检索结果-内蒙古大学图书馆

AKT3基因重组腺病毒表达载体的构建及其对BT474乳腺导管癌细胞增殖的影响

医学分子生物学杂志 2014年第1期11卷 12-16页

作者：韩俊永林炎鸿黄俏佳南京军区福州总医院分子医学研究中心福州市350025

目的构建人AKT3基因的重组腺病毒表达载体，探究其对人乳腺导管癌细胞增殖的影响。方法应用RT-PCR方法从流产胎儿脑组织总RNA中扩增出AKT3eDNA，以XhoI及最g21I酶切位点克隆入腺病毒pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭载体，测序鉴定后与骨架载... 详细信息

目的构建人AKT3基因的重组腺病毒表达载体，探究其对人乳腺导管癌细胞增殖的影响。方法应用RT-PCR方法从流产胎儿脑组织总RNA中扩增出AKT3eDNA，以XhoI及最g21I酶切位点克隆入腺病毒pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭载体，测序鉴定后与骨架载体PAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组，获得重组腺病毒表达载体***3后，转染293A细胞，进行病毒的包装。荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光，测定病毒效价，Western印迹方法分析细胞内AKT3蛋白质的表达。通过MTr实验，研究AKT3过表达前后BT474乳腺导管癌细胞增殖的变化。结果重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误。重组腺病毒效价为2．6×10^8pfu／ml，重组腺病毒转导后，BT474乳腺导管癌细胞中可检测到AKT3的过表达：Western印迹检测结果显示AKT3融合蛋白在BT474细胞中表达良好。而转导空载体腺病毒及未转导细胞对照中未见有此融合蛋白质条带；MTr结果显示AKT3表达上调的重组腺病毒组，其增殖活性显著高于转导空载体腺病毒组及未转导细胞组，差异具有统计学意义（P〈0．01），而后两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功地构建了AKT3重组腺病毒表达载体，AKT3过表达可增强BT474乳腺导管癌的增殖，为进一步研究AKT3的功能奠定了基础。

关键词： Akt3 重组腺病毒表达载体基因表达 BT474细胞四唑盐比色测定

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FoxA1、Pdx1、Ngn3和Pax4/Nkx2.2重编程犬脂肪间充质干细胞成为胰岛素分泌细胞的研究

FoxA1、Pdx1、Ngn3和Pax4/Nkx2.2重编程犬脂肪间充质干细胞成为胰...

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作者：李佳锴西北农林科技大学

学位级别：硕士

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。目前临床上治疗糖尿病以注射外源胰岛素为主,但无法维持血糖长期稳定,并发症的风险依然存在。胰岛移植是解决这一难题的有效方法,但存在供体短缺、免疫排斥等问题。因此体外生成胰岛素分泌细胞... 详细信息

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。目前临床上治疗糖尿病以注射外源胰岛素为主,但无法维持血糖长期稳定,并发症的风险依然存在。胰岛移植是解决这一难题的有效方法,但存在供体短缺、免疫排斥等问题。因此体外生成胰岛素分泌细胞(insulin producing cells,IPCs)代替胰岛移植成为研究热点。脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)来源广泛,取材方便,免疫原性低,具有多向分化潜能,是新生IPCs比较理想的种子细胞。研究表明,ADSCs能够在体外诱导条件下分化为IPCs,但存在分化效率低,胰岛素分泌量少等缺点。在本实验室前期研究工作中,通过绝对定量转录组测序,筛选出体外诱导犬ADSCs向IPCs分化过程中新的差异表达基因FoxA1。为了验证FoxA1基因对体外犬ADSCs向IPCs分化的影响,本研究构建了FoxA1重组腺病毒表达载体,在293A细胞中包毒后,感染犬ADSCs,得到FoxA1基因过表达的ADSCs细胞株,结合体外诱导犬ADSCs向IPCs分化的程序,探究FoxA1基因过表达对体外犬ADSCs向IPCs分化的影响;通过构建FoxA1基因的siRNA载体,转染犬ADSCs,得到FoxA1基因干扰的ADSCs细胞株,结合体外诱导犬ADSCs向IPCs分化的程序,探究FoxA1基因干扰对体外犬ADSCs向IPCs分化的影响。胰腺发育级联调控关键基因(Pdx1、Ngn3、Pax4和Nkx2.2)单独或联合转入ADSCs,可诱导分化为IPCs,但往往分化效率不高,分化形成的IPCs不成熟。为进一步探究多基因联合转入犬ADSCs向IPCs分化的效率和分化形成的IPCs成熟度,本研究将FoxA1与Pdx1、Ngn3、Pax4、Nkx2.2基因构成不同的组合,分别为组合A:FoxA1+Pdx1+Ngn3、组合B:FoxA1+Pdx1+Ngn3+Pax4和组合C:FoxA1+Pdx1+Ngn3+Nkx2.2。在各基因序列后加入不同的2A肽序列,使用同源重组技术连接,构建多基因重组腺病毒载体,在293A细胞中包毒后,感染犬ADSCs,只经连续细胞培养,探究重编程犬ADSCs成为IPCs的最佳组合。主要结果如下:1、分别对FoxA1基因过表达和干扰的犬ADSCs诱导后细胞进行葡萄糖刺激分泌胰岛素试验和RT-qPCR检测胰岛β细胞相关基因的表达。发现与单纯诱导组细胞相比,FoxA1基因过表达组的细胞低糖刺激分泌胰岛素的量显著升高(p<0.05),高糖和KCl刺激分泌胰岛素的量均极显著升高(p<0.01),Pdx1、Mafa、Nkx6.1、Nkx2.2和Ins基因的表达极显著升高(p<0.01);FoxA1基因干扰组高糖和KCl刺激分泌胰岛素的量均极显著降低(p<0.01),Pdx1、Mafa、Nkx6.1、Pax4、Pcsk1、Pcsk2和Ins的表达极显著降低(p<0.01)。因此,FoxA1基因的表达促进体外犬ADSCs向IPCs的分化。2、分别对各组合联合转入犬ADSCs诱导向IPCs分化后的细胞进行成团数比较、双硫腙染色、葡萄糖刺激分泌胰岛素试验和RT-qPCR检测胰岛β细胞相关基因的表达。发现组合B和组合C的成团数显著高于组合A(p<0.05);组合B的低糖、高糖和KCl刺激分泌胰岛素的量均极显著高于组合A和组合C(p<0.01);组合B和组合C的Pdx1、Mafa、Nkx6.1、Pcsk2和Ins I基因的表达均极显著高于组合A(p<0.01)。因此,FoxA1、Pdx1、Pax4和Ngn3重编程犬ADSCs成为IPCs的效率最高,分化形成的IPCs最成熟。综上所述,FoxA1基因的表达促进体外犬ADSCs向IPCs的分化,FoxA1、Pdx1、Pax4和Ngn3可重编程犬ADSCs成为IPCs。

关键词：糖尿病脂肪间充质干细胞重组腺病毒表达载体胰岛素分泌细胞

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含有热休克蛋白HSP70C的用于促进汉坦病毒融合蛋白G2S0.7提呈的重组腺病毒表达载体

含有热休克蛋白HSP70C的用于促进汉坦病毒融合蛋白G2S0.7提呈的重...

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作者：徐志凯张芳琳白文涛李璞媛程林峰李凯吴兴安于澜张亮 710032 陕西省西安市长乐西路169号第四军医大学

本发明涉及含有热休克蛋白HSP70C的用于促进汉坦病毒融合蛋白G2S0.7提呈的重组腺病毒表达载体,主要是对含CAG启动子/增强子及汉坦病毒76-118株的G2S0.7的嵌合基因的G2S0.7-pCAG转移载体进行改建，用于促进机体对高表达的汉坦病毒融合蛋... 详细信息

标准号: CN102676582A

本发明涉及含有热休克蛋白HSP70C的用于促进汉坦病毒融合蛋白G2S0.7提呈的重组腺病毒表达载体,主要是对含CAG启动子/增强子及汉坦病毒76-118株的G2S0.7的嵌合基因的G2S0.7-pCAG转移载体进行改建，用于促进机体对高表达的汉坦病毒融合蛋白G2S0.7有效提呈。能有效提高实验动物机体的体液免疫应答水平和细胞免疫应答水平。

关键词：病毒融合蛋白应答重组腺病毒表达载体实验动物体液免疫细胞免疫启动子嵌合蛋白病毒改建基因转移

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腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对逆转卵巢癌顺铂耐药的效果

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武警医学 2019年第7期30卷 591-595页

作者：田丽娜徐福强姬力群刘小平单育杨菲菲陈静瞿全新北京市石景山医院妇产科 100043 中国科学院大学附属华北医院产科青岛062550 天津市第一中心医院妇产科 300001

目的探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达逆转卵巢癌顺铂耐药的效果。方法采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流式细胞仪检测等方法,绘制顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3/DDP细... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达逆转卵巢癌顺铂耐药的效果。方法采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流式细胞仪检测等方法,绘制顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3/DDP细胞感染重组病毒前后其顺铂的IC50值、细胞凋亡形态及细胞各周期的分布。结果(1)顺铂浓度与SKOV3/DDP细胞抑制率呈线性正相关,相关系数r=0. 9862(P <0. 05),顺铂IC50为(13. 93±0. 37)μg/ml,耐药指数为1. 79。(2)重组腺病毒感染后干扰ERCC1基因表达,SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性分别增加了11. 1%、16. 7%、26. 4%、33. 5%,呈剂量依懒性(r=0. 9716,P <0. 05),耐药指数降至1. 19。(3)重组腺病毒联合顺铂作用后,SKOV3/DDP细胞株G1期细胞比例增大,S期细胞比例增大,细胞凋亡率增高(P <0. 05)。结论干扰ERCC1基因表达可以通过诱导耐药肿瘤细胞SKOV3/DDP凋亡、调节细胞周期分布等途径逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药。

关键词：卵巢癌 ERCC1基因 RNA干扰顺铂重组腺病毒表达载体

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腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用

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武警医学 2018年第4期29卷 361-366页

作者：田丽娜瞿全新盛晓滨徐福强北京市石景山医院妇产科 100000 天津医科大学总医院妇科 300052

目的探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用。方法采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流失细胞仪检测等方法,绘制SKOV3细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3细胞感染重组病毒前后其顺铂的I... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用。方法采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流失细胞仪检测等方法,绘制SKOV3细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3细胞感染重组病毒前后其顺铂的IC50值、细胞凋亡形态及细胞各周期的分布。结果 (1)顺铂浓度与SKOV3细胞抑制率呈线性正相关,相关系数r=0.9905(P<0.05),顺铂IC50值为(7.76±0.37)μg/ml;腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达后,SKOV3细胞的生长受到一定程度的抑制;(2)与对照组相比,梯度浓度的重组腺病毒感染后,SKOV3细胞对顺铂的敏感性分别增加了9.4%、16.4%、23.2%、33.5%,呈剂量依懒性;(3)梯度滴度重组腺病毒表达载体联合顺铂作用于SKOV3细胞株,细胞凋亡显著增高;(4)重组腺病毒表达载体感染并联合顺铂用药,G1期细胞比例减小,S期细胞比例增大,细胞凋亡率进一步增高。结论重组腺病毒表达载体可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、调节肿瘤细胞周期分布等途径增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性。

关键词：卵巢癌 ERCC1基因 RNA干扰重组腺病毒表达载体

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高效包装与表达黑色素瘤分化相关基因-7的腺病毒构建方法

高效包装与表达黑色素瘤分化相关基因-7的腺病毒构建方法

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作者：张雅洁李书华 510000 广东省广州市越秀区东风西路195号之二十八806房

本发明提供一种高效包装与表达黑色素瘤分化相关基因-7的腺病毒构建方法，本发明采用属于腺病毒AdMaxTM的pDC316为载体，以此构建重组腺病毒表达载体代替最普及的AdEasy系统。与目前使用最普及的腺病毒AdEasy系统相比，腺病毒AdMaxTM系... 详细信息

标准号: CN104762323A

本发明提供一种高效包装与表达黑色素瘤分化相关基因-7的腺病毒构建方法，本发明采用属于腺病毒AdMax^TM的pDC316为载体，以此构建重组腺病毒表达载体代替最普及的AdEasy系统。与目前使用最普及的腺病毒AdEasy系统相比，腺病毒AdMax^TM系统具有操作简便、重组效率高、获得的病毒产率高（一般大于10⁴vp/cell）的特点。本发明以选择性诱导肿瘤细胞凋亡的黑色素瘤分化相关基因7（mda-7）为治疗基因，通过AdMax^TM系统包装mda-7基因构建了复制缺陷型腺病毒载体***，并证明其具有选择性诱导肺腺癌细胞株A549凋亡的功能，为肺腺癌的基因治疗奠定了良好的实验基础。

关键词：黑色素瘤相关基因病毒凋亡复制缺陷型腺病毒载体重组腺病毒表达载体肺腺癌细胞株诱导肿瘤细胞病毒产率病毒构建高效包装基因构建基因治疗实验基础治疗基因重组效率肺腺癌诱导大于

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IL-18BP/IL-4融合表达重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞经脾移植抑制ConA诱导的小鼠免疫性肝炎

IL-18BP/IL-4融合表达重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞经脾移植抑制...

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第二十四次全国中西医结合肝病学术会议

作者：姚航平程林芳吴晓鑫欧会林靳昌忠吴南屏浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心

目的:ConA诱导的小鼠肝炎模型是最常用来研究人类自身免疫性肝炎病理机制的理想模型。本文主要研究了白介素18结合蛋白/白介素4(IL-18BP/IL-4)融合表达重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞(***2)经脾移植,对ConA诱导的小鼠免疫性肝炎的治疗作... 详细信息

目的:ConA诱导的小鼠肝炎模型是最常用来研究人类自身免疫性肝炎病理机制的理想模型。本文主要研究了白介素18结合蛋白/白介素4(IL-18BP/IL-4)融合表达重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞(***2)经脾移植,对ConA诱导的小鼠免疫性肝炎的治疗作用及其分子机制。方法:用基因工程方法构建IL-18BP/IL-4融合表达重组腺病毒载体(Ad-IL-18BP/IL-4),并感染小鼠胎肝细胞***2。采用ELISA和Western blotting检测IL-4和IL-18BP在***2的表达,并将Ad-IL-18BP/IL-4基因转染的***2经脾移植至BALB/C小鼠。10天后,小鼠尾静脉注射ConA(剂量15mg/kg)。18小时后,小鼠被处死,留取各组小鼠的血清和肝组织。采用干式生化法检测血清转氨酶水平,HE染色分析肝脏的病理改变和肝损伤的程度。ELISA法检测小鼠血清和肝组织匀浆液中TNF-α,IL-18,IL-4,IL-10,IL-12p70和MCP-1水平;Western blott ing法分析肝组织NF-κB p65,AKT,p38-MAPK和JNK1/2的磷酸化水平。结果:Ad-IL-18BP/IL-4重组腺病毒能有效感染:***12,并在细胞内高效表达IL-18BP/IL-4融合蛋白,表达持续时间达2周。Ad-IL-18BP/IL-4基因修饰的胎肝细胞(Ad-IL-18BP/***2)经脾移植后,能有效地降低ConA注射所致的小鼠肝组织损伤,包括显著降低血清转氨酶(ALT、AST)的水平,明显改善肝脏的炎症和坏死。与对照组比较,Ad-IL-18BP/***2治疗组小鼠的血清和肝组织中TNF-α,IL-18,IL-12p70和MCP-1的表达水平显著降低,而IL-4和IL-10的水平较对照组升高。并且,治疗组小鼠的肝组织NF-κB p65,AKT,p38和JNKl/2信号分子的磷酸化水平显著受抑制。结论:Ad-IL-18BP/IL-4重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞经脾移植,能有效抑制ConA诱导的小鼠免疫性肝炎,减轻肝脏的损伤。本研究为将来靶向肝脏疾病的生物治疗提供可行的策略。

关键词：免疫性肝炎重组腺病毒表达载体细胞因子融合蛋白经脾移植基因治疗胎肝细胞

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表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒及其构建方法和应用

表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒及其构建方法和应用

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作者：于力周国辉杨德成王海伟 150001 黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号

本发明公开了表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒及其构建方法和应用。本发明在保证3C蛋白酶对口蹄疫病毒衣壳蛋白的剪切及正确组装和形成的前提下，对O型FMDV的3C基因进行改造或突变，构建3C蛋白酶活性改变的表达O型FMDV P1、2... 详细信息

标准号: CN104388437A

本发明公开了表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒及其构建方法和应用。本发明在保证3C蛋白酶对口蹄疫病毒衣壳蛋白的剪切及正确组装和形成的前提下，对O型FMDV的3C基因进行改造或突变，构建3C蛋白酶活性改变的表达O型FMDV P1、2A和3C亚基因组或其突变体的重组腺病毒表达载体，将其转染293细胞筛选获得两株稳定表达O型或O型突变株亚基因组且能正确形成空衣壳的重组腺病毒。两株重组腺病毒的3C蛋白酶活性呈明显下调，对细胞的毒力得以显著降低，有效提升了在动物体内的免疫原性和免疫保护效力的指标。本发明构建的两株重组腺病毒还可组合作为二价口蹄疫候选疫苗覆盖当前中国O型FMDV流行株的抗原谱。

关键词：重组腺病毒蛋白酶活性基因组空衣壳重组腺病毒表达载体病毒衣壳蛋白免疫保护效力蛋白酶口蹄疫病毒对口蹄疫发明构建免疫原性稳定表达细胞筛选剪切抗原谱突变体突变株毒力转染突变口蹄疫疫苗病毒细胞基因改造

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表达PTA基因的重组腺病毒及其制备方法

表达PTA基因的重组腺病毒及其制备方法

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作者：徐涛高永周伟 310018 浙江省杭州市下沙高教园区2号大街5号

本发明公开了一种含表达三叶半夏凝集素(Pinellia Ternate Agglutinin,PTA)基因重组腺病毒表达载体：将PTA基因依次插入pcDNA3.1+、入门载体pENTR1A，再利用体外重组技术体外重组pENTR1A-PTA和腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST，得到含PTA基... 详细信息

标准号: CN104031940A

本发明公开了一种含表达三叶半夏凝集素(Pinellia Ternate Agglutinin,PTA)基因重组腺病毒表达载体：将PTA基因依次插入pcDNA3.1+、入门载体pENTR1A，再利用体外重组技术体外重组pENTR1A-PTA和腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST，得到含PTA基因的重组腺病毒表达载体。本发明提供了一种高表达含PTA基因的重组腺病毒，为将来进一步探究一些肿瘤和自身免疫性等疾病的发病机理，并为这些病的临床诊断和治疗提供一种新颖基因治疗的方法。

关键词：体外重组基因重组腺病毒表达载体基因重组腺病毒临床诊断和治疗重组腺病毒自身免疫性表达载体病毒载体发病机理基因治疗凝集素半夏三叶肿瘤疾病

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显性负性突变体及microRNA下调STAT3信号分子对乳腺癌细胞的影响

显性负性突变体及microRNA下调STAT3信号分子对乳腺癌细胞的影响

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作者：唐浩重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：1.通过构建小鼠信号转导与转录激活因子3β（Signaltransducer and activator of transcriptions3β, Stat3β）基因重组腺病毒表达载体，感染小鼠乳腺癌细胞4T1并表达Stat3β基因，研究竞争性抑制4T1中STAT3信号通路，对小鼠乳... 详细信息

目的：1.通过构建小鼠信号转导与转录激活因子3β（Signaltransducer and activator of transcriptions3β, Stat3β）基因重组腺病毒表达载体，感染小鼠乳腺癌细胞4T1并表达Stat3β基因，研究竞争性抑制4T1中STAT3信号通路，对小鼠乳腺癌细胞的影响。 2.探讨miR17-5p对STAT3基因的调控作用，并通过抑制STAT3信号通路的影响，研究其对MCF-7增殖、凋亡、侵袭迁移能力的影响。方法：***Ⅲ、XbaⅠ双酶切载体pcDNA-Zeo-Stat3β-C4flag获得目的基因Stat3β，亚克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV，双酶切鉴定成功后经PmeⅠ酶切线性化后转化到含pAdEasy-1的BJ5183菌株中，重组载体经PacⅠ线性化后，在HEK293A细胞中进行包装，感染小鼠乳腺癌细胞，设立PBS对照组、pAdtrack空载对照组；经RT-PCR及WesternBlot检测目的基因Stat3β及STAT3信号通路下游基因c-myc、MMP2、MMP9及p-STAT3的表达情况，流式细胞术（FCM）检测4T1细胞周期及细胞凋亡情况，划痕实验检测4T1细胞的迁移能力，Transwell小室实验检测4T1细胞的侵袭能力。 2.利用生物信息学方法检测STAT3mRNA的3’UTR区的在脊椎动物间的保守性，预测调控STAT3基因表达水平的microRNA。选择miR17-5p作为研究对象，构建相应的luciferase载体用双荧光素酶报告系统验证miR17-5p能否直接靶向调节STAT33’UTR区；然后用miR17-5p mimics（microRNA模拟物）转染人乳腺癌细胞株MCF-7，mimics control和过表达STAT3恢复组作为对照，检测miR17-5p是否在转录后水平调控STAT3的表达，以及对STAT3信号通路相关蛋白的影响；通过Transwell系统检测miR17-5p对MCF-7细胞的迁移和侵袭能力的影响；流式细胞术（FCM）检测miR17-5p对MCF-7细胞周期和细胞凋亡的影响。结果：1.重组腺病毒载体构建成功，转染HEK293A细胞进行包装，可观察到GFP表达，测得病毒滴度为1.1×109pfu/ml，将包装成功后的重组腺病毒pAd-Stat3β感染小鼠4T1后，RT-PCR结果显示，处理组明显表达STAT3β，Western Blot结果显示STAT3β可明显下调4T1细胞c-myc、MMP2，MMP9蛋白水平，而对p-STAT3蛋白水平无明显影响。FCM结果显示，重组腺病毒pAd-Stat3β感染4T1细胞后，细胞周期和细胞凋亡情况无明显影响；划痕实验结果显示4T1细胞迁移能力无明显变化；Transwell小室侵袭实验结果表明4T1细胞侵袭能力明显下降。 2.生物信息学分析STAT3基因mRNA3’UTR区在人、马、兔等多种脊椎动物间高度保守；相应的luciferase载体构建成功，双荧光素酶报告系统显示miR17-5p能够通过直接靶向于STAT3基因mRNA3’UTR，调控报告基因luciferase的表达水平。人乳腺癌细胞MCF-7转染miR17-5p mimics后，RT-PCR和Western Blot的显示，miR17-5p对STAT3的mRNA无明显影响，但能调控STAT3的蛋白水平，说明miR17-5p于转录后水平调控STAT3基因的表达情况。Western Blot检测STAT3信号通路的相关蛋白，发现miR17-5p能够显著下调p-STAT3、MMP2、c-myc、Bcl2、vimentine的表达水平，显著上调CD31、AnnexinⅡ的表达情况，而对E-cadherin及MMP9的表达无显著影响。Transwell小室实验结果显示，miR17-5p对MCF-7细胞的迁移能力无显著影响，但能降低MCF-7细胞的侵袭能力；FCM结果显示miR17-5p能促进MCF-7细胞凋亡但对其细胞周期无显著影响。结论：1.成功构建重组腺病毒载体pAd-Stat3β，并在4T1细胞中表达目的基因Stat3β;过表达STAT3β后，可以竞争性抑制4T1细胞STAT3信号通路，抑制STAT3信号通路下游基因c-myc、MMP2、MMP9的表达，抑制4T1细胞的侵袭。 2. miR17-5p可通过与STAT3基因mRNA的3’UTR区互补结合而于转录后水平调控该基因的表达，通过下调STAT3信号通路的相关蛋白，抑制MCF-7细胞的侵袭并促进其凋亡，并影响肿瘤细胞上皮间质化转变(Epithelial to Meschymal Transition，EMT)某些标志物。

关键词：重组腺病毒表达载体乳腺癌信号转导与转录激活因子3 miR17-5p

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