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作者：刘宝瑞梅义 210008 江苏省南京市鼓楼区中山路321号

本发明提供一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌，所述免疫活化型重组耻垢分枝杆菌为胞内表达anti‑PD‑L1scfv与IL‑15融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗，该疫苗以耻垢分枝杆菌为宿主细胞，转染宿主细胞的表达载体为包含anti‑PD‑L1scfv和IL‑15... 详细信息

标准号: CN117070436A

本发明提供一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌，所述免疫活化型重组耻垢分枝杆菌为胞内表达anti‑PD‑L1scfv与IL‑15融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗，该疫苗以耻垢分枝杆菌为宿主细胞，转染宿主细胞的表达载体为包含anti‑PD‑L1scfv和IL‑15融合蛋白基因片段的表达载体。该重组耻垢分枝杆菌可在菌体相应位置表达anti‑PD‑L1scfv与IL‑15融合蛋白，成功构建后经实验验证，该重组耻垢分枝杆菌疫苗不仅可以有效阻断PD‑1与PD‑L1信号通路轴，而且能够有效活化T细胞，激活肿瘤杀伤功能。动物实验提示原位瘤内注射本发明的免疫活化型重组耻垢分枝杆菌具有抑制肿瘤乃至使肿瘤完全消失的效果，可用于制备肿瘤疫苗和免疫佐剂。

关键词：重组耻垢分枝杆菌活化型重组耻垢分枝杆菌疫苗表达载体融合蛋白肿瘤耻垢分枝杆菌融合蛋白基因制备肿瘤疫苗转染宿主细胞胞内表达动物实验免疫佐剂杀伤功能实验验证宿主细胞位置表达信号通路抑制肿瘤有效活化构建菌体可用注射提示疫苗激活成功

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猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其表达

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中国病原生物学杂志 2019年第6期14卷 675-678页

作者：江楠刘娉婷罗镇颉吴晨穆文美周必英遵义医科大学寄生虫学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学医学与科技学院

目的构建猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,分析猪带绦虫TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。方法采用PCR方法从重组质粒pGEX-TSOL18中扩增TSOL18基因,克隆入pMV361载体,构建pMV361-TSOL18穿梭质粒,经酶切和测序鉴定后电穿... 详细信息

目的构建猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,分析猪带绦虫TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。方法采用PCR方法从重组质粒pGEX-TSOL18中扩增TSOL18基因,克隆入pMV361载体,构建pMV361-TSOL18穿梭质粒,经酶切和测序鉴定后电穿孔法转化入耻垢分枝杆菌,进行单克隆菌落筛选及PCR鉴定。构建的猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗经热诱导后,以SDS-PAGE分析及Western blot分析TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。结果成功扩增出TSOL18目的基因,大小约为393 bp,与预期值相符;经酶切验证,pMV361-TSOL18穿梭质粒构建成功;PCR鉴定猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗构建成功。SDS-PAGE电泳检测重组菌表达的目的蛋白TSOL18,相对分子质量为15×10^3与预期相符;Western blot分析该蛋白能被TSOL18兔抗血清识别。结论成功构建了猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,猪带绦虫TSOL18基因在耻垢分枝杆菌中成功表达,表达蛋白具有反应原性,其免疫原性有待进一步研究。

关键词：猪带绦虫 TSOL18 重组耻垢分枝杆菌疫苗构建表达

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猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗诱导小鼠免疫应答

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中华地方病学杂志 2019年第10期38卷 793-799页

作者：王亮亮陈闽艳郑维琼周必英遵义医科大学寄生虫学教研室 563000

目的观察猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)疫苗免疫小鼠诱导产生的体液和细胞免疫应答。方法SPF级昆明小鼠60只(18~22 g,雌雄各半),采用随机数字表法分为3组,每组20只,分别为重组MS-TSOL18疫苗组、MS对照组... 详细信息

目的观察猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)疫苗免疫小鼠诱导产生的体液和细胞免疫应答。方法SPF级昆明小鼠60只(18~22 g,雌雄各半),采用随机数字表法分为3组,每组20只,分别为重组MS-TSOL18疫苗组、MS对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。采用口服灌胃法免疫2次,间隔2周。于免疫后0、2、4、6、8周,每周4只小鼠眼眶静脉取血,分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清IgG与IgG2a水平;无菌取脾,制备脾淋巴细胞悬液,采用CCK-8法检测脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后增殖水平,采用ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后产生白细胞介素(IL)-2和IL-4的水平。结果与MS对照组(IgG:0.160 ± 0.019、0.187 ± 0.038、0.193 ± 0.050、0.170 ± 0.005,IgG2a:0.213 ± 0.010、0.198 ± 0.012)和PBS对照组(IgG:0.159 ± 0.015、0.184 ± 0.029、0.191 ± 0.025、0.165 ± 0.018,IgG2a:0.198 ± 0.032、0.178 ± 0.025)比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠血清特异性IgG水平(0.310 ± 0.034、0.391 ± 0.029、0.443 ± 0.030、0.373 ± 0.021)在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),lgG2a水平(0.446 ± 0.056、0.339 ± 0.026)在免疫后6、8周升高(P均< 0.05),6周时均达峰值。抗原刺激后,与MS对照组和PBS对照组比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠脾淋巴细胞增殖水平在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),在6周时达峰值。抗原刺激后,与MS对照组和PBS对照组比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-2和IL-4水平均在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),分别在6周和4周时达峰值。结论猪带绦虫TSOL18重组MS疫苗免疫可诱导小鼠产生体液和细胞免疫应答。

关键词：有钩绦虫 TSOL18 重组耻垢分枝杆菌疫苗免疫应答小鼠

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一种表达HBHA-IL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗

一种表达HBHA-IL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗

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作者：师长宏张海徐志凯赵勇 710032 陕西省西安市长乐路37号

本发明公开了一种表达HBHA-IL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗，该疫苗是以耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)为宿主细胞，转染宿主细胞的外源性表达载体是包含HBHA-IL-12基因片段的表达载体。该重组耻垢分枝杆菌疫苗能够持续... 详细信息

标准号: CN101816783B

本发明公开了一种表达HBHA-IL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗，该疫苗是以耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)为宿主细胞，转染宿主细胞的外源性表达载体是包含HBHA-IL-12基因片段的表达载体。该重组耻垢分枝杆菌疫苗能够持续表达具有生物活性的HBHA-IL-12融合蛋白，诱导产生的IFN-γ能够有效清除小鼠体内感染的MTB。该疫苗集中了靶抗原和活载体的优势，可应用于MTB感染的治疗。

关键词：重组耻垢分枝杆菌疫苗表达载体融合蛋白宿主细胞疫苗耻垢分枝杆菌基因片段生物活性体内感染诱导产生抗原转染感染

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一种重组质粒pMFA42S-Ag85a-IL-17a及其构建方法与应用

一种重组质粒pMFA42S-Ag85a-IL-17a及其构建方法与应用

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作者：陈凌茅松石文静徐敏朱若尘 200233 上海市徐汇区宜山路600号

本发明提供了一种重组质粒pMFA42S‑Ag85a‑IL‑17a及其构建方法与应用；本发明以大肠杆菌‑分枝杆菌穿梭表达载体pMFA系列中的pMFA42S为载体，构建重组质粒pMFA42S‑Ag85a‑IL‑17a，采用电转化技术将重组质粒pMFA42S‑Ag85a‑IL‑17a转入耻垢分... 详细信息

标准号: CN115287293A

本发明提供了一种重组质粒pMFA42S‑Ag85a‑IL‑17a及其构建方法与应用；本发明以大肠杆菌‑分枝杆菌穿梭表达载体pMFA系列中的pMFA42S为载体，构建重组质粒pMFA42S‑Ag85a‑IL‑17a，采用电转化技术将重组质粒pMFA42S‑Ag85a‑IL‑17a转入耻垢分枝杆菌中，构建表达融合蛋白Ag85A‑IL‑17A的重组耻垢分枝杆菌疫苗rMS‑Ag85a‑IL‑17a。上述疫苗同时兼具有调节Th1/Th2细胞平衡功能，并可通过主动免疫诱导机体产生自身抗体抑制内源性IL‑17A的功能，实验周期短，方法经济，且仅需要2次接种，具有较强的实用性。

关键词：重组质粒构建重组耻垢分枝杆菌疫苗耻垢分枝杆菌穿梭表达载体构建重组质粒大肠杆菌分枝杆菌融合蛋白实验周期主动免疫自身抗体电转化内源性接种诱导疫苗转入应用

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一种表达HBHA-IL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗

一种表达HBHA-IL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗

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作者：师长宏张海徐志凯赵勇 710032 陕西省西安市长乐路37号

标准号: CN101816783A

关键词：重组耻垢分枝杆菌疫苗表达载体融合蛋白宿主细胞疫苗耻垢分枝杆菌基因片段生物活性体内感染诱导产生抗原转染感染

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表达SARS病毒M蛋白重组耻垢分枝杆菌疫苗株的建立及其免疫原性分析

表达SARS病毒M蛋白重组耻垢分枝杆菌疫苗株的建立及其免疫原性分析

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全国寄生虫学与热带医学学术研讨会

作者：甘燕吴少庭刘洪波李俊华黄达娜余新炳 Research Base in Shenzhen Center for Disease Control and Prevention Basic Medicine Postdoctoral Mobile Station in Sun Yat-sen University

目的构建表达SARS冠状病毒膜蛋白(M蛋白)的重组耻垢分枝疫苗株,分析其免疫原性,为进一步的抗SARS疫苗研究奠定基础。方法以pMD18-M-TA质粒为模板PCR扩增M蛋白的基因片断,克隆入大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG3000。电穿孔法... 详细信息

目的构建表达SARS冠状病毒膜蛋白(M蛋白)的重组耻垢分枝疫苗株,分析其免疫原性,为进一步的抗SARS疫苗研究奠定基础。方法以pMD18-M-TA质粒为模板PCR扩增M蛋白的基因片断,克隆入大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG3000。电穿孔法将重组pBCG3000-M质粒转化耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatismc 155,筛选得到重组分枝杆菌疫苗Msmc 155-M。Western-blot鉴定M蛋白基因在耻垢分枝杆菌中的表达及生物学活性。ELISA法检测重组Msmc 155-M疫苗株免疫Balb/c小鼠诱导产生的血清特异性抗体。结果成功构建SARS病毒M蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗株Msmc 155-M;经热诱导后Msmc 155-M重组菌株可表达一约26 000Da的蛋白带,免疫印迹分析发现可与SARS病人恢复期血清以及免疫鼠血清发生特异性抗原抗体反应;Msmc 155-M免疫小鼠能够诱导产生M特异的IgG抗体。结论重组Msmc 155-M疫苗株能有效表达SARS冠状病毒M蛋白,并具免疫原性,可诱导抗SARS特异性体液免疫应答。

关键词： SARS冠状病毒 M蛋白重组耻垢分枝杆菌疫苗免疫原性

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表达幽门螺杆菌外膜蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗菌对小鼠的免疫保护作用

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中国预防兽医学报 2007年第9期29卷 694-696,722页

作者：向廷秀谯敏姜政陶小红黄爱龙王丕龙重庆医科大学附属第一医院实验研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

为研究含pLAO的重组耻垢分枝杆菌疫苗(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.S)对小鼠的保护作用。将重组耻垢分枝杆菌疫苗pLAO(MS)2×107灌胃免疫接种BALB/c小鼠,同时设PBS组、耻垢分枝杆菌空菌组,免疫4周后,各组处死一批小鼠,... 详细信息

为研究含pLAO的重组耻垢分枝杆菌疫苗(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.S)对小鼠的保护作用。将重组耻垢分枝杆菌疫苗pLAO(MS)2×107灌胃免疫接种BALB/c小鼠,同时设PBS组、耻垢分枝杆菌空菌组,免疫4周后,各组处死一批小鼠,取胃组织待用;余下的小鼠用幽门螺杆菌标准株(Helicobacter pylori SS1,Hp SS1)攻击2次,4周后处死小鼠,进行胃组织快速尿素酶试验、Hp培养、炎症程度及其炎症活动度评分,以评价疫苗对胃黏膜Hp感染的免疫保护作用,ELISA检测Hp特异性血清IgG和IgA水平。结果表明疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS组和空菌组,疫苗组不仅可以降低Hp的定植,而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应。免疫后BALB/c小鼠特异性抗体显示rM.S疫苗诱导的Hp特异性血清IgG、IgA水平都升高。因此rM.S疫苗经灌胃接种BLAB/c小鼠能降低Hp定植,减轻胃黏膜的炎症反应,对Hp感染有明显的预防保护作用。

关键词：幽门螺杆菌重组耻垢分枝杆菌疫苗

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