检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2019年第4期39卷 256-263页

作者：张晓洁张春杰程相朝李银聚杨亚东郁川廖成水贾艳艳杜付玉河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室471023 洛阳职业技术学院微生物与食品检验实验室 471003

目的检测sseK2基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供新思路。方法首先通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除1 047 bp sseK2基因并成功构建缺失株及其回复株,进而检测... 详细信息

目的检测sseK2基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供新思路。方法首先通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除1 047 bp sseK2基因并成功构建缺失株及其回复株,进而检测其生物学和免疫学特性。结果PCR、双酶切及测序结果分析,证实构建了SL1344△sseK2缺失株及其回复株。生物学特性研究表明,缺失株SL1344△sseK2保留了亲本株SL1344的血清型1,4,[5],12:i:1,2,且能够稳定遗传缺失后的sseK2基因,生化特性和生长速度并未发生明显改变,但与亲本株SL1344相比,其毒力发生明显改变。缺失株SL1344△sseK2口服感染6周龄BALB/c小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD50)为3.44×10^8菌落形成单位(colony-forming units,CFU),毒力较亲本株SL1344降低了1 620倍。免疫保护效力试验显示,缺失株免疫17 d后对鼠伤寒沙门菌野生株攻毒小鼠的保护率为62.5%,小鼠免疫14 d后血清抗体IgG达到最高。回复株与亲本株生物学特性无显著性差异,基本回复到野生型水平。结论成功构建了SL1344△sseK2基因缺失株,其遗传稳定,毒力明显降低,且具有较好的免疫原性,推测sseK2对SL1344的毒力具有重要的调节作用,为探究该基因的功能及评估其作为用于减毒活疫苗的候选株提供参考。

关键词：鼠伤寒沙门菌SL1344 重组自杀性质粒缺失株SL1344△sseK2 回复株SL1344C-△sseK2 生物学特性

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减毒鸡白痢沙门氏菌ΔcrpC79-13株的构建及其对雏鸡的免疫活性

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中国兽医科学 2012年第1期42卷 19-25页

作者：程相朝郁川廖成水赵战勤张春杰李银聚吴庭才李小康李正河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003

为构建鸡白痢沙门氏菌C79-13株Δcrp基因缺失突变株,并初步观察ΔcrpC79-13缺失菌株作为活疫苗对雏鸡的免疫活性,将含缺失320bp crp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp与C79-13进行接合转移,两步法筛选出无抗性标记的ΔcrpC79-13缺失菌株;通... 详细信息

为构建鸡白痢沙门氏菌C79-13株Δcrp基因缺失突变株,并初步观察ΔcrpC79-13缺失菌株作为活疫苗对雏鸡的免疫活性,将含缺失320bp crp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp与C79-13进行接合转移,两步法筛选出无抗性标记的ΔcrpC79-13缺失菌株;通过半数致死量测定其毒力;给4日龄雏鸡口服免疫缺失菌株,在不同时间点根据胸腺、法氏囊、脾等免疫器官发育和平均日增重、外周血淋巴细胞转化试验、Griess法NO测定及血清IgG动态观察免疫水平。结果显示ΔcrpC79-13的毒力较C79-13降低约99.6%(LD50>5.0×109CFU);雏鸡接种ΔcrpC79-13(1.0×109 CFU/只)后不影响雏鸡生长,第14～21天体内特异性细胞和体液免疫水平达到最高。表明成功构建了减毒鸡白痢沙门氏菌ΔcrpC79-13株,其毒力显著降低,免疫雏鸡安全,具有良好的免疫活性。

关键词：鸡白痢沙门氏菌 crp基因重组自杀性质粒免疫

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鼠伤寒沙门菌双缺失株SL1344ΔcrpΔsipB的构建及其生物学特性的初步研究

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中国兽医科学 2015年第1期45卷 61-67页

作者：陈松彪李静颜云飞张春杰程相朝郁川何雷余祖华赵战勤河南省动物疫病与公共安全院士工作站河南洛阳471003 河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471003

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗候选株,在单缺失株SL1344Δcrp的基础上,运用自杀性质粒介导的细菌同源重组技术敲除sipB基因,构建了双缺失株SL1344ΔcrpΔsipB。PCR及测序结果表明SL1344ΔcrpΔsipB构建成... 详细信息

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗候选株,在单缺失株SL1344Δcrp的基础上,运用自杀性质粒介导的细菌同源重组技术敲除sipB基因,构建了双缺失株SL1344ΔcrpΔsipB。PCR及测序结果表明SL1344ΔcrpΔsipB构建成功。生物学特性研究表明,SL1344ΔcrpΔsipB血清型未发生变化,遗传性稳定。与亲本株SL1344相比,双缺失株的生长速度明显减慢,毒力降低了约99.9%以上。免疫保护效力试验显示,6周龄昆明小鼠口服免疫SL1344ΔcrpΔsipB后第17天,利用鼠伤寒沙门菌野生株攻毒,保护率为60%;免疫后第21天血清抗体效价达到峰值。上述结果为进一步研制安全有效的鼠伤寒沙门菌疫苗弱毒株奠定了基础。

关键词： SL1344Δcrp缺失株 SL1344ΔcrpΔsipB缺失株重组自杀性质粒毒力减毒活疫苗

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猪霍乱沙门氏菌C78-1株Δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究

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畜牧兽医学报 2010年第5期41卷 587-593页

作者：郁川程相朝赵战勤张春杰李银聚吴庭才河南科技大学动物科技学院洛阳471003

通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pR... 详细信息

通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pRE112上,构建含缺失320 bpcrp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术,两步法筛选C78-1的Δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明,缺失株的血清型与亲本菌株C78-1一致,且能够稳定遗传缺失的crp基因,但其生化特性和生长速度与C78-1相比发生明显改变,小鼠致死性试验结果表明其毒力较C78-1降低约750倍。以上结果均证实,作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失突变株,缺失株遗传稳定,毒力显著降低,为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。

关键词：猪霍乱沙门氏菌C78-1 crp基因重组自杀性质粒接合转移 Δcrp缺失株

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猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1的构建及其生物学特性比较

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中国兽医科学 2014年第8期44卷 781-788页

作者：张俊峰张春杰程相朝尚珂陈松彪张明亮郁川何雷赵战勤河南省动物疫病与公共安全院士工作站河南洛阳471003 河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471003

为开发更加安全有效且遗传背景清晰的减毒猪霍乱沙门菌活疫苗,运用自杀性质粒介导的等位交换技术缺失cya基因,分别构建猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1,并将两者的生物学特性与ΔcrpC78-1和疫苗株C500进行比较。以猪霍... 详细信息

为开发更加安全有效且遗传背景清晰的减毒猪霍乱沙门菌活疫苗,运用自杀性质粒介导的等位交换技术缺失cya基因,分别构建猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1,并将两者的生物学特性与ΔcrpC78-1和疫苗株C500进行比较。以猪霍乱沙门菌C78-1为模板,分别扩增cya基因的上臂和下臂,然后通过中间转移载体pBluescriptⅡSK(+)克隆至自杀性质粒pRE112中,构建重组自杀性质粒pREΔcya,再与C78-1和ΔcrpC78-1分别进行接合转移,通过两步法筛选ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1。PCR及测序结果表明,ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1构建成功。生物学特性检测结果表明,所构建的ΔcyaC78-1和ΔcrpΔcyaC78-1的血清型和生化特性与ΔcrpC78-1保持一致,并能够稳定遗传Δcya基因;两者的生长速度明显慢于疫苗株C500,且ΔcrpΔcyaC78-1的生长速度最慢。小鼠毒力试验表明,ΔcyaC78-1的毒力高于ΔcrpC78-1约1.7倍,较疫苗菌株C500下降至58.2%,但ΔcrpΔcyaC78-1的毒力较ΔcrpC78-1下降至0.194%,较C500下降至0.065%。构建的猪霍乱沙门菌缺失株ΔcyaC78-1、ΔcrpΔcyaC78-1遗传稳定,背景清晰,毒力降低,尤其是ΔcrpΔcyaC78-1双缺失株的毒力较疫苗株C500降低显著,为筛选更加高效的减毒猪霍乱沙门菌疫苗和进一步开发适用于猪的口服活疫苗载体奠定了良好基础。

关键词：猪霍乱沙门菌 ΔcyaC78-1 ΔcrpΔcyaC78-1 重组自杀性质粒毒力生物学特性减毒活疫苗

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鼠伤寒沙门菌SL1344株ΔcrpΔasd缺失株的构建及生物学特性初步研究

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中国兽医学报 2013年第11期33卷 1700-1706页

作者：田芳华程相朝张春杰李银聚李静张明亮李小康李正赵战勤河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003

构建鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以χ7213(pREΔasd)为供体菌,SL1344Δcrp为受体菌进行结合转移,通过自杀性质粒介导的等位交换技术两步法筛选SL1344的ΔcrpΔasd双缺失株。该缺... 详细信息

构建鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以χ7213(pREΔasd)为供体菌,SL1344Δcrp为受体菌进行结合转移,通过自杀性质粒介导的等位交换技术两步法筛选SL1344的ΔcrpΔasd双缺失株。该缺失株在有外源DAP的存在下能够正常生长,且能稳定遗传缺失的asd基因;其血清型与亲本株SL1344Δcrp及强毒株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相同,但与强毒株相比变化较明显,且生长速度明显减慢;雏鸡毒力试验结果表明其毒力较SL1344降低约105倍。鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd缺失株构建成功,为进一步开发以鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌 asd平衡致死系统重组自杀性质粒活疫苗载体

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猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd缺失株平衡致死载体系统的构建及生物学特性研究

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中国兽医科学 2012年第4期42卷 373-379页

作者：张明亮张春杰程相朝赵战勤李正王慧郁川河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为开发减毒猪霍乱沙门氏菌的活疫苗载体,通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd双基因缺失株,并对其生物学特性进行探讨。首先构建含有缺失1 488bp asd基因的重组自杀性质粒pREΔasd,然后与已构... 详细信息

为开发减毒猪霍乱沙门氏菌的活疫苗载体,通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd双基因缺失株,并对其生物学特性进行探讨。首先构建含有缺失1 488bp asd基因的重组自杀性质粒pREΔasd,然后与已构建完成的ΔcrpC78-1缺失株进行接合转移,采用两步法筛选无抗性的C78-1的ΔcrpΔasd双缺失株。PCR鉴定结果表明,C78-1的ΔcrpΔasd双缺失株构建成功;进一步研究表明,该缺失株的生长需要外源的二氨基庚二酸(DAP),且能稳定遗传缺失的asd基因,与C78-1相比,其血清型未发生变化,但其生长速度明显减慢。ΔcrpΔasd C78-1双缺失株可接受asd+质粒作为宿主平衡致死系统高效稳定地表达外源基因,为开发以C78-1为载体的口服多价疫苗奠定了基础。

关键词：猪霍乱沙门氏菌C78-1株 Asd+平衡致死系统重组自杀性质粒活疫苗载体

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鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd平衡致死系统的构建及其生物学特性的研究

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中国免疫学杂志 2014年第8期30卷 1083-1087,1092页

作者：陈松彪李静尚珂郁川张春杰程相朝李银聚赵战勤河南省动物疫病与公共安全院士工作站/河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003

目的:为了研制更加安全的鸡白痢沙门菌弱毒株,并将其开发为疫苗活载体。方法:本研究构建了鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd缺失株。双基因缺失株的构建是以含有重组自杀性质粒pREΔasd的大肠杆菌χ7213为供体菌,C79-13Δcrp为受体菌进行... 详细信息

目的:为了研制更加安全的鸡白痢沙门菌弱毒株,并将其开发为疫苗活载体。方法:本研究构建了鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd缺失株。双基因缺失株的构建是以含有重组自杀性质粒pREΔasd的大肠杆菌χ7213为供体菌,C79-13Δcrp为受体菌进行接合转移,两步法筛选crp/asd基因双缺失突变株。结果:PCR及测序结果表明C79-13ΔcrpΔasd构建成功。进一步研究表明,该缺失株的生长需要外源的二氨基庚二酸(DAP),且能稳定遗传缺失的asd基因,与亲本株C79-13相比,其血清型未发生变化,但其生长速度明显减慢,毒力明显降低。结论:C79-13ΔcrpΔasd双缺失株可接受asd+质粒作为宿主平衡致死系统高效稳定地表达外源基因,并为研制安全有效的鸡白痢沙门菌疫苗弱毒株以及进一步将其开发为适于黏膜免疫的口服活载体疫苗奠定了基础。

关键词：鸡白痢沙门菌C79-13 asd+平衡致死系统重组自杀性质粒活疫苗载体

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鼠伤寒沙门氏菌SL1344株△crp△cya缺失株的构建及其生物学特性初步研究

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 534-538页

作者：李正程相朝张春杰李银聚李静张明亮田芳华杨宁宁河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003

为研制更加安全并保持良好免疫原性的弱毒株鼠伤寒沙门氏菌(***)及疫苗活载体,本研究通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,将已缺失cya基因的SL1344株进一步缺失crp基因,构建***-murium SL1344△crp△cya双基因缺失突变株,并对其生物... 详细信息

为研制更加安全并保持良好免疫原性的弱毒株鼠伤寒沙门氏菌(***)及疫苗活载体,本研究通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,将已缺失cya基因的SL1344株进一步缺失crp基因,构建***-murium SL1344△crp△cya双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。双基因缺失株的构建是以含有重组自杀性质粒pRE△crp的大肠杆菌χ7213为供体菌,SL1344△cya为受体菌进行接合转移,两步法筛选crp/cya基因双缺失突变株,并通过PCR和测序鉴定。对双缺失菌株的生物学特性鉴定表明,SL1344△crp△cya血清型与亲本株SL1344△cya及野生株SL1344保持一致,并且能够稳定遗传缺失后的crp基因;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化,生长速度也更为缓慢;对雏鸡致病性测定试验显示,双缺失株毒力比SL1344至少降低了约106倍。实验结果表明,*** SL1344△crp△cya缺失株具有良好的遗传稳定性,毒力明显降低,为深入研究以***为载体的口服疫苗奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌SL1344 crp/cya基因双缺失重组自杀性质粒

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鼠伤寒沙门菌SL1344株分泌性蛋白K1缺失株的构建及其生物学特性的初步研究

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中国兽医科学 2017年第9期47卷 1087-1093页

作者：杨亚东张春杰程相朝丁轲李银聚郁川廖成水陈松彪王二鑫张晓洁河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471023

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株,本研究首先构建了含缺失1 011 bp sseK1基因的重组自杀性质粒PREΔsseK1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选SL1344的sseK1缺失株。PCR、双酶切及测... 详细信息

为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(***)疫苗弱毒株,本研究首先构建了含缺失1 011 bp sseK1基因的重组自杀性质粒PREΔsseK1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选SL1344的sseK1缺失株。PCR、双酶切及测序结果表明SL1344ΔsseK1构建成功。生物学特性初步研究表明,与亲本菌株SL1344相比,缺失株SL1344ΔsseK1保留了亲本株SL1344的血清型1,4,5,12∶i∶1,2,且能够稳定遗传缺失后的sseK1基因,生长速度及生化特性没有发生明显改变。小鼠毒力试验表明,SL1344ΔsseK1缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD_(50)为6.63×10~8CFU,毒力较亲本株SL1344下降至0.048%。免疫保护效力试验显示,小鼠免疫后第14天血清抗体Ig G含量达到最高,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率。以上研究结果表明,SL1344株sseK1基因缺失株构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为研究sseK1基因的致病机制及将其开发为更加安全有效的沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定了基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌SL1344 重组自杀性质粒 sseK1基因生物学特性

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