作)的宿主蛋白,阐明宿主蛋白对病毒复制的影响。方法:构建表达σNS蛋白的诱饵质粒pGBKT7-S3,采用测序技术验证诱饵质粒在Y2H酵母细胞中的准确表达。将pG... 详细信息

目的:探讨小鼠成纤维L929细胞中与纳尔逊海湾正呼肠孤病毒(NBV)σNS蛋白相互作用(互作)的宿主蛋白,阐明宿主蛋白对病毒复制的影响。方法:构建表达σNS蛋白的诱饵质粒pGBKT7-S3,采用测序技术验证诱饵质粒在Y2H酵母细胞中的准确表达。将pGBKT7-S3和pGADT7质粒分别和共同转化至Y2HGold酵母细胞中,涂布于固体培养基进行培养,观察菌落生长情况,确认σNS蛋白对酵母细胞无毒性,不能自行激活报告基因。诱饵质粒pGBKT7-S3与小鼠成纤维L929细胞的cDNA文库进行杂交,对编码互作蛋白的阳性克隆进行质粒抽提,阳性测序结果通过Uniprot数据库检索筛选得到与NBVσNS互作的蛋白。对互作蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析和STRING生物信息学分析。结果:成功筛选出61个阳性克隆。DNA测序分析和BLAST比对分析去除23个未匹配到数据库和测序基本相同的阳性克隆。阳性测序结果通过Uniprot数据库检索筛选得到38个与NBVσNS互作的蛋白,31个蛋白参与细胞生物过程,36个蛋白是细胞解剖成分,31个蛋白具有结合功能,5个蛋白是线粒体呼吸链组成部分,7个蛋白是核糖体蛋白和核糖体大小亚基的组成部分,2个蛋白参与铁代谢稳态。GO功能富集分析,互作蛋白参与的生物过程(BP)富集在细胞过程、代谢过程、生物学调节、定位和对刺激的反应等;细胞组分主要是细胞解剖成分和含蛋白复合物;分子功能集中在结合、催化活性、结构分子活性和转运活性等方面。KEGG信号通路富集分析,蛋白在遗传信息处理途径的翻译、折叠、分类和降解信号通路中高度富集,在机体系统中主要与消化系统有关联;与多种病毒性传染病和癌症有关联。STRING分析,互作蛋白涉及核糖体蛋白类、蛋白修饰类、代谢类和免疫蛋白类等功能蛋白。结结论论:成功筛选出与NBVσNS蛋白互作的蛋白,宿主蛋白在病毒复制中具有重要作用。

关键词：纳尔逊海湾正呼肠孤病毒酵母双杂交实验 σNS蛋白蛋白互相作用生物信息学

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拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK11与ABA响应元件结合因子ABF4相互作用的研究

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四川大学学报（自然科学版） 2022年第2期59卷 158-164页

作者：胡搏刘盈盈杨毅四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

为研究钙依赖蛋白激酶CPK11参与ABA信号通路的方式,本文利用体外酵母双杂实验(Y2H)以及体内双分子荧光互补实验(BiFC)分析CPK11与ABA响应元件结合因子(ABA-responsive element binding factors, ABFs)ABF4之间的关系.酵母双杂交实验表明... 详细信息

为研究钙依赖蛋白激酶CPK11参与ABA信号通路的方式,本文利用体外酵母双杂实验(Y2H)以及体内双分子荧光互补实验(BiFC)分析CPK11与ABA响应元件结合因子(ABA-responsive element binding factors, ABFs)ABF4之间的关系.酵母双杂交实验表明CPK11与ABF4存在体外相互作用,双分子荧光互补实验表明CPK11与ABF4存在体内相互作用.以上实验共同证明CPK11与ABF4存在直接相互作用.作为CPK11的同源蛋白CPK4与转录因子ABF4在植物体内也存在相互作用.以上实验表明CPK11及其同源蛋白CPK4可能通过与转录因子ABF4相互作用从而参与钙离子介导的ABA信号通路.

关键词：钙依赖蛋白激酶11 ABA响应元件结合因子4 同源蛋白酵母双杂交实验双分子荧光互补实验

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参薯GID1基因家族的挖掘和特征分析

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分子植物育种 2022年第24期20卷 8029-8034页

作者：蔡校森吴晓龙黄东益夏薇海南大学热带作物学院海口570228

参薯属于薯蓣科薯蓣属,是热区重要的薯类作物,具有很高的营养价值和药用价值。GID1基因是赤霉素受体蛋白,在植物的生长和发育中起关键作用。本研究采用生物信息学方法对参薯基因组中GID1家族基因进行鉴定,并对该基因结构、系统进化、保... 详细信息

参薯属于薯蓣科薯蓣属,是热区重要的薯类作物,具有很高的营养价值和药用价值。GID1基因是赤霉素受体蛋白,在植物的生长和发育中起关键作用。本研究采用生物信息学方法对参薯基因组中GID1家族基因进行鉴定,并对该基因结构、系统进化、保守基序以及表达模式等进行分析,通过分子实验筛选DELLA2-PGBKT7自激活抑制剂3-AT的浓度,酵母双杂交实验验证参薯GID1的互作基因。结果表明,参薯基因组中含有4个GID1家族成员,各成员都含有1个内含子。系统进化结果显示,单子叶和双子叶植物的GID1蛋白处于两个不同分支,参薯中GID1C-1和GID1C-4处于同一分支,GID1C-2和GID1C-3处于同一分支。保守基序分析发现,参薯中GID1C-1和GID1C-4含有10个完整的蛋白保守序列。表达模式分析结果显示,DaGID1C-1和DaGID1C-4在块茎、叶片和零余子中表达较高。分子实验表明:随着菌液稀释倍数和3-AT浓度的增加,DELLA2-PGBKT7自激活抑制效果显著。酵母双杂交实验表明,DELLA2是GID1C-1和GID1C-4的互作基因。

关键词：参薯(Dioscorea alata L.) GID1基因生物信息学分析酵母双杂交实验

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纳尔逊湾正呼肠孤病毒非结构蛋白μNS和σNS表达特性的分析

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吉林大学学报（医学版） 2021年第4期47卷 934-942页

作者：李藤菲王诗雨蒋欣如孙淼李婷婷林家锋王颖李永刚陶晓莉锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000

目的:检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域,阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒(NBV)的致病机制。方法:采用Lipo3000转染试剂将pCAG M3和pEFHAσNS质粒分别和共同转染至BHK细胞中,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞中的定位和... 详细信息

目的:检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域,阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒(NBV)的致病机制。方法:采用Lipo3000转染试剂将pCAG M3和pEFHAσNS质粒分别和共同转染至BHK细胞中,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞中的定位和分布;用NBV感染BHK细胞,采用Western blotting法检测μNS和σNS蛋白在感染细胞中的表达。构建σNS蛋白N末端10~60个氨基酸(aa)残基缺失的质粒,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞内共定位的结合区域,酵母双杂交实验验证μNS和σNS蛋白相互作用的结合区域。结果:亚细胞定位显示,NBV的μNS蛋白在无其他病毒蛋白的情况下会形成包涵体结构,而σNS蛋白弥散地分布在整个细胞质中。Western blotting检测证实μNS和σNS蛋白在感染细胞中表达。采用偶联抗体进行免疫染色,共聚焦显微镜下观察到μNS和σNS蛋白共定位于细胞质中。利用酵母双杂交实验检测到与μNS蛋白相互作用的σNS蛋白的基本区域位于σNS蛋白N末端区域的60个aa残基区域内。结论:NBV自噬相关蛋白σNS蛋白可以通过与μNS蛋白相互作用而共同表达于病毒包涵体中,σNS蛋白与μNS蛋白的结合区域位于σNS蛋白N末端的60个aa残基区域内。

关键词：纳尔逊湾正呼肠孤病毒蛋白互作非结构蛋白免疫荧光法酵母双杂交实验

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能够增强MBW复合体调控花青苷合成能力的龙眼DlMYB15基因

能够增强MBW复合体调控花青苷合成能力的龙眼DlMYB15基因

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作者：魏永赞石胜友黄颖华王尉谢江辉杨子琴 571101 海南省海口市龙华区学院路4号

发明提供了一种DlMYB15基因，其CDS序列如SEQ ID NO:4所示。本发明还提供了一种DlbHLH3基因，其CDS序列如SEQ ID NO:3所示。二者过表达不能合成花青苷，但酵母双杂交实验表明二者分别与DlMYBrp互作，烟草叶片瞬时表达发现二者分别与DlMY... 详细信息

标准号: CN116640775B

发明提供了一种DlMYB15基因，其CDS序列如SEQ ID NO:4所示。本发明还提供了一种DlbHLH3基因，其CDS序列如SEQ ID NO:3所示。二者过表达不能合成花青苷，但酵母双杂交实验表明二者分别与DlMYBrp互作，烟草叶片瞬时表达发现二者分别与DlMYBrp基因共转化植物能够增加花青苷的积累，而且二者一起与DlMYBrp基因共转化植物时更能够显著增加花青苷的积累，表明DlMYB15/DlbHLH3可能通过与DlMYBrp互作以及与DlMYBrp和DlbHLH3/DlMYB15所形成的复合体互作增强花色苷的积累，这为特色龙眼新品种创制提供理论支撑。

关键词：花青基因共转化积累酵母双杂交实验理论支撑瞬时表达烟草叶片复合体花色苷龙眼合成新品种发现

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青天葵F-box基因的克隆及其与ASK1蛋白互作分析

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中药新药与临床药理 2021年第6期32卷 845-852页

作者：黎斯敏左紫梅詹若挺何瑞广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的从濒危药用植物青天葵(Nervilia fordii)中克隆F-box基因,为寻找解决青天葵资源紧缺的方法提供依据。方法从青天葵转录组中筛选得到2个F-box基因的核心片段,以RACE技术获得基因的全长并克隆其编码区;通过荧光定量PCR(qRT-PCR)进行... 详细信息

目的从濒危药用植物青天葵(Nervilia fordii)中克隆F-box基因,为寻找解决青天葵资源紧缺的方法提供依据。方法从青天葵转录组中筛选得到2个F-box基因的核心片段,以RACE技术获得基因的全长并克隆其编码区;通过荧光定量PCR(qRT-PCR)进行组织表达模式分析;利用酵母双杂交实验验证F-box蛋白的F-box区域与拟南芥ASK1蛋白的互作情况。结果从青天葵中克隆到F-box基因NfFBL3和NfFBL4,它们的开放阅读框(open reading frames,ORF)分别长1974、1833 bp,分别编码657、611个氨基酸。二者均包含F-box保守功能结构域,C端具有多个重复亮氨酸序列(Leucine rich repeats,LRRs);NfFBL3和NfFBL4蛋白均为不稳定的疏水蛋白,定位于细胞核,无信号肽及切割位点。系统进化分析表明,NfFBL3和NfFBL4分别与F-box/LRR-repeat protein 3蛋白、F-box/LRR-repeat protein 4蛋白聚在一起。二者均在青天葵的块茎中表达量较高。酵母双杂交实验中NfFBL3的F-box区域能与拟南芥ASK1蛋白互作,而NfFBL4不与ASK1蛋白互作。结论该研究从青天葵中克隆得到2个F-box基因,其中NfFBL3编码的蛋白可与拟南芥ASK1蛋白发生互作,为进一步研究青天葵中Skp1-Cullin-F-box(SCF)复合体的功能提供科学依据。

关键词：青天葵 F-box 生物信息学表达模式分析 RACE技术酵母双杂交实验

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MBW复合体及其在调控杨絮发育中的应用

MBW复合体及其在调控杨絮发育中的应用

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作者：周芳伟吴怀通尹佟明 210018 江苏省南京市玄武区龙蟠路159号

本发明首次公开了MBW复合体(PdeMIXTA‑PdeMYC‑PdeWD40)，调控杨絮起始发育，属于植物基因工程技术领域。本发明以杨树的PdeMIXTA基因为诱饵蛋白，对杨絮起始发育时期的的雌花芽的酵母文库进行筛选，得到两个互作蛋白PdeMYC和PdeWD40,通... 详细信息

标准号: CN114891080B

本发明首次公开了MBW复合体(PdeMIXTA‑PdeMYC‑PdeWD40)，调控杨絮起始发育，属于植物基因工程技术领域。本发明以杨树的PdeMIXTA基因为诱饵蛋白，对杨絮起始发育时期的的雌花芽的酵母文库进行筛选，得到两个互作蛋白PdeMYC和PdeWD40,通过酵母双杂交实验，双分子萤光互补实验和荧光素酶互补实验，验证了在杨树中PdeMIXTA‑PdeMYC‑PdeWD40形成MBW复合体行使功能，把杨树PdeMIXTA基因在拟南芥无毛突变体gl1中过量表达，可以恢复其野生型毛状体表型，表明该基因可以促进拟南芥表皮细胞凸起分化为表皮毛。以上证实MBW复合体是调控絮的起始发育的关键复合物，为通过基因编辑技术创制无絮杨新品种，提供可靠的靶基因和重要的理论支持。

关键词：复合体杨树互补实验拟南芥基因植物基因工程技术酵母双杂交实验发育表皮细胞发育时期过量表达酵母文库理论支持荧光素酶诱饵蛋白靶基因雌花芽复合物突变体野生型表皮调控毛状凸起蛋白新品种验证分化筛选恢复

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能够增强MBW复合体调控花青苷合成能力的龙眼DlMYB15基因

能够增强MBW复合体调控花青苷合成能力的龙眼DlMYB15基因

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作者：魏永赞石胜友黄颖华王尉谢江辉杨子琴 571101 海南省海口市龙华区学院路4号

标准号: CN116640775A

关键词：花青基因共转化积累酵母双杂交实验理论支撑瞬时表达烟草叶片复合体花色苷龙眼合成新品种发现

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TGAL11蛋白及其编码基因在调控植物对白叶枯病的抗性中的应用

TGAL11蛋白及其编码基因在调控植物对白叶枯病的抗性中的应用

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作者：江光怀翟文学尹德东石岳朱立煌 100101 北京市朝阳区北辰西路1号院

本发明公开了TGAL11蛋白及其编码基因在调控植物对白叶枯病的抗性中的应用。本发明通过酵母双杂交实验筛选到了与OsNPR3.3蛋白互作的TGAL11蛋白，并通过对TGAL11突变体和TGAL11过表达植株接种菲律宾白叶枯病菌生理小种PXO86进行白叶枯... 详细信息

标准号: CN113372419B

本发明公开了TGAL11蛋白及其编码基因在调控植物对白叶枯病的抗性中的应用。本发明通过酵母双杂交实验筛选到了与OsNPR3.3蛋白互作的TGAL11蛋白，并通过对TGAL11突变体和TGAL11过表达植株接种菲律宾白叶枯病菌生理小种PXO86进行白叶枯抗病性鉴定。实验结果表明：TGAL11基因可调控植物对白叶枯病的抗性。本发明对改良植物抗病性、培育抗病品种尤其是抗白叶枯病植物品种具有重要价值。

关键词：蛋白叶枯病抗性酵母双杂交实验抗病性白叶枯病菌抗病性鉴定白叶枯病编码基因调控植物改良植物抗病品种植物品种植株可调控突变体小种接种筛选基因培育应用

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一种调控HbCBL10和/或HbCIPK14基因表达的方法

一种调控HbCBL10和/或HbCIPK14基因表达的方法

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作者：肖小虎方永军唐朝荣隋金蕾莫春演龙翔宇秦云霞阳江华 570100 海南省海口市龙华区学院路4号

本发明提供一种调控HbCBL10和/或HbCIPK14基因表达的方法，通过割胶和/或乙烯利刺激树体调控橡胶树中HbCBL10和/或HbCIPK14基因表达。本发明首次克隆了橡胶树HbCIPK14和HbCBL10基因的全长cDNA，首次利用酵母双杂交实验证实HbCIPK14和HbC... 详细信息

标准号: CN114107337A

本发明提供一种调控HbCBL10和/或HbCIPK14基因表达的方法，通过割胶和/或乙烯利刺激树体调控橡胶树中HbCBL10和/或HbCIPK14基因表达。本发明首次克隆了橡胶树HbCIPK14和HbCBL10基因的全长cDNA，首次利用酵母双杂交实验证实HbCIPK14和HbCBL10两个蛋白具有较强的互作，基因表达分析表明二者的表达明显受到乙烯利刺激和割胶的影响，说明HbCBL10‑HbCIPK14调控因子在乳管信号接收和传递方面具有重要功能，可作为橡胶树转基因育种的重要靶基因，有望通过调控该基因的表达来合理调节乳管乙烯和割胶信号传递，进而调控橡胶树胶乳再生，挖掘橡胶树最大生产潜力。

关键词：橡胶树割胶调控基因表达乙烯利乳管酵母双杂交实验基因表达分析橡胶树胶乳转基因育种调控因子全长cDNA 生产潜力信号传递信号接收重要功能刺激基因靶基因树体乙烯蛋白克隆再生传递挖掘

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