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动物营养学报 2018年第4期30卷 1582-1591页

作者：李佳骏王振华胡正茂唐慧琴谷笑笑廖成斌潘康成四川农业大学动物医学院动物微生态工程研究中心成都611130 成都农业科技职业学院成都611130 成都中牧生物药业有限公司成都610000

本试验旨在研究芽孢表面展示鸡白痢沙门氏菌Omp C重组枯草芽孢杆菌SE1对肉鸡生长性能、肠道消化酶活性和菌群的影响。选择7日龄肉鸡120只,随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只鸡。A组(对照组)饲喂基础饲粮,B组和C组分别在基础饲粮中添... 详细信息

本试验旨在研究芽孢表面展示鸡白痢沙门氏菌Omp C重组枯草芽孢杆菌SE1对肉鸡生长性能、肠道消化酶活性和菌群的影响。选择7日龄肉鸡120只,随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只鸡。A组(对照组)饲喂基础饲粮,B组和C组分别在基础饲粮中添加0.1%(1.0×106CFU/g)枯草芽孢杆菌168制剂和0.1%(1.0×10~6CFU/g)重组枯草芽孢杆菌SE1制剂,试验期35 d。结果显示:1)与A组相比,C组肉鸡的终末体重和平均增重分别增加6.14%和6.76%(P>0.05),料重比降低8.21%(P>0.05)。2)28、42日龄时,B组和C组肉鸡的空肠脂肪酶和回肠蛋白酶活性显著高于A组(P<0.05);B组和C组肉鸡的肠道消化酶活性无显著差异(P>0.05)。3)28、42日龄时,B组和C组肉鸡的回肠、盲肠大肠杆菌数量显著低于A组(P<0.05),盲肠乳杆菌数量显著高于A组(P<0.05)。16S rRNA V3区聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)结果显示,B组和C组肉鸡的盲肠菌群丰富度、均匀度和香农-维纳指数均显著高于A组(P<0.05);C组肉鸡盲肠菌群的相似性在28、42日龄时分别比A组高26.8%和15.6%,C组和B组之间无显著差异(P>0.05)。结果表明,重组枯草芽孢杆菌SE1具有与枯草芽孢杆菌168相同的效果,能有效促进肉鸡生长,提高肠道脂肪酶和蛋白酶活性,调节肉鸡肠道菌群,提高肠道菌群稳定性和多样性。

关键词：重组枯草芽孢杆菌肉鸡生长性能消化酶活性肠道菌群

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重组枯草芽孢杆菌发酵产青霉素G酰化酶的条件优化

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甘肃农业大学学报 2016年第2期51卷 116-126页

作者：吴卓颖邵威平张永玲杨富民田常庆甘肃农业大学食品科学与工程学院甘肃兰州730070 临夏州人民医院甘肃临夏731100 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

【目的】研究提高PGA酶活力及稳定性.【方法】以重组枯草芽孢杆菌10397(pMA5-PGA)产PGA酶活力为研究对象,在单因素试验基础上,采用响应面设计,对重组菌发酵产PGA的培养基及发酵条件进行了研究.【结果】以葡萄糖20.39g/L、胰蛋白胨15.48... 详细信息

【目的】研究提高PGA酶活力及稳定性.【方法】以重组枯草芽孢杆菌10397(pMA5-PGA)产PGA酶活力为研究对象,在单因素试验基础上,采用响应面设计,对重组菌发酵产PGA的培养基及发酵条件进行了研究.【结果】以葡萄糖20.39g/L、胰蛋白胨15.48g/L、糊精6.1g/L为培养基,在三角瓶装液量16.23%、接种量4.32%、温度35.43℃、时间48.34h、摇床转速220r/min的条件下,所产PGA的酶活力为14.167U/mL,比初始发酵条件下发酵重组菌产PGA的酶活提高了1.14倍.【结论】通过条件优化,可提高重组枯草芽孢杆菌PGA的酶活力,并为工业化生产PGA提供科学依据.

关键词：重组枯草芽孢杆菌发酵青霉素G酰化酶工艺优化

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重组枯草芽孢杆菌生产角质酶发酵条件优化

重组枯草芽孢杆菌生产角质酶发酵条件优化

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作者：张芙华江南大学

学位级别：硕士

角质酶是一种多功能酶,属于丝氨酸酯酶,具有称作α/β水解酶折叠的共同结构框架的蛋白质。作为酯酶的一种,角质酶在工业产品和生产工艺中的应用表现出脂肪酶的特性,它既可以参与水解反应也可以参与合成反应。因此其在奶制品工业、洗涤... 详细信息

角质酶是一种多功能酶,属于丝氨酸酯酶,具有称作α/β水解酶折叠的共同结构框架的蛋白质。作为酯酶的一种,角质酶在工业产品和生产工艺中的应用表现出脂肪酶的特性,它既可以参与水解反应也可以参与合成反应。因此其在奶制品工业、洗涤剂工业、化妆品工业、甘油三酯、多聚体、表面活性剂、护肤产品、药物以及农业化学药品等方面都表现出潜在的应用。角质酶在纺织上的应用是近几年兴起的新的研究方向,在染色方面和传统工艺相比能够提高润湿性和水解纤维的能力,缩短处理时间、减少蒸汽和电力消耗以及保护环境等优点。本论文以一株高积累角质酶的重组枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis WSH 06-07）为出发菌株,以角质酶的高产量、高得率和高生产强度为目标,采用针对发酵过程的外因定性优化（基于微生物反应原理的培养环境优化技术）、内因定性优化（基于代谢特性的分阶段培养技术）等一系列技术对角质酶发酵过程进行优化,研究的主要结果如下: 1.种龄对发酵的影响较大,实验考察了种子的生长情况:9~22 h为种子的对数期,种龄为11 h,将种子接入培养基中有利于菌体的发酵。 2.采用基因工程菌进行发酵,质粒的稳定性和细胞内包涵体对产量影响很大。实验结果表明:在整个发酵过程中,质粒稳定性能维持90%以上。此外,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳验证了细胞内没有包涵体,目的蛋白全部在发酵上清液中。 3.摇瓶水平上考察营养条件对B. subtilis WSH 06-07生长和角质酶合成的影响;通过单因素实验和Plackett–Burman实验确定了蔗糖、蛋白胨以及硫酸镁是影响角质酶发酵的主要因素;在此基础上,采用响应面设计方法考察了各营养组分及其浓度的配比关系。实验结果表明:蔗糖和硫酸镁存在交互作用也是影响细胞生长和角质酶合成的主要因素。最终确定角质酶发酵的培养基组分为（g/L）:蔗糖32.5,蛋白胨37,酵母膏24,磷酸氢二钠12.54,磷酸二氢钾2.31,硫酸镁4.4。进一步确定较优的环境条件组合为:初始pH 7.5、装液量75 mL/500 mL、接种量5%。 4.在3 L发酵罐中研究了溶氧对角质酶分批发酵的影响。结果表明:在通气量恒定的情况下,不同搅拌转速对菌体干重（DCW）和角质酶产量没有较大影响。因此,在蔗糖浓度为32.5 g/L且通气量控制在1.5 vvm的前提下,将搅拌转速恒定在600 r/min即可满足细胞生长和角质酶合成对溶氧的需求。 5.不同pH控制模式对角质酶分批发酵的影响有较大差异。在发酵过程中控制pH相对于不控制pH角质酶产量有所提高。基于发酵过程中不同pH对菌体比生长速率及比产物合成速率的变化,确定了pH两阶段控制策略,即0~4 h时控制pH 7.5,4 h后将pH调至6.5。通过采用这一优化策略,角质酶酶活有了较大的提高,达170 U/mL,生产强度为16.9 kU/（L·h）,比恒定pH 7.5控制模式下分别提高了122.6%和123.2%。 6.实验考察了温度对B. subtilis WSH 06-07生长和产酶的影响。分批培养结果表明:温度在27 oC~40 oC范围内,较高温度对提高细胞生长速度有促进作用,但在40 oC下质粒丢失严重,而较低温度有利于角质酶的合成。在深入分析不同温度下角质酶分批发酵动力学的基础上,提出了温度分阶段控制策略,即发酵前4 h控制为温度37 oC,4 h后切换至30 oC并保持到发酵结束。采用这一最优温度两阶段控制策略,最高酶活和生产强度为312.5 U/（mL）、13.02 KU/（L·h）,比37 oC分别提高了83.4%、10.9%。因此温度两阶段控制策略对于提高角质酶产量具有实际效果。 7.实验考察了不同初糖浓度对角质酶分批发酵的影响,实验结果表明:仅通过提高初糖浓度难以实现细胞和角质酶高产量、高得率和高生产强度的有机统一。对此实验考察了分批补料、恒速流加培养方式对B. subtilis WSH 06-07发酵生产角质酶的影响。结果表明:这两种补料培养方式都可以实现细胞和角质酶的高产。综合比较,恒速流加对于B. subtilis WSH 06-07发酵培养来说,无论是细胞得率还是角质酶的高产量、高得率和高生产强度都是较理想的选择。经过31 h的恒速流加培养,DCW达到52.76 g/L,酶活最大达545.87 U/mL。

关键词：角质酶重组枯草芽孢杆菌响应面设计分批培养分阶段控制策略流加培养

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重组枯草芽孢杆菌核黄素发酵工艺的研究

重组枯草芽孢杆菌核黄素发酵工艺的研究

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作者：李彦军天津大学

学位级别：硕士

该文着重从种子培养、质粒的稳定性、培养基组成以及发酵控制方式等几方面对重组枯草芽孢杆菌24/pMX45核黄素发酵的影响进行了研究.该文研究了重组枯草芽孢杆菌发酵过程中质粒的稳定性.在正常保藏和培养条件下,重组质粒非常稳定;在种子... 详细信息

该文着重从种子培养、质粒的稳定性、培养基组成以及发酵控制方式等几方面对重组枯草芽孢杆菌24/pMX45核黄素发酵的影响进行了研究.该文研究了重组枯草芽孢杆菌发酵过程中质粒的稳定性.在正常保藏和培养条件下,重组质粒非常稳定;在种子培养及发酵过程中加入红霉素对细胞生长和核黄素的合成均有抑制作用.该文详细比较了发酵培养基中不同碳源、氮源对核黄素发酵的影响,对葡萄糖所引起的分解代谢产物阻遏效应对发酵的影响机理进行了研究.发酵液中较高浓度的葡萄糖可以引起糖分解代谢产物阻遏效应,使糖的分解代谢途径以经EMP途径的混合酸—羟基丁酮发酵为主,磷酸戊糖途径和TCA循环的代谢同时受到抑制.由于磷酸戊糖途径的代谢通量减少,核黄素前体物的合成受到抑制;另外由于酸性代谢产物的积累造成环境pH下降,低pH抑制了核黄素合成酶的活性,因此高浓度葡萄糖不利于核黄素的合成.

关键词：核黄素重组枯草芽孢杆菌发酵质粒稳定性

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重组枯草芽孢杆菌发酵产核黄素的工艺研究

重组枯草芽孢杆菌发酵产核黄素的工艺研究

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作者：薛彩丽南京工业大学

学位级别：硕士

核黄素(Riboflavin)是人体和哺乳动物必需的一种营养元素，主要以黄素辅酶的形式参与氧化还原反应和电子传递过程，具有广泛的生理功能。临床上，核黄素已被用于治疗传统的核黄素缺乏病，并用于防治烧伤、畸形、癌症、心血管病等。本文... 详细信息

核黄素(Riboflavin)是人体和哺乳动物必需的一种营养元素，主要以黄素辅酶的形式参与氧化还原反应和电子传递过程，具有广泛的生理功能。临床上，核黄素已被用于治疗传统的核黄素缺乏病，并用于防治烧伤、畸形、癌症、心血管病等。本文研究了重组枯草芽孢杆菌发酵产核黄素的摇瓶发酵工艺、代谢调节以及5L罐放大工艺，成功地将核黄素产量从3.45 g/L提高到10.40 g/L。主要内容和结果如下:\n (1)通过响应面分析实验确定核黄素发酵的最佳培养基组分为:葡萄糖80.43 g/L，豆饼粉10 g/L，玉米浆17 g/L，酵母膏2g/L，NH4Cl3 g/L，MgSO40.53 g/L，K2HPO41.4 g/L，KH2PO40.6 g/L。最佳摇瓶发酵条件为:种龄18h，接种量6％，装液量40 mL/500 mL，初始pH7.2，摇床转速220rpm，培养温度40℃。在最优培养基和最佳发酵条件下，核黄素产量达4.92 g/L，比优化前提高了42.6％。\n (2)考察了7种外源添加物对核黄素发酵的影响，发现添加葡萄糖酸钙、柠檬酸钠和丙氨酸能有效提高核黄素产量;接着优化了葡萄糖酸钙、柠檬酸钠和丙氨酸的添加时间、添加量及组合添加时的最佳浓度配比，确定3种物质的最适添加时间分别为0h、0h、18h，最适添加量分别为7.5 g/L、4g/L、2g/L，组合添加时的最佳浓度配比为7.5 g/L、5g/L、1.5 g/L。在组合添加条件下核黄素产量从未添加时的4.90 g/L提高到6.74 g/L。\n (3)综合考虑发酵中的各种因素，确定5L罐的发酵条件为:通气速率1.0vvm，搅拌转速400rpm，发酵过程pH控制在6.8～7.0。通过对比分析发现采用限制葡萄糖浓度补料策略能显著提高核黄素产量，将葡萄糖浓度控制在8～10g/L，核黄素产量达到10.40 g/L，比分批发酵提高了40.2％。

关键词：重组枯草芽孢杆菌核黄素培养基优化外源添加物补料发酵

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高产表面活性素的重组枯草芽孢杆菌构建及培养优化

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生物工程学报 2020年第11期36卷 2377-2386页

作者：王苗苗于慧敏何欣李艳梅杨怀宇清华大学化学工程系教育部工业生物催化重点实验室北京100084 中国石油天然气股份有限公司大庆炼化公司黑龙江大庆163000

表面活性素是一种新型生物表面活性剂,因其具有良好的表面活性、可生物降解及抗菌活性,在石油开采、医药、农业和食品化妆品等领域具有广阔的应用前景。高产表面活性素菌株的获得和发酵过程优化是其商业化生产的关键。文中考察了脂肪酸... 详细信息

表面活性素是一种新型生物表面活性剂,因其具有良好的表面活性、可生物降解及抗菌活性,在石油开采、医药、农业和食品化妆品等领域具有广阔的应用前景。高产表面活性素菌株的获得和发酵过程优化是其商业化生产的关键。文中考察了脂肪酸合成途径对表面活性素合成的影响,强化脂肪酸生物合成关键基因以及该途径全部基因分别构建了高产表面活性素枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis THBS-2和THBS-8,并对发酵过程中氨基酸种类及添加量、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)添加时间和添加量等条件对产物合成的影响进行考察,获得优化的两阶段前体添加方案:发酵3 h,加入IPTG和L-亮氨酸,使其终浓度分别为1.25 mmol/L、5 g/L;发酵24 h,添加L-亮氨酸(终浓度5 g/L)和浓缩培养基5 mL。优化条件下,枯草芽孢杆菌THBS-2摇瓶发酵48 h,表面活性素产量高达24 g/L;30 L发酵罐中发酵68 h,产物产量最高达到34 g/L。研究结果为表面活性素的工业化生产及应用奠定基础。

关键词：表面活性素重组枯草芽孢杆菌脂肪酸合成前体优化

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重组枯草芽孢杆菌的应用和利用酶法合成肌肽的废水生产四氢嘧啶的方法

重组枯草芽孢杆菌的应用和利用酶法合成肌肽的废水生产四氢嘧啶的...

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作者：何平戴柱李浪赵弘方欣樊卫岳亮宓鹏程廖立新丁小妹于铁妹潘俊锋刘建 519040 广东省珠海市金湾区三灶镇机场西路628号国际健康港检测办公大楼A座111A

本发明涉及微生物发酵技术领域，公开了重组枯草芽孢杆菌的应用和利用酶法合成肌肽的废水生产四氢嘧啶的方法。本发明通过基因工程技术构建一株重组枯草芽孢杆菌，其能够利用酶法合成肌肽的废水进行发酵，并得到含四氢嘧啶的发酵液。经... 详细信息

标准号: CN113717998A

本发明涉及微生物发酵技术领域，公开了重组枯草芽孢杆菌的应用和利用酶法合成肌肽的废水生产四氢嘧啶的方法。本发明通过基因工程技术构建一株重组枯草芽孢杆菌，其能够利用酶法合成肌肽的废水进行发酵，并得到含四氢嘧啶的发酵液。经提取不仅可获得较多的四氢嘧啶，同时得到副产物菌渣蛋白饲料，而且排放的废水比原废水中COD、BOD、总磷、氨氮等下降70.4～96.2％，该方法还具有操作简便，节省资源，安全环保，成本低等优点，适合工业推广应用。

关键词：四氢嘧啶重组枯草芽孢杆菌酶法合成肌肽废水微生物发酵技术基因工程技术安全环保蛋白饲料节省资源发酵液废水比副产物原废水氨氮构建菌渣总磷发酵排放应用生产

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重组枯草芽孢杆菌及其过表达谷氨酰胺合成酶促进合成乙酰氨基葡萄糖的方法

重组枯草芽孢杆菌及其过表达谷氨酰胺合成酶促进合成乙酰氨基葡萄...

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作者：徐恒德张西进朱玉钦刘家印李建波 276511 山东省日照市莒县浮来山镇官庄社区坝田路南侧

本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌，在重组枯草芽孢杆菌BSGNK的基础上，过表达来源大肠杆菌谷氨酰胺合成酶（EglnA），得到重组菌BSGNKN；所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK，是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagA Δ nagB Δ... 详细信息

标准号: CN108570441A

本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌，在重组枯草芽孢杆菌BSGNK的基础上，过表达来源大肠杆菌谷氨酰胺合成酶（EglnA），得到重组菌BSGNKN；所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK，是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagA Δ nagB Δ ldh Δ pta Δ glck::lox72为宿主，分别以启动子P_xylA、P₄₃控制glms、GNA1的重组表达；还公开了重组枯草芽孢杆菌过表达谷氨酰胺合成酶促进合成乙酰氨基葡萄糖的方法，得到的重组枯草芽孢杆菌可提高乙酰氨基葡萄糖在胞外积累和底物的转化效率，发酵上清液中乙酰氨基葡萄糖含量为7.8 g/L，与对照菌BSGNK相比分别提高了23.8%，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础，且重组枯草芽孢杆菌构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。

关键词：重组枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖谷氨酰胺合成酶宿主枯草芽孢杆菌氨基葡萄糖发酵上清液大肠杆菌促进合成代谢工程重组表达转化效率启动子重组菌底物构建积累应用改造生产

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重组枯草芽孢杆菌及其过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法

重组枯草芽孢杆菌及其过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基...

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作者：徐恒德张西进朱玉钦刘家印李建波 276511 山东省日照市莒县浮来山镇官庄社区坝田路南侧

本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌，在重组枯草芽孢杆菌BSGNK的基础上，进一步过表达6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶（GlmS），得到重组菌BSGNKS；所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK，是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagA Δ nagB ... 详细信息

标准号: CN108546668A

本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌，在重组枯草芽孢杆菌BSGNK的基础上，进一步过表达6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶（GlmS），得到重组菌BSGNKS；所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK，是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagA Δ nagB Δ ldh Δ pta Δ glck::lox72为宿主，分别以启动子P_xylA、P₄₃控制glms、GNA1的重组表达；还公开了重组枯草芽孢杆菌过表达6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法，得到的重组枯草芽孢杆菌可提高乙酰氨基葡萄糖在胞外积累和底物的转化效率，发酵上清液中乙酰氨基葡萄糖含量为11.4 g/L，与对照菌BSGNK相比分别提高了37.4%，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础，且重组枯草芽孢杆菌构建方法简单，便于推广使用。

关键词：重组枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖葡萄糖合成酶磷酸氨基宿主枯草芽孢杆菌氨基葡萄糖发酵上清液代谢工程重组表达转化效率启动子重组菌底物构建合成积累改造生产

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重组枯草芽孢杆菌发酵产UDP-糖基转移酶的方法

重组枯草芽孢杆菌发酵产UDP-糖基转移酶的方法

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作者：陈宇杰 214000 江苏省无锡市惠山经济开发区前洲配套区惠和路15号

本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌发酵产UDP‑糖基转移酶的方法，包括以下步骤：UDP‑糖基转移酶培养：将产酶促进剂加入到UDP‑糖基转移酶培养基中，然后放在恒温保温箱中备用；UDP‑糖基转移酶基因克隆；重组枯草芽孢杆菌的培养：将活化... 详细信息

标准号: CN114457051A

本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌发酵产UDP‑糖基转移酶的方法，包括以下步骤：UDP‑糖基转移酶培养：将产酶促进剂加入到UDP‑糖基转移酶培养基中，然后放在恒温保温箱中备用；UDP‑糖基转移酶基因克隆；重组枯草芽孢杆菌的培养：将活化后的重组枯草芽孢杆菌按接种到培养基中，摇床培养到对数生长期，然后将其优化成为种子培养液，接种一定量的种子液到调整后的发酵培养基中，用发酵罐进行发酵培养，加入UDP‑糖基转移酶，然后每隔一段时间测量酶活力等参数。本发明发酵速度更快，能够快速分泌表达UDP‑糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌，其分泌于胞外的UGT可以将莱胞迪苷A转化为莱胞迪苷D。

关键词：糖基转移酶重组枯草芽孢杆菌培养基发酵接种糖基转移酶基因产酶促进剂对数生长期发酵培养基恒温保温箱种子培养液发酵培养分泌表达时间测量摇床培养发酵罐酶活力种子液活化分泌备用克隆优化转化

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