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中华医学会临床药学分会2014年全国学术会议

作者：张敏张远童荣生四川省人民医院药剂科

目的构建HMGN2重组表达载体,探讨HMGN2分子的抗HBV作用。方法用基因克隆的方法构建pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导表达后,采用亲和层析的方法纯化His-HMGN2融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳、Western blotting对纯化得到的HM... 详细信息

目的构建HMGN2重组表达载体,探讨HMGN2分子的抗HBV作用。方法用基因克隆的方法构建pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导表达后,采用亲和层析的方法纯化His-HMGN2融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳、Western blotting对纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。以HBV DNA

关键词： HMGN2 抗乙型肝炎病毒重组表达质粒

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刚地弓形虫RH株pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒的构建与鉴定

刚地弓形虫RH株pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒的构建与鉴定

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中华医学会第十一次全国临床微生物学术年会暨全球华人临床微生物与感染症学会学术论坛暨第四届国际临床微生物及抗微生物化疗学术会议(4th SICCMAC)

作者：郭玲玲张进顺张晓磊贾晓晖河北北方学院

目的克隆刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,***)RH株棒状体蛋白18(ROP18)及ROP12的基因,构建pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒。方法从4～6周龄感染刚地弓形虫RH株3～4天的昆明小鼠腹腔提取弓形虫速殖子,并提取其总RNA。根据***18基因全... 详细信息

目的克隆刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,***)RH株棒状体蛋白18(ROP18)及ROP12的基因,构建pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒。方法从4～6周龄感染刚地弓形虫RH株3～4天的昆明小鼠腹腔提取弓形虫速殖子,并提取其总RNA。根据***18基因全长编码序列(GenBank登陆号为DQ096559.1)和***12基因全长编码序列(GenBank登录号为AM075204.1)设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩

关键词：刚地弓形虫 GenBank pVAX1-ROP18-ROP12 ROP 重组表达质粒

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酒酒球菌mleA基因重组表达质粒pYELmleA的构建及其在酿酒酵母中的表达

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中国农学通报 2005年第4期21卷 48-52页

作者：刘延琳蒋思欣何秀萍李华张博润西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100 中国科学院微生物研究所北京100080

苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶.笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建,利用来自重组质粒pLmleA的mleA基因,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒p... 详细信息

苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶.笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建,利用来自重组质粒pLmleA的mleA基因,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒pYELmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58.酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定.SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白,斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中.获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d;取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量,采用t检验进行差异显著性分析,结果表明nleA基因进行了功能性的表达,将L-苹果酸转化成L-乳酸,L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著,L-乳酸的生成量为1002-1106mg/L,苹果酸的相对降低率为19.16-22.34%.

关键词：重组表达质粒 leA基因酿酒酵母构建球菌 L-苹果酸乳酸含量 L-乳酸显著性分析转化子重组质粒调控元件强启动子穿梭质粒大肠杆菌筛选鉴定 PAGE 目的基因杂交检测 HPLC MLF 酶基因终止子酵母菌亮氨酸色氨酸

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Ghrelin重组表达质粒体内表达及其对断奶大鼠胃酸分泌的调节作用

Ghrelin重组表达质粒体内表达及其对断奶大鼠胃酸分泌的调节作用

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全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十三次学术交流会

作者：杜改梅刘茂军胡志华罗碧平晏文梅蒋加进金陵科技学院动物科学与技术学院江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

Ghrelin是一种对胃生长和功能发育具有调节作用的小肽。本研究旨在阐明重组Ghrelin表达质粒调节胃酸分泌的作用,我们采用RT-PCR的方法从断奶仔猪胃底粘膜组织中扩增出Ghrelin,然后克隆到表达载体pcDNA3中,通过肌肉内注射重组表达质粒的... 详细信息

Ghrelin是一种对胃生长和功能发育具有调节作用的小肽。本研究旨在阐明重组Ghrelin表达质粒调节胃酸分泌的作用,我们采用RT-PCR的方法从断奶仔猪胃底粘膜组织中扩增出Ghrelin,然后克隆到表达载体pcDNA3中,通过肌肉内注射重组表达质粒的方法,来研究其体内表达和调节胃酸分泌的作用。20只21日龄断大鼠随机分成2组,对照组和试验组,每组10只。试验组以每只

关键词：重组表达质粒胃酸分泌空质粒断奶大鼠 Ghrelin 体内表达

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乙肝病毒S／前S抗原的重组表达质粒对HBV转基因小鼠的免疫治疗效应

乙肝病毒S／前S抗原的重组表达质粒对HBV转基因小鼠的免疫治疗效应

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中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议

乙型肝炎病毒(HBV)前S抗原在HBV感染后的免疫清除方面发挥重要的作用。HBV基因组的前 S1区和前S2区都包含HBV与肝细胞膜的亲和区,与HBV感染、复制及感染后的免疫清除密切相关。其中,前S1含有多个T细胞抗原表位,而前S2抗原分子量小,抗原... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)前S抗原在HBV感染后的免疫清除方面发挥重要的作用。HBV基因组的前 S1区和前S2区都包含HBV与肝细胞膜的亲和区,与HBV感染、复制及感染后的免疫清除密切相关。其中,前S1含有多个T细胞抗原表位,而前S2抗原分子量小,抗原表位少但免疫原性强。为进一步了解含有HBV前S抗原的乙肝基因疫苗对HBV慢性携带者是否具有治疗效应,作者以能表达乙肝表面抗原

关键词： HBV 小鼠血清乙肝基因疫苗免疫清除抗原表达免疫治疗重组表达质粒

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末端脱氧核苷酸转移酶突变体、其编码基因、重组表达质粒和基因工程菌

末端脱氧核苷酸转移酶突变体、其编码基因、重组表达质粒和基因工...

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作者：宋东亮胡慧芳孙瑶刘想 200120 上海市浦东新区天雄路166弄1号楼402室

本发明公开了一种热稳定性提高的末端脱氧核苷酸转移酶突变体，对如SEQ ID NO.1所示的野生型末端脱氧核苷酸转移酶的氨基酸序列的位点进行突变，获得N135P、S138H、Q229D、K232D、L234R、V366M六位点突变的突变体。还公开了其编码基因... 详细信息

标准号: CN114921436B

本发明公开了一种热稳定性提高的末端脱氧核苷酸转移酶突变体，对如SEQ ID NO.1所示的野生型末端脱氧核苷酸转移酶的氨基酸序列的位点进行突变，获得N135P、S138H、Q229D、K232D、L234R、V366M六位点突变的突变体。还公开了其编码基因、重组表达质粒和基因工程菌。本发明的末端脱氧核苷酸转移酶突变体，可以显著提高末端脱氧核苷酸转移酶的热稳定性，提高了其与3’‑OH端修饰的核苷酸的结合效率，该突变体可以取代野生型TdT发挥作用，可以应用在基因合成和信息存储领域。

关键词：末端脱氧核苷酸转移酶突变体热稳定性野生型重组表达质粒氨基酸序列基因工程菌编码基因基因合成位点突变信息存储核苷酸位点修饰突变应用

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一种烷基辅酶M还原酶重组表达质粒转化产甲烷古菌的方法

一种烷基辅酶M还原酶重组表达质粒转化产甲烷古菌的方法

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作者：茶桂宏承磊白丽萍代丽蓉冷欢杨清 610000 四川省成都市武侯区人民南路四段13号

本发明公开了一种烷基辅酶M还原酶重组表达质粒转化产甲烷古菌的方法，属于厌氧微生物技术领域，其中，在制备原生质体时采用聚乙二醇8000与醋酸锂进行处理，优选还采用二硫苏糖醇与蔗糖处理；本发明提供了一种全新的产甲烷古菌原生质... 详细信息

标准号: CN113528413A

本发明公开了一种烷基辅酶M还原酶重组表达质粒转化产甲烷古菌的方法，属于厌氧微生物技术领域，其中，在制备原生质体时采用聚乙二醇8000与醋酸锂进行处理，优选还采用二硫苏糖醇与蔗糖处理；本发明提供了一种全新的产甲烷古菌原生质体的制备方法，其转化效率高达1×10⁶CFU/μg质粒DNA，从而可以将大片段基因或质粒顺利转化到产甲烷古菌细胞中进行有效的基因编辑，并且能实现快速、准确、稳定地大规模定性和定量，为烷基辅酶M还原酶后续代谢途径的研究提供基础。

关键词：产甲烷古菌烷基原生质体还原酶辅酶制备重组表达质粒大片段基因二硫苏糖醇厌氧微生物代谢途径聚乙二醇蔗糖处理转化效率质粒DNA 醋酸锂质粒优选转化定性细胞基因研究

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重组表达质粒构建透明质酸工程菌株的方法及应用

重组表达质粒构建透明质酸工程菌株的方法及应用

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作者：杨艮江晓路张京良 273299 山东省济宁市泗水县经济开发区泉福路16号

本发明公开了一种重组表达质粒构建透明质酸工程菌株及使用方法，属于生物活性物质提取技术领域，其特征在于重组表达质粒包含一段编码重组型蛋白表达产物基因的聚核苷酸；编码重组型蛋白表达产物基因的聚核苷酸包括在宿主细胞中表达蛋... 详细信息

标准号: CN113151336A

本发明公开了一种重组表达质粒构建透明质酸工程菌株及使用方法，属于生物活性物质提取技术领域，其特征在于重组表达质粒包含一段编码重组型蛋白表达产物基因的聚核苷酸；编码重组型蛋白表达产物基因的聚核苷酸包括在宿主细胞中表达蛋白酶基因的聚核苷酸；通过发酵制备高分子透明质酸发酵液，包括破壁工序、分离工序、提取工序和水解工序，本发明的有益效果是：几丁质酶进行破壁处理，利用产蛋白酶将糖蛋白变性水解后与透明质酸脱离；而分离后的透明质酸能够顺利通过细胞膜到细胞膜外，达到了将糖蛋白变性后与透明质酸分离的目的，规避了因内容物释放导致透明质酸酶水解效率差和杂质难以处理的问题，保证了低分子透明质酸高收率和低蛋白杂质。

关键词：透明质酸聚核苷酸水解细胞膜蛋白表达产物编码重组糖蛋白变性重组表达质粒构建低分子透明质酸高分子透明质酸生物活性物质重组表达质粒蛋白酶蛋白酶基因透明质酸酶分离工序工程菌株几丁质酶破壁处理宿主细胞基因低蛋白发酵液内容物破壁收率制备发酵释放脱离保证

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用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方法

用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方...

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作者：梁争论陈盼吴星李文辉隋建华 100050 北京市崇文区天坛西里2号

本发明涉及用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方法。包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒，分别命名为pEGFP‑CV‑B5(417)质粒和pCVB3‑复制子，pEGFP‑CV‑B5(417)质粒表达的CV‑B5结构蛋白在细胞中可以包装pCV... 详细信息

标准号: CN106884017A

本发明涉及用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方法。包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒，分别命名为pEGFP‑CV‑B5(417)质粒和pCVB3‑复制子，pEGFP‑CV‑B5(417)质粒表达的CV‑B5结构蛋白在细胞中可以包装pCVB3‑复制子转录的CV‑B3亚基因组RNA，从而产生CV‑B5假病毒，该假病毒可以用来检测中和抗体，由于采用了单周期感染的假病毒，所以没有使用活病毒时的安全问题。经过多个试验，其结果表明本发明公开了一种安全，灵敏，快速，特异，简便且成本低廉的检测CV‑B5中和抗体的方法。基于以上特点，本发明非常适合于快速，大规模地检测中和抗体的试验，对于病毒疫苗的研制及检测患者个体及人群CV‑B5特异性中和抗体水平有着重要的应用价值。

关键词：假病毒中和抗体重组表达质粒检测柯萨奇病毒复制子特异性中和抗体亚基因组RNA 安全问题病毒疫苗结构蛋白质粒表达转录单周期活病毒试剂盒试验质粒灵敏细胞感染人群应用安全

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重组表达质粒构建透明质酸工程菌株的方法及应用

重组表达质粒构建透明质酸工程菌株的方法及应用

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作者：杨艮江晓路张京良 273299 山东省济宁市泗水县经济开发区泉福路16号

标准号: CN113151336B

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