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作者：沈路一 201318 上海市浦东新区周浦国际医学园区青黛路588号

本发明提供一组含有人肝癌组织特异性hAFP启动子和单个或二个或三个肝癌治疗基因的重组真核表达载体，所述肝癌症治疗基因是人抑癌基因hp53，或酵母菌胞嘧啶脱氨酶自杀基因yCD，或不含非甲基化胞苷-鸟苷二核苷酸基序CpG的单纯疱疹病毒... 详细信息

标准号: CN102344933B

本发明提供一组含有人肝癌组织特异性hAFP启动子和单个或二个或三个肝癌治疗基因的重组真核表达载体，所述肝癌症治疗基因是人抑癌基因hp53，或酵母菌胞嘧啶脱氨酶自杀基因yCD，或不含非甲基化胞苷-鸟苷二核苷酸基序CpG的单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶HSV-tk-ΔCpG基因。所述真核表达载体是不含CpG基序的pCpG mcs G2类型质粒。所述重组真核表达载体包括质粒AP、质粒AY、质粒AT、质粒APAY、质粒APAT和质粒APAYAT，分别由序列表的序列1-序列6表示。本发明还提供这些重组真核表达载体的制备方法。

关键词：质粒重组真核表达载体基因基序单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶酵母菌表达载体二核苷酸肝癌治疗肝癌组织制备方法治疗基因胞嘧啶肝癌症甲基化启动子脱氨酶序列表胞苷

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靶向人肝癌细胞含有抑癌基因的真核表达载体质粒

靶向人肝癌细胞含有抑癌基因的真核表达载体质粒

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作者：沈路一 201318 上海市浦东新区周浦国际医学园区青黛路588号

标准号: CN102344933A

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pVAX-PTX3真核表达载体、构建方法及所表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型的抗菌应用

pVAX-PTX3真核表达载体、构建方法及所表达的PTX3蛋白对猪链球菌2...

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作者：姚火春许崛琼潘子豪王晓辉荣杰宋文超 211225 江苏省南京市溧水区白马镇国家农业科技园南京农业大学基地

本发明属于猪链球菌病防控技术研究领域，提供pVAX-PTX3真核表达载体、构建方法及所表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型的抗菌应用。重组真核表达载体pVAX-PTX3中PTX3蛋白基因ptx3序列如SEQ？ID？NO.1所示，可在组织体内稳定表达PTX3蛋白。PTX... 详细信息

标准号: CN104561079A

本发明属于猪链球菌病防控技术研究领域，提供pVAX-PTX3真核表达载体、构建方法及所表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型的抗菌应用。重组真核表达载体pVAX-PTX3中PTX3蛋白基因ptx3序列如SEQ？ID？NO.1所示，可在组织体内稳定表达PTX3蛋白。PTX3蛋白序列如SEQ？ID？NO.2所示，用于制备治疗或预防由猪链球菌2型引起的猪链球菌病生物制剂。pVAX-PTX3重组质粒稳定性强，可在组织体内稳定有效表达，表达产生的PTX3蛋白对猪链球菌2型有抗菌作用；通过体外试验，BALB/c小鼠和仔猪的体内试验验证了pVAX-PTX3表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型的抗菌作用，pVAX-PTX3建立起临床猪链球菌病的预防和治疗的新方法。

关键词：猪链球菌2型猪链球菌病抗菌作用表达重组真核表达载体体内真核表达载体构建方法生物制剂体内试验稳定表达稳定性强重组质粒仔猪防控抗菌体外预防制备治疗验证基因试验应用产生稳定有效建立研究

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一种大鼠防御素真核表达载体及其构建方法

一种大鼠防御素真核表达载体及其构建方法

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作者：陈新年李娟刘燕时妍梅周蕾 730000 甘肃省兰州市城关区天水南路222号

本发明公开了一种大鼠防御素真核表达载体及其构建方法，通过提取Wistar大鼠肺组织总RNA、反转录成cDNA，设计引物，PCR扩增目的片段和PCR产物行琼脂糖凝胶电泳后回收目的片段获取rBD2目的片段；克隆载体pGEM‑T‑rBD2；pCMV‑blank质粒的... 详细信息

标准号: CN107630035A

本发明公开了一种大鼠防御素真核表达载体及其构建方法，通过提取Wistar大鼠肺组织总RNA、反转录成cDNA，设计引物，PCR扩增目的片段和PCR产物行琼脂糖凝胶电泳后回收目的片段获取rBD2目的片段；克隆载体pGEM‑T‑rBD2；pCMV‑blank质粒的扩增和提取；重组真核表达载体pCMV‑rBD2；抗菌活性检测。本发明构建本发明的有益效果是能稳定表达抗菌基因rBD2产物，用于耐药菌感染的辅助治疗。其表达产物对金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)标准菌、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)标准菌及多重耐药鲍氏不动杆菌、多重耐药大肠埃希菌均具有良好的抗菌活性，可用于耐药菌感染的辅助治疗。

关键词：目的片段耐药菌感染多重耐药辅助治疗标准菌构建行琼脂糖凝胶电泳重组真核表达载体金黄色葡萄球菌鲍氏不动杆菌抗菌活性检测铜绿假单胞菌真核表达载体大肠埃希菌表达产物抗菌活性克隆载体设计引物稳定表达反转录防御素肺组织总RNA 大鼠抗菌可用扩增质粒回收基因

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WT1基因表达模式改变对NB4细胞分化的影响

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中华血液学杂志 2005年第9期26卷 543-547页

作者：沈慧玲陈子兴王玮岑建农胡绍燕赵晔苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所215006

目的探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制。方法用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆... 详细信息

目的探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制。方法用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株。通过形态学观察,细胞周期动力学检测,NBT还原试验,细胞表面分化抗原CD11b的检测了解外源性WT1基因异构体WTA在全反式维甲酸(ATRA)诱导下对NB4细胞分化的影响。用RT-PCR检测细胞中PML/RARα、p21、c-myc基因表达的改变。结果ATRA处理细胞48h,对照组(转染空载体的NB4/CMV和未转导WTA的NB4细胞)细胞分化明显,NB4/WTA细胞只出现部分分化。流式细胞术检测NB4/WTA细胞CD11b相对荧光强度(4.63±1.63)低于对照组(8.15±1.84),ATRA作用24h后CD11b相对荧光强度(31.42±5.65)与对照组(71.95±9.36)相比差异更为明显。NB4/WTA细胞NBT还原能力较对照组下降,经ATRA处理后两组细胞之间的NBT还原能力的差异更加明显。RT-PCR提示NB4/WTA细胞PML/RARα、p21、c-myc基因的表达较对照组升高。结论增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型能部分抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与PML/RARα、p21、c-myc基因表达上调有关。

关键词：基因,WT1 细胞系,NB4 细胞分化 WT1基因异构体 NB4细胞分化基因表达模式 PML/RARα RT-PCR检测重组真核表达载体 NBT还原试验

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一种鸡球虫配子体抗原重组载体、重组菌及其制备的疫苗

一种鸡球虫配子体抗原重组载体、重组菌及其制备的疫苗

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作者：刘丹丹冯永翠陶建平潘志明候照峰许金俊康喜龙 225009 江苏省扬州市大学南路88号

本发明公开了一种鸡球虫配子体抗原活载体疫苗的制备方法：将毒害艾美耳球虫配子体抗原基因Engam59与真核表达载体pVAX1相连，获得重组真核表达载体pVAX1‑Engam59，再将该重组载体电转入减毒肠炎沙门菌Z11Δrfbg，获得重组活载体疫苗Z11... 详细信息

标准号: CN118064480A

本发明公开了一种鸡球虫配子体抗原活载体疫苗的制备方法：将毒害艾美耳球虫配子体抗原基因Engam59与真核表达载体pVAX1相连，获得重组真核表达载体pVAX1‑Engam59，再将该重组载体电转入减毒肠炎沙门菌Z11Δrfbg，获得重组活载体疫苗Z11Δrfbg(pVAX1‑Engam59)。该重组活载体疫苗的体外稳定性好，对HD‑11细胞的黏附力、侵袭力好，在HD‑11细胞内的增殖力强，且体内定殖力好。本发明还公开了口服上述活载体疫苗，可诱导鸡群的体液免疫反应，产生特异性抗体，该重组活载体疫苗能用于预防鸡球虫病。

关键词：重组活载体疫苗活载体疫苗配子体重组真核表达载体毒害艾美耳球虫体液免疫反应预防鸡球虫病真核表达载体肠炎沙门菌特异性抗体体外稳定性细胞抗原基因重组载体定殖力侵袭力增殖力抗原减毒球虫种鸡黏附制备诱导体内转入

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转人抑癌基因p53鸡的研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2019年第7期47卷 54-61页

作者：李鹏姗雷雪芹徐廷生王攀林宋祯李振红史明艳韦光辉张广平李俊堂河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003 河南科技大学第一附属医院河南洛阳471003 洛阳师范学院生命科学学院河南洛阳471022 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 全军肛肠外科研究所河南洛阳471031

【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电... 详细信息

【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电镜检测转染含人野生型p53基因的Hep3B细胞形态及超微观结构的变化情况;显微注射法将脂质体介导的重组载体注入鸡X期胚盘的明区和暗区,制备G0代转基因鸡。以EGFP为报告基因,人工授精法制备G1代转基因鸡,对G0代和G1代鸡体外源基因p53进行PCR检测,并对G1代转基因鸡进行小动物活体成像检测。【结果】转染含人p53基因重组载体的Hep3B细胞明显皱缩变圆;微观结构层面,粗面内质网不明显,线粒体肿胀,细胞核中异染色质边集明显,并出现凋亡小体。G0代转基因鸡暗区组孵化率(45%)显著高于明区组孵化率(0)(P<0.05),但均显著低于对照组孵化率(82.5%)(P<0.05);获得4只基因组中含有外源p53基因的G0代转基因鸡,外源基因转染率为22.2%(4/18);获得2只G1代转基因鸡,转基因世代遗传率为3.08%(2/65)。【结论】重组真核表达载体pEGFP-N1-p53/MAR可以促进人肝癌细胞Hep3B的凋亡;脂质体介导的含MAR序列调控元件的pEGFP-N1-p53/MAR质粒,可以提高p53在转基因鸡基因组中的整合稳定性,并可遗传给后代。

关键词：重组真核表达载体 Hep3B 转基因鸡 p53基因转染率世代遗传率

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pMAGE-A1/EGFP转染的人树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第10期25卷 806-807页

作者：于津浦任秀宝刘虹曹水郝希山天津医科大学附属肿瘤医院免疫室 300060

树突状细胞（DC）是目前已知功能最强的抗原提呈细胞，被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗。肿瘤特异性抗原MAGE-A1在不同来源肿瘤组织中有较高表达幢’，因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视。本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-A1／E... 详细信息

树突状细胞（DC）是目前已知功能最强的抗原提呈细胞，被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗。肿瘤特异性抗原MAGE-A1在不同来源肿瘤组织中有较高表达幢’，因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视。本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-A1／EGFP，体外电转染人人外周血单核细胞来源DC，并评价其体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力，以期为临床开展MAGE-A1为基础的免疫治疗提供有利的分子生物学工具。

关键词：肿瘤特异性抗原抗肿瘤免疫效应人树突状细胞体外诱导 EGFP 电转染 MAGE-A1 重组真核表达载体肿瘤免疫治疗抗原提呈细胞

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重组MAGE-A1/EGFP质粒转染人树突状细胞体外诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫

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中国免疫学杂志 2006年第1期22卷 49-52,57页

作者：于津浦任秀宝刘虹曹水郝希山天津医科大学附属肿瘤医院免疫室天津300060

目的:应用人重组真核表达载体pMAGE-A1/EGFP转染的树突状细胞(DCs)在体外诱导MAGE-A1特异性T 细胞免疫。方法:构建重组质粒pMAGE-A1/EGFP,体外电转染该质粒入DCs,通过流式细胞仪检测和胞内染色法LDH法比较转染前后DCs在蛋白表达、细胞... 详细信息

目的:应用人重组真核表达载体pMAGE-A1/EGFP转染的树突状细胞(DCs)在体外诱导MAGE-A1特异性T 细胞免疫。方法:构建重组质粒pMAGE-A1/EGFP,体外电转染该质粒入DCs,通过流式细胞仪检测和胞内染色法LDH法比较转染前后DCs在蛋白表达、细胞成熟度和诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫能力的差异。结果:成功构建pMAGE-A1/EGFP 真核表达质粒,电穿孔法导入DCs后观察到MAGE-A1与EPFG实现等效表达,分别为8．8％±0．9％和8．47％±0．78％。 pMAGE-A1/EGFP转染的DCs表面CD86、CD40L和CD83表达水平显著升高,提示DCs的成熟度增加;同时表达的MAGE-A1 蛋白可与小鼠来源抗MAGE-A1的单抗发生特异性结合,并在体外诱导MAGE-A1特异性CD4+T细胞克隆扩增,当再次接触 MAGE-A1抗原时大量分泌IFN-γ。结论:pMAGE-A1/EGFP转染的DCs不仅能在体外诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫,还可通过流式细胞仪进行快速检测,为临床开展MAGE-A1为基础的免疫治疗奠定了一定基础。

关键词：重组真核表达载体树突状细胞 MAGE-A1 EGFP 特异性T细胞免疫

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凋亡素基因在人乳腺癌细胞中的表达及诱导凋亡作用

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中华实验外科杂志 2005年第7期22卷 801-803页

作者：于春梅罗丽琼张岂凡哈尔滨医科大学附属第三临床医学院腹外科 150001

目的构建pcDvp3重组真核表达质粒,并观察凋亡素基因(vp3)在人乳腺癌细胞435中的表达及诱导凋亡作用。方法(1)扩增vp3基因,与pcDNA3.1连接构建pcDvp3重组真核表达载体,并测序;(2)将pcDvp3和pcDNA3.1转染Hela细胞,免疫荧光技术检测凋亡素... 详细信息

目的构建pcDvp3重组真核表达质粒,并观察凋亡素基因(vp3)在人乳腺癌细胞435中的表达及诱导凋亡作用。方法(1)扩增vp3基因,与pcDNA3.1连接构建pcDvp3重组真核表达载体,并测序;(2)将pcDvp3和pcDNA3.1转染Hela细胞,免疫荧光技术检测凋亡素蛋白表达;(3)将pcDvp3和pcDNA3.1空质粒转染人乳腺癌细胞435和正常细胞,转染48h后用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡。结果(1)核酸序列分析证明克隆的vp3基因与文献报道一致,且正确插入载体中,表明真核表达载体pcDvp3构建成功;(2)转染pcDvp3的Hela细胞48h后可见明显的荧光,而pcDNA3.1组未见;(3)电镜可见细胞明显形态改变及凋亡小体形成;电泳见典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高,凋亡百分率为14.42%;而转染pcDNA3.1细胞未见上述改变。结论vp3在体内能够表达并有效地诱导人乳腺癌435细胞凋亡。

关键词：人乳腺癌细胞诱导凋亡作用凋亡素表达及 pcDNA3.1 流式细胞仪检测重组真核表达载体 Hela细胞琼脂糖凝胶电泳 vp3基因真核表达质粒核酸序列分析蛋白表达技术检测免疫荧光正常细胞透射电镜肿瘤细胞文献报道

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