检索结果-内蒙古大学图书馆

pRluc-hKOR-pcDNA3.1真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达

中国病理生理杂志 2009年第10期25卷 2078-2080页

作者：李雅林白波陈京刘有旺刘海青路海泰山医学院山东泰安271000 山东农业大学山东泰安271018 济宁医学院山东济宁272000

目的:构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体(kappa opioid receptor,KOR)的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法:以质粒pcD-NA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KO... 详细信息

目的:构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体(kappa opioid receptor,KOR)的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法:以质粒pcD-NA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(human embryonic kidney293,HEK293)细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察。结果:扩增出了1条约1.2kb的片段,与预期的人KOR大小相符,质粒酶切结果显示重组质粒pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段,其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小,另1条为目的片段大小。经测序鉴定,序列与GenBank(NM_000912)中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上。结论:构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体,此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。

关键词：受体,阿片样,κ 重组真核表达载体 HEK293细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

pMAGE-Al/EGFP转染的人树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应的研究

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第10期25卷 806-807页

树突状细胞(DC)是目前已知功能最强的抗原提呈细胞,被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗[1].肿瘤特异性抗原MAGE-Al在不同来源肿瘤组织中有较高表达[2],因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视.本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-Al/EGFP,... 详细信息

树突状细胞(DC)是目前已知功能最强的抗原提呈细胞,被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗[1].肿瘤特异性抗原MAGE-Al在不同来源肿瘤组织中有较高表达[2],因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视.本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-Al/EGFP,体外电转染人人外周血单核细胞来源DC,并评价其体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力,以期为临床开展MAGE-Al为基础的免疫治疗提供有利的分子生物学工具.

关键词：电转染人树突状细胞体外诱导特异性抗原抗肿瘤重组真核表达载体肿瘤免疫免疫治疗分子生物学肿瘤组织肿瘤疫苗细胞来源人外周血抗原提呈知功能应用实验评价能力临床

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪轮状病毒和传染性胃肠炎病毒核酸免疫的研究

猪轮状病毒和传染性胃肠炎病毒核酸免疫的研究

引用

作者：师东方东北农业大学

学位级别：博士

本实验在MA104细胞上培养增殖了猪轮状病毒（RV）地方分离株JL94，并提取了病毒的双股RNA。以该RNA为模板，Li-9、Li-11为一对上、下游引物，Li-12、Li-13为另一对上、下游引物，通过RT-PCR分别扩增出了大小为1000bp、1300bp的两个片段... 详细信息

本实验在MA104细胞上培养增殖了猪轮状病毒（RV）地方分离株JL94，并提取了病毒的双股RNA。以该RNA为模板，Li-9、Li-11为一对上、下游引物，Li-12、Li-13为另一对上、下游引物，通过RT-PCR分别扩增出了大小为1000bp、1300bp的两个片段。将该片段插入T载体中构建了重组质粒pMD18-T-JL94/VP7和pMD18-T-JL94/VP6，经酶切初步鉴定和序列检测证明扩增的片段是JL94/VP7（1062bp），JL94/VP6（1356bp）全长基因，并与国外参考毒株OSU株、Gottfried株进行了核苷酸和氨基酸序列的比较。JL94/VP7与OSU株VP7核苷酸同源性为99.9％，氨基酸同源性为99.9％，与Gottfried株VP7核苷酸同源性为74.1％，氨基酸同源性为75.4％。JL94/VP6与OSU株VP6核苷酸同源性为86.85％，氨基酸同源性为97.48％，与Gotffried株VP6核苷酸序列同源性为82.41％，氨基酸序列同源性为93.20％。以pMD18-T-JL94/VP7为模板，Li-14、Li-11，为上、下游引物扩增带有Kozak序列的VP7基因并克隆到T载体上构建了重组质粒pMD18-T-VP7。将真核表达载体pcDNA3.1（+）与pMD18-T-VP7分别用HindⅢ、BamHⅠ双酶切，胶回收纯化后连接。经酶切鉴定和序列检测，证明VP7基因按设计要求已插入表达载体中，构建了重组真核表达载体pcDNA-VP7。以重组质粒PHD为模板，Li-15、Li-2为上、下游引物扩增出上游带有BamHⅠ酶切位点的传染性胃肠炎病毒（TGEV）TH-98/N基因。将N基因胶回收纯化后与真核表达载体pcDNA3.1（+）分别用BamHⅠ、XhoⅠ双酶切，胶回收纯化后连接。经酶切鉴定和序列检测，证明N基因按设计要求已插入表达载体中，构建了重组真核表达载体pcDNA-N。将昆明鼠随机分为A、B、C、D四组，分别肌肉注射pcDNA-VP7、pcDNA-N、pcDNA-VP7+pcDNA-N和pcDNA3.1（+），每只鼠100μg/100μ1，共免疫3次，每次间隔2周。首次免疫第0d、14d、21d、28d、35d、39d、47d、54d采血分离血清用ELISA法检测抗体动态变化，同时检测外周血CD4+、CD8+T细胞动态变化。 A组小鼠血清在首免后第14d即可检出阳性抗体。以后在第28d、35d、39d、54d分别检出了阳性抗体（P/N≥2.0），第35d抗体水平最高。C组小鼠血清在首免后第14d也可检出阳性抗体。以后在第28d、39d、54d均检出阳性抗体（P/N≥2.0）。B组小鼠在首次免疫后第39d检测到针对TGEVN蛋白的阳性抗体（P/N≥2.0），其它时间均未检出阳性抗体。 A组与D组小鼠外周血CD4+T细胞数量在首免后第14d、47d、54d有显著差异（P＜0.05），A组小鼠外周血CD4+T细胞数量明显高于D组。B组与D组小鼠外周血CD4+T细胞数量在首免后第28d、47d分别出现显著差异（P＜0.05）。B组小鼠外周血CD4+T细胞数量明显高于D组。C组与D组小员外周血CD4+T细胞数量在首免后28d与对照组比较，差异显著（P＜0.05），C组小员外周血CD4+T细胞数量明显高于D组。 A组与D组小鼠外周血CD8+T细胞数量在首免后第14d出现显著差异（P＜0.05），博士学位论文猪轮状病毒和传染性胃肠炎病毒核酸免疫的研究 2002年 12月 A组小鼠外周血CDS”T细胞数量明显高于D组。B组与D组小鼠外周血CDS”T细胞数量在首免后第14d出现显著差异(P＜0．0引，B组小鼠外周血CD矿T细胞数量明显高于D组。C组与D组小鼠外周血CDS“T细胞数量在第35d出现显著差异（P＜0．05），C 组小鼠外周血CDS＋ T细胞数量明显高于D组。本实验首次在国内克隆了猪轮状病毒地方分离株JL94的VP6、VP7全基因并与国外参考毒株进行了序列比较分析，丰富了猪RV感染的分子流行病学资料，也为研制猪轮状病毒基因工程疫苗提供了候选基因；首次在国内构建了猪轮状病毒地方分离株 JL94／VP7基因和

关键词：猪轮状病毒 VP6基因 VP7基因传染性胃肠炎病毒 N基因重组真核表达载体核酸免疫

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

pVAX1-INF-α作为猪蓝耳病疫苗免疫佐剂的评价

pVAX1-INF-α作为猪蓝耳病疫苗免疫佐剂的评价

引用

作者：杨竹鸣南京农业大学

学位级别：硕士

猪繁殖和呼吸综合征（Porcinere productive and respiratory syndrome，PRRSV），是由PRRSV引起猪的一种繁殖障碍和呼吸道炎症的国家二类传染病。又称“猪蓝耳病”(Blue-ear disease)。PRRSV主要感染猪的巨噬细胞，损伤免疫器官导致机... 详细信息

猪繁殖和呼吸综合征（Porcinere productive and respiratory syndrome，PRRSV），是由PRRSV引起猪的一种繁殖障碍和呼吸道炎症的国家二类传染病。又称“猪蓝耳病”(Blue-ear disease)。PRRSV主要感染猪的巨噬细胞，损伤免疫器官导致机体免疫功能下降，从而引起免疫抑制，使感染猪极易继发各种疾病。PRRSV疫苗较弱的免疫原性和交叉保护效果是最近在PRRSV免疫方面较重要的问题。在细胞免疫和体液免疫方面都有提高的情况下，才可以起到不同基因型毒株之间的交叉保护。利用佐剂提高PRRSV疫苗的免疫效果和交叉保护效果是最近的一大研究热点。\n PRRSV不同于其他病毒，感染猪后会抑制体内IFN-α的产生。本研究利用重组猪IFN-α分别以不同的注射方式和不同的注射部位免疫，同时免疫蓝耳病疫苗，研究增加外源IFN-α对免疫反应的提高和PRRSV引起的免疫抑制的改善。\n 1.本试验体外克隆了猪IFN-α基因，将其克隆到pVAX1载体上，构建重组真核表达载体pVAX1-IFN-α，将此重组质粒在293细胞中转染表达，Western-blot检测IFN-α的表达情况。蛋白质印迹分析表明，转染48h后可在上清中检测到分泌的IFN-α，表达产物大约为27KD。\n 2.将重组的pVAX1-IFN-α质粒与蓝耳病弱毒疫苗同时免疫八周龄猪，使用ELISA法检测猪蓝耳病中和抗体。再将免疫猪的淋巴细胞体外培养，检测其分泌产生的IFN-γ，评估细胞免疫反应。中和抗体的结果表明，肌肉注射用PLL包裹的pVAX1-IFN-α重组质粒，和淋巴结注射pVAX1-IFN-α重组质粒分别联合弱毒苗免疫，都可以明显提高猪体内的中和抗体水平。体外刺激淋巴细胞分泌产生IFN-γ的结果表明，加PLL修饰的pVAX1-IFN-α重组质粒组和淋巴结注射pVAX1-IFN-α重组质粒组所测得的值都明显高于对照组。\n 因此pVAX1-IFN-α重组表达质粒作为佐剂免疫动物，可以提高机体的体液免疫和细胞免疫，同时为有效地缓减PRRSV引起的免疫抑制而造成的猪持续性感染提供了一条新思路。

关键词：猪蓝耳病猪繁殖和呼吸综合征重组真核表达载体疫苗免疫佐剂中和抗体交叉保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

pVAX1-IFN-α作为猪蓝耳病疫苗免疫佐剂的评价

pVAX1-IFN-α作为猪蓝耳病疫苗免疫佐剂的评价

引用

作者：杨竹鸣南京农业大学

学位级别：硕士

猪繁殖和呼吸综合征(Porcinere productive and respiratory syndrome,PRRSV),是由PRRSV引起猪的一种繁殖障碍和呼吸道炎症的国家二类传染病。又称“猪蓝耳病”(Blue-ear disease)。 PRRSV主要感染猪的巨噬细胞,损伤免疫器官导致机体免... 详细信息

猪繁殖和呼吸综合征(Porcinere productive and respiratory syndrome,PRRSV),是由PRRSV引起猪的一种繁殖障碍和呼吸道炎症的国家二类传染病。又称“猪蓝耳病”(Blue-ear disease)。 PRRSV主要感染猪的巨噬细胞,损伤免疫器官导致机体免疫功能下降,从而引起免疫抑制,使感染猪极易继发各种疾病。PRRSV疫苗较弱的免疫原性和交叉保护效果是最近在PRRSV免疫方面较重要的问题。在细胞免疫和体液免疫方面都有提高的情况下,才可以起到不同基因型毒株之间的交叉保护。利用佐剂提高PRRSV疫苗的免疫效果和交叉保护效果是最近的一大研究热点。 PRRSV不同于其他病毒,感染猪后会抑制体内IFN-α的产生。本研究利用重组猪IFN-α分别以不同的注射方式和不同的注射部位免疫,同时免疫蓝耳病疫苗,研究增加外源IFN-α对免疫反应的提高和PRRSV引起的免疫抑制的改善。 1.本试验体外克隆了猪IFN-a基因,将其克隆到pVAX1载体上,构建重组真核表达载体pVAX1-IFN-α,将此重组质粒在293细胞中转染表达,Western-blot检测IFN-α的表达情况。蛋白质印迹分析表明,转染48h后可在上清中检测到分泌的IFN-α,表达产物大约为27KD。 2.将重组的pVAX1-IFN-α质粒与蓝耳病弱毒疫苗同时免疫八周龄猪,使用ELISA法检测猪蓝耳病中和抗体。再将免疫猪的淋巴细胞体外培养,检测其分泌产生的IFN-y,评估细胞免疫反应。中和抗体的结果表明,肌肉注射用PLL包裹的pVAX1-IFN-α重组质粒,和淋巴结注射pVAX1-IFN-α重组质粒分别联合弱毒苗免疫,都可以明显提高猪体内的中和抗体水平。体外刺激淋巴细胞分泌产生IFN-γ的结果表明,加PLL修饰的pVAXl-IFN-α重组质粒组和淋巴结注射pVAX1-IFN-α重组质粒组所测得的值都明显高于对照组。因此pVAX1-IFN-α重组表达质粒作为佐剂免疫动物,可以提高机体的体液免疫和细胞免疫,同时为有效地缓减PRRSV引起的免疫抑制而造成的猪持续性感染提供了一条新思路。

关键词：重组真核表达载体佐剂中和抗体 IFN-γ

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪IFN-γ的优化基因和采用该优化基因制备猪IFN-γ的方法及其注射液和应用

猪IFN-γ的优化基因和采用该优化基因制备猪IFN-γ的方法及其注射...

引用

作者：钱泓吴有强卞广林张强徐玉兰吴素芳车影吕洋萍闻雪查银河 312366 浙江省绍兴市滨海新区百川路1号

本发明公开了一种猪IFN‑γ的优化基因和采用该优化基因制备猪IFN‑γ的方法及其注射液和应用，所述猪IFN‑γ的优化基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述制备方法包括：1)将权利要求1所述的基因序列克隆到真核表达载体中，得到重组真核... 详细信息

标准号: CN109810983B

本发明公开了一种猪IFN‑γ的优化基因和采用该优化基因制备猪IFN‑γ的方法及其注射液和应用，所述猪IFN‑γ的优化基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述制备方法包括：1)将权利要求1所述的基因序列克隆到真核表达载体中，得到重组真核表达载体；2)将步骤1)中所述重组真核表达载体转染CHO细胞，通过培养、筛选和驯化，得到高效表达猪IFN‑γ的CHO细胞株；以及3)将步骤2)中所述CHO细胞株进行发酵培养，从发酵培养上清中纯化得到猪IFN‑γ。所述注射液包括60μg猪IFN‑γ与70佐剂。使用优化后的基因序列在CHO细胞中制备猪IFN‑γ蛋白时具有产量高、易纯化、成本低、质控容易，且具有良好的活性，可以作为免疫增强剂和治疗药品使用。

关键词：优化基因制备重组真核表达载体发酵培养基因序列注射液基因序列克隆真核表达载体免疫增强剂高效表达药品使用驯化质控转染佐剂种猪蛋白筛选治疗优化应用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪INF-γ的优化基因和采用该优化基因制备猪INF-γ的方法及其注射液和应用

猪INF-γ的优化基因和采用该优化基因制备猪INF-γ的方法及其注射...

引用

作者：钱泓吴有强卞广林张强徐玉兰吴素芳车影吕洋萍闻雪查银河 312000 浙江省绍兴市滨海新城马欢路398号科创中心2号楼5楼

本发明公开了一种猪INF‑γ的优化基因和采用该优化基因制备猪INF‑γ的方法及其注射液和应用，所述猪INF‑γ的优化基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述制备方法包括：1)将权利要求1所述的基因序列克隆到真核表达载体中，得到重组真核... 详细信息

标准号: CN109810983A

本发明公开了一种猪INF‑γ的优化基因和采用该优化基因制备猪INF‑γ的方法及其注射液和应用，所述猪INF‑γ的优化基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述制备方法包括：1)将权利要求1所述的基因序列克隆到真核表达载体中，得到重组真核表达载体；2)将步骤1)中所述重组真核表达载体转染CHO细胞，通过培养、筛选和驯化，得到高效表达猪INF‑γ的CHO细胞株；以及3)将步骤2)中所述CHO细胞株进行发酵培养，从发酵培养上清中纯化得到猪INF‑γ。所述注射液包括60μg猪INF‑γ与70佐剂。使用优化后的基因序列在CHO细胞中制备猪INF‑γ蛋白时具有产量高、易纯化、成本低、质控容易，且具有良好的活性，可以作为免疫增强剂和治疗药品使用。

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一种重组减毒沙门氏菌LH430及其制备方法和用途

一种重组减毒沙门氏菌LH430及其制备方法和用途

引用

作者：金天明李昕王小月李丹蓝肇煜孟佳丽尚翠玲林静高珂珂李小慧 300384 天津市西青区津静公路

本发明公开了一种重组减毒沙门氏菌LH430及其制备方法和用途，利用蜂毒肽MEL基因和肿瘤靶向肽RGD基因，将目的基因克隆到pMD‑18‑T载体中，线性化重组穿梭载体后构建重组真核表达载体pEGFP‑RGD‑MEL，将其转化至感受态LH430，构建了包含... 详细信息

标准号: CN109439686B

本发明公开了一种重组减毒沙门氏菌LH430及其制备方法和用途，利用蜂毒肽MEL基因和肿瘤靶向肽RGD基因，将目的基因克隆到pMD‑18‑T载体中，线性化重组穿梭载体后构建重组真核表达载体pEGFP‑RGD‑MEL，将其转化至感受态LH430，构建了包含上述目的基因的重组减毒沙门氏菌LH430；用重组减毒沙门氏菌LH430侵染黑色素瘤细胞B16，使其表达RGD‑MEL基因；评价RGD‑MEL基因共表达的减毒沙门氏菌LH430对B16细胞的抑瘤效果。

关键词：重组减毒沙门氏菌基因目的基因构建重组真核表达载体黑色素瘤细胞减毒沙门氏菌肿瘤靶向肽穿梭载体蜂毒肽感受态共表达线性化侵染抑瘤制备克隆细胞转化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗人死亡受体5胞外区的人源化单克隆抗体

抗人死亡受体5胞外区的人源化单克隆抗体

引用

作者：郑德先邱宇鹤刘彦信 100005 北京市东城区东单三条5号

本发明提供了抗人死亡受体5(DR5)胞外区的人源化单克隆抗体，其包括与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列同一性至少为90％的轻链可变区氨基酸序列，与SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列同一性至少为90％的重链可变区氨基酸序列，以及人抗体功能I... 详细信息

标准号: CN104245736A

本发明提供了抗人死亡受体5(DR5)胞外区的人源化单克隆抗体，其包括与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列同一性至少为90％的轻链可变区氨基酸序列，与SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列同一性至少为90％的重链可变区氨基酸序列，以及人抗体功能IgG1的恒定区。本发明还提供了所属人源化单克隆抗体的编码核苷酸序列，重组真核表达载体，以及所述抗体的生产方法，其组合物以及用途。本发明所述的人源化单克隆抗体在体内外对多种肿瘤细胞具有特异性的凋亡诱导活性，可单独或与DR5的天然配体肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体或其它药物联合使用，用于多种肿瘤和与DR5高表达相关的疾病的治疗。

关键词：单克隆抗体人源化可变区氨基酸氨基酸序列同一性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组真核表达载体药物联合使用核苷酸序列疾病的治疗死亡受体5 抗体功能天然配体诱导活性肿瘤细胞胞外区恒定区组合物凋亡抗体肿瘤

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法及其应用

西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法及其应用

引用

作者：周选围胡广川朱翔袁青贤 850000 西藏自治区拉萨市拉萨经济技术开发区金珠西路158号世通阳光新城2栋2单元3楼1号

一种西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法及其应用，通过克隆得到西藏灵芝免疫调节蛋白基因后，通过基因重组构建重组真核表达载体pPIC9K::FIP‑gle‑His并线性化，再将重组真核表达载体转化到毕赤酵母GS115中形成毕赤酵母工程菌株，经发酵、... 详细信息

标准号: CN116333070A

一种西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法及其应用，通过克隆得到西藏灵芝免疫调节蛋白基因后，通过基因重组构建重组真核表达载体pPIC9K::FIP‑gle‑His并线性化，再将重组真核表达载体转化到毕赤酵母GS115中形成毕赤酵母工程菌株，经发酵、表达和纯化得到西藏灵芝免疫调节蛋白FIP‑gle。本发明利用西藏灵芝免疫调节蛋白FIP‑gle基因序列，并通过酵母表达实现rFIP‑gle蛋白的系统制备，并将重组蛋白rFIP‑gle应用于影响巨噬细胞RAW 264.7分泌细胞因子TNF‑α。

关键词：免疫调节蛋白灵芝重组真核表达载体毕赤酵母工程菌株分泌细胞因子影响巨噬细胞表达和纯化毕赤酵母基因序列基因重组酵母表达系统制备重组蛋白线性化构建制备发酵应用蛋白克隆基因转化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：