检索结果-内蒙古大学图书馆

第十三届江浙沪儿科学术会议暨2016年浙江省医学会儿科学学术年会

作者：陈凌上海交通大学附属第六人民医院

目的:探讨重组耻垢分枝杆菌(rMS-Ag85a-IL-17a,rMS)鼻腔黏膜接种对非特异性哮喘小鼠气道炎症反应的影响及作用机制。方法:SPF级DO11.10小鼠随机分为正常对照组(CON组)、非特异性哮喘组(OVA组)、耻垢分枝杆菌组(MS组)和重组耻垢分枝杆菌... 详细信息

目的:探讨重组耻垢分枝杆菌(rMS-Ag85a-IL-17a,rMS)鼻腔黏膜接种对非特异性哮喘小鼠气道炎症反应的影响及作用机制。方法:SPF级DO11.10小鼠随机分为正常对照组(CON组)、非特异性哮喘组(OVA组)、耻垢分枝杆菌组(MS组)和重组耻垢分枝杆菌组(rMS组)。以OVA鼻腔滴注建立非特异性哮喘小鼠模型,MS

关键词：重组耻垢分枝杆菌 rMS-Ag85a-IL-17a 哮喘小鼠影响及作用非特异性气道炎症

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髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响

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中国医科大学学报 2015年第6期44卷 562-564,572页

作者：胡少婷李升锦黄秦重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010

目的探讨髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响。方法使用髓样分化因子88抑制剂ST2825作用于重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞,确定ST2825干预的实验组、无ST2825作用的对照组以及空白组。运用荧光显... 详细信息

目的探讨髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响。方法使用髓样分化因子88抑制剂ST2825作用于重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞,确定ST2825干预的实验组、无ST2825作用的对照组以及空白组。运用荧光显微镜观察自噬小体,RT-PCR检测Beclin-1基因和Bcl-2基因的m RNA的表达。结果与对照组比较,实验组的自噬荧光小点数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测结果显示Beclin-1和Bcl-2 m RNA表达较对照组下调。结论髓样分化因子88抑制剂ST2858可能通过干扰Beclin-1和Bcl-2的分离,抑制THP-1细胞自噬。

关键词：髓样分化因子88 ST2825 重组耻垢分枝杆菌

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表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用

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科学技术与工程 2012年第2期20卷 415-417页

作者：赵善民张彩勤赵勇毛峰峰白冰张海师长宏徐志凯第四军医大学实验动物中心西安710032 第四军医大学微生物学教研室西安710032

评价表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌用于结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗效果。结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠4周后,用表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫治疗,检测免疫小鼠肺部荷菌量和组织病理变化。重组耻垢分... 详细信息

评价表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌用于结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗效果。结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠4周后,用表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫治疗,检测免疫小鼠肺部荷菌量和组织病理变化。重组耻垢分枝杆菌可有效控制感染小鼠肺部结核分枝杆菌的荷菌量,减轻病理损伤。但在降低肺部荷菌量方面不如化疗药物。表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌可有效控制结核分枝杆菌在小鼠体内的增殖,可能成为联合化疗药物控制结核病的有效候选疫苗。

关键词：重组耻垢分枝杆菌结核分枝杆菌 HBHA hIL-12

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弓形虫重组耻垢分枝杆菌M.S-P30-ROP2载体活疫苗的构建及鉴定

弓形虫重组耻垢分枝杆菌M.S-P30-ROP2载体活疫苗的构建及鉴定

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作者：高红刚山东省医学科学院

学位级别：硕士

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种世界性分布的专性细胞内寄生原虫，属于顶复门生物，由法国学者Nicolle和Manceaux于1908年在北非刚地梳趾鼠的肝、脾单核细胞内发现的，因虫体呈弓形而得名。根据毒性和流行情况可将弓形虫分为三种类型... 详细信息

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种世界性分布的专性细胞内寄生原虫，属于顶复门生物，由法国学者Nicolle和Manceaux于1908年在北非刚地梳趾鼠的肝、脾单核细胞内发现的，因虫体呈弓形而得名。根据毒性和流行情况可将弓形虫分为三种类型，分别是Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。爱滋病病人感染的主要是Ⅱ型，Ⅰ型和Ⅱ型在先天性弓形虫病的病人已有报道，而从动物中分离的主要是Ⅲ型。人类感染弓形虫主要是通过进食含有包囊的未煮熟或生肉(主要是猪和羊)或者被猫粪中的卵囊污染的水或食物引起的。成人感染弓形虫后一般不表现为临床症状或者为自限性。孕妇感染后，弓形虫可通过胎盘传染胎儿导致早产、流产、死胎、畸胎等严重后果。免疫缺陷病人或者使用免疫抑制剂病人(如AIDS\器官移植等)弓形虫慢性感染常可导致致死性的脑炎。羊感染弓形虫后也可导致流产和早产从而给畜牧业发展造成严重后果．美国第三次全国健康与营养调查研究表明，估计全国有23％的青少年和成人实验室证明感染了弓形虫。我国人群的感染率约在5％～20％，平均为8.5％。 P30蛋白是弓形虫速殖子表面主要抗原，在弓形虫入侵宿主细胞时起重要作用，是一种重要的疫苗侯选抗原。P30亚单位疫苗和核酸疫苗的研究多有报道，均表明可以产生一定的免疫保护性。但由于其表达具有期特异性，只能在速殖子阶段表达，所以不能产生针对各个阶段的特异性免疫保护。 ROP2是弓形虫棒状体分泌的一种蛋白，在入侵的宿主细胞的起始和整个过程与纳虫泡膜相连。其氨基端暴露于宿主细胞胞质侧，主要介导纳虫空泡与宿主细胞线粒体和内质网接触，在弓形虫的各个阶段均有表达。对弓形虫的存活、生长、复制起重要作用。由于抗弓形虫病药物的毒副作用，及用药后仍可能发生再次感染，使得目前药物治疗弓形虫病非常困难。到目前为止，弓形虫病疫苗的研究取得一定的发展，活的减毒S48株被广泛应用于畜牧业的预防，但尚无可应用于人体的疫苗。由于弓形虫寄生生活的复杂性、形态的多变性，并且不同个体抗原递呈能力不一，仅利用某一时期、某一形态的单一抗原制备的单价疫苗往往不能提供对其他阶段弓形虫感染的保护性。本研究将弓形虫主要表面抗原P30和棒状体蛋白ROP2候选抗原基因克隆到大肠杆菌/分枝杆菌穿梭表达载体pSTM3中，经电穿孔法转入耻垢分枝杆菌中构建重组M.S载体活疫苗，从而为弓形虫病的防治提供新的方法。本研究的主要方法、结果及结论1．弓形虫速殖子表面抗原P30基因、棒状体抗原ROP2复合基因载体的构建、表达和鉴定方法：将液氮冻存的弓形虫速殖子复苏后，接种于小鼠腹腔，连续传代三次，收集小鼠腹水，分离纯化速殖子，常规方法提取基因组DNA。根据GenBank报道的p30基因和rop2基因序列的开放读码框架分别设计合成引物;PCR法扩增p30、rop2基因片段，重叠PCR法扩增P30-ROP2复合基因，经琼脂糖凝胶回收纯化后，克隆至TOPO-TA克隆载体;通过酶切、测序鉴定正确后，将P30-ROP2复合基因片段亚克隆至pET-30a(+)载体，构建成pET-30a-P30-ROP2质粒;转化大肠埃希菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达，表达蛋白用SDS-PAGE初步分析，Western blot分析鉴定。结果：提取弓形虫基因组DNA，PCR扩增出预期的p30片段(684bp)和rop2片段(1212bp);成功构建了TOPO-P30-ROP2质粒，以及重组表达质粒pET-30a-p30-rop2;测序结果表明：与GenBank报道的基因序列相比，p30基因有1个碱基发生同义突变;ROP2基因有2个碱基不同，导致1个编码氨基酸发生改变，但都没有改变原序列的开放阅读框架。pET30-P30-ROP2转化大肠埃希菌BL21(DE3)，经IPTG诱导后表达出了约75kDa的融合蛋白;Western blot分析鉴定证实该重组蛋白能被P30单克隆抗体识别。结论：pET-30a-P30-ROP2重组表达质粒的成功构建、P30ROP2重组蛋白的高效表达，为下步实验打下了基础。 2．重组耻垢分枝杆菌M.S-P30-ROP2载体活疫苗的构建及鉴定方法：重新设计带有所需酶切位点的引物，以构建成功pET-30a-P30-ROP2质粒为模板，PCR法扩增P30-ROP2复合基因片段，经琼脂糖凝胶回收纯化后，克隆至TOPO-TA克隆载体;通过酶切、测序鉴定正确后，将P30-ROP2复合基因片段亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体psTM3，构建成pSTM3-P30-ROP2质粒;电穿孔法转化耻垢分枝杆菌MC<'2>155，热诱导表达，表达蛋白用SDS-PAGE初步分析，Western blot分析鉴定;总之，本研究成功提取了弓形虫R

关键词：弓形虫 P30-ROP2复合基因重组耻垢分枝杆菌载体活疫苗免疫抑制剂弓形虫病防治

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一种产烟酸的游离型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

一种产烟酸的游离型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

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作者：王绪德周亚凤刘雪宾 200120 上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路780号4楼A座

本发明公开了一种产烟酸的游离型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法。本发明要求保护一种产烟酸的重组耻垢分枝杆菌，所述重组耻垢分枝杆菌含有重组游离型质粒，其中重组游离型质粒含有nudC基因，nudC基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。通... 详细信息

标准号: CN108330094A

本发明公开了一种产烟酸的游离型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法。本发明要求保护一种产烟酸的重组耻垢分枝杆菌，所述重组耻垢分枝杆菌含有重组游离型质粒，其中重组游离型质粒含有nudC基因，nudC基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。通过本发明制备得到的工程菌可以一步直接获得烟酸，而不依赖于添加3‑氰基吡啶，不仅避免了现有烟酸化学合成过程中的各种缺点，而且生产条件简单，无污染，简便易行，易放大，成本低，适合于大规模工业化生产应用，有很大的推广应用的价值。

关键词：烟酸重组耻垢分枝杆菌游离型质粒大规模工业化生产化学合成过程基因核苷酸氰基吡啶生产条件工程菌构建制备放大基因应用

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一种产烟酸的整合型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

一种产烟酸的整合型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

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作者：王绪德周亚凤刘雪宾 200120 上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路780号4楼A座

本发明公开了一种产烟酸的整合型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法。本发明要求保护一种产烟酸的重组耻垢分枝杆菌，其特征在于，所述重组耻垢分枝杆菌含有重组整合型质粒，其中重组整合型质粒含有nudC基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所... 详细信息

标准号: CN108384739A

本发明公开了一种产烟酸的整合型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法。本发明要求保护一种产烟酸的重组耻垢分枝杆菌，其特征在于，所述重组耻垢分枝杆菌含有重组整合型质粒，其中重组整合型质粒含有nudC基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。通过本发明制备得到的工程菌可以一步直接获得烟酸，而不依赖于添加3‑氰基吡啶，不仅避免了现有在烟酸化学合成过程中的各种缺点，而且生产条件简单，无污染，简便易行，易放大，成本低，适合于大规模工业化生产应用，有很大的推广应用的价值。

关键词：烟酸重组耻垢分枝杆菌整合型质粒大规模工业化生产化学合成过程核苷酸序列氰基吡啶生产条件工程菌构建制备放大基因应用

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一种产烟酸的游离型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

一种产烟酸的游离型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

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作者：王绪德周亚凤刘雪宾 200120 上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路780号4楼A座

标准号: CN108330094B

关键词：烟酸重组耻垢分枝杆菌游离型质粒大规模工业化生产化学合成过程基因核苷酸氰基吡啶生产条件工程菌构建制备放大基因应用

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一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌的构建及作为肿瘤疫苗和免疫佐剂的应用

一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌的构建及作为肿瘤疫苗和免疫佐剂...

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作者：刘宝瑞梅义 210008 江苏省南京市鼓楼区中山路321号

本发明提供一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌，所述免疫活化型重组耻垢分枝杆菌为胞内表达anti‑PD‑L1scfv与IL‑15融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗，该疫苗以耻垢分枝杆菌为宿主细胞，转染宿主细胞的表达载体为包含anti‑PD‑L1scfv和IL‑15... 详细信息

标准号: CN117070436A

本发明提供一种免疫活化型重组耻垢分枝杆菌，所述免疫活化型重组耻垢分枝杆菌为胞内表达anti‑PD‑L1scfv与IL‑15融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗，该疫苗以耻垢分枝杆菌为宿主细胞，转染宿主细胞的表达载体为包含anti‑PD‑L1scfv和IL‑15融合蛋白基因片段的表达载体。该重组耻垢分枝杆菌可在菌体相应位置表达anti‑PD‑L1scfv与IL‑15融合蛋白，成功构建后经实验验证，该重组耻垢分枝杆菌疫苗不仅可以有效阻断PD‑1与PD‑L1信号通路轴，而且能够有效活化T细胞，激活肿瘤杀伤功能。动物实验提示原位瘤内注射本发明的免疫活化型重组耻垢分枝杆菌具有抑制肿瘤乃至使肿瘤完全消失的效果，可用于制备肿瘤疫苗和免疫佐剂。

关键词：重组耻垢分枝杆菌活化型重组耻垢分枝杆菌疫苗表达载体融合蛋白肿瘤耻垢分枝杆菌融合蛋白基因制备肿瘤疫苗转染宿主细胞胞内表达动物实验免疫佐剂杀伤功能实验验证宿主细胞位置表达信号通路抑制肿瘤有效活化构建菌体可用注射提示疫苗激活成功

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一种产烟酸的超级重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

一种产烟酸的超级重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

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作者：詹玉心吴泽承周亚凤王绪德 528000 广东省佛山市禅城区江湾一路18号

本发明提供了一种产烟酸的超级重组耻垢分枝杆菌的构建方法，包括步骤：1)构建质粒pMHS‑NrtRms；2)构建质粒pHAGE‑NrtRms；3)制备重组TM4噬菌体；4)构建nrtRms基因缺失菌株耻垢分枝杆菌mc2100；5)nudC基因的扩增及构建质粒pMV361‑NudCms... 详细信息

标准号: CN110551748A

本发明提供了一种产烟酸的超级重组耻垢分枝杆菌的构建方法，包括步骤：1)构建质粒pMHS‑NrtR_ms；2)构建质粒pHAGE‑NrtR_ms；3)制备重组TM4噬菌体；4)构建nrtR_ms基因缺失菌株耻垢分枝杆菌mc²100；5)nudC基因的扩增及构建质粒pMV361‑NudC_ms；6)构建nrtR基因敲除/nudC基因过表达的超级重组耻垢分枝杆菌。本发明通过构建nrtR基因敲除且ncdC基因过表达制得超级重组耻垢分枝杆菌，通过本发明制备得到的工程菌可以一步直接获得烟酸，而不依赖于添加3‑氰基吡啶，不仅避免了现有在烟酸化学合成过程中的各种缺点，而且生产条件简单，无污染，简便易行，易放大，成本低，适合于大规模工业化生产应用，有很大的推广应用的价值。

关键词：构建重组耻垢分枝杆菌构建质粒烟酸基因过表达基因敲除制备大规模工业化生产耻垢分枝杆菌化学合成过程基因缺失菌株氰基吡啶生产条件工程菌噬菌体扩增放大基因应用

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一种产烟酸的整合型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

一种产烟酸的整合型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

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作者：王绪德周亚凤刘雪宾 200120 上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路780号4楼A座

标准号: CN108384739B

关键词：烟酸重组耻垢分枝杆菌整合型质粒大规模工业化生产化学合成过程核苷酸序列氰基吡啶生产条件工程菌构建制备放大基因应用

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