检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2025年第2期 473-478页

作者：霍玉奇马杰王超刘金瑾郑州大学附属传染病医院(河南省传染病医院郑州市第六人民医院)

探讨基于重组杆状病毒表达系统的不同亚型诺如病毒衣壳蛋白VP1表达及组装情况。将来源于13个（GI.1、GI.2、GI.3、GI.4、GI.5、GI.6、GI.8、GII.1、GII.4、GII.6、GII.9、GII.12和GII.13）不同亚型的诺如病毒VP1蛋白序列根据Sf9昆虫细... 详细信息

探讨基于重组杆状病毒表达系统的不同亚型诺如病毒衣壳蛋白VP1表达及组装情况。将来源于13个（GI.1、GI.2、GI.3、GI.4、GI.5、GI.6、GI.8、GII.1、GII.4、GII.6、GII.9、GII.12和GII.13）不同亚型的诺如病毒VP1蛋白序列根据Sf9昆虫细胞密码子使用频率进行优化，合成并连接到pFastBac-Dual载体的Pph启动子下游制备穿梭质粒，转化DH10Bac ***感受态细胞制备杆粒，最后转染Sf9细胞制备重组杆状病毒。利用制备的重组杆状病毒感染Sf9细胞后收获培养液，采用超高速离心和氯化铯密度梯度离心的方法对蛋白进行纯化，SDS-PAGE和Western blot方法对蛋白表达情况进行鉴定，透射电子显微镜分析蛋白组装情况。成功制备表达13个诺如病毒不同亚型VP1蛋白的重组杆状病毒，感染Sf9细胞后经SDS-PAGE和Western blot分析显示，GI.1、GI.2、GI.5、GI.6、GI.8、GII.1、GII.4、GII.6、GII.12和GII.13 VP1蛋白中高度水平表达，GI.3、GI.4、和GII.9 VP1蛋白低水平表达。氯化铯密度梯度离心后，GI.1、GI.5、GI.8、GII.4、GII.6、GII.12和GII.13 VP1蛋白可见明显蛋白富集条带，但GI.2、GI.6和GII.1 VP1蛋白未观察到蛋白富集条带。透射电子显微镜显示GI.1、GI.5、GI.8、GII.4、GII.6、GII.12和GII.13 VP1蛋白成功组装成病毒样颗粒（virus-like particles, VLPs）。透射电子显微镜（Transmission Electron Microscopy, TEM）下GI.2和GI.6沉淀复溶蛋白未观察到或者只观察到少量VLPs，而GII.1 VP1观察到大量VLPs。利用重组杆状病毒表达系统表达诺如病毒VP1蛋白，个别VP1蛋白高水平表达但不能有效组装成VLPs，表明VP1蛋白的有效组装可能有赖于其它因素或者因子的协同作用。

关键词：诺如病毒衣壳蛋白重组杆状病毒病毒样颗粒

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猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白基因重组杆状病毒的构建及应用

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中国动物传染病学报 2025年第1期33卷 91-96页

作者：郭伟伟向银辉刘大卫刘岳孙鹏崔晓霞杜元钊青岛易邦生物工程有限公司青岛266000

本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细... 详细信息

本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细胞减少症病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中成功表达,并与抗FPV的多克隆抗体发生特异性反应。该蛋白能凝集1%猪红细胞,凝集价达1∶16384。电镜观察可见表达的VP2蛋白能形成病毒样颗粒(VLPs),为20~22 nm。VP2蛋白制备的疫苗能产生较高的抗体滴度。VP2基因的成功表达为FPV疫苗的研制奠定基础。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 VP2基因重组杆状病毒鉴定

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重组杆状病毒转导恒河猴骨髓间充质干细胞

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微生物学报 2008年第4期48卷 539-544页

作者：刘正山张成卢锡林许勇峰冯善伟周畅李勇程菲中山大学附属第一医院神经内科广州510080 中山大学干细胞与组织工程研究中心广州510080

【目的】研究重组杆状病毒(Bac-CMV-EGFP)能否能有效转导恒河猴骨髓间充质干细胞(rhesus Bone marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,rBMSCs),及杆状病毒转导后对细胞活力,增殖及分化能力的影响。【方法】体外原代培养rBMSCs,不同剂... 详细信息

【目的】研究重组杆状病毒(Bac-CMV-EGFP)能否能有效转导恒河猴骨髓间充质干细胞(rhesus Bone marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,rBMSCs),及杆状病毒转导后对细胞活力,增殖及分化能力的影响。【方法】体外原代培养rBMSCs,不同剂量的杆状病毒转导3代以后的细胞,并用流式细胞仪分别检测其转导效率。在较高的杆状病毒转导效率下,检测rBMSCs细胞活力,增殖及分化能力,并与正常对照组细胞进行比较。【结果】杆状病毒在感染指数(Multiplicity Of Infection,MOI)为300v.g/cell,孵育温度为25度,孵育时间为4h的转导条件下,对rBMSCs转导效率可达80%左右。进一步检测后发现,高效转导杆状病毒后的rBMSCs的细胞活力,增殖及分化能力与未转导病毒细胞组无明显变化。【结论】重组杆状病毒可安全有效地基因修饰rBMSCs,且不影响其生物特性,为今后的体内基因治疗灵长类动物模型试验奠定了基础。

关键词：重组杆状病毒恒河猴骨髓间充质干细胞转导绿色荧光蛋白

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重组杆状病毒表达牛β干扰素及其生物学活性研究

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微生物学报 2007年第6期47卷 992-996页

作者：陈伟业肇慧君王喜军黄克和步志高曹文雁葛金英温志远南京农业大学动物医学院南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究构建了表达牛β干扰素的重组杆状病毒,感染sf9细胞后,分别采用免疫荧光和免疫印迹证实了重组BoIFN-β的表达存在于细胞内和培养上清中。采用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(VSV*GFP)检测分泌到细胞上清中重组BoIFN-β的抗病毒... 详细信息

本研究构建了表达牛β干扰素的重组杆状病毒,感染sf9细胞后,分别采用免疫荧光和免疫印迹证实了重组BoIFN-β的表达存在于细胞内和培养上清中。采用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(VSV*GFP)检测分泌到细胞上清中重组BoIFN-β的抗病毒活性,可达到106.0AU/mL。同时重组BoIFN-β还可以激活鸡Mx启动子控制的萤光素酶报告基因的转录表达。综上,本研究采用杆状病毒表达系统,重组牛β干扰素以分泌形式高水平表达,且具有天然Ⅰ型干扰素的生物学活性。

关键词：牛β干扰素抗病毒活性 Mx启动子重组杆状病毒

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重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 410-414页

作者：代春铭张晓燕张然然邵一鸣沈荣显中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心病毒免疫室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病室黑龙江哈尔滨150001

目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE... 详细信息

目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE和Westernblot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒 ,单独或与重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白联合免疫小鼠。结果 :构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比 ,联合免疫组免疫应答显著增强 ,其中中和抗体的滴度提高5～ 9倍。结论 :含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫 ,能够诱导高滴度的中和抗体。

关键词： EIAV Env蛋白重组杆状病毒重组痘苗病毒免疫应答

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重组杆状病毒安全性及其评价

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中国生物防治 2003年第1期19卷 40-43页

作者：郭君慧杜昌升彭建新洪华珠华中师范大学昆虫学研究所武汉430079

重组杆状病毒不仅作为杀虫剂具有重大的潜在应用价值,而且作为表达载体应用于基因治疗具有诱人的前景。但它对环境及非靶标生物尤其是哺乳动物的安全性还有待于评价,本文对此问题进行了阐述。

关键词：重组杆状病毒安全性评价杀虫剂表达载体基因治疗环境哺乳动物

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重组杆状病毒生物杀虫剂的研究进展

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微生物学通报 1996年第6期23卷 364-367页

作者：农广庞义中山大学生命科学学院生物防治国家重点实验室

重组杆状病毒生物杀虫剂的研究进展农广，庞义（中山大学生命科学学院生物防治国家重点实验室，广州５１０２７５）目前，发展安全有效、替代化学农药的生物杀虫剂是害虫防治的主要趋向。杆状病毒是ＷＨＯ推荐的一种生物杀虫剂，它具有... 详细信息

重组杆状病毒生物杀虫剂的研究进展农广，庞义（中山大学生命科学学院生物防治国家重点实验室，广州５１０２７５）目前，发展安全有效、替代化学农药的生物杀虫剂是害虫防治的主要趋向。杆状病毒是ＷＨＯ推荐的一种生物杀虫剂，它具有以下优点：是昆虫的病原体，对脊椎动...

关键词：生物杀虫剂重组杆状病毒生物工程

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一种构建重组杆状病毒的简易方法

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生物化学与生物物理进展 1996年第5期23卷 477-478页

作者：李迎秋施先宗吴文言龙綮新王章中山大学生物防治国家重点实验室华中师范大学昆虫学研究所

对传统构建重组杆状病毒的方法作了如下改进：先用磷酸钙共沉淀法单独将质粒ＤＮＡ转进昆虫Ｓｆ细胞中，其中重组质粒采用聚乙二醇沉淀法纯化，１２～２４ｈ后再用低剂量的病毒攻击细胞．改进后的方法简便、省时、经济、重组率高，适于... 详细信息

对传统构建重组杆状病毒的方法作了如下改进：先用磷酸钙共沉淀法单独将质粒ＤＮＡ转进昆虫Ｓｆ细胞中，其中重组质粒采用聚乙二醇沉淀法纯化，１２～２４ｈ后再用低剂量的病毒攻击细胞．改进后的方法简便、省时、经济、重组率高，适于一般实验室使用．

关键词：重组杆状病毒昆虫病毒方法技术

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重组杆状病毒作为一种新型的基因治疗载体的研究

重组杆状病毒作为一种新型的基因治疗载体的研究

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作者：潘永飞华中农业大学

学位级别：博士

长期以来,由于其宿主特异性,杆状病毒载体仅限于在昆虫细胞内表达外源蛋白。但最近的研究发现,携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能有效转导哺乳动物细胞并且可以在哺乳动物细胞中高效表达外源蛋白。由于其转导效率高、易操作、增殖滴... 详细信息

长期以来,由于其宿主特异性,杆状病毒载体仅限于在昆虫细胞内表达外源蛋白。但最近的研究发现,携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能有效转导哺乳动物细胞并且可以在哺乳动物细胞中高效表达外源蛋白。由于其转导效率高、易操作、增殖滴度高、易扩增、载体容载量大、在哺乳动物细胞中不复制和生物安全性好等优点,重组杆状病毒有望成为良好的基因治疗载体。 Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的小蛋白,能特异性诱导大量的肿瘤细胞和转化细胞产生凋亡,而对正常二倍体细胞无凋亡诱导作用。特异的肿瘤细胞杀伤性使Apoptin成为癌症基因治疗的一种新的工具。 Duchenne型肌营养不良症（Duchenne musculardystrophy,DMD）是一种以骨骼肌进行性变性、坏死为主要病理特征的致死性X-性连锁隐性遗传性肌病,目前尚无有效的治疗方法,基因治疗被认为是治疗该病最有希望的途径。但是现有的基因治疗载体的载体容载量少、需要复制辅助病毒和存在着生物安全性等局限性大大的限制它的临床应用。因此提高治疗基因在体内的表达效率以及选择合适的载体将是治疗DMD获得成功的关键。鉴于上述的研究背景,本研究探讨了含有Apoptin蛋白的重组杆状病毒在体外、体内的抑瘤的作用;研究了含有microdystrophin蛋白的重组杆状病毒在体内和体外的microdystrophin表达情况,比较了重组杆状病毒和重组腺病毒在体内基因治疗mdx鼠的效果。主要研究内容如下: 1.重组杆状病毒BV-Apoptin的构建从质粒pVAX-Apoptin中PCR扩增全长的Apoptin片段,经酶切克隆到真核表达载体pcDNA3.1-HisB中,构建重组质粒pcDNA3.1-His-Apoptin。然后将CMV启动子驱动的编码Apoptin蛋白的整个读码框插入转移载体pFast-VSV-G中VSV-G的下游,构建转移载体pFast-G-Apoptin。将此重组质粒转化DH10Bac大肠杆菌,通过蓝白斑菌落及抗性筛选,获得重组穿梭载体Bacmid-Apoptin,提取其基因组并转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-Apoptin。 2.重组杆状病毒BV-Apoptin的体外转导研究重组杆状病毒BV-Apoptin在细胞中有正确的定位。在人肝癌细胞HepG2中Apoptin主要定位于细胞核,在人胚肾细胞HEK-293中,Apoptin定位于细胞质中。体外转导试验表明,构建的重组杆状病毒BV-Apoptin能高效转导HepG2细胞,Apoptin的表达水平与杆状病毒的感染剂量成正相关,当感染复数越高,表达Apoptin蛋白的细胞数越多。 3.重组杆状病毒BV-Apoptin在体外、体内的抑瘤作用将重组杆状病毒BV-Apoptin分别以不同感染复数转导HepG2细胞,通过DNA-Ladder和TUNEL检测细胞凋亡。结果显示,重组杆状病毒BV-Apoptin能够诱导转导的人肝癌细胞HepG2的产生凋亡,并且BV-Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡的能力呈剂量依赖性。实验利用异体同源肿瘤细胞系移植的方法复制了C57BL/6小鼠荷H22肿瘤模型,研究构建的重组杆状病毒BV-Apoptin的体内抑瘤效果。结果显示,注射BV-Apoptin能够明显抑制小鼠肿瘤的生长,同时也提高荷瘤小鼠的存活率。以上结果提示,重组杆状病毒BV-Apoptin有望成为治疗肿瘤的一种新的有效手段。 4.重组杆状病毒BV-MICDYS的构建从载体pcDNA3.1（+）中酶切CMV启动子的表达框,插入转移载体pFast-VSV-G中VSV-G的下游,构建转移载体pFast-G-CMV;然后从质粒pBSK-MICRO酶切全长的microdystrophin基因,分别克隆到pFast-G-CMV中,构建质粒pFast-G-MICDYS。转化DH10Bac大肠杆菌,通过蓝白斑菌落及抗性筛选,获得重组穿梭载体Bacmid-MICDYS,提取其基因组并转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-MICDYS。 5.重组杆状病毒BV-MICDYS转导C2C12细胞将构建的重组杆状病毒BV-MICDYS以不同的感染复数（50、100、200MOI）转导C2C12细胞,转导后48h检测microdystrophin基因的表达。结果显示,重组杆状病毒BV-MICDYS能高效转导C2C12细胞,呈现明显的剂量依赖性。结果还显示,相同感染复数的Ad-MICDYS感染的C2C12细胞中microdystrophin蛋白表达数量低于相同感染复数BV-MICDYS转导的C2C12细胞中microdystrophin蛋白表达数量,

关键词：基因治疗重组杆状病毒凋亡素基因凋亡 Duchenne型肌营养不良 microdystrophin mdx鼠

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重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)的杀虫活性和安全性初步研究

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华北农学报 2007年第5期22卷 161-164页

作者：范晓军曹建斌许成钢付月君张志云梁爱华山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西太原030006

苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒作为新型生物杀虫剂已应用于农作物病虫害防治。对构建的重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)进行了杀虫活性和生物安全性初步研究。结果显示,重组病毒和野生型病毒的LC50分别为7.5×102,3.3×104PIBs/mL... 详细信息

苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒作为新型生物杀虫剂已应用于农作物病虫害防治。对构建的重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)进行了杀虫活性和生物安全性初步研究。结果显示,重组病毒和野生型病毒的LC50分别为7.5×102,3.3×104PIBs/mL,重组病毒比野生型病毒具有更好的杀虫活性;检测了该重组病毒和野生型病毒对小鼠的易感性,所试小鼠未见明显急性毒性反应,高剂量重组病毒灌胃小鼠的脾脏增大,小鼠胸腺、脾、肾组织切片未有异常,重组病毒对小鼠具有较高的生物安全性。

关键词：重组杆状病毒杀虫活性生物安全性

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