检索结果-内蒙古大学图书馆

集美大学学报(自然科学版) 2025年第1期30卷 1-8页

作者：黄名锡戴荣贵陈磊王梦洋谢仰杰陈天圣海水养殖生物育种全国重点实验室福建厦门361021 集美大学水产学院福建厦门361021 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心福建厦门361021

日本鳗鲡(Anguilla japonica)的人工繁育技术尚未解决,其重要原因是饲养条件下鳗鲡性腺不能发育成熟。黄体生成素(luteinizing hormone,LH)是促性腺激素的主要成分。为了解黄体生成素的功能,利用毕氏酵母生产具有生物活性的重组日本鳗... 详细信息

日本鳗鲡(Anguilla japonica)的人工繁育技术尚未解决,其重要原因是饲养条件下鳗鲡性腺不能发育成熟。黄体生成素(luteinizing hormone,LH)是促性腺激素的主要成分。为了解黄体生成素的功能,利用毕氏酵母生产具有生物活性的重组日本鳗鲡黄体生成素,构建了LHβ和GTHα亚基cDNA串联的669 bp的真核表达载体,通过转化X-33酵母菌株,成功表达了日本鳗鲡黄体生成素重组蛋白。重组蛋白糖基化后相对分子质量为45~75 ku,经过N-糖苷酶(glycopeptidase F)去糖基化后蛋白呈现单一条带,且相对分子质量与理论大小相符。在0.5%甲醇诱导下,96 h重组蛋白表达量最高,纯化后可获得3~4 mg/L的蛋白量。

关键词：日本鳗鲡黄体生成素重组蛋白酵母表达

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酵母表达的风疹病毒E1在ELISA检测中应用

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中国公共卫生 2005年第8期21卷 955-956页

作者：温红玲王志玉王桂亭许洪芝宋艳艳姚苹陶泽新宋绍霞山东大学公共卫生学院病毒学研究室济南250012

目的将毕赤酵母表达系统中表达的E1糖蛋白作为包被抗原,建立一种优于病毒作为包被抗原的风疹病毒(rubellavirus,RV)抗体ELISA检测方法。方法将重组包膜糖蛋白(E1)抗原和风疹病毒分别作为包被抗原,用间接ELISA法检测90份临床血清标本,同... 详细信息

目的将毕赤酵母表达系统中表达的E1糖蛋白作为包被抗原,建立一种优于病毒作为包被抗原的风疹病毒(rubellavirus,RV)抗体ELISA检测方法。方法将重组包膜糖蛋白(E1)抗原和风疹病毒分别作为包被抗原,用间接ELISA法检测90份临床血清标本,同时用晶美(JINGMEI)进口分装试剂盒和德国RECI公司试剂盒进行检测;将RECI试剂盒作为金标准,计算另外三者检测结果的特异性、灵敏性和符合率;比较他们之间的差异有无统计学意义,特别是重组抗原与病毒抗原作为包被抗原检出RV抗体阳性率的差异有无统计学意义。结果重组蛋白重复性实验结果经统计学处理,P>0·05,差异无统计学意义;RECI试剂盒与重组抗原、病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05);重组抗原与病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05),作为包被抗原,重组抗原优于病毒抗原。结论用毕赤酵母表达的RVE1重组蛋白作为包被抗原进行ELISA检测优于病毒作为包被抗原,具有广阔的应用前景。

关键词：风疹病毒酵母表达糖蛋白类 ELISA

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匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)As3.38△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与酵母表达

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微生物学报 2007年第1期47卷 59-63页

作者：陆合柴友荣张学昆雷天刚李加纳重庆医科大学微生物与免疫学教研室西南大学农学与生命科学院重庆400716 西南大学农学与生命科学院

通过气相色谱法(GC)快速分析8种真菌的脂肪酸成分,发现匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)具有较高的γ-亚麻酸含量,利用RT-PCR和RACE方法获得了全长为1475bp的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的cDNA序列,其中开放阅读框为1380bp,编码459个氨... 详细信息

通过气相色谱法(GC)快速分析8种真菌的脂肪酸成分,发现匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)具有较高的γ-亚麻酸含量,利用RT-PCR和RACE方法获得了全长为1475bp的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的cDNA序列,其中开放阅读框为1380bp,编码459个氨基酸。生物信息学分析所克隆的基因具有△6-脂肪酸脱氢酶的典型结构:N端具有细胞色素b5结构、具有3个保守的组氨酸区序列和跨膜结构;把该基因的开放阅读框序列连接到表达载体pYES2.0上,构建重组表达载体pYRnD6D,并将其转入缺陷型酿酒酵母INVScl中进行表达。GC分析表明,该序列在酵母中获得了表达,表达产物表现出△6-脂肪酸脱氢酶的酶学活性,能将底物亚油酸转化为γ-亚麻酸。新生成的γ-亚麻酸占酵母细胞总脂肪酸的12.25%。

关键词： γ-亚麻酸 △6-脂肪酸脱氢酶匍枝根霉(Rhizopus stolonifer) 酵母表达

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石斑鱼β-防御素的酵母表达及其产物抗菌活性分析

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水生生物学报 2011年第5期35卷 739-744页

作者：金俊琰周莉桂建芳中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

防御素是一类阳离子抗菌肽。研究从石斑鱼垂体SMART cDNA文库中扩增出129 bp石斑鱼β-防御素成熟肽序列,将其克隆到毕赤酵母表达载体pPCIZαA中,构建了石斑鱼β-防御素的真核表达载体,电击转化毕赤酵母GS115。Western Blot分析表明石斑... 详细信息

防御素是一类阳离子抗菌肽。研究从石斑鱼垂体SMART cDNA文库中扩增出129 bp石斑鱼β-防御素成熟肽序列,将其克隆到毕赤酵母表达载体pPCIZαA中,构建了石斑鱼β-防御素的真核表达载体,电击转化毕赤酵母GS115。Western Blot分析表明石斑鱼β-防御素在酵母菌中获得了表达。体外抗菌实验表明纯化的重组蛋白具有抑制大肠杆菌以及嗜水气单胞菌的作用,但是对革兰氏阳性菌,如金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的生长没有抑制作用。实验结果表明酵母表达的石斑鱼β-防御素能够特异地抑制革兰氏阴性菌的生长。

关键词：石斑鱼β-防御素酵母表达抗菌活性

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酿酒酵母表达Sj23HD-HSA融合蛋白与免疫反应性分析

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第6期23卷 653-658页

作者：张伟余传信杨建良冯炜殷旭仁宋丽君王玠钱春艳柯雪丹江苏省血吸虫病防治研究所新技术研究室卫生部寄生虫病预防与控制重点实验室无锡214064 江苏省无锡和邦生物技术有限公司

目的采用酵母表达技术制备日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)与人血清白蛋白(HSA)成熟肽的融合蛋白(Sj23HD-HSA),并分析其免疫反应性。方法应用重叠PCR方法构建编码Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因片段,通过TA克隆和... 详细信息

目的采用酵母表达技术制备日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)与人血清白蛋白(HSA)成熟肽的融合蛋白(Sj23HD-HSA),并分析其免疫反应性。方法应用重叠PCR方法构建编码Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因片段,通过TA克隆和DNA测序确定构建的融合蛋白基因序列的正确性。将融合基因定向插入酵母表达质粒pWX530中构建分泌型重组表达载体Sj23HD-HSA/pWX530。重组质粒转化酿酒酵母感受态细胞,在亮氨酸营养缺陷型培养基上筛选含重组质粒的酵母转化子菌落。对转化子酵母进行发酵培养,通过SDSPAGE分析酵母培养液上清中的蛋白成分,离子交换层析纯化培养上清中的Sj23HD-HSA蛋白成分。经免疫印迹分别与血吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清反应,确定酵母表达的Sj23HD-HSA融合蛋白的免疫反应性。结果 DNA序列分析显示,编码外分泌型Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因构建成功。含有Sj23HD-HSA/pWX530重组表达质粒的酵母转化子可以在非诱导条件下表达外分泌型可溶性的Sj23HD-HSA融合蛋白,其分子量大小与预期大小(73kDa)相近。免疫印迹分析结果显示,Sj23HD-HSA融合蛋白可以特异性地被血吸虫病人血清所识别,但与华支睾吸虫病人血清、健康人血清不发生反应。结论 Sj23HD-HSA融合蛋白被成功制备,并具有良好的特异性和免疫反应性,是一种有潜在价值的血吸虫病免疫诊断抗原。

关键词：日本血吸虫 Sj23HD-HSA融合蛋白酵母表达免疫反应性

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密码子优化提高aiiaB546毕赤酵母表达活性

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水生生物学报 2013年第1期37卷 164-167页

作者：张宇婷曹雅男解绶启周志刚中国农业科学院饲料研究所农业部饲料生物技术重点开放实验室北京100081 中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

N-酰基高丝氨酸内酯酶是一类特异性降解N-酰基高丝氨酸内酯类信号分子（AHLs）的蛋白水解酶,通过水解AHLs生成酰基高丝氨酸,使AHLs失去活性,从而阻断病原菌的群体感应路径,使病原菌失去致病能力,其广泛存在于多种微生物中。近年来N-酰... 详细信息

N-酰基高丝氨酸内酯酶是一类特异性降解N-酰基高丝氨酸内酯类信号分子（AHLs）的蛋白水解酶,通过水解AHLs生成酰基高丝氨酸,使AHLs失去活性,从而阻断病原菌的群体感应路径,使病原菌失去致病能力,其广泛存在于多种微生物中。近年来N-酰基高丝氨酸内酯酶作为一种新型抗菌策略（群体感应淬灭策略）的工具酶而成为水产养殖防治细菌性疾病研究的热点。

关键词： N-酰基高丝氨酸内酯酶密码子优化酵母表达

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兔防御素NP2酵母表达液抗菌活性的研究

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中国药理学通报 2005年第12期21卷 1528-1529页

作者：李再新左勇罗惠波四川理工学院生物工程系四川自贡643000

兔防御素NP2是防御素家族成员之一，从兔子的多形核嗜中性细胞中分离出来，对革兰阴性细菌、阳性细菌、分枝杆菌、真菌、某些恶性肿瘤细胞和被膜病毒如艾滋病病毒有较强的毒杀作用，对正常功能的细胞几乎无毒害作用。在免疫调控中可促... 详细信息

兔防御素NP2是防御素家族成员之一，从兔子的多形核嗜中性细胞中分离出来，对革兰阴性细菌、阳性细菌、分枝杆菌、真菌、某些恶性肿瘤细胞和被膜病毒如艾滋病病毒有较强的毒杀作用，对正常功能的细胞几乎无毒害作用。在免疫调控中可促进抗原递呈细胞、单核巨嗜细胞的靶趋向性，增加机体的免疫能力，加快伤口的愈合。为深入研究和开发防御素，我们将鉴定正确的酵母穿梭质粒pGAPZ αA—NP2转入Pichia pastoris SMD1168酵母表达；选择对传统抗生素耐药性较强的细菌为研究对象，通过抗菌活性试验，初步确定酵母表达兔防御素的抗菌活性。[第一段]

关键词：兔防御素酵母表达抗菌活性

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小麦β-酮脂酰CoA合成酶基因KCS的克隆与酵母表达

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麦类作物学报 2016年第9期36卷 1121-1129页

作者：夏凌峰史雪杨昊虹李春莲王中华权力西北农林科技大学农学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨凌712100

超长链脂肪酸是生物体内众多重要物质的合成底物。KCS基因编码β-酮脂酰CoA合成酶,该酶具有底物特异性,参与超长链脂肪酸延伸的缩合反应,是超长链脂肪酸合成的限速步骤。为了探究小麦KCS基因在超长链脂肪酸合成中的功能,采用同源克隆的... 详细信息

超长链脂肪酸是生物体内众多重要物质的合成底物。KCS基因编码β-酮脂酰CoA合成酶,该酶具有底物特异性,参与超长链脂肪酸延伸的缩合反应,是超长链脂肪酸合成的限速步骤。为了探究小麦KCS基因在超长链脂肪酸合成中的功能,采用同源克隆的方法从小麦(Triticum aestivum L.)中克隆出KCS基因后,利用生物信息学对其编码序列进行分析,并在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中对其进行真核表达。结果表明,小麦TaKCS6基因的开放阅读框为1 287bp,编码428个氨基酸残基。结构域预测结果显示,TaKCS6蛋白含有III型聚酮合酶脂肪酸延伸酶和C末端3-酰基ACP合酶III结构域,属于KCSs蛋白家族。序列比对分析结果显示,TaKCS6氨基酸序列与拟南芥及其他植物的KCS6氨基酸序列在两个功能结构域上和活性位点保守。酵母表达结果显示,TaKCS6基因编码的蛋白参与C24以上超长链脂肪酸的延伸。

关键词：普通小麦超长链脂肪酸 KCS基因酵母表达

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灵芝木质素降解酶系相关基因的克隆与酵母表达

灵芝木质素降解酶系相关基因的克隆与酵母表达

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作者：周选围上海师范大学

学位级别：博士

白腐真菌具有较强降解木质纤维素的能力，灵芝属是白腐真菌中的一大类，对其分类，降解木质纤维素高产菌株筛选方法和相关基因的系统研究，对利用灵芝降解木质纤维素和环境应用有着积极的推动作用。该研究利用灵芝中的真菌免疫调节蛋白... 详细信息

白腐真菌具有较强降解木质纤维素的能力，灵芝属是白腐真菌中的一大类，对其分类，降解木质纤维素高产菌株筛选方法和相关基因的系统研究，对利用灵芝降解木质纤维素和环境应用有着积极的推动作用。该研究利用灵芝中的真菌免疫调节蛋白（FIP）基因、细胞核核糖体ITS1-5.8S-ITS2序列和线粒体核糖体小亚基V4-V6区（mt SSU rDNA V4-V6）序列分析了20个灵芝菌株的遗传多样性；在此基础上建立了从灵芝中筛选漆酶高产菌株的方法，利用外显子拼接法和cDNA末端快速扩增技术分别克隆了灵芝菌株漆酶（Lac）和灵芝锰过氧化酶（MnP）基因序列，并将两个基因在毕赤酵母中进行了表达。研究结果表明：①不同的标记基因对对灵芝区分能力不同；②灵芝00679产漆酶能力最强；克隆到的灵芝00679和灵芝50817菌株漆酶cDNA全长序列分别为1566bp和1563bp，编码521和520个氨基酸，均属于多铜氧化酶家族；构建了灵芝00679漆酶基因(GlLac)表达载体pPICZαA-GlLac，并在毕赤酵母X33中进行了有效表达；③克隆到的灵芝锰过氧化物酶cDNA序列全长1337bp，编码363个氨基酸，蛋白质包括一个木质素氧化酶的催化位点，属于类似于植物的氧化酶超家族；构建了灵芝MnP的酵母表达载体pAO815-GlMnP，成功转化毕赤酵母SMD1168，表达出了有活性的灵芝锰过氧化物酶。主要结论：使用FIP基因可区分赤芝组和紫芝组，使用细胞核核糖体ITS1-5.8S-ITS2基因序列可区分来自不同地区的赤芝，使用mt SSU rDNA V4-V6序列能将赤芝中的不同菌株进行更好地区分。从灵芝中成功克隆到的漆酶cDNA序列编码520个氨基酸的蛋白质，属于多铜氧化酶家族，克隆到的灵芝锰过氧化物酶全长cDNA序列编码363个氨基酸的蛋白质，属于类似于植物的氧化酶超家族，这两个基因均能在酵母中有效表达。该研究为进一步利用漆酶和锰过氧化物酶于环境修复和木质素的降解奠定了基础。

关键词：灵芝分子鉴定漆酶锰过氧化物酶基因克隆酵母表达

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华游蛇PLIγ的毕赤酵母表达及其抗蛇毒sPLA_2活性

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南昌大学学报（理科版） 2017年第2期41卷 158-165页

作者：李婧婧李兴章孙士民张登虹黄春洪南昌大学基础医学院江西南昌330006

抗蛇毒血清作为抗蛇伤中毒特效药,其生产和临床应用上的局限导致很多伤者得不到及时救治。PLI(phospholipase A_2 inhibitors)是蛇自身表达的解毒蛋白,它可以抑制蛇毒主要毒素PLA_2进行自我保护。我们实验室前期在华游蛇中分离到一个PLI... 详细信息

抗蛇毒血清作为抗蛇伤中毒特效药,其生产和临床应用上的局限导致很多伤者得不到及时救治。PLI(phospholipase A_2 inhibitors)是蛇自身表达的解毒蛋白,它可以抑制蛇毒主要毒素PLA_2进行自我保护。我们实验室前期在华游蛇中分离到一个PLIγ,它对蛇毒PLA_2酶活性和出血毒均有强抑制效果。本研究通过酵母对华游蛇PLIγ进行表达。将PLIγ连接到pPICZαA表达载体,重组质粒通过电转化方式导入毕赤酵母GS115。在30℃、250r·min-1条件下,使用终浓度0.5%甲醇对筛选的转化子进行诱导,连续培养120h,每隔24h收集发酵液上清,用Western Bolt检测PLIγ表达水平,确定72h为最佳诱导时间。采用镍柱亲和层析分离纯化PLIγ,SDSPAGE检测纯度。活性实验表明:重组PLIγ对五步蛇蛇毒PLA2酶活的抑制效率为84%,并可以有效抑制其出血毒性。体外免疫共沉淀表明重组PLIγ与蛇毒sPLA_2IB和IIA型均存在直接相互作用。

关键词： PLIγ 蛇毒PLA2 酵母表达出血毒性免疫共沉淀

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