检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：黄金光孙晓梅 266109 山东省青岛市城阳区长城路700号

本发明公开了一种构建多位点突变重组表达质粒的高效方法，包括如下步骤：将表达质粒pHAT2用双酶切方法采用两种限制性内切酶NcoI和XhoI酶切产生带有粘性末端5’-CATG-3’和5’-AGCT-3’线性片段，回收线性化质粒片段备用；PCR引物设计... 详细信息

标准号: CN105002200A

本发明公开了一种构建多位点突变重组表达质粒的高效方法，包括如下步骤：将表达质粒pHAT2用双酶切方法采用两种限制性内切酶NcoI和XhoI酶切产生带有粘性末端5’-CATG-3’和5’-AGCT-3’线性片段，回收线性化质粒片段备用；PCR引物设计；进行三轮PCR反应得到突变表达载体；进行连接反应；构建突变表达载体。本发明具有突变率高、简单易行的特点。

关键词：突变表达构建突变限制性内切酶重组表达质粒线性化质粒表达质粒进行连接粘性末端多位点双酶切两种一种备用回收反应设计公开产生进行

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一种重组表达质粒及其制备方法、用途

一种重组表达质粒及其制备方法、用途

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作者：昌增益刘洋余家钰 100871 北京市海淀区颐和园路5号

本发明属于微生物学、基因工程和蛋白质工程领域，具体提供了一种重组表达质粒及其制备方法、用途，重组表达质粒包含：溶菌酶基因和核酸酶基因；核酸酶基因包括核酸酶基因序列和编码膜间质定位信号肽的基因序列；重组表达质粒可以稳定... 详细信息

标准号: CN108220317B

本发明属于微生物学、基因工程和蛋白质工程领域，具体提供了一种重组表达质粒及其制备方法、用途，重组表达质粒包含：溶菌酶基因和核酸酶基因；核酸酶基因包括核酸酶基因序列和编码膜间质定位信号肽的基因序列；重组表达质粒可以稳定表达溶菌酶并积累在细胞质内，稳定表达的核酸酶积累在膜间质的空间中，两者的表达积累并不干扰菌体正常生长和目的蛋白的表达积累。当释放目的蛋白时，改变宿主细胞的通透性，溶菌酶进入膜间质空间中降解肽聚糖层，核酸酶进入细胞质中降解基因组核酸和质粒，使宿主细胞稳定可控发生自溶释放细胞内目的蛋白，同时降解所释放的核酸，时间短，释放目的蛋白的效率高，且无需使用昂贵的仪器或添加额外的溶菌酶，成本低。

关键词：目的蛋白重组表达质粒核酸酶基因溶菌酶间质降解释放细胞质宿主细胞稳定表达积累核酸酶蛋白质工程基因组核酸溶菌酶基因定位信号基因工程基因序列肽聚糖层通透性核酸菌体可控质粒自溶制备细胞生长

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在蜂房哈夫尼菌中稳定的重组表达质粒载体及其应用

在蜂房哈夫尼菌中稳定的重组表达质粒载体及其应用

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作者：庞振华李乃强刘驰 201203 上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路1690号5幢4楼

本发明涉及一种通过将重组质粒载体转移进入蜂房哈夫尼菌宿主细胞而获得的转化子，其中所述重组表达质粒载体包括一段编码多肽表达产物的聚核苷酸，并由在蜂房哈夫尼菌中可复制骨架质粒衍生而成。本发明还涉及利用该转化子制造生物基戊... 详细信息

标准号: CN103667167A

本发明涉及一种通过将重组质粒载体转移进入蜂房哈夫尼菌宿主细胞而获得的转化子，其中所述重组表达质粒载体包括一段编码多肽表达产物的聚核苷酸，并由在蜂房哈夫尼菌中可复制骨架质粒衍生而成。本发明还涉及利用该转化子制造生物基戊二胺的方法。

关键词：蜂房哈夫尼菌转化子重组表达质粒重组质粒载体编码多肽骨架质粒宿主细胞核苷酸生物基转移

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一种核糖体结合位点、重组表达质粒、转化子及其应用

一种核糖体结合位点、重组表达质粒、转化子及其应用

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作者：陈玲周豪宏刘修才 200120 上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路1690号5号楼

本发明第一方面涉及一种核糖体结合位点，第二方面涉及包含这种核糖体结合位点的重组表达质粒，第三方面涉及包含所述重组表达质粒的转化子，本发明还涉及这种转化子在发酵生产多肽，以及进一步发酵生产1,5‑戊二胺的方面的应用。本发明... 详细信息

标准号: CN108456669A

本发明第一方面涉及一种核糖体结合位点，第二方面涉及包含这种核糖体结合位点的重组表达质粒，第三方面涉及包含所述重组表达质粒的转化子，本发明还涉及这种转化子在发酵生产多肽，以及进一步发酵生产1,5‑戊二胺的方面的应用。本发明的技术要点在于所述核糖体结合位点的序列5’‑3’包含如下所示的序列之一：a)、GAGAGGAGGA；b)、AAGGGAAATT；c)、TTAAAGAGGG。本发明解决了目前的菌株的赖氨酸脱羧酶的表达量低，菌株体外转化赖氨酸的时间长的技术问题。

关键词：核糖体结合位点重组表达质粒转化子菌株发酵赖氨酸脱羧酶技术要点体外转化表达量赖氨酸多肽二胺生产应用

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一种缺氧诱导因子重组表达质粒转染树突状细胞的方法

一种缺氧诱导因子重组表达质粒转染树突状细胞的方法

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作者：邓武 712000 陕西省咸阳市西咸新区沣西新城西部云谷1期E1栋10楼

本发明提供了一种缺氧诱导因子重组表达质粒转染树突状细胞的方法，涉及细胞生物学技术领域。本发明提供的方法，包括：将树突状细胞、液体培养基、缺氧诱导因子重组表达质粒和脂质体溶液混合后，静置，得到转染体系混合液树突状细胞培... 详细信息

标准号: CN111748581A

本发明提供了一种缺氧诱导因子重组表达质粒转染树突状细胞的方法，涉及细胞生物学技术领域。本发明提供的方法，包括：将树突状细胞、液体培养基、缺氧诱导因子重组表达质粒和脂质体溶液混合后，静置，得到转染体系混合液树突状细胞培养液；将所述转染体系混合液和液体培养基、细胞因子混合，得到混合物，将所述混合物进行培养，得到转染细胞。利用本发明提供的转染方法，通过将树突状细胞过表达Hif‑1α基因，可显著缩短树突状细胞成熟和活化所需时间，并且提高树突状细胞抗原提呈及对T细胞激活的能力。

关键词：树突状细胞缺氧诱导因子重组表达质粒液体培养基转染体系混合液转染培养液树突状细胞成熟细胞生物学技术得到混合物脂质体溶液抗原提呈细胞因子转染细胞混合物活化

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在蜂房哈夫尼菌中稳定的重组表达质粒载体及其应用

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药物生物技术 2015年第4期22卷 311-311页

本发明所公开的内容涉及到一个稳定的重组表达质粒载体，包括一段编码重组型抗毒素基因的聚核苷酸，其表达一种多肽，来中和对宿主细胞有毒的多肽，该有毒的多肽由一段编码毒素基因的聚核苷酸在宿主细胞中表达；一段编码多肽表达产物的... 详细信息

本发明所公开的内容涉及到一个稳定的重组表达质粒载体，包括一段编码重组型抗毒素基因的聚核苷酸，其表达一种多肽，来中和对宿主细胞有毒的多肽，该有毒的多肽由一段编码毒素基因的聚核苷酸在宿主细胞中表达；一段编码多肽表达产物的聚核苷酸，其中，该稳定的重组表达质粒载体由在蜂房哈夫尼菌中可复制骨架质粒衍生而成。本发明所公开的内容还包括带有上述稳定的重组表达质粒的转化子，和利用该转化子制造生物基戊二胺的方法，以及按本发明所述方法制备的生物基戊二胺。本发明公开的内容还包括用上述方法制造的生物基戊二胺为原料制造的聚酰胺及含有该物质的组合物。本发明公开的内容也包括制备五亚甲基-1，5-异氰酸酯的方法，包括用本发明中的方法制备生物基戊二胺，再将生物基戊二胺转化为五亚甲基-1，5-异氰酸酯。

关键词：重组表达质粒蜂房哈夫尼菌质粒载体制备生物编码多肽应用毒素基因宿主细胞

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猪白介素-4重组表达质粒在小鼠体内的组织分布及环境释放安全性

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中国兽医学报 2009年第5期29卷 546-550页

作者：蒙学莲景志忠房永祥窦永喜陈国华贾怀杰段凤云才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了探讨pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒作为疫苗佐剂进入临床应用的生物安全性,本试验就pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒在小鼠体内的组织分布和环境释放安全性进行了研究。将pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒经肌肉途径免疫BALB/c小鼠,免疫后不同时... 详细信息

为了探讨pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒作为疫苗佐剂进入临床应用的生物安全性,本试验就pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒在小鼠体内的组织分布和环境释放安全性进行了研究。将pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒经肌肉途径免疫BALB/c小鼠,免疫后不同时间剖杀动物并摘取各种组织,抽提基因组DNA。利用PCR技术分析其在组织内的分布及与细胞基因组发生整合的可能性,同时检测了免疫动物现场环境,以监测pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒上的猪IL-4基因、CMV启动子基因和抗性基因是否在环境细菌中发生转移和扩散。结果表明,免疫后1d在3/3小鼠各组织中仅注射部位肌肉存在重组表达质粒,免疫后5d仅有1/3小鼠于注射部位肌肉中存在重组表达质粒,免疫后15d所有小鼠的各组织中无重组表达质粒存在;未发现pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒整合到宿主细胞基因组和转化到环境其他细菌中。因此,认为pcDNA3.1/IL-4重组表达质粒对动物和环境是安全的。

关键词：猪白介素-4 小鼠重组表达质粒生物安全性组织分布基因组整合转移和扩散

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布氏杆菌BCSP_(31)/pVAX1重组表达质粒的构建及其免疫保护效果的研究

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中国人兽共患病学报 2006年第6期22卷 493-497页

作者：李鹏罗德炎高永辉张松乐宋艳王希良军事医学科学院微生物流行病研究所三室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射... 详细信息

目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,观察特异性体液免疫和细胞免疫效果。进一步用1.25×104布氏杆菌A544强毒株腹腔攻毒,观察BCSP31/pVAX1重组表达质粒的免疫保护效果。结果扩增的BCSP31保护性抗原基因片断在牛、羊和猪布氏杆菌株中具有高度保守性,构建的BCSP31/pVAX1重组表达质粒在COS7细胞有目的蛋白抗原的表达。制备的BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉免疫BALB/c小鼠4次,ELISA检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒产生了较高水平的特异性IgG抗体,并随免疫次数增加抗体的滴度也递增,且抗体亚型以IgG2a为主,表明主要引起Th1型的免疫应答。FCM检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒的CD4+/CD8+比值明显下降,说明激发了显著的CTL效应。MTT测定BCSP31/pVAX1重组表达质粒的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异显著。布氏杆菌A544强毒株攻毒后,动物存活及脾组织细菌数与对照组比较有显著性差异,说明BCSP31/pVAX1重组表达质粒能够产生有效的保护效果。结论研制的BCSP31/pVAX1重组表达质粒免疫BALB/c小鼠能产生高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,以细胞免疫为主,并产生有效的免疫保护效果,为布氏杆菌病新型疫苗的研究奠定了基础。

关键词：布氏杆菌BCSP31 重组表达质粒免疫应答免疫保护

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HMGN2重组表达质粒的构建及其抗乙型病毒性肝炎的病毒活性

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中国临床药理学杂志 2014年第5期30卷 432-435页

作者：张敏张远童荣生四川省医学科学院、四川省人民医院药剂科

目的构建HMGN2重组表达载体并观察高迁移率蛋白HMGN2分子的抗乙型病毒性肝炎的病毒作用。方法用基因克隆的方法,构建pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒;用亲和层析的方法,纯化His-HMGN2融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳、Western blotting... 详细信息

目的构建HMGN2重组表达载体并观察高迁移率蛋白HMGN2分子的抗乙型病毒性肝炎的病毒作用。方法用基因克隆的方法,构建pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒;用亲和层析的方法,纯化His-HMGN2融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳、Western blotting对纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。以HBV DNA转染的细胞株HepG2.2.15细胞为模型,用ELISA检测HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg),用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA的含量。结果成功构建了pET-32a-c(+)-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,降低HBV DNA拷贝数。结论 HMGN2在体外细胞培养中有直接抗HBV的活性。

关键词：高迁移率蛋白N2 重组表达质粒乙型病毒性肝炎的病毒活性

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SARS病毒N蛋白真核表达质粒的构建及其诱导的体液免疫应答

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中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 50-51页

作者：林绮萍吴少庭翁亚彪袁仕善高世同秦莉雷明军潘晖榕张仁利黄达娜温见翔华南农业大学兽医学院广州510642 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518020 华中科技大学同济医学院武汉430030 广东医学院微生物学教研室湛江524023

　　构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答.采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/... 详细信息

　　构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答.采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价.成功构建了重组表达质粒pVAC-N,免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体.构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体,为SARS疫苗的进一步研究打下基础. ……

关键词：病毒核衣壳蛋白真核表达质粒构建重组质粒小鼠体液免疫应答重组表达质粒真核表达载体特异性抗体注射免疫体外扩增体内诱导抗体效价基因片段定向克隆基因枪疫苗基础腹部

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